Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 87
Текст из файла (страница 87)
Ь)ольресйс ЬаИ р!аьтЕИ Р!еаьа ьае гЬе лога го 5сер б. рм'Я112, рКГНМ-1 рВаИ !Егот 51аее 7) Уеаьг со!оп~еь пай йе арргорпаге рЬепогуре Вгоачуп8 ол а СМЕС!и)-Е)га-Нуь-Тгр тагпег р!аге ИделггВед т сааде 2, 5гер 2 1) Уеап ьсга)п ЕСУ48 МЕТНО0 1501аг1оп оЕ Ро516че Р1а5гпи15 Тьчо арргоасЬеь аге В)чеп Еог йе гьо!агюп оЕ с!!ьсгеге 11Ьгагу р1аяпЫь. Рог гЬе гьо1агюп оЕ а япа!1 пшпЪег оЕ со!ошеь, се1)ь аге 1уьес! !п Я)5. Рог ЕЬе !ьо1аг!оп оЕ а 1агае пшпЬег оЕ со!оп!еь, се11ь аге 1уьес! гп Хуто1уаье. 1. Ргераге се11 1уьагеь Егош роя!и е со1оп)еь. РОК !5ОЕАТ!ОЬ! ОГ А 5МАЕЕ й!)МВЕК ОГ СОЕОЫ!Е5 Сепега11у, гЬ)ь арргоасЬ !ь шоьг иьепа1 ъчЬеп ьчог!с)пВ ьч!1Ь -24-36 роь)г)чеь ог 1еьь, а11ЬоиВЬ гоше 1пчеьг)магога ргеЕег го иье гЬ)ь арргоасЬ го чгог)с ир гЬе еппге ьег оЕ роя!)чеь 1п)11а!1у оЬгашей ечеп !Е ьисЬ роь!г!чеь пипйег !п йе Ьипс)гес)ь.
1п гЬ)ь саье, и !ь иьиа11у пюге ейесг!че го иг!1)ге гЬе а1гегпапче ргогосо1 а! ЕЬе епс1 оЕ гЬ)ь ргогосо1 аь а гпеапь го с)!ьг)пВшьЬ ип!дие Егот сопипоп1у оссигг!пц роя!)че с1опеь. а. 5гагппВ Егопг йе СМ(С1и)-Сга-Н!ь-Тгр таьгег р!аге (5гаВе 2, 5гер 21), р!с1с со!оп!еь йаг д!ар!ау йе арргорпасе рЬепогуре оп ье)есс!че р1асеь !пго 5 гп! оЕ-Тгр В!исоье гпейигп. Сгоьч гЬе си1гигеь очегп!цЬг аг 30 С. Ого!гг!о5 йе АОга-НЬ ае!есггоп !и ЙЬ ягоабоп епсоога5еь !оя оЕ поп!!Ьгагу р!аяпгаь апд Еас!1аагеь Ьо!апоп оЕ гЬе с!еягес! !!Ьгагу р!аьго!с7. Ь. Сепгг!ЕиВе 1 т! оЕ еасЬ си1гше аг шахипшп ьреес1 Еог 1 пипше аг юош гепгрегагше !п а т)сгоЕиае. Кеьиьрепс) йе ре11еп гп 200 771 оЕ 5ТЕ5!уяь ьо!иг)оп, апс) асЫ 100 !с1 оЕ 0.45-ппп-с)1агпегег ьгеп!е 81аьь Ъеас)ь.
ЪЬггех йе гиЬеь ч!аогоиь!у Еог 1 пипше. 18.42 СЬаргег 18г Ргосет!пгегас6оп ТесЬпо1ое(ез с. АсЫ 200 )л! оЕ ег!ш1!Ьгасес! РЬепо1 со еасЬ сиЬе, апс! чогсех йе сиЬея ч!цогоия1у Еот апосЬег пиписе. й СепСНЫПе СЬе епш1яопя аС шахипшп ярее6 Еог 2 пипиСея аг гоош СешрегаСиге Еи а писгойце, апг) сгапяЕет еасЬ ас)иеоия РЬаяе со а ЕгезЬ тшсгойце сиЬе. е. АсЫ 200 )л1 оЕ ег!ш!1Ьгасес! РЬепо! апг! 100 )с! оЕ сЫотоЕопп со еасЬ ас!иеоия РЬаяе, апг! чотсех Еог 30 яесопбя. Сепспйде сЬе епш1яопя ас шахипшп яреес1 Еог 2 пиписея ас тоош сегпрегасиге тп а писгойце, апг! сгапяует еасЬ ас)иеоия РЬаяе со а ЕгеяЬ сиЪе. Е.
