Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 81
Текст из файла (страница 81)
!997). 1л гЬе пехг леъч уеага лпагсЬ гЬе расе оГ гЬе ргесейпд уеагя Ь тау Ъе йаг асгееплпд а депоте'а ъчогй оу сойпд !проста!!оп ъч!11 пог Ье аа даппг!пд а гаа)с аа П поъч аеета (р1еаае аее гЬе !проста!!оп рапе1 оп !ХТЕКАСТ!Ом тКАР АХО КЕЕАТЕО ТЕСН|ЧОЕОС!Е5 аГ йе епъ! о! й|а сЬарлег). Ргогосо| 1: Вга8е 1: СЬигасгепгабоп оГа Вгдг-ГехЛ Рияоп Ргогет 18.17 СТАСЕ 1: О!агаС$Епка6Оп От а Ва1И.ЕхА ГЫ!ОП РгО$Е!и Ап лпсегассог Ьипс Ъе81па чдсЬ сЬе Вепега6оп оГ а сопасгисс сЬас ехргехаеа йе ргоселп оГ ли!егер! Гсьед со сЬе Ьассепа1 ргосеш ЬехА (а рВай). ТЬ!а сопасгисс ь сосгапаГогшед ндй а !ехЛор- !ась геропег р1аяиЫ |псо а уеахс а!гам сопса|п|п8 а сЬгошокоша!1у |псе8гасед 1ехЛор-ГЕН герогсег Вепе.
ТЬе рВай ь апа1укед |и сопсго1 ехрепплепь со еасаЫьЬ лнЬесЬег Ь сап Ье иаед |и а слно-ЬуЪг!д асгееп. ТЬеае сои!го!9 десегпипе ннЬесЬег сЬе ЬаЬ Ь ехргеааед аз а асаЫе пис1еаг рииеш оГ йе соггесс ргейссес1 ыке сЬас доел пос |пдерепдепс1у асбчасе сгапзспрс!олл оГ сЬе 1ехЛ орегасог-Ьааед герогсег 8епеа со апу я8п!Всапс де8гее. Г)ерепд|п8 оп йе гехи|с оГ сЬеае сопсго1я йе Ъад гпау Ъе сьес| с|Ьесс1у со зсгееп а 11Ъгагу ипс|ег сопйсюпз ехсаЫьЬед дипп8 ча11- дасюп оГ сЬе Ъао. А1сегпа6че!у, длТГегепс сошЫпа6опа оГ герогсег асса!па) р1ахш!да сап Ъе иаед, ог сЬе Ъад сап Ъе пюйВес1 ассогйп8 со ргочЫед Вшде1|пея ТаЫеа 18-1 апд 18-2 деаспЬе сЬе Геасигеа апд напогь Гипсс|опа оГ йе р1аятпда сьес1 |и сопксгисс|оп апс1 сеа608 оГ сЬе р1аяиЫ саггуш8 сЬе Вепе епсойп8 сЬе Ъаи Гияоп ргосе|п.
ТЬе ягиссигех оГ сЬе 1.ехА Гияоп апс1 асбнаСюп с1опла!п Гияоп нес!оса аге аЬончп ш Р18иге 18-8. |п сЬоояп8 Ьогн со сопксгисс а Ьа)с, |с Ь )гпрогсапс со геплегпЬег сЬас сЬе аааау с1ерепсЬ оп йе ай!)су о! сЬе Ьа|с со епсег сЬе пис)еиа апг! гегрлгеа сЬе Ьа|с со Ье а сгапасг)рс)опа) пол-асс)налог. ТЬеге1оге, 8 йе сЬоаеп ргосе|п Ьаа оЬчюгь аес|иепсеа йас соп1ег ассасЬспеис со плеплЬгаиея ог хег|иеисеа сЬас аге сгапаспрсюпа) асс)нас)оп л1опла|пя сЬеае аЬоиЫ Ье гегпочег|.
