Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 82
Текст из файла (страница 82)
Та сеьс йе Егосчсй гецшгешепс(ь) оЕ а рагВси1аг ьсгаш, ргераге а ьепеь ос ье1есс1че шейа Еог ч. 16сЬ еасЬ ехрессед аихасгорЬу п ьирр1ешевсей ехсерс йе опе оЕ Гпгегеьс. Гп Оеар ош аг ье!ессв е шейа, а рагиси1аг гщгейепс Ь1асмщ ог УВгорред оис (е 8., — !СН! и 1ас)6щ игасг1 ап6 ЬгпгсК пе). Ч»1иеь аге арргох)шаге поп гпшгп пишЬег оЕ р1»геь ог чо)шпе оЕ!гс)шд гпейшп гегсшгед го соспр)еге еасЬ аГ йе оис)спе6 ргагоса1ь, аььшпгп8 сЬагассевсапоп апг) 1)Ьгагу ьсгеепгщ чггсЬ а яп81е Ьап. ча1иеь гп рагепсйеьеь геОесс р1асеь сЬас шау ог гпау пос Ье геашгей Ьаьеа ап сЬе рагсзси1аг аоау »1гегвасйе сЬоьеп.
(Е') Еаг8е р1агеь аге иье6 ш ЫЬгагу ьсгеешщ (р1еаье ьее сехс); а)1 осЬег р!всеь аге 1О-спг й йагпесег. Оесаые йе геьи1о ас )гЬгагу ьсгеешщ аге чаг)»Ые, йе пшпЬег аГ р1асеь гес)шее гп 5сасе 3 шау Ье Егеасег ог 1еы йап ЕЬе ачегасе ча1иеь рчеп. ТАВЕЕ 18-4 Уеаь( СМ 5е1есВче Мес(1а Гог Тччо-ЬуЬгс8 Апа)уь!5 СМ(6ш) СМ(сш) СМ(ссс) СМ(сш) СМ(сиз, СМ(САЕ) СМ(САЕ, -!1-Н -() -()-Н -()-Н-Ь Х-САЕ)-() -(3-Н-Е Х-САЕ)-()-Н-Е 1агскеосент5 Меошм АсАк Асйк Асдк АСАК~ АСАК АСАКа 6.7 8 20 8 6.7 8 208 6.7 8 208 6.7 8 6.7 8 6.7 8 208 6.7 8 208 208 28 208 28 28 15 сп! 1О ш! 28 !5 гп! 10 пг! 10 гп! 10 пг! !О пг! 20 8 208 208 208 То ргераге 1)г)ш4 ог а8аг шейиш, ш)х ЕЬе (п8сесКепсь ш а Егп»Г чо1ише ос 1 )ггег аЕ Н,О.
Аишссаче гог 20 ш)писеь. Соо) сЬе а8аг шейиш со 55'С ЬеГоге роивп8 р1агеь: Ееисше ьсосЕ = 4 гп8йп1; ТгурсарЬап аеас)с = 4 пг8йпЬ Нгьс161пе ьСос)с = 4 пг8йп1. 'Еог шейа сопсагшщ Х-Еа1, ргераге йе арргорвасе Ьаье пгейшп гп 900 ш) ос Н,О, апс) ые и гп сЬе гессре Еаг уеап ьаеси к Х-Еа) пгейшп. УЬГВ 61исоье Са!ассоье )3гараис ппх Теис ше ТгурсорЬап Н(ьс(6!пе АВаг 28 15 т! 1О т1 5 сп1 20 8 28 15 сп! 1О гп1 5 сп1 208 Ргосого!1: Вга8е 1: СЬагассепха6оп оу и Ваа-! ехА Еивсоп Ргосеах 18.23 МЕТНО0 СопйгсссФ!оп о1 а Васу-ЕехА Гсс8юп Ргосе!и 1.
С1опе сЬе саг8ес РЬУА епсогВп8 йе ргосе!и со Ье сье6 ав Ъаа !пго йе ро1у11п)сег ог" а 1.ехА впяоп чессог (е.8., рМЪСг!01 ог рМ чСг103) Со вупСЬевсхе ап ш-6аше гпв!оп Со 1.ехА. Бпвпге йас а сгапв!асюпа1 яор весрсепсе 18 ргевепс ас сЬе сагЬоху1 сеппшпв ог" сЬе г)еягес) Ъаа вес)пепсе. ТЬе гевп16п8 р1аяпЫ ь гегеггед со ав рВай. 2. 5ес пр а вепев ог сгапвгоппа6опв ог" йе ВСу48!ехАор-ЕЕсУ2 ве!есбоп всгаш ог уеавс пяп8 сЬе го11оилп8 сошЬспабопв ог' 1ехА 6сяоп апд 1ехАор-!ась герогсег р1аяпЫя а.