АгЫ сзчо чо1шпея (400 )с1) оЕ есЬапо! со еасЬ ас!иеоиз РЬаяе, пих Ьу 1пчегяоп, апд сЫП сЬе сиЪея Еог 20 пиписея ас — 20'С. Кесочег сЬе пис1ек асЫ Ьу сепспйКасюп ас шах1- шшп ярее6 Еот 15 пиписея ас 4'С 1и а ш)сгоЕипе. К. Роиг оЕЕ сЬе яирегпасапся ЪЧаяЬ сЬе реПеся зч(сЬ 1се-со!6 70огЬ есЬапо1, апг! с!гу сЬе ре1- 1еся Ьпейу ипс1ег часишп.
Кеяиярепг1 еасЬ реПес ш 5-10 !л! оЕ ТЕ (РН 8.0). Ртосееб со 5сер 2. ГОК 15ОСАТ!ОЬ! ОГ А САКСЕ йСЛ!ССВЕК ОГ СОСОЬ!!Е5 ТЬе ЕоПозчшц ргосег)иге Еот ргераппП Е)ЫА !и ЬассЬея зчая г!ече1орег) Ьу 5сече Кгоп (()п!чегя(су оЕ СЫсаВо) ая а яса1е-ир оЕ а ргососо! ог(П!паПу с!ече1орес! Ьу Мапие1 С1агоя (ЕаЬогасо!ге бепес(срле Мо1еси1алге, Рапя). А геЕг!пега!ел) сепспйКе зч!сЬ р1асе ЬоЫегя ся тес)шгег), апс1 а гереа6пц р!Реиог Ея Ье!РЕи1. а. ТгапяЕег 2 ш) оЕ 2х СМ(С1и)-Тгр шейшп шсо еасЬ зчеП оЕ а 24-счеП писгобсег р!асе. Уяе а соойрк1с со рк1с а риса6че роя!с(че со1опу Егопс а шазсег р1асе 1псо еасЬ зчеП (5сапе 2, 5сер 21). Стоят сЬе си!сигея очеги!КЬс ас 30"С зч!сЬ яЬаЫпП.
ТЬе ые оЕ лх пппппа1 плейпт тах1тсгез сЬе угеЫ оЕ уезя. Ропг р1асез сап депегаПу Ье ЬапгС!егС сопчетепс1у апП зрпп япт1сапеоы1у т а сепстсупае. Ь. Сепспйце йе р!асе(я) ш а сепспйце сч(сЬ тпкгор1асе Ьо16етя ас 1500е (3000 грш лп а 5огчаП Н1000В МРС госог) Еог 5 пипшея ас 4'С. 5Ьа1се оЕЕ йе яирегпасапс зч)сЬ а япар оЕ сЬе ччг)яс апг) гесипл сЬе р!асе со ап ирпцЬс роя6оп. 5зч!г! ог ПаЬ11у чогсех сЬе р!асе со геяиярепд еасЬ сеП реПес 1и сЬе гетпа!п!пК Пг)шс1. АсЫ 1 тп! оЕ Н О со еасЬ зчеП апс) язч!г! йе р!асе Кепс!у. СеП реПеь сап гпозс еая1у Ье гезпзрепг1ед сп гезЫпас 1п!пЫ Ьесоге адйпп пезч ю1тюпз. АгСйсюп оЕ!пПпЫ сап Ье ассотр1ВЬеи пипа а гереаипц р1регсог.
