Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 85
Текст из файла (страница 85)
АЬоиг опе й|г|1 оЕ йе уеаяг я!иггу ъч111 Ье 1еК оп йе р1асея; Ьоччечег, погша11у по п|оге |Ьап 290 оЕ йе со1!есле|1 йлггу гя пяес), яо К !я ипрог|ап| |о епяиге |Ьаг со! ошея аге |чаяЬед Егош |Ье р1а|ея чпй арргохипа|е1у ег)иа! еГЕ|с)епсу. ТЬе яесопс! гесЬп)с)ие (Ьу ясгар)пВ) |п 5|ер 9 ыпоге есо- 18.34 СЬарсет !8| Рсосесп Гпгетат6оп ТесЬпо1оцсеь пописа1 оЕ геацепн апс! спау Ъе еаяег со иье оп р!асеь Егогп |нЬкЬ гпо1|Ь ап|1 сопсапипапсь Ьаче Ьееп ехс!ьет!. 9.
Нагчеьс йе ПЪгагу иыпц опе оЕ сЬе Еоцочч!пц шесЬос!ь. ТО НАКЧЕ5Т ТНЕ ПВКАКЧ ВЧ АС!ТАТ!ОС|С а. Роиг !О гп1 оЕ ьсе61е Н О апт) арргохипасе1у 30 ьсеп1е ц!аьь Ъеат)ь оп еасЬ оЕ 6че 24 х 24-сгп р!асеь сопсашшц сгапьЕогшапсь. Ь. 5сас1с йе 6че р!асеь оп сор оЕопе апойег, ап|1, ЬоЫ!пц йе р1асеь с!ВЬс!у, ьЬа1|е сЬе ьсас1| ипсП аП сЬе со1ошеь аге геяльрепс!е|1 (! — 2 ш!писеь). с.
Г)ье а ьсеп1е р|реие со соПесс 5 п|1 оЕуеаьс ь1иггу Егош еасЬ р!асе (сцс сЬе р1асе). Роо! сЬе ь!иггу шсо ьсеП1е 50-гп) сошса1 сиЬеь. д. Ргосеет! со сЬе пехс бче р1асеь апс! гереас 5серь а — с. Соп6пие Ьагнеь6пц уеаьс сеПь 6огп аП 30 р1асеь, геьи16пц !п а соса! но1шпе оЕ 150 гп1 оЕ! нрлЫ сопсаше|1 ш йгее 50-ш1 шЬеь. ТЬе ьатпе д!ам Ьеат)ь сап Ье стапьсеттесс со йе Гте|Ь р!асеь от пе|ч ооеь шау Ье очей Моте сЬап Пче р!асеь сап Ъе |чаьЬе|! о6 оп|и!сапеоиь!у, аь тпапу аь сап Ье Ье!|Г ш сЬе Ьап|Ь ап|! |Ьа!|еп. ТЬе р1асеь сап Ъе теиьесс п|апу спить.
АГсет сеПь Ьаче Ьееп Ьатчеяей гетпоче йе тешаспсоц адат, |чаьЬ йе р!асеыч!ре |чиЬ а!соЬо!, ехроье со ГЛ| Еог ! 0 пппшеь, ап|! Коте ип|П пеетсесс. ! О НАКЧЕПТ ТНЕ ОВВАЙ ВЧ 5СКАРГ!|СС а. ЪЧеаппц ц!инея р1асе сЬе 30 24 х 24-сгп р!асеь сопсашшц сгапьЕогшапсь ас 4'С со ЬаЫ- еп сЬе ацаг (цепегацу, 2 Ьоигь со онегшцЫ !ь ассерсаЫе). Ь. 5сетП!ге а ц1аьь гпкгоьсоре ь1Ые Ьу ппшегяпц Ь ш есЬапо! апс! Паш!пц! иье сЬ!ь ь1Ые со ьсгаре уеаьс сець цепс1у 6ош сЬе сгапьЕоппасюп р1асеь !псо 50-ш1 сопка1 сиЪеь. Кейаше ог иье а ЕгеьЬ ь1Ые ас | псегча1ь (ечегу 5 — 10 р1асеь).
