Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 79
Текст из файла (страница 79)
1993; чо)се)с ес а1. 1993) ас яо1ч!п8 а Ссчо-Ьо<1у ргойеш, шсегеяс сшпес1 со сЬе рояя!Ь!1!су оЕ ехсепг)!п8 ссчо-ЬуЬг!6 яуясеш сараЬ!1сбея со асЫгеяя шоте согпр1ех !псегас6опя !пчо!и!п8 8геасег пшпЬегя оЕ яуясеш сопсропепся. МойЕ!ед ВасЬ !п)с!а!1у, а11 сччо-ЬуЬгЫ яуясешя цяе6 сЬе уеаяс 5. сеген!я!ае ая а Ьояс се11. ТЬЕя ргочег) со Ье а 1цп)сасюп ш яоше ясц61ея оЕ ЬаЬ ргосешя Егош Ьс8Ьег ог8ап)яшя, тчЬеп рояссгапя!асюпа1 шо6!Ес- 18.8 С)таргет 18| Рготе|п!птегаст)оп Тес)тпо1о8|ея Е!Сс!ЙЕ 18-2 Мог)!Г!ет! Ва!т А ргеу !я ипаЫе |о !птегаст тч!|Ь а ЬаЬ !п йе аЬяепсе оГ рояигапя!а|юпа! |пот)|Т|сат!оп оГ |Ле Ьа!|.
А соехргеяяе|! )т!паяе РЬоярЬогу!атея йе Ьап ргосе|п, сгеа8пд а Ыпт)!п8 !птегГасе Гог |Ье ртеу. Ги1 еЬЬег |чЬеп тчог!тш8 |ч|й а Ыпаяе ог ойег роятггапя1а6опа1 шот!|Т|ет оГ с)гсишяст)Ьес) яиЬ- я|тате ярес|Т|с)ту ог тчЬеп р1ас)п8 |Ье шо|Г|Т|ег ип|1ег соптго1 оГ ап икЬтс|Ые ог гергеяя)Ые ртопютег. Рер1!11еь Ехтеп|1)п8 йе сарасЬу оГ а ттчо-ЬуЬгЫ яуятеш со шсегас6опя Ьет|чееп рготе!пя ап|1 чету яша11 1<16 геяЫие) рер|Ыея |чая оГ сопяЫегаЫе Гптегеят Гот яечега1 теаяопя. Опе ап6с)рате|1 ЪепеГтт |чая йе аЪ|16у то ЫепЬГу пипппа! яегя оГ сопяегчет! яет)иепсея гет)и)тес! Гог штегас6оп тч)тЬ а ЪаЬ. А яесопд Ьепей| |чая |Ье Ыеп66са6оп оГ яша11 рер|Ыея |Ьат сои!8 геаи1аге |Ье аст)ч)ту оГ а ЬаЬ рготеш, е)йег Ьу сошрет111че Ь|пйп8 апт! ЫосЫпц оГ ап штегас6оп Ъеттчееп а рготе|п апд 1|я поппа1 раг|пет ог Ьу штетГег)пц тч)тЬ |Ье рго|е!и'я 1птг)пя)с сата1уйс асбчиу.
1п тъчо шт!ерепт)епт т!етпопятгат)опя, яша11 ярес|Т|с )п|егас6п8 рер|Ыея |чете яиссеяя6|11у яе!ес|е|1 Гтош а!|Ьгату: М. Уап8 е| а1. (1995) ияет! а гег!поЫаятоша (КЬ) ЪаЬ то !яо1ате пш16р!е рер|Ыея сиота)пш8 |Ье сапошса1 1.хСхЕ Р|Ъ-|птегаст)п8 пют|Т, |чЬегеая Со1ая ет а1. (1996) 1яо1асет! Ст!!|2-штегасг)п8 рер|Ыея !тегшет) арсашетя), яотпе оГ |чЬ|сЬ ргочет! |о )пЬГЪЬ Ст!)|2 Ыпаяе аст)ч)гу. ТЬе рер! Ые 1|Ъгапея ияе|1 |и |Ье ттчо яти|11ея ъчеге я18птТ|сап|1у т!|ТГегепт |и |1ея)8п, тч1|Ь |Ье рерб|1ея |и опе саяе Гияет! |о йе сагЬоху! |епшпия оГ |Ье ОАЬ4 ас6чатюп |1оша)п !М.
