Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 88
Текст из файла (страница 88)
А |о1 оЕ сиопеу саи Ье счасть оп аес)иепс|пц попарес|Е|с 3птегастогя и В Ягопц|у гесопппепс)ег3 йат йе СгапаЕоггпат|оп !ото уеааг апс| арес|Е|с|ту театя аа с)еасг|Ьес3 Ье1ои, Ье согпр|етед Ьесоге аесртепс|пц, бесопс! Сопйгпта11оп о1 Ро51Тпге 1п1егас11оп53 гсереа1ед Рттепо!уре апд бресйсйу Те515 ТЬе 6па1 тест оЕЕЬе арес|6тс|гу оЕ штегас6пц рготе!иа и 1Ье гетгапауогтиат!оп оЕ 1тЬгагу р1аяшба Еготп Е.
со6 што "ч|гц|п" 1ехАор-ЕЕЕЕ2г|ехАор-1асЕЕрВа|т-соптапипц а!та|па ТЬе апп и то чепуу 1Ьас |птегаст|оп-берепбепт рЬепогуреа аге а611 оЬаегче6 ап6 аге арес|6с то тЬе яаг6пц рВаи. ТЫз тезт счт!1 е!пи!пате Еа!ае роябчея |пс!ийпц пштатюпа |и тЬе |п66а!1у тгапаЕоппе6 ЕСу48 уеаат йаг Еачог цготч1Ь ог сгапаспрбопа1 асбча6оп оп ца)астоае тпедшш; ВЬгагу-епсодед с)3Ь)Аа тЬат |псегасс счиЬ гЬе 1.ехА !ЭХА-Ыпс)!пц с1ошаш; апс! 13Ъгагу-епсо6е6 рготе|па 1Ьас аге "а!|с)су" ап6 тптегаст ч61Ь пш16р1е рВа|ь Еи а ргопиасиось шаппег. 6.
ТгапаЕогш уеаст яга|п ЕСУ48 тч|1Ь гЬе Ео)1отч)пц аега оЕ р!аашнЬ, ап6 ае1есс со!оп)еа оп СМ(С1и)-33га-Н)а р!атея а. рМчЧ112 апс1 рВай Ь. рМ%112 ап6 рВГНМ-1 с. рМ чу!12 апс1 а попарес!Втс Ъап !Е гЬе РВа|г |ишацу шее т ЕЬе ссгееи счао аЫе го асс|часе ггапгсирПоп, ечеп с138Ь|1у, сче отгоп8!у гесопппепс3 йат а попсрес|сгс сопгго1 Ьаи с!гаг сап а1со счеаИу асичасе ггапасг|рг|оп Ье 3ис1пг|еа аг а сопыо1.
1п 8епега|, Ъа|гг гЬаг аспчаге |гаигсирПоп роог1у аге йгбси1г го йгипцшгЫгогп йе Ьас|ссгоипгт оЕ Еа1ае рояичея Боте Еа!зе рояичег гигегасс Пеиепсацу гч|гЬ тчеаИу аспчаипц СехАПгсег| ргогеша. 7. Айег 2-3 дауя 1гапаЕогше6 уеая Егош 51ер Е| аЬои16 Ъе ачат!аЫе. 33хе е1естгорогабоп то |птгобисе 1|Ьгагу р1аяпЫа ргерагес3 Егош Е, со6 КС8 ог ЕЗН5а |иго |пйчЫиа! тгапаЕоппапта а-с. Р1ате еасЬ тгапауогшапоп пихтше оп СМЕС1п)-1)га-Н)яТгр с)тороп! р1асеа апс1 гпсиЬате йе р1атеа ат 333оС ип61 со!оп|ее цгои (2-3 дауа).