с. Сепсп6лце ая ш 5сер Ь, яЬа1се оЕЕ йе яиретиасаис, геяиярепг! сЬе сеПя ш геяг!иа1 ялрегпасапс, апс) асЫ 1 ш1 оЕ геясие Ьийет. й Сепспйце ая лп 5сер Ь, яЬа1се оЕЕ йе яирегпасапс, апс1 геяиярепд сЬе сеПя 1и сЬе яшаП чо1- шпе оЕ 1щшд геша(и!пц ш сЬе р!асе. То еасЬ счеП, асЫ 25 )л! оЕ!уяя яо1ис!оп. 5чч)г! огчогсех сЬе р1асе. 1псиЬасе сЬе р1асе (зч)сЬ сЬе сочег оп) оп а госагу яЬа1сег сот -1 Ьоиг ас 37"С. ТЬе 1уяз зо!пиоп пеед пос Ье согпр1есе!у йяо1чег1 Ъеуоте ые.
Ву 1 Ьош, 1уяз зЬоп!д Ье оЬчюы аз уеазс се!Ь соаПп1асе спго а ъчЬпе ргесгрпасе. ТЬе зпзсерПЬгПсу оЕ уеая ясгатз со суПс епгугпез чмгез. !Е 1уяз осспт гарЫ!у, сЬеп пзе сея 1уск епгуте. !Е йе !уз!я зсер ы аПозчегС го ргосеег1 соо Еаг, соо пюс1л оЕ сЬе рагиаПу йззо1чегС сеП зчаП гпау сопсапппасе сЬе Ппа1 пласепа!. Еуяз сап Ье )пгСпег! Ьу ехатсп!пп сеПз сп а рЬазе ппсгозсоре. ЕМпц сеПз аге зчЬпе чгссЬ з гСзгСг Ьз1о, апгт гСеагС се16 аге ппиопп1у егау. Еуяз сеагСз со сЬе ге!газе оЕ пгзпп1аг сеП сои!спи гпсо сЬе тег!!пол. Опсе сеПз аге тоМу агау апгС пгапу аге йзгпрсей Ь сап Ъе аззптегс йаг пплсЬ оЕ сЬе р1аяпЫ Ьзз Ъееп ге!еазей е. АгЫ 25 )л! оЕ 10ого Ю5 со еасЬ ъчеП.
131ярегяе сЬе ргес(РПасея сошр1есе1у Ьу язч(г!шц йе р1асея. АПоп сЬе р1асея со геяс оп сЬе ЬепсЬ Еог 1 пиписе ас гоопл сешрегасиге. АЕсег 1 пипи!с, йе ччеПя яЬоиЫ сопсаш а с1еаг, яошезчЬас ч)зсоия яо1ис!оп. Рттосо! 1: 5таде 3: 5есоитЕ СоттЕтгтат!ои оГ Роятттче 1птетагВот 18.43 Г.
То еасЬ счеП, атЫ 100 Сс! оЕ 7.5 м апппопппп асесасе. 5счсг! сЬе р!атея Пепс1у, апд йеп ясоге йет Гог 15 пппитея ас -70"С ог ас -20"С ипП1 сЬе 1уяасея аге Ггохеп. АддЬюп оЕ асесасе яЬоисд теяисс сп йе Еоппаиоп оЕ а итаяяче ячЬ|со ргес!рпате оЕ сеП тсеЬпя аид 5175. ТЬе йеег щ8 ясар арреагя со ипргоче тепточа! оЕ сиЬтбтсотя ос Е. со1т тгаияЕоппасюи.
д. Пепюче сЬе р1асея Егот йе Ггеехег. Опсе сЬеу Ье8!и со сЬаъч, сепспйце сЬе р1асея ас 30008 !3800 грт тп а 5огчаП Н6000А МРС гогот) Еог 15 пиписея ас 4"С. ТгапяЕег 100-150 Сс! оЕ СЬе геяи1Ппц с1еаг яирегпагаптя Со ЕгеяЬ 24-счеП р!аСея. А сМРОССТА!Яту !и Пепета1, яотпе соптапя!иа6оп оЕ йе яиретпатаптя сч!СЬ реПетед птатепа! саппот Ье ачй*ед. Ночтечет, Ь !я Ьессет со яасп6се у!еЫ !и отт!ет со та!пса!и ритду.