Уап8 е| а1. 1995), ап|1 1п йе яесоп|1 саяе, сопя!та)пе|Г оп Ьой епт)я |чЬЬ|п а!оор оп йе яитГасе оГ |Ье сугор1аяш!с рготе!и йюге|1охш (Со!ая е| а!. 1996). ТЬе Гас| |Ьат Ьо|Ь арргоасЬея тчог)сет) |че!1 ипр1|ея сопяЫегаЫе йех!Ь116у и| рергЫе-рго|е)п гесо8п)тюп. Рер|Ые арта|петя сап по| оп1у Ъе Ыепт|Т|е|1 Гготп Еепе6с ясгеепя, Ьит а!яо Ье ияет! ая Ьаия |п Гигйег ясгеепя Гог !птегастшц рготетпя, |Ьия Ье!р1п8 то е1исЫате сотпр1ех Еепе||с петтчог)тя, яисЬ ая йе уеаят ша6п8 РЬеготпопе геяропяе рай|чау (беуег ет а). 1999; Хогшап ет а!. 1999). Ргогосо! 1: Тгчо-ЛуБпд апд О)Лег Тгчо-сотропепг оувгетв 18.9 1п а ге1агед арр1!саг!оп, 6(аа1)аг ег а1. (1996) девсг(Ьед а гарЫ шейод (о ЫепЬЕу япа!1 шсегас((оп-врес!Еу(пц вес(пепсев мчй|п 1аг8ег ргоге(пв. 1п (Ыв арргоасЬ, сЕ)1)А епсод(пе а )спочнп !п(егас(!п8 ргоге!и нчав вЬеагед Ьу воп(са((оп апд с1опед шго а ргеу чесгог пяпа (Ье вЬог8пп гесЬпщпе.
ТЬе гевп1((п8 гагцегед 1!Ьгагу ннав сосгапвЕогшед ьч(Ь йе Ъад оЕ !пгегевг, апд д)гес( ве1есг!оп ччав шаде Еог Егарпепгв сараЫе оЕ сопЕегг)п8 ш(егас((оп (6(ац))аг ег а1. 1996). ТЬе 1онч-(есЬ, сов(-ейес((че с)па!1(у оЕ впсЬ ап арргоасЬ гпа1сев Ь а пвеЕп1 агЫЬюп го ьгпд!ев оЕ рго(еш Еппс(юп. Тегпагу Сопчр!ехе8 А яп81е ргосеш гпау Ье в(гопы!у Ъоппд го а шп!((ргоге)п согпр1ех Ьу !псегас((па в!пш1гапеоы!у апс1 а(!очч аЕЕгп!(у чч((Ь вечега1 д(ЕЕегепс сошропепга оЕ йе сошр1ех. 6оше Ъад ргогешв (Ьаг поппаПу ехьг ш а пш1((впЬпп)г сошр1ех пгау йегеЕоге шгегасс тч!(Ь !пд!чЫпа! раггпегв уч(й аЕЕ)п!гу !падег)па(е го Ье дегесгед Ьу (Ье пчо-ЬуЬг!д вувгеш.
Соехргевяоп оЕ (Ье Ъад мч(Ь а ргеч!опв!у деЕгпед рагспег ргогегп пщЬ( ргочЫе ап !п(егЕасе (Ьаг впрроггв в(гопцег )пгегасдопв, а11онч)пд (Ье !депг!Егсаг(оп оЕ агЫЬюпа! согпр!ех шешЬегв (Р(8пге 18-3). А пшпЪег оЕ цгопра вееХ югегвсгюп: го(п(гое( геропег асг(негюп вГгопо Гегпегу (пГегасГюп; вГгопд герогГег всбнвГюп вох Ьбб ргог вГгопр ~ЬГегвсг(оп юеб~вгеб Ьу в Ьпбое, 'вГгопс геробег есбнеГюп Е(Сс)КЕ г 8-3 Тегпагу Сот 1ехев А Ьа(( апг1 ргеу, ннЛ)(е рагг о( йе вагпе Л(аЛег-огдег согпр(ех, еаЛег Еопп ггапв!епг сопгасгв ог до по( д)гес(1у (п(егасг, геви!Ьпц )п 1)п(е ог по ас((ча()оп о( герог(ег дерев (гоР). Соехргевв(оп о( а (Л(гд раг(пег (Аих(1(агу) (гпончп со аввос(аге чи(Ь йе Ьа(( апд (о Ье а согпропеп( о( йе согпр1ех гпау вгаЬ|!(хе ргеч)оов1у ннеа)с )п(егас0опв Ье(ннееп Ьаа апд ргеу (т)дд)е) ог ас( ав а Лидие го гесса)( ргеу го Ьа(( (Ьоссогп).