К 1МРОКТА~ЧТ Аа а пецатье соп1го|, а1ао е|естгорогате ехагпр|еа оЕ тгапаЕоггпапта а-с чатЬ 3Ье р)С4-5 ПЬгагу чес1ог. 8. Сгеате а СМ(С!и)-Сга-Нь-Тгр шаатег 6гороиг р1ате Еог еасЬ |гЬгагу р1аяиЫ Ьетпц теяей И и цепега!1у Ье1рЕЬ1 то атгеа1с тгапЕоппапь а-с Еог еасЬ ВЬгату р|аяпЫ ти с!осе ргохпппу оп 1Ье р1ате то Еассбгате 6есеспоп оЕ попаресгбс ш1егасгюпя ас 1мРОктА~чт еасЬ р|аге гЬойд аЬо сои!а|и 3Ье а-с аег|еа тгапаЕогтед чай 1ье р|с4-5 пецатые сои!го|. Рго1осо! 1г Маце 3: 5есоию? Сои?югтагюои о]ГРолюгюче ?июегаегюоил 18.45 9.
Теес Гог ]П-ца]ассое|с]аее асс|ч]су апс] Гог ]еис]пе аихосгорЬу, ехасс]у аа с]ексг]Ьес] |п 5!аде 2, 5(ер 23. 1О. Апа]ухе сЬе сеял!се о1 СЬеяе нрес|слс]су Сеей апс] нес]иепсе сЬе ром]1]че сао]асее (р]еаее нее СЬарсег 4, Ргососо] 33]. ~ м Тгие "рюь|1(не" сОМАа ейоиЫ гепю|ег уеаес Ыие оп СМ(Са|, Кай)-Ога-Н|е-Тгр р]асеа Ьи1 по1 оп СМ(С|и, Х-ца))-Ога-Н(а-Тгр р)асея, апс| реитнс цгоъчй оп СМ(Са|, Кай)-Ога-Н(а-Тгрйеи сЗгорои1 р|а1ец Ьи1 по1 СМ(С(и)4/га-Н(а-Тгр-$.еи г|горои1 р|асец прес(?юса()у ъмй Фе ог|ц)па) рйа|1 Ьис по1 Ь ог с.
ТЛеее роййче сОМАя аге геас|у Со Ье нес)иепсесЗ (й СЛеу Ламе поС Ьееп а(геаг|у) ие(пц ригпег ГРЛ (р)еаее нее йе рапе| оп АЕТЕКМАТ!ЧЕ РКОТОСОО КАР!О 5СКЕЕМ ГОК |МТЕКАСТ1ОМ ТКАР РО5|Т|ЧЕ5 оп СЛе 1о1- Зоън(пц раце). Плане сОМАе йас а|но епсос|е ргосе|па сЛас |псегасс ъмй е|сйег Ь ог с ейои]с3 Ье ю33асагдесЗ. ° 11 'ь роюь|Ь|е 1о с|иапс|(у гоицЫу йе ге|а1Ые а?Гюп|(у о1 Зпсегас||опа иа(пц пигпЬеге цепегасесЗ Ьу П-ца|ассоа|с|аае аеаауя. ЧЧЛесйег йь Зе с|ее(гаЬ]е 'ь |ей со йе г3|зсгес)оп о1 сЬе Ыйчм|иа1 Зпнеас(цасог. ° Аа ап асЫШопа! сопсго|, а с|асаЬаае о1 соиъпъоп (аце роа(1(чеа Лае Ьееп сотр||ег! апс! тас|е ачайаЫе оп йе ъног)гЗ ЧН|с|е ънеЬ, аС Лиръ]юмъмм(ссс.ею|и?геаеагсй?ЗаЬа?цо)ет|аю|псегасс(опТгар)пуног(с.Л(т! Раг||си1аг1у (ог сОМАа юно]аСесЗ оп|у опсе, ог 1ог сОМАа (Ьас г|о поС арреаг Со гпа|се Ь|о(оц|са( аепее юп сйе сопсехс о( СЛе асагйпц Ьа|1, |С плау См Ье|рй й Со сопаий йе йа1аЛаае Со та(ге миге йас йм с1опе Лаа пос Ьееп герогсес| 1о Ье а ргоЫеил Ьу осйег цгоира 50В5ЕЕ?ОЕМТ СНАКАСТЕКЗХАТЗОМ дай Лае допе ъчей |п йле ргсйоиа асерц 1Ле ехреигпепс ъМЗ| Лаче цепегасегЗ а ата]3 нес о1 еес|иепсегЗ сОМАя, епсосйпц ргосе|па йас юпсегасс ересюТюса(]у мюй йеюг алаи)пц Ьа|1.