Се!Ь Воп| ац 30 р1асеь сап цепетацу Ье роо!е|! |псо опе ог пчо ьсеп!е 50-то! сопсса! сиЬеь. ТЬе р!асеь сап Ье теист|с |папу Пп|еь. АГсет сеПь Ьаче ЪеепЬатчеяей гепшче сЬе геп|а|псщ ацаг, ъчаьЬ йе р!асеь, ъчсре |чЬЬ а!соЬо1, ехроье со ГЛ' Еот со пшаиеь, апт! |соте ипсц пее|се|!. Т О. 1Е песеььагу, 66 еасЬ сопка1 СиЬе сопгапипц уеаьг Со йе 40-45-ш! шаг)с |нПЬ ьСе61е ТЕ (РН 7.5) ог Н О, апс! чояех ог шчегс йе сиЬеь со ьиьреп|1 се1ЬЬ 11. СепсПйлце |Ье сиЬеь !п а ЬепсЬсор сепспйце ас ! 000-! 500д (2200-2700 гргп ияпц а 5огчаП Н!ОООВ гогот) Гог 5 гшписеь ас гоотп сеп|регасиге, ап|1 сПьсаг|1 йе ялрегпасапс.
12. Кереас 5серь 10 ап|1 11. Айат сЬе ьесопт) |чаьЬ, сЬе соса! чо!итие оГ сЬе сец рецес с!ах!чесс Гтош сй х Гоь стапьЕоппапи ьЬои!|Г Ье 25 то! оЕ сець. Т 3. Кеьиьрепс) сЬе рас)сес) сеП реПес !п 1 чо)ите оЕ ьсеп1е ц!усето1 ьо1ис!оп. СошЬ!пе сЬе сопсепсь оЕ сЬе с)!ЕЕегепс Ра1соп сиЬеь апг) пих сЬогоицЫу. 14. ТгапьЕег 1-ш! ацт)иосыпсо а ьепеь оЕ ьсеп1е писгойце сиЬеь, апт! Егееге ас -70 С (сець гегпа|п ьсаЫе Еог ас 1еаьс 1 уеаг). ГЕ ргосее|Пщ тцгесс1у со р!аищ оп ье!есс!че п|егПшп Г|чЬГсЬ геоисгеь 5 Ьоигь со соспр!есе), 1еаче опе ацссиос опутохеп апт! сатту оис |Ье пехс ьетлиепсе оЕ |серь.
Аяшие йас сЬе ч|аЬПЬу оЕ сЬе иолтохеп си!сите Ь 1009а. !п цепета), Гот уса|с Вохеп Сот < ! уеат, |Ье ехрессет! НаЬ!1||у бац Ье >909 о. 6 |Ьете В апу саиье Еог сопсегп Г|.е., рагс|си!аг!у |Е по со!опсеь ате оЬсаспе|! Еоцолчспц р!ассщ оЕ сЬе Егохеп а!и!пои оп ье!есстче шетцшп), шеаьите йе чсаЬПГсу оЕ сЬе Етохеп сець Ьу ретЕопшпц а ьепеь ой|тоГсспц й!исюпь оп СМГС!и)-Ттр-НВ-сла. Ргогосо! !г 5)аее 2г Яе1есггщ ал Епгегасгог 18.35 5сгеепяпд аког 1пТегасбпд Рго1е$п5 А!|с)по(я оЕ (Ье сгапяуогшес$1ЕЪгагу аге р1асес$ оп — 1.еп яе1еспче пъейа со сея( Еог (Ье гпаЬ!1Пу со ргошосе ЕЕ((2 ггапясг!рг!оп.
Ь)ог а11 се11я сопса|п|пц |пгегасг!пц ргогегпя р1аге аг 1003% еЕЕ!с|епсу оп — Ьеп яе1есггне пъейшп (Еяго)а1с ес а1. 1995). То шахптпге гЬе сЬапсе оЕ с|егесг!пП гпсегасгго, еасЬ ргппагу со1опу оЪ)агпеь! Егош гЬе 1гЬгагу ггапяуогшаг!оп яЬоп1П Ъе гергеяепгес1 оп (Ье яе1есс|оп р!аге Ъу йгее со сеп ч!аЫе уеаяг се11я. Рог ехагпр!е, ЕЕ 5 х 105 со1ошея Ьас1 Ъееп !п|с|а1- 1у оЬ(агпес|, Ъесъчееп !.5 х 104 апс$5 х 104 се1)я ъчоп1П Ье р!асеь$ оп съчо со Пче р1асея. А!)ЬопПЬ ГЬ)я ргасске гпау геяп1$ ш гес$ппс$апг ьо!апопя оЕ йе яагпе сР)ъ)А, П Ье1ря Со епяпге СЬа( а11 рН- шагу сгапяуоппапь аге гергеяепгес1 Ьу аг 1еап опе се11 оп )Ье яе1есг!Ре р1асе; |п Еасс, ге!яо1ас!оп оЕ ап |с|епг!са) сР)ь)А агпопП а ге!апче)у япа11 яес оЕ "роя!С)чея" сап Ье Са1сеп ая опе я|По оЕ а ярес!Е)с ргогегп-ргосегп гпгегаспоп.