А)сЬоиВЬ аогпе )пнеас)8асога Ьане аиеплрсес| со иле ино-ЬуЬг)д ауагегпа Со Впд анаод|ас)08 раипегв Гог ргосе)пх йас аге поггпа|3у ехггасе))и)аг, йь Ь аи ипргочеп ягасе8у апл| 9Ьои)д Ье ге8агс|ед ах а Ь|8Ь-г39)с чеп|иге. ТЬе Го11ондп8 шейосЬ и61Ье Ьаяс уеахс шейа апс| сгапаГоппасюп ргосесЬлгея 1с Ь 8оос| ргас6се со гпоче ехрейсюгь1у сЬгоиВЬ сЬе сЬагассепха6оп асера дезспЪед Ье1олн. 1Г р|аяшсЬ аге гела)пед Гог ехсепдед репода оГ 6лие ш уеаас шашсалпед оп РагаГл1ш-ннгарред хе!ее!|не р1асеа ас 4'С, сЬе ехргеаяоп 1ечеЬ оГ ргосешх нн!11 Вгадиа!|у дгор.
АГсег 2 лнее|с9 ог ао, гехи!!а шау Ьесоше аошеннЬас напаЫе. 1Г де!аул аге Гогеаееп, сЬе Ъеас ор6опх аге елйег со гереас сгапаГогшас|опа ън|сЬ ЬаЬ ргосе)п апд сЬе 1ехЛор-!асУ геропег ЬеГоге плоч!п8 оп со!лЪгагу асгеепш8 ог со яоге ас -70'С а а!ос)с оГ уеанс сгапаГоппед чдсЬ Ъа|с апд герогсег сопасгисса сЬас сап Ье сЬаннед пшиейасе|у ЪеГоге |лЬгагу асгеепш8. МАТЕК!Аи5 САОТ!О)93: Р1еаае нее Аррепйх 12 Гог арргорпаСе Ьапд13п8 01 таСег|а19 гпаг|гед нч|сЬ <3>.
ВоГГег8 апг! Бо!обоо8 Р1еаке нее Аррепд|х ! Гог сошропепла оГ а!ос|с ао1иС|опа, ЬиГГегя апд геадепся 03!иСе а!ос|с ао!ис|опх со сЬе арргорпале сопсепСга6опя 2х ВО5 Ве1-1оасГт8 ЬиГГег 300 ппп Тиг-С1 |рН 6.8) 200 гпм ййю|Ьгеио| 4ОА ЯЛЯ |е!ессгорЬогегь 8гаде) 0.2ОА ЬгопюрЬепо! Ыие 209'о 8)усего! Я)8 8е1-|оайпц ЬиГГег )ас)дп8 ййюсЬгеьо! сап Ье лсогед ас гоои1 Сегирегасше. Адд с|аЬюйгеьо1 Гголи а 3 м ксоссс )ыс ЬеГоге йе Ьисуег Ь плед. 18.18 СЬарсег 183 Ргогет !пгегасбоп ТесЬпо!081еь Се!8 5О5-ро1уасгу)атЕде Ве) <1> Р1еаье ьее Аррепйх 8 Еог ргерагадоп оГ 51)5-ро1уасгу)аспйе Ве1ь иьеь) ш сЬе ьерагасюп оЕ ргосе!пь, Мос!е1с АснЬ апе! О!коппс!еобе!еВ Таг8еС Е))ч)А елсод108 !Ье ргогет оЕ слсегеьс ЕЬад) АпбЬос!1еВ Молос)ола) алссЬоду со ЕехА !СЕ ОЕч)ТЕСН) ог Роlус)ола1 алВЬоду !о ЕехЛ Е)лйгго8ел) ог 5ресспс апдЬоду со СЬе Гияол дотат оГ ЕЬе саг8еС ргоге)л Е!Г ачас!аЫе) Мее1!а Р1еаье ьее Аррепд)х 2 Еог сопзропеп!ь оЕ уеаьс гпейа.