)АюЛас пехс? |п стиле сеюсь, йе аиЬаессиепс сйагас(епга(юп а(ере аге оЬМоиз, май йе ьо|аСес! СОМА юпаЫпц с|еаг Ыо]оц|са( яепее |и Фе сопсехС о1 а рагйси|аг есап|пц Ьа|1. Номюечег, |и цепега|, Фь 'ь Фе ро|п1 ас м ЛЫЬ йе Ьийь о1 йе ъчог|с геайу Ьеьпц мхй йе оЬСаюпес| |пСегас|ог е|йег соггеероис3)пц со а СОМА ъййюиС а с|ейпес] Ью1оц)са! асйню(у |гпгпесйале|у ге!ечап1 Со Фе е(ап(пц Ьай ог соггеаропюЗЗпц 1о а поне3 нес|попсе. ТЛеге аге плапу м ауе 1о арргоасЛ йе апа]ув|а о1 еисЛ ююче! |псегастгц апсЗ а соплр|есе сЗьсиюьюп ънои!сЗ до (аг Ьеуопг| 1Ле асора о1 1Л|е сЬарсег. Гог |пчеь йца1огв поС ехрег(епсес) юп йе сйагассег)нас(оп о1 паче! рго(еюпц йе 1о(!омю)пц срлеес(опе сонег а 1ем Згьиеа йа1 т|цЛ1 Ье рагйси|аг|у Ле|рй| |и цей(пц есапесЗ. ° В йе СОМА йю?1-?епд?И? Мапу 1(гпее, 'во|асею| |псегас|ога соггеаропг3 со сйе сагЬоху-!егин па| епг3 о1 | псотр|е1е сОМАя.
ТЛиь ююгпе йюгас есера ъчоиЫ юпно|не ижиц а СОМА ргоЬе юп поИЬегп апа(уа|а 1о еасаЫлей сгапясп рс чае. й 1Ле |ео]асею! СОМА ь сгипсасег3, есапп)пц еес|иепсе с|асаЬаеее (Фоне спаса)п(пц ехргегьед нес(иепсе саць аге иаейл)) апсЗ еиЬеес|иепс есгееп(пц о1 сопчепйопа| СОМА ЗЗЬгаг(ее (СЛарсег 11, Ргососо| 2) ог КАСЕ (СЛарсег 8, Рго1осод 9 апс| 10) аге инею| 1о оЬ(аЗп 1и(3-Зепц(Л с|опех ° В йе СОМА ехргеееею? т ап аррюоргюасе се11 суре апю??ог сюйеие 1осайоп со сопсеючаЫу юпсегасю и юй Язе йай рго(е?п? Гог илаилилац, ргоЬвц о1 а пъи|сйьаие пог|Легп Ыос (тапу аге соиниегс|а3|у ачайаЫе 1гопл С|ОМТЕСН апс| о1Лег еоигсее) ъмй асЫгегь Фюе ро|пй ° Ооез 1Ие Ги?3-?еидюИ Ьаюс агьосюа(е ънюй 1Ие йюй-1еиц?И ли!огас!огю Оо йе Ьаюс аию? юлсегассог аыос?асе аю а по!Лег агеау еунсет гйу?егепс ?тот йе Инею-Иуйг?г? ~Фет? Зг|еа(!у, |пчеай да(ага мюои Ы 33]ъе со сою т ти поргес|рйасе сЬе епдоцепоюь Ьай апсЗ |п1егассог йопл йе|г Лоес огцап|ет.