рВап 4- рМЧг112 (севс гог ас6ча6оп) Ь. Р5Н17-4 + рМчСг112 (роясгче сопсго1 Сог ас6чабоп) с. рВРНМ1 + рМчСг112 (пе8ас)че сопсго1 гог ас6ча6оп) д. рВай + р1К101 (севс гог гергеввюпУРЬУА Ь)псВп8) е. РВРНМ1 -> р)К101 !рояле сопсго1 гог гергеввюп) 6 р)К101 а!опе (пеВассче сопсго1 сог гергевяоп) Рог а гСевспргсоп оу СЬе Сппс6оп ос еасЬ ос йе р1аяпЫв рсевве все ТаЫев С8-1 вод 1 82. 3. Р1асе еасЬ сгапвсоппасюп ппхыге оп ве1есбче 6горош р!асев: СМ(С!п)-1)га-Нсв (гог р!ав- шЫ соспЬспа6опв а-е) ог СМ(Св1п)-СУга (гог р1аяпЫ сошЬспа6оп С), ав арргорпасе.
1пспЬасе сЬе р1асев 1ог 2 — 3 дауа ас 30'С со ве1есс гог сгапвгоппе6 уеавс со!опсев сЬас сопсасп сЬе р1аяпЫя 11 со!опсев аге пос аррагепс вчссЬ!и 3 — 4 гСаув, ог 11 оо1у а чегу япа11 пшпЬег 1 <20) ос со!ооСев аге оЬсасоегС, сгаовсоппаВоп вЬои18 Ье герсасе8. 4. Ма)ге а шавгег р1аСе ог" Сгапвсоппаппь Сгош вчЬкЬ вресс6с со!ошев сап Ье асьауе6 Сог йе рЬепосуре ос ассгчасюп ог" !ась апд ЕЕБ2 герогсегв ав девспЬес! сп 5серв 5-9.
С!Уагас$еша6оп о1 Асбсча6оп апс! Керге88!оп Ассссгссу: А88ау аког Х-ца! апс! Еесс2 Р!сепо$уре 5серв 5 — 9 аге гье6 со сея сЬе Ьап-1.ехА гпв!оп ргосе!и гог сгапвспрбопа1 ас66су ап6 со бепюпвсгасе сЬас йе йяоп ог йе Ъаа доев пос айесс 1ехА Р)в)А-Ъ!п6!п8 асбчау (гог ап !Ппвсгасюп ог йе гергеввюп аввау, р!еаве вее Р18пге 18-9). 5ечега! шйерепбепг со1ошев аге агьауе6 гог еасЬ сошЬ!пасюп ос р1авш)6в сгапвгоппед ш 5сер 2. ТЬсв )в ппрогсапс Ьесапве, 1ог вогпе Ъап сопвсгпсьь сЬе 1ече1 ог" ргосесп ехргевяоп чапев апюп8 шдерепбепс со1ошев, ав доев йе аррагепс аЪс16у со ас6чаСе сгапвспрсюп ос сЬе свчо герогсегв.
1пвсеас1 ог реггопп!п8 5серв 5 — 8, а сев! гог ас6- чаСюп Ьу СЬе сЫогогопп очег1ау агьау ь 8)чеп ш йе а1СегпаСгче ргогосо! аС йе еп6 ог 5Са8е 1. 5. Ргогп еасЬ сгапвгоппасюп а — в (Вош 5сер 2), сье всеп1е, всапбаг6 Вас-е68е6 соосЬрсс)св со рк)с -8 со!ошев. ТопсЬ а с1еап соосЬрсс)г со йе со!опу со р)с)с пр се!1в, ап6 гевсгеа)с йеш ав а 1-сш-!оп8 всгеа1с ш а ВгЫ оп а СгевЬ СМУСв1п)-СУга-Нь ог СМ(С!п)-СУга р!асе. Ав шапу ав 60-80 всгеа1св сап Вепега!1у Ье Вговчп оп а яппи!е р1асе.!пспЬасе йе р!асев очегп18Ьс ас 30'С. 78.24 СЬарсет 18т Ртосегп 1исегасдоп 7есЬпо!ое(ея р!аяпя иКЪОЪ р~авпь!и акъоь Е(СС)ССЕ 18-9 Вергеведоп Аявау Сот 0(чА-Едпд(п8 (Втеп( апд РСаяЬпе 1984) Р)аяпъЫ )К101 соп)а!пя йе ирвтгеагп-асг(наС!пц яес)иепсе (ОА5) ';тоти йе САМ депе ГоПоъчес1 Ьу ЬехА орегасогя ирв(геагп о( сЬе )ас2-сод!пд вес)иеисе. (А) Оп гиейигп соп(а!гпие Па)ассове, йе ргодисс о( йе уеавг САЬ4 Пепе асситпи)агев апд Ыпдв Со йе САЕ ирвтгеаис-аст!нат!п8 вес(иепсе (САЬив ).