СМ ье)есГгче тедЕит 1)ье ТаЫе 18-3 со еьдпсасе йе апюипс оЕ гпейа гедшгеВ апс) ТаЫе 18-4 со ргераге сЬе песеяагу ье!есВче пьейа. Уеаьс пЬго8еп Ьаье часЬоис апипо ассаь ЕУНВ) ы ьоЫ е)сЬег чай ог счссЬоис апипошшп яс1Еасе. ТаЫе 18-4 аььшпеь сЬас сЬе УНВ соп саша агпгпошшп ьи1Еасе. 1ЙЬе Ьогпе оЕ уеаьс шсго8еп Ьаье шьспссш сЬас 1.1 881сег Ье асЫеа со ша)се шеа!а, сЬеп Ь г7оеь пос сопсаш апипошши ьи)Гасе апс) 5 8 оЕ агпгпопшгп ьи1Еасе рег Раег оЕ гпейа ьЬои1с) Ье асЫег).
Уеаьс ье)есЕгче Х-Ва1 тедЕит Ь Ргераге йе Ьаье спейигп сп 900 гп) оЕ Н,О, ассогйп8 со ТаЫе 18-4, Аисодаче сЬе Ъаье зпейиго апг) соо1 Ь со 55'С, ги 1п а ьерагасе Ьоо!е, аисос)аче 1 8 оГ юйиш РЬоьрЬасе ЕйЬаяс) апс) 3 8 оЕ ьос)шш РЬоьрЬасе 7гпопоЬаяс) )п 100 сп! оЕ йь611ес1 Н,О. ш'. М)х сЬе пчо аисос)ачег) ьо1шюпь со8есЬег, апс) асЫ 0.8 ш) оЕ 100 гп81гп1 Х-Ва) Дп Ас,)ч'-йшесЬу1- Еоггпашйе <!>). Рош йе р)асеь.
УРО тедсигл 20 8 оЕрерСопе 10 8 оЕ уеаьС ехггасС 208 оЕ81исоье 20 8 оЕ а8аг Е)Е Еог р1асеь) АсЫ 1 1пег оГ йь611ед Н О апс1 аисос1аче йе шейиш сог 20 пипшеь. Ве1оге роипп8 р!асеь, соо) сЬе аисос1ачег) гпес1шш со 55'С. прес!а! Ес!о1репеп1 Огу Гсе)е!Ьало1 ЬаГЬ <! > Р!еаье ьее 5сер 13. Йас-ед8ед ГооЕЬрссКь, ьсег1112ед То ьсеп)ые, сгапьЕег ьсапВай соойр)с1сь со а 250-гп1 Ьеа)сег, сочег йе Ьеа1сег сч)с!ь а!шп)пиль Ео)1, апс) аиСос)аче ипс)ег ьгапс)агс) г)гу сопйгюпь.
Неас Ыос)с ог ТЬегглосус)ег ргеьес со 700 С, ог 801)Еле иасег Ьа!Ь Ае!Й6опа! Кеацеп18 5сер 7 оГ ГЬЕь ргогосо1 гедисгеь ЕЬе геа8елСь Гог ьиЬс!оп!08 11ьсед т СЬарсег 7, Ргососо1 7 у. 51ер 2 оГ ЕЬ)ь ргососо) гедшгеь ГЬе геа8еп18 Гог 1гальГогтадол оЕ уеаьс Гсьсед и 5рессог ес а!. !7998, СЬарсег 21).