Гог гпагптаЬ, ап Зпсепиег||асе всер мЛЗ)е (Ье апйЬоду 'ь 1огсЛсогиюпд 'ь со еупсйеейе ап ер|соре-садцесЗ неге(оп о1 йе |псегассог, сгапе1есс 31 юпсо сейм поппайу ехргеайпц йе Ьай, апг3 со)гпгпипоргес)р|сасе ъмсЛ йл(а согпЬюпасюп. ° |и?гасейи?аг?у, аге Ьай аиг3 юи?егас?ог ехргегьег? юп онег?аррюид ог юг?еийса? сотраейиепсе? Сей (гасйопа1|оп аигсюог Зттипойиогеасепсе реиюоггпесЗ ъм(Л апс(Лог|у е|йег 1о а пайне ог сацдег1 |псегассог пъау Ье гьед 1о асЫгесь сЬеае ро|пЬ (1ог с|еса|Ь оп йене гпейосЬ, р(еаае ге(ег 1о 5рессог е1 а|. [1998, СЛарсеге 71 апсЗ 98]). ° Айоне а11, г?о Ьай апю? 1исегас|огз ал?есс еасИ ойегй Ь?о?од?са? асбисую 5оте Ыг|Лег аееауе тау ийр юпа1е|у Ье иаейю] юп уеаъ(, 1ог ехагпр|е, гпарр|пд йе с3отаюп о1 юпСегасйоп иа|пд а аепеа о1 Сгипса1ес| Ьай ргосеюпь Г(гас апс| 1огетое(, йе исаи доа| 'ь Со еесаЬ||аЛ Ыо)од|се! ге|енапсе оНЛе юпсегассюп |п йе огдап35т О1 оицюи. 1В.46 СЬаргег 18: Ргогет 1пгегасггоп ТесЬпо)оЯ(ез А ЕТЕКМАТЕТ(Е РКОТОСО30 КАР!О 5СКЕЕМ РОК 3МТЕКАСТЕОМ ТКАР Р ~ ТЬ15 рго1осо) 35 ап а)(егпа1ве арргоасЬ (о ссгееп(пд Еог рос(1(че ПЬгагу р)аяпк)5.
А гп арргоасЬ гс ЕЬа( К чч)П (г)еп13(у гес(ипг(ап( с1опес Ье(оге р(асгп(с( 350)а1)оп апс) Ьас(епа) 1 гп согпе сасес аггее(!у гес)исес (Ье апюип( оЕ ччог)с гес(Ыгес!. Ночченег ассига1е гесогс)5 5 с)е(а)3)пе Ьопг тапу оЕ еасЬ с(аас оЕ сОМА5 аге оЫа)пег(. К(Ьеге 35 апу г)оиЫ нчЬе(Ьег рагС оЕ а се( ог 35 ип)с(ие, ) пче51г(Яа(ога йои)13 егг оп (Ье ск)е оЕ саи(юп. ТЬ(5 гар(с( ссгее ас)чапсаееоис ччЬеп ЕЬе пигпЬег оЕ се)ес(ес3 со(оп(ес ехсеесЬ 23. СА1)Т!ОМг Р(еасе сее Аррепспх 12 Еог арргорг)а1е Ьапг)!)пд п( гпа(епа(с гпаг)гег) А(Е(3313опа! Ма1ег)а35 2% г(яагосе де! )ч53исигоп(с)аье )уа)5 ьо!ипоп 50 тм Тпс-НС! (РН 7.5) 10 гпМ ЕОТА 0,3% (чМ П-гпегсср1ое(капо) (ргераге Егесп) < ! > 1:50 П-П!исигоп)г)асе (уре НР-2, сгиг)е со)ипоп (гогп Н, Рогпаиа (5)5гпа) С)аас Ьеас)с (150-212 ргп с)(атегег! 5(Ягпа) О.
7% 1опг-те)1(пд-гетре га1 иге адагиье де! О)гЯопис)ео((г(еа рг)теса (20 тМ )п ТЕ ЕРН В.0!) Гопчагг3 рпгпег (ГР1 ) 5 '-СТО АСТ ОСА САТ ССС ТСС Яечегяе ргппег (Ггх) 5'-СТО ОСА АСС ТАС АСА АСС СС АЕ(его(3(ег р)а1е (96-чче)0 Яеадеп(5 Еог апа)ух(пд уеас( со)опгсс Ьу РСЯ (СЬаргег 4, Рго1осо! 15) Яеадепп Еог риг(Е) )пд ОАгА ЕгаЯтепгс Егогп )огн-те)1(пд-гетре галлисе аугоае (СЬар(ег 5, Яесгг(сопи епс)опис)пасе Наед! ТЬегтосус)ег ТЫп-чча))ес) т(ого!оде 1иЬеь (05-т), ьгегг)е> Ме1Ьо(3 1. Ас)с) 25 р! оЕ П-ц(исигоп)с)аае )усь 50)ибоп )п(о (Ье (пс)(ч(с)иа) ччеП5 оЕ а 90-ччеП т(сг 2. 5(аП(пе Егопс (Ье СМ(О)и)-(!га-Н(5-Тгр гпас(ег р)а1е (5(аде 2, 5(ер 21), (гапсЕег апс( рос(1(че сапс)(с(а(е уеас( со)оп(егНп еасЬ оЕ (Ье сне(35 соп(а)п(пд П-фзси гоп)с)асе со)и (Ье чне)35, апг) (псиЬа(е !Ье р3а1е оп а Ьопхоп(а( йа(сег Еог 1.5 — 3,5 Ьоига а( 57"С.