15. ТЬаъч опе а!|с)пог оЕ 1|Ьгагу-сгапяуогпъес1 уеаяг (Егогп 5(ер 14), апс$ Й1псе $;$0 ъчПЬ СМ(ба1- КаЕЕ)-Рта-Н)я-Тгр сЬоропс гпейшп. |пспЪасе йе уеаяс ъч!ГЬ яЬа|с|пП Еог 4 Ьопгя ас 30'С Го |ос|псе сгапясг)рс|оп Егош йе САМ ргошосег оп йе 1гЪгагу. 16.
Р!а(е 10 сеПя (ог 50 )г! оЕ а сп!Гоге ас ОР „= 1.0) оп еасЬ оЕ ап арргорпасе пшпЪег оЕ $00- ппп СМ(ба1($(а(1)-Рга-Н|я-Тгр-Ьеп ъ)горопг р1агея. А 3МРОКТА(9Т ТЬе ча1ое о( 10я се|В рег р|аге 'ь йе Ь~ПЬеяг р|аппП с|епя)су ЕЬас ПепегаПу сап Ье еПесггче|у ияес$.
Р)аг)пП аг ЫПЬег с|епйПея (е.П., 3 х 10я) сап геяо3$ )п сгояя-ЕеейпП Ьегиееп уеая( сеПя, геяо|ПпП |п ЫПЬ ЬасППгоопг) ПгоиаЬ. 17. !пспЪасе йе р!асея Еог 5 ъ)ауя ас 30'С. Еъерепъ)|пП оп |Ье тйчйиа| Ъаа ъьей цооъ3 сапъ)|г|агея Еог рояпче тгегасгогя ъчъП Пепега|)у ргог)осе со1оп1ея ъч)ЕЬ|п 5 ъ|ауя, ъчПЬ )Ье тояг оЕ со1опъея арреаг)пц аг 2 — 4 ъ)ауя. 18.
ОЪяегче (Ье р!агея Еог Пгоъч(Ь апс$ гпаг1с со1оп|ея ая ЕЬеу арреаг. А Пооъ| пгагеПу (еяресъаПу П а )агПе питЪег оЕ со1ойея ярреаг го Ье Пгоъч)пс) ь со оЬяегче йе р|агея оп а ъ)а)|у Ьайя, Ьиг пог песеьап!у со рк|ь со1отея ъгпгпейасе1у, |пясеай оп |Ье Пгяг ъ)ау ЕЬаг ЕЬе со)оп|ея аге ч|я)Ь|е Ьу еуе, пъаг)ь ЕЬеъг |осаг|оп оп ЕЬе р|асе ъч)ЕЬ а ъ|ос оЕ а СПчеп со|ог Егопь а |аЬ тая|сея (е.П., ъ)ау 3 = геъ3). ЕасЬ ъ)ау, таг)ь паясепс со)оп|ея ъчъгЬ йяппспче со|огя (ъ|ау 4 = Ь|ие, егс). 19. Ас с$ау 5, сгеасе а шаясег р1аге (СМ [Сг!п!-Рга-Н|я-Тгр) оп ъчЬгсЬ со1оп|ея аге цгопрес$ Ьу с1ау оуарреагапсе.
|Е гпапу аррагепг рояъгсчея арреаг, П тау Ье песеяяагу со сгеаге яерагяге р|агея ъч|ЕЬ со1оп1ея оЪга)пеъ3 оп г)ау 2, оп г)ау 3, апъ3 оп ъ)ау 4. То Пепегяге а пеПагсче сопьо| Еог яоЬяеапепг ягеря, р|с)ь аг гапъ|опь 3 — 5 со1опъея Егопь ЕЬе р1асея ъьеъ$ со с$егегпппе лаЬППу (р|еаяе яее поге го 5гер 34), апъ) яагеа)ь ЕЬеъп |п рагаПе| оп ЕЬе пъаягег р|агея го Ъе геягсй!Е ияпП а пъапъсо|йггоцсег Еог яоЬяе9иепг яяяау ягеря (яее 5гер 2 3), пъа1ъе гоге ЕЬас ЕЬе яггеа1ъя аге Пг|ъ)ъ|еъ| ъп япсЬ а ъчау ЕЬас со|опъея иаП соггеяропъ$ го ЕЬе яро|ъея оп а ЕгоППег (р|еаяе яее Р)Ппге ) 8-30). 20.