(В) ЬехЛГивед ргосе!пв епсег йе иис(еия апс( Ь!ид сЬе !ехА орегасог весрсепсев ().ех, р ), йегеЬу Ыос1апе ассва6оп (тоти СЬе САЬидв апд геРгевв(па 8-Па!ас(ов)даве астпдСУ йгее- Со Г!не(о!д. (ъ)о)е СЬаС оп 8)исове Х-Ца( иъедвпь, уеаяС сои)а!п)п8 )К101 арреаг ав ъчЫСе со1оп)ев Ьесаиве САЕ„дв Сгапвспрдои 'ь гергеввед. (Кедгаъчи (топь 5рестог еС а). 1998,) 6.
Оп йе яесопс! дау, гевстеа1с Гтотп йе съчо пъаясег р!асея со еасЬ оГ ЕЬе Го!!оъч!пЬпс Тгаия(огтиадоия а-Ег 5стеа)с оп(о СМ(С1и, Х-Па!)-Ыта апс1 оп1о СМ(ба), Х-аа!)-Ыта Тгаияуотигас(оия а — с: 5(теа)с опсо СМ(Св!и)-Ыта-Н!я-Ьеи апд оп!о СМ(Сьа!)-Ыта-Н!в-Ьеи Оп!у игасс! ся с)торрес) оис (ЬппЫспе ь ргеяепс) (топь сЬе Х-Ва! р!всея, со аПоъч вЫе-Ьу-вЫе сопьраиюп оГ сЬе !К)01 р(аягпЫ-оп1у сгапв(оппа6оп (Г) вЬЬ (с),е). Ьас(с оГ ве1ессюп Гог йе ЬехАГивед р1аяпЫ доев пос посаЫу аГГесс сгапяспр6опа1 ас6ча6оп очег йе регюд оГ йгв аяау. !п Вепега1, Ь Ь Ье)р(и1 со тпаЕе а ге1абче!у сЬсс1с ястеа1с о( уеая (Ье., сеПв вЬои!с1 Ъе ч!яЫе Ьу еуе) оп Х-Па! р1асея, Ьгп а тдасвду сЬгп ягеа)с (!.е., сеПв Ьаге!у ляЫе Ьу еуе, Ьис с)есессаЫе Ьу !оъчроъчег йыессш8 ягоре) оп — Ееи р)атея.
уеаяс до пос цгоъч ав ъчеП ас пеисга! РН (Ъи(Гегед со 7.0 со ордгпые 8-Па!ассов!даве ас6лсу) ав сЬеу до оп погоса! тпейа (РН -5.0 — 55). Непсе, и ь еаяег со десегпппе а 1>1ие-ъчЬссе РЬепосуре !Г юГПссепс сеПв ате иис(аПу р1асед ю сЬас Геъчег сеП йляопв аге ге9шгед. Сопчегве)у, сГ уеая аге р)асед соо депяе1у оп — 1.еи р1асев, видксепс сгояв-Геед!пц ндП оссиг Ьесъчееп сеПя апд югпе ПгоъчсЬ чдП оссиг ечеп ъп сЬе аЬяепсе оГ ас6ча6оп оГ йе геропег, оЬвсиг!п8 а стив ровсбче геви!с. ' г и»ъ™ РЗ ~в (Рвг~ъя въъ~1~в в Р ° в В ~ " > в в в Сгаивсирдопа1 асСЫадоп Ьу пев(у сгеа)ед ЕехА ЬаП рго)ейв. рМИг102 Пвед (ог йе ге1атес1 р!аяпЫ рЕС202) 'ь поС а Поод пееаС!не соп)то( Ьесаиве йе рерС!де еисос1ед Ьу йе иптйеггиртес1 ро!уПп1сег вес!иепсе Гипс6опя ав а ънеа1с сгапяспрдопа( ас6часог. рМНН1 12 (апд ге(а(ед р)авив!д р5Н18-34) 'ь опе о( йе пюяс вопя!1)не )ас2 герогсегв ана!(аЫе апд ндП де)есС апу ро1епда( аЫПСу Со ас)ваге !ас2 Сгапяси р)юп.