18.10 О ангес 18г Ршгегп 1пгегаспоп ТесЬпо!о8!ез Ьане йепюпзсгасей йас соехргезз!оп ог ап "аихл)лагу Ьай" сз ялрйслепс со зсгеп8сЬеп зисЬ сегпагу !псегасс!опз (ТошазЬе1с ес а1. 1996; ХЬап8 апс) Еаисаг 1996; Тггос1е ес а1. 1997). ТЬгз зсга!8Ыогвагй арргоасЬ Ьаз Ъееп изей зиссезз)и!1у Со Ыепс!Гу сазразе зиЪзсгаСез (Кашайа еС а1. 1998; лгап СпеЫп8е ес а1.
1998) апй со апа1ухе а Гоиг-ялЬип)1 ргоселп сошр1ех (Раизе ес а1. 1999). ТЬе сегпагу "рагспег" !п а йгее-сошропепг !пгегасс!оп пеей пос песеззаП1у Ье а ргоселп, Ъи1 лпзсеай плау Ъе а Ьоппопе ог а йги8. СЬли ес а1. (1994) глгзс йезспЬей 1Ье изе ос ап РКВР12 Ъай лп соп)ипсгюп в!СЬ гарагпусш со !йепс)гу йе КАРТ1 рго1елп Ггош а 1!Ьгагу, зиЬзесрлеп11у йепюпзсгас!п8 сЬас сЬе !псегасйоп ваз йерепйепс оп 1Ье ргезепсе оу гарашусш.
1п а зерагасе згис1у, Ьее е1 а1. (1995) ънеге аЫе Со Ыеп(!Еу ргоСелпз йаг !псегасгес1 вЬЬ СЬе 1ЬугоЫ Ьоппопе гесерсог !п 1Ье ргезепсе ог аЪзепсе оусЬугоЫ Ьоппопе. ТЬе рпшагу сопзсгалпс оп 1Ьлз изе оС сЬе сво-ЬуЬг!й зуяегп !з сЬе реппеаЬ!!Ку оу уеазс со 1Ье сегпагу япа11 шо1еси1е оусЬоке. Ва(1 апс! Ноо!с Риг1Ьег арр!кас!опз оу пни-ЬуЬг!й зузсешз сЬас ргопизе со Ье рагски1аг1у ровегЬй аге зсгасе8!ез со зплс1у ргосе!и-КМА ог рго1есп-йпл8 !псегасс!опз. 1п сЬезе зсгасе8!ез, а зсапйагй!хес1 "Ьоо1с" !з изей 1о йгзр1ау ап КХА то1еси1е ог а йгид со йе (псопипд ргеу, согш(п8 а попргосе(п ЬгЫВе со йе герог1ег Вепе (Р!8иге ! 8-4).
НооЕе Мповп ВЫА- ог Идапй-Ыпб!пд ргосе~п, гизеб 1о 0П)А-Ыпйпд богпа~п Пуопб Я(4А ПуЬг(й адапб ог ос с Вапе: едс апаег )спев Ыпоз )спев Ыпйз Ргеуа: '5ПОВП ОГ ПОНЕ! (ПЬгагу) ргосе!и впп ВСЛА ог Идапй Ыпсйпд зрЕС!1!с!(у Е!СС)КЕ 18-4 Ва(1 апс! Ноо1с !п йь Ягасе8у, йе 0П(А-Ыпй!П8 с(оспа)п (080) 'ь (изей со а йедпей ргоге!и нйй йе сарае!су 1о Ь!пс( е!йег КП)А ог а еПегп)са( 88апй. ТЫз (изюп сопзсгисс, 1егплес( "Ноо)с," 'ь соехргеззес) в!СП а ПуЬпс( КП(А (Ва)с) сои(а!и!П8 сПе ВП)А-Ыпй!П8 я1е (ог 1Пе Ноо)с апс1 а поне) ргоЬе зес(иепсе ог, а11егпас(не!у, уеазс соп(а) и!П8 1Пе Ноо)с аге 8говп (п йе ргезепсе о( а ЬЬегпка1)у зупйеягей пло)еси1е (Ва!1) сПас гизез 1Пе Ноо1с! Вапй апй йе ассиа) ргоЬе зес(иепсе.