1пспЬаге (Ье р1асея аг 30'С ппг!1 рассЬея/со!оп!ея Еогпь. ТКОРВ! ЕПНООТПЧС ° Со|оп)ея аг)я)пП пюге йап ) иее|с айег р)аг)пП аге пос 33)се|у Го гергеяепг Ьопа йг|е роя|Пчея. |п сея|я о( пъаясег р1агея, Ггое |п(егассогя сепг) со соте ор |п а и4пс|оъч о( багие ярес)Пс Еог а П)чеп ЬаП, и ПЬ Еа)яе рояйнея с)оягег)пП аг а с))Иегепг г|гпе ро$пг; Ьепсе, Пгоор)пП ЕЬе со)оп)ея ая ЕЬеу Пгоъч Ьу )Ье)г г)аге о( арреагапсе Еас)3!Засея йе с$есьюп о( и ЫсЬ с|опея го апа)усе Пгяг. П ия)пП а герЬса гесЬп)с|ое, |г 'ь иоппиФп|е / та)ъ)пП ап ехсга гпаясег р|асе спаса)п)пд П|исояе (р|еаяе яее посе Го 5сер 19).
° Соп|агп|папоп ГЬа( Ьая оссоггеъ) ас ап еайег ясер (!.е., г)ог)пП р|асе ясгар)пП) 'ь депега3)у ъпапаега Ьу Г гар)с3 ПгоияЬ (24 Ьоогя ог |еяя) о( гпапу (ь 500) со)оп)ея рег р|асе. П сопгапъ|пагюп сап Ье сопйггпес$ Ье Ьассепа|, опе орПоп ь Го ргераге пеъч яе|ес|Ые р|а)ея Пъас сап)а|о 1 5 )сап) Гесгасус3|пе, апс| гереас Г 3)Ьгагу )пс|исПоп апг3 р)ас)пП. Бг51 СопЕ1ггпа11оп оЕ Р05111че 1п1егасЕ1оп51 Те51 Еог Д-да!ас$051г!а5е Ас11ч!Еу апг! 1ог Е.еи Рецо1гептепс Мерь 21 апс! 22 сеп Еог Ва1ассове-шг)пс)Ые сгапвспрсюпа! асс!час!оп оЕ ЬосЬ сЬе 1ехАор-ЕЕ!/2 апс1 1ехАор-!ай герогсепп Япш1сапеопь асс)Час)оп оЕ Ьой терогсегь ш а 8а1ассоье-ьресгйе таппег 8епега11у !пс)ссасев сЬас сЬе стапьепрсюпа! рЬепосуре !в сспе со ехргеьв)оп оЕ 11Ъгагу-епсоссес! рготеспь, гайег йап пшСайоп оЕ СЬе уеаьС ЬоьС.
А гпаяСег р!аСе сопта)п)п8 8!псоье апс) 1епсше Гь пьес) аь а вот се Еог сеьс со!посев. 21. Авьау Еог сгапьепрсюп асс)уасюп. ТЬе аявауя сап Ье регуогшесг Ьу епЬег гевсгеа!с!п8 со!ошеь мчсЬ а соойрсе1с ог шйгш8 а гпашГо!д/Его88ег, сеЬссЬ Ь рагйеп1аг1у пвеЕп1 сеЬеп апа1угш8 а 1аг8е ппгпЬег оГ ропоте со!ошеь ГЕог сСеса11я оп сЬе ые оЕ а Гго88ег, р1еаъе ьее Г!8пге 18-10). ТО А55АЧ ВЧ 0!ВЕСТ 5ТВЕАКИЧС а.
Оп еасЬ оЕ йе Еоог Ео!)оссг!08 р1асеь, пве а Пас-ессйес! соойрк1с со гер1касе с)се ВгЫ Егот сЬе гпаьсег р!асе. С/ве сЬе вате соосЬрк)с со всгеа)с ап 1пссюЫпа! со!опу асгоьь сЬе Еопг р1асеь. Тгу со Вес а сЬ!с)с всгеа)с оЕ уеаьс оп р1асеь сопсашш8 Х-8а1, апс) а сЬ)п всгеа)с оЕ уеаьс оп р1асеь !асЫп8 1епс!пе. Ь. 1пспЬасе йе р1асев Еог 3 — 4 ссауь ас 30'С. Х-8а1 р!асев ъг!11 усе!д гевп1п мчсЬ!и 48 Ьопгя, сессЬ йе ьсгопаеса шсегаейоы арреапп8 аь еаг!у ав 18 Ьопгв.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