51ер 77 оГ ЕЬсь ргососо) гедиЕгеь ГЬе геа8елГь Гог )ттилоЫоЯл8 11ьсед!л Аррелспх В. Чес1отВ апе! Чеаь~ Яуа1пВ 5. сегечсьсае ьггать Гог ьеlесдол алд ргорададол оГ чесСогь Ер)еаье ьее ТаЫе 78-6) УесСогь саггу)лд ЕехА Ер1еаье ьее ТаЫе 18-1) алс1 асдчадол дотат Гиь)ол ьедиелсеь Ер!еаье ьее ТаЫе 78-2) алс1 Еас2 геропег р)аьтсдь Ерlеаье ьее ТаЫе 78-5) 18.20 СЬарсег 18: Ргогегп 1пгегастсоп ТесЬпо!од(ез ТАВЕЕ 18-2 АсйчаВоп 0ота)п Еияоп Р!азгп)68 десестгогч гя т'схзт Е. сои Соммсят!085сагртгоя Соятхст) доиассз' ь' РГА5мзО ТВР! Ар» р!64-5 ТВР) Ар» р)64-51 ТР,Р1 Ар» 1пн)ггодеп РУЕ5Тгр ТВР1 Ар» РЫВ42 зепез Вгозчп ап6 Мас6гПгчгау (1997) 5егеЬпыМг ап6 6о)епиз ТВР1 Кгп» РМЧг! 02 ТВР! Сшгг Сепег» Кпз» РМ)Ч)04 РССВ42/р26В42 Ниапд апд 5»ЬгегЬег (1997) А ВЧ40 пио1ааг 1осааха1юп со1Е оре 1ад р()С СЕГ(/АВВ о Е1СЕ)ЙЕ 18-8 Тсчо-Ь ЬгсВ Ваяс згес1огз (А) ЕехА Гизюп чессог рС!16а.
ТЬе чес1ог (з изес1 (аз ап ехагпр)е оЕ а Ьа)1 чессог) со ехргезз ЬаП ргосешз аз Гизюпз со йе 0ЫАЬ)пйпд с3оша)п (0В0) о( ЕехА ипбег йе соп1го) оЕ йе САЕ1 )абис)Ые ргопюсег (рСАИ ). Р)азгп)сЬ соп1а!и йе Н)52 зе)ессаЫе гпаг)сег, (Ье 2-ргп ог)д)п оЕ гердса(юп со аПочч ргорадабоп )п уеая, ап апПЬюдс геязсапсе депе, ап6 йе со1Е1 опд)п оЕ гердсасюп со аПочч ргорада6оп (п Е. соИ. )пмсгодеп Ьаз гесепду 6ече!оре6 ап )псегасбоп-Тгар зузсегп )п ччЫсЬ ЬосЬ (Ье Н)53 гпаг3сег апс) апПЬю6с гез)»с»псе шаг(сегз Ьаче Ьееп гер)асе6 иой йе хеос(п геязсапсе депе, счЫсЬ сап Ье зе)ессес! !и Ьой уеазс ап6 Ьас1епа.
Аз (ЬВ чессог Ьас)сЬопе 'ь согпЫпе6 ил(Ь зрес(а)ссе6 Ее»А-Еизюп саззетсез, 11 'ь ПЕе)у со Еасд)сасе ЪчоЬуЬг(6 зсгееп)пд. (В) р)С4-5 (р842А0). ТЬе чес1ог В изес1 со ехргеы (пзегсз аз Еияоп рго1е)пз 1о йе 5Ч40 пис(еаг )осадгасюп зес)иепсе, йе 88-геяс(ие ас1Ыасог 842, ап6 йе Ьегпадд1ибп)п (НА) ер!Горе сад. Ехргеззюп 01 ГЬе Ызюп рго1е)п 'ь ипс1ег сопсго3 оЕ йе САМ )п6ис(Ые ргогпосег (рСАИ). Оесадз о( ро1удпЕегз ап6 чессог зег)иепсез сап Ье 1оип6 ас иги»ч.(ссс.еби(гезеагсЫ)аЬз)до!егп)81101егасдоптгар)пч(гог)с.Ыгп!. (Ас)ар!ее(, »Мй регш(зз)оп, Егогп СЕОЫТЕСН.) ЫЬгагу сопзггис6оп р!аяпаЬ 6А!.1 ргогпогег ргочсбез еГВсгепг ехргеяюп оГ а депе Гизед со а саззеие сопязгшд оЕ пис1еаг )ос»1!»абоп зег)попсе, ггапзспргюпа1 асгЫабоп даша)п, апс) НА ерВоре гад.