Ь. То еасЬ ячеП, атЫ -0.7 чо1шпе оЕ 1яоргорапо1. Мтх йе яо1иПопя Ъу ясч)г1ш8 апт1 аПояч сЬе пис1ек асЫя со ргес)РЬасе Еог 2 ппписея ас гоот сетрегасиге. СепспЕи8е ая ш 5сер 8. ЕЬа1се оГЕ сЬе шрегпасапся счссЬ а япар оЕ с!се счг)яс. А с!ош!у 6пе ргестртсасе яЬоисд Еопп иитиейасесу айаг Ьоргораио! Ь аддед. 1. То еасЬ счеП, атЫ 1 т1 оЕ соЫ 70ото есЬапо1. 5сч!г! сЬе р!атея, апт1 сЬеп сепсгтТи8е йетп ас 3000е !3800 грт ш а 5огчаП Н6000А МРС гогот) Гог 5 ппписея ас 4"С.
Ята1се оГЕ йе шрегпасапс сч!сЬ а япар оЕ сЬе счг)яс, шчегс йе р1асея, апд Ыос сЬет счеП опсо рарег соъче18. АПояч сЬе р!атея со дгу ш йе атг. 1. То еасЬ счеП, атЫ !00 Сс! оЕТЕ (РН 8.0). 5сч)г! сЬе р1асея апд аПояч йепс со гесс оп сЬе ЬепсЬ 1ог яечега! ппписея, ип61 йе реПеся арреаг ЕиПу дсяяо1чед. ТгапяЕег сЬе ргерагасюпя со ткгоГи8е сиЪея ог сЬе тче1Ь оЕ а 96-счеП р!асе Еог ясога8е ас — 20"С.
Ргосеес1 со 5сер 2. ! — 5 и! оЕ еасЬ оЕ сЬе геяисби8 ртерагасюия сап Ье ияед то сгаиясогит сотиретепт Е. оо6 Ьу е!ессторогасюп. 1Е тая иЕ6ссеис пшиЬел оЕ со!оптах ате оЪсасиед, тергессриасе йе СтХАя аид йяяосче СЬепт ш 20 и! татЬег СЬап 100 и! ос ТП, Со соисеиСгаСе йе С5ССА атоса. Тгап5Гогсста11ссп !пГо Е. Сой !Е йе ЪаП ся с1опед 1п опе оЕ сЬе ярес)аПхед ЬехА-Гия)оп р1аяпЫ8 !ТаЫе 18-1) сЬас сагпея ап атркП1ш геяясапсе тпаг1сег, а ргорогсюп оЕ йе Е, соВ РН5а тгапяЕоппапся ииП пос сопса)п сЬе ПЬгагу р)аяпЫ.
Опе орсюп то геяо1че сЬ)я ргоЫегп 18 со апа1ухе пш1ПР1е сгапяГоппапся Ггот еасЬ РЫА ргерагаПоп. АПегпаПче!у, П 18 рояяЫе со раяяа8е р1аяпЫ8 сЬгои8Ь а яга)п оГ Е. соВ рояяеяятп8 а тгрС пшсасюп, апт1 яе!есс Гог а 1тЬгагу р!аяпЫ Ьу йе аЬт!Ьу оЕ йе уеаяс ТЕР1 Пепе со сотр1етепс йе Е. соП тгрС пшсасюп. 2. !псгос1исе 1 — 5 Сс! оЕ еасЬ ргерагаПоп оГ р!аяпЫ Р)я)А шсо сотресепс Е. со)т' РН5а ог шсо ясгаш КС8 !Рутр 1еиВ600 тгрС ЙЬВ463) Ьу е1ессгорогаПоп, Р1асе йе Ьассепа оп ЬВ а8аг сопсасп)п8 50 Ссфт! оГ атпрксПш, апд шсиЪасе йе р1асея очегш8Ы ас 37"С. 3. !Г р1аяпЫ Р)4А счая сгапяЕоппед шсо РН5а, ргосеед со 5сер 4. 11 р1аяпЫ РЫА ъчая сгапяЕоппед ппо КС8: а.