Ноъченег Гог югие Ьа!Св, йе Ш~2 герогтег !и уеав( втга(и ЕСУ48 !в енеп пъоге яепяСЫе йап йе р5Н18-34 герат)ег, во П 'ь рова!Ые йаС а ЬаП рго)е!и йаС 8!нев 1Пде ог по в!Ппа( !и а ()-па!ассов!даве аявау ъчоиЫ пенегсЬе1еяя реггпП яопъе !ене! о( егоънСЬ оп — Ьеи арпад(- ипъ. П йе в)геа1с о( се!)в депчед Ьу !таис(оппа)!оп ъч!СЬ ров!С(не сои!то) р!аягпдв (р5Н1 74 алд рМИ112) с)оев пос Ыгп с1еер Ыие оп Х-Па! р1асев ъч!СЫп 1 — 2 дауа, сЬеге пъау Ье а ргоЫепь ъчвй СЬе р1асев. Ргосоео! 1: Бгаее1: СЬагасгег)гас)оп и) а Вай-1,ехА Рия)оп Ргосегп 18.25 ТАВ! Е 18-7 Ехресгес) Кеяийя (ог а "СА)е)1-Ьейачес)" Ва)С Ант1с1РАтео Ке5ист5 Х-Ом Рсктся Р|А5м105 тО ТКАняеокм Скоъчтн Ееи-САЕ А55АУ Кегоктек ЕехА Г05юн Сси Аебчабои рВай ъчййе) ИИЬ|Ыое |РЫ|е Ыое ъчйне) ИПЬ| Ыие ъчЫсе Ыое РМСЧ!12 (ио) |ен иеИабче сопсго! роббче соисго! рм ъЧ)12 РМИ|1 12 рККНМ) р5).Н 7-4 ио уея Кергем|ои 1еи иекабче сопсго! роббче сои|го! (ИПЬ|ег Ыое) Ыие до С)ОТ |еяе Ицмег Ыое рВаи (ъчйие) ъчЬ!се ъчЫсе р)К)О) р)К)О! р)К)О! рКРНМ) 5ее |ех| таг де1а|Ь.
7. 1псиЬасе сЬе р!атея Тот ир со 4 с(ауя а( ЗОаС. 8. Аяяау Тот гергеяяюп апс) асйчайоп асг)ч!С)ея: а. Рог гергеяясоп, оЪяегче сЬе Х-Иа) рЬепосуре ас -!2-24 Ьоиь айег ясгеа)ссп8. Ь. Рог асс|часюп, оЬяегче сЬе Х-Иа! рЬепосуре Ьесъчееп 18 апс) 72 Ьоигя айег ясгеа)с)п8. с. ОЬяегче сйе Ьеиг рЬепосуре Ъесъчееп 48 апе) 96 Ьоигя. ТЬе ехрессес) геяи1ь Тот а ъчеПЪЕЬачес) Ьай аге 8)чеп сп ТаЫе ) 8-7 апс) аге яипспсаг)гес) Ъе)оъч.
° ОрсипаПу, ас 12-24 Ьоигя айег ясгеа)с|п8 со СМ(Са), Х-Иа))-()га, йе с) + е сгапяуогпсапся 5Ьои)е) Ье гйясегп!Ыу ПИЬсег !п со1ог сЬап й ° Ас 48 Ьоигя айег ясгеа)с|п8 со СМ(С1и, Х-Ва))-11га, Ь сгапя)огпсапся яйои!с) Ье ЬПцЫ Ыие, с яйои)с) Ье ъчЬ)се, апс) а яЬои!с) Ъе ъчЫсе ог чету ПИЬс Ыие. ° Ас 48 Ьоигя айег ясгеаППп8, Ь сгапяуогпсапся яйои11) Ъе ая ъчеП Вгоъчп оп СМ(С!и)- ()га-Нся-Ьеи ог СМ(Са1)-~Уса-Н!я-Ееи ая оп а СМ(С1и)-!1га-Нь |паясег р1асе, ъчЬегеая а апс) с яйои!Е) яйоъч по Игоъч)Ь.
° 1|)еайу, а сгапяГогпсапся чпП яйП ЕПяр1ау по аррагепс ИгоъчсЬ ас 96 Ьоигя айег ясгеа1|- !п8. )и ап орби|а! ехреии|еиС, со)ои)ея аяяауес) )гоис еасй Сгаия(оииаг)ои а — 1 ъчои)б аП рояяеяя ецача)еиг рйеиосуресНп асс)час)оп апд гергеяя)ои аяяауя. Гог а я иаП иии|Ьег о) Ьа|ся, йь )я иос йе саяе. Тур)сабу, юисе со)оп|ея аге ъчЫсе оп Х-Иа! аиб бо иос Игоъч ои — !.еи гиесбиги, ъчйегеая йе гегисби)и8 со)ои)ея |Пар)ау югие де8гее о( Ыиепеяя аис) Игоъъсй.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