А !МРОЯТАМТ Тгагсс(ег арргохнпа1е)у гпе чо)игпе о( опе гп)г)д)е-с(хег) уеап со)опу г)о пог гаке гпоге, ог (Ье г(иаагу о( гке 'ьо(а(ед ОНА гч)П си((ег. ТЬе гпапег р)аге г)оес по (у Егеск: Р)агес с1огег) Еог 5 0аус аг 4"С Ьаче Ьееп исег) сиссесс(иру. !Е арргорпаге, а гпи(осо(опу геркса(ог((го55ег сап Ье осег). 3.
Яегпоне(Ье 1аре апг) аг)с) — 25 Р3 о! 5)асс Ьеас)5 (150-212 ргп) 1о еасЬ чне)3, апс( аеа) 1Ье чче)Ь ада(п. А((асЬ (Ье гп(сгоСкег р3а(е 1о а чог(ех сч((Ь а Па( (ор аиг(асе (е.д., ис)пе гиЬЬег Ьапг(5) апс( гпгх чг)догоис)у Еог 5 пппи1ес. 4. Аг(с( 100 р) оЕ Кеп(е г(35(П)ег) Н О (о еасЬ чне3!. Тгапс(ег 0.8-2 р! Егогп еасЬ ччеП (о а Егей т(его(05е 10Ье (о Ье исес( ас а (егпр!а1е Еог еасЬ РСЯ. Яесеа! (Ье р)а(е сн((Ь Саре, апс( )сеер (Ье гегпа)пг)ег оЕ !Ье )уса(е Етгеп а1 -20оС. Ргогосо! 1: жеане ъй Бесопг) Соп1ггтаггоп о1'Роз|ггне 1псегасг|опе 18.47 5. |и а аепее о( 51егйе 0.5-пъ| 1Ып-игайес( т!его(ойе 10Ьеа (ег)иа) (о (Ье пипъЬег о( со|пи|ее (о Ье апа1уаес(), пих !п Иге (ойои4пй огг)ег: 10х со|оиу РСй Ьийег 2 н| 25 гам Ма )х 1.2 н| 10 пъм оНТРх 0.4 н| оййоиис|еояйе рг)тегь (ГР1 аиа ГР2) 10 рте(ех о(еасЬ Таг! Ро(утегаъе 5 оиВ (0.2 Н|) Н,О 1о 20 Н! 6.
Ас(г( 0.8 — 2 н| о( 1егпр|а1е Игогп 5(ер 4) 1о еасЬ РСй 1иЬе. 7. Тгапа(ЕГ 1Ье РСК (иЬеа 1о 1Ье Иъегтосус1ег, ргойгагигпег) аъ Гойои5, апс( 5(аа(Ье ргойгат. Сус|е а(юп 2оС Могййег) чегхюпь о! 1Ых рго(осо! ъч!16 ех1еиг)ег) е|опйайои 1!тех Ьаче аЬо Ьееи (ориг) го ъчог(ъ; гйе чапаиг йвеи аЬоче Ьаъ агпрййед (гайтеиЬ о( ах гичсЬ ах 1.8 )гЫи геаъоиаЫе г|оаийгу. 8. Апа)ухе Иъе РСК ргог(вс(я а. йеточе 10 Н| о( !Ье РСК ргос(ис(5 'а(о Ьеей т!его(ойе 10Ьее, апг| рег(огпь а геа(псйоп сййе51 мл(Ь Наей| !п а (о1а| но1вгпе о1 20 н|.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