А бег)ч»арче оЕ р164-5 1Ьаг сап Ье шгедгаге6 шго уеазг ТВР) депе а(гег 6)дезгюп иЬЬ Вза561; деядпе6 со згш)у Ысегас6опз йаг оссиг РЬуяо- !од)саду аг 1очг ргоге)п сопсепггагюпз (гп согпЬгпагюп иЬЬ РЕЕ2021). 6А1.1 ргопгосег ехргеыез пис!еаг 1оса!ыа6оп 6оша)п, ггапзспргюпа! асбча6оп 6ошаш, зг5 ерЬоре 1»д, гпи16р!е с!оп(пд ягея сопгашз Е1 оп' апд Т7 ргопюгегИ»п)с)пд яге, изе6 го ехргеы сРЫА !гЪгапез. А)!ои Еияоп со йе агпшо гегш)пиз оЕ ап асса агюп с1ошагп,!еач)пд апппо-сеппша! геябиез оЕ ргеу ипЫосЕей чагюиз пш)6Р1е с!ошпд зггез; по ПЪгапез уег ачаг1аЫе.
5»гпе аз р!64-5, Ьш чг)гЬ а!гоге<1 ап6Ь)ог)с геязгапсе гпаг1сегз; по ПЬгапез уег ачаг1аЫе. ТЬе заше Тп903-епсобе6 депе сопГегз 1сапагпусш гезсяапсе (п Е. соП ап6 депе6сгп геызгапсе ш уеая; Ьой ЫВЬ- ап6 1озч-сору пигпЪег чегяопз ачя)аЫе; гпи!6Р1е с1оп)пд яге. )Серг)пге4 Егош Еие Со1еши ЧуеЬ 5!ге Ьггра)чг»чг.сссс е4»)гезеагсЬЛ»Ьз!8о1етгз/сот юогеез1 Ыго) 'з'Р1еазе зее т»Ые г8-1, ОпСепе СЬОЫТЕСН МоВгТес РЬР1ау 5егеЪгП»)сд ап6 6о1ешЬ Ргогосо! 1г Всаре 1: Сйагастегггасгоп оу'а Ва(1-1.еьсА Риь(оп Рго(еЬК 18.21 ТАВЬЕ 18-3 Уеаь1 СМ 5е1есНче Мег(1а Вес)и)сес( Гог Тччо-ЬуЬНд Апа1уь!ь 5тйсе 3 5ТАСЕ 2 МЕОЕА 5ТАСЕ 1 СМ 5е1есНче МесВа (пг1) СМ 61и -Чг СМ 61и — ]6Н] СМ 6»1 -](ГН)Сг] (100) 400 (100) 100 СМ 5е!есВче АВаг Р1асеь (пшпЪег) СМ 61и — (Г СМ 61и — ]УН] СМ 6)и -]СНЪ] СМ 6!и — ](ГНС)г] СМ 6!и -]()Н)А Ъ] (3) 8 — 10 4 е ЗОЪ* 6 — !2 1 — 6 СМ 6а! — () СМ Са1 — ]()Н1] СМ Са1 -]Т)Н'чйг] СМ Са! — ](ТНЕУ.] 3-4 3 — 4 2 — 12 2 12 20 24 СМ ба1 ХВ»! -() СМ 61и ХВа! -() СМ Са! ХВа1 — ]()НКСГ] СМ 61и ХВа) — ]()Н)Сг] (2 — 6) (2 — 6) Согпр1есе пишша1 (СМ) Ь а ше4шш йас сопса(ы аП песе»сагу юрр)ешепи.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