Ряе геясгеаЫп8 ог гер1ка р!аПп8 со сгапяЕег со1опсея Егосп 1.В1агпрктПш р!атея со ппшта1 ! — ттр) тегПшп Еог Ьассепа, 1псиЬасе сЬе Ьассепа очегш8Ы ас 37'С. Со!оитея сЬас 8гояч падет тЬеяе сопйИоия соисатп сЬе р!64-5 Пбтагу р!аятинП ая йе Тррт депе сатпет! Ъу т!ия рсаяисд еЕЕтссеиссу сатир!степи йе Ьассепа! ттрС9850 тиисасюи. ТЬе согда! рсасти8 ос сгаиясогтассои пихттея оп !.81атркдсш рсасея и !ея ясгеяябт! сЬап йтесссу р!ади8 оп то Ьассепа! пииииа! тейши аид итахиийея йе ииитЬег оЕ со!ошея оЬтатед, Ь. Ргераге пппсргер РЫА Гготп ап Ьо!асед со1опу апд ияе сЬе РЬСА со сгапяГопп 1)Н5а сеПя ая деяспЬед Еп 5сер 2.
Мштртератасюия оЕ КС8 с!ХА саи Ье ияед Еот теяспсдои й8еяп, РСК, аид тестаиясопиадои оЕ уеая. !т ь, Лотчечег, адляаЫе то ше йе КС8 пиитргер СтССА со сгаияЕопп а таите атеиастсе Е. го6 ятати, ялсЬ ая ОН5а, Ьесоге яетСиеиссп8 Ь ассетрсед. 15!я!А ртератед стати КС8 ы 8оиегаПу иияииаЫе Еог йдеоху ог ашотиасед яет!иеисси8 ечеи айат ехсеияче рип6сасюи. 18.44 СЬаргег18г Ргоге|п Епгегаспоп ТесЬпо!оц)ет 4. Ргераге иишргер 33)ч)А Еготп 13Н5а се!1а саггутпц йе ВЪгагу р1аяпЫ. ,й, 1МРОКТАЬ|Т 1п цепега|, |т Ь а цоог3 Ыеа го ргераге ОЬ|А !гоги тччо ог йгее аерагаге Ьас1епа| со!оп|еа цепегатег3 !гоги еасЬ ог|цта! рояПче |птегасгог.
Ву соптгап то Ьастег|а, уеаат сап Со|егаге тпйр|е 23г р|аат|с)а чатЬ Ыеписа| ае1естве тат|сетя 1Е а а|пц1е уеаат сеП сои!а|па тио ог 1Ьгее йя Пист ПЬгагу р|аат|г)я оп|у опе оЕ и ЫсЬ епсос)ес ап |птегасПпц рготе|п, 3Ье ге|ечапт сОЫА с|опе сап Ье 1овт ат йе втаце оЕ р|аяиЫ 'во|абоп. Аца|п, 3п цепега3, ЕЫа Ь пот а гпа|ог ргоЫет; оп ачегаце, регЬара 104 оЕ уеаат сеца чаП сои!а|и тсчо ог пюге ПЬгагу р|аагп|сЬ.
5. Сопбпп Ъу геатпст|оп епбопис1еаае йцеат)оп 1Ьат 1Ье дар|кате аагпр1еа ргерагес3 Еог еасЬ рояггче сои!а!п Ыепбса1 )иаегтя ап61ог бесегш|пе счЬейег а яиа11 пшиЬег оЕ сЕ|Ь)Аа Ьаче Ьееп 3ао1ате6 гереатес1!у. Р38есг|оп оЕ1гЬгагу р1агткЬ чий Есо81 + Х|го1 ч П ге!еаге сРтсА |поеггя иЬегеао гццегиоп счЬЬ ЕсоИ + Х|го! + Нае111 гч|П "Ппцегрипг" ЕЬе !итог!я 1пдерепг|еиг Ьо!аиоп оЕ оп1у а Еесч сРс|Аг ы Пепега|1у а цоос3 гпйсаПоп ЕЬас йе с1опег Ьаче Ъ|о|о83са! ге!ечаисе. Ро пос г1еграк гЕ йе сР34А с1оиео аге пот Ыепгка|, 1п сагой!гоге оп| у а япаП пшпЬег опоса! рос аи е со!оп|го Ьаче Пгогчп, ог |и саоег сч|геге ЕЬе гпгегасгог сР14А счаг роог1у гергегепгес3 гп г1ге 1гЬгагу, ггпе гпгегасгоггЬачс Ьееп оЪга|пег3 аг яи81е роя Ыче с1опея а 1МРОКТА~ЧТ 5осие 3пчеат|цатога аес|пепсе РЬ|Аа ат 1Ьь атаце.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