ТЬе ргеу сопздсисез ап асс!нас!оп-йогпа!и-(изей ргосе!и аз !и о(Пег пно-ПуЬпс( гпапйезсасюпз; !п сЫз сазе, йе ргосе!и Паз 1Пе ргорегсу о( Ыпй!П8 1Пе ргоЬе КП)А ог сПеписа1 88апс(. Ртотосо! 1: Тсчо-ЬуЬгтт) аптГ Ойет Т|чо-сотропепт 5ултетл 18.11 1и опе ехагпр1е пает) со Ыепс!Еу КХА-!псегасс!пц шо1есп1еа, а Р)ч)А-Ь)пт)!пц |1оша!п |чаа Епаес1 то йе соас ргосе|п оЕ |Ье М52 РЬаце, ччЬ|сЬ !а )тполчп со Ь!пт) а сопаепапа КХА асеш-1оор. ТЬе КЬ)аде Р !Ро1утпегахе 111) рготпосег |чав йеп пает) со ехргеаа ЫВЬ !ече1ь оЕ а аупсЬес!с К)ч)А стипрпяпц сЬе М52 сагцес асепл-1оор апт) сЬе асспа! КХА сагцес оЕ шсетасбоп, сЬе !гоп геаропье е1ешепс !1КЕ). Ъл|Ьеп йе ргеу, сопяас!пц оЕ |Ье |гоп тецп1асоту ргосе!п Епает) со ап асс|часюп |1отпаш, |чав Ьоппт) со сЬе 1КЕ ьесрлепсе, К мчав аЫе со ас6часе ехргеааюп еЕ6с|еп|1у оГ йе Ьабгевропа!че герогсег !5епОпрса ес а1. 199б).
ТЬгх ауяеш |х соинпегс|а11у ача|1аЫе !тоти 1пчигоцеп. А яип1аг ьуасеш Ьаа а1ю Ьееп Ьш!с агопп|1 а РХА-Ьшйпц доша!п, а ЬаК бепчетс Его|и йе Ьшпап !шшппот)еЕ|с!епсу ч|гпа !Н1Ч) Кеч ргосе|п, ап|1 а Кеч геаропае е!ешепс !ККЕ) Гпхет) Со КЫА (Ри|г ет а1. 1996). Во|Ь ьуасешх Ьаче Ьееп пае6 со хсгееп 11Ъгапез апдЬаче Ыеп6- Етет) арес|6с КХА-!псегас6пц пю!есп1еа Ге.ц., р1еаае аее Рпсг ес а1. 1990; Чтапц ес а1. 1996; Ра|1| ес а1. 1999Ь; цепСпрта еС а1. 1999). А ша)ог ргоЫеш |чИЬ йе СесЬп!т)пе Га а ге!аС|че1у Ь~ВЬ Ьас1|- цгопп|1 оГ Еа1ае роа!с!чеь |!не со попарес!Егс КЬ!А-!псегасс)пц ргосе!пь Граг1| ес а1.
1999а). То |1есесс !псегасс!опь Ъес|чееп ргосе!пь апт) сЬешка1 1!цап|)х, |Ье Ьоо1| |чав сопасгпссет) аь а Епяоп Ьепчееп а РЫА-Ъ!пйпц т)оша!п апт) |Ье Ьоппопе-Ъ|пйпц т)оша)п оЕ |Ье ц!псосог6- соЫ гесерсог. То цепегасе а Ъа!с, 6ехашесЬаюпе !йе ц!псосогскоЫ гесерсог 11цап6) ччаа соп!ицасе|! со йе сошроппт) оЕ !псегеас, РК506. 13япц сЬ)а Ьоо1|-Ъаи сошЬ|пасюп, 6 |чаа роаа!Ые со апа!уге !псегасс!опа Ьеслчееп РК506 апт) Ка Ъ|пйпц рагспег, РКВР12.
ТЬ!ь ауасетп арреагх со Ье цепе6са!1у гоЬпас, ах и чтаа пает) со !ю1асе РКВР12 Егош а сРХА 1|Ьгагу |п а Ыш|1 асгееп ап|1 со 6)хсппппасе РКВР12 пшсапса лчссЬ ЫВЬ ап|1 1о|ч ацбшсу Еог РК50с! (1.кбга апт) 1.ш 1996). А ятп11аг асгасецу сои!6 Ье ат)арсет) со сЬе аспт)у оЕ иш16Р1е т)тица оЕ РЬаппасо1оц!са! !псетеас, а1|ЬооцЬ а росепба1 1пп)сас!оп |х |Ье роог реппеаЪ|16у оГ уеаас со юше с1аааеь оЕ сошроппбя Речегъе Тччо-!|у)эг!тГ ТЬе опц|па1 снто-ЬуЬг!6 ау|теша ге1!ет) оп сгапхспрсюпа! асбча6оп оЕ ье!ессаЫе шаг!тета со ьсоге ргосе)п-ргосеш шсегассюп. 1п а гес|ргоса! арргоасЬ, слчо-ЬуЬ|Ы асс|часюп оГ соппсегае1ессаЫе шаг)сета |чаа пает) со т)ече!ор ап аааау Гог 1оаа оЕ ртосе!п-ргосеш !псегасс!опь ГР!цпте 18-5).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
