Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 84
Текст из файла (страница 84)
5тет//е 8/усего/ хо/цйол Гог Ггеех/л8 Стала/отталя 65% зсеп1е 81усето1 Ой М М85О, 25 тия ТпяНС) срН 8.0) Ргососо! 1.' 5сиее 2: 5е!есйпц ал 1пгегасгог 18.31 ТЕ (рН 7.5) (ь(егЛе) ТЕ ГрН 7.5) сол(ат!л8 О. 1 М !!СЫигл асе(а(е ТЕ (рН 7.5) сол!а(л(л8 407ч РЕС 4000 алс! 0.1 АЕ (ЛЬгигп асеса(е (х(ег(!е) 1Чос!е1с АспЬ ап(1 О1фопос!ео6де5 Саглег Г)А(А ВЬеагед аа1шоп арепп ОЫА Ь сурссаау иаеП аа сагпег.
1с Ь ехсгегпе)у ипрогсапс йас сЫа ОЫА Ье о( чегу Ь!ВЬ Пиа16у; ые оГ а роог-с)иаПсу ргерагасюп сап дгор сгапа(огпсасюп ЕгеПиепс!еа опе со пчо огдега оЕ гпа8п(сиПе. Рог а ыгпр1е ргосеПиге Еог Пепегабп8 Ь!ПЬ-оиаПсу аа! пюп ареггп ОЫА, р!еаае аее 5сЫеас1 апП Еаесг (1989) апП СЬарсег б, Ргососо! 10; а!сегпа6че!у, а пшпЬег о( соспрашеа аеП юсЬ ргерагасюпа сапипегс!аау. НЬгагу со Ье зсгеелег( Гог т(егаспол 1псегассюп сгар 1гЬгапеа аге ачаааЫе сопипегс!аау Егош, Еог ехашр!е, СЕОСЕТЕСН (МассЬМа1сег Вуасепг), 1пйсго8еп, Оппеле, ОВР1ау, МоВсТесЬ (Еог а сопсргеЬепяче 1ьпп8 о( ПЬгапеа Егосп чалою арес)еа апд 6аюе аоигсеа, р!еаае аее ъпчсч.(ссс,еПи)геьеагсЬЛаЬа(8о)ешЫ1!Ь аоигсеа.Ьспс1). Ме(11а Р(еаье атее Аррепйх 2 Гог сотропеп!а оЕ уеаа! псейа.
СМ хе!есссче тесПигп С)ае ТаЫе ! 8-3 со еасипасе йе апюипс оГ гпейа гес)шгед апс) ТаЫе 18-8 со ргераге сЬе песеяагу ае1ес6че шейа. Уеаас шсго8еп Ьаае сч(сЬоис апипо аспас (у)чВ) Ь юЫ епЬег сч)сЬ ог сч!ЕЬоис апппопсшп си!Гасе. ТаЫе 18-8 амшпеа йас йе УЫВ сопсаспа апппопшгп ю1(асс. И сЬе Ьоспе оГ уеаас паго8еп Ьаае спас гись сЬас 1.7 ПЛпег Ье аааеП со гпа)се гпейа, сЬеп П с(оег лог сопсаш апппошшп ю1(асе ап6 5 8 оЕ апипошшп ю1Еасе рег 1ссег оЕ шеП(а аЬои16 Ъе аППей Уеаз( хе!ессгуе )(-Па! теоПит с.
Ргераге йе !саче спейшп ш 900 ш1 оЕ Н,О, ассогйп8 со ТаЫе 18-8. Ашос!аче йе Ьаье псейшп апП соо! !с со 55"С. П. 1п а аерагасе Ьосс!е, аисос1аче 7 8 о( юйшп РЬоарЬасе (йЬаяс) апП 5 8 оЕ аойшп РЬоарЬасе (пюпоЬаяс) )п 100 пс! о(с)ь6Пес) Н О. ш. Мгх сЬе ссчо аисос!ачеП ао!и6опа со8ейег, апс) ааа 0.8 пс! оЕ 100 ш8йп! Х-Па! (ш Х,Аг-йшесЬу! Еоппапсйе (! > ). Рош сЬе р!асеа.
Сеп1г1йре5 апс1 Ко$ог5 5огча(! С5А госог ог ес(и(ча(елс 5ова(! КТ6000 сел!с!(08е алс( Н!0008 го!ос ог ег(и(ча!елс Брес1а! Ецо!ргпеп1 СиИиге р!а(еь Г24 х 24 слс) Гог ье!есс!Уе тесПа Гхее ТаЫе 78-3) ТЬеае р1асеа аге с)и!се ехрепяче, Ьис йеу сап Ье геиаеП псапу 6шеа (аее 5сер 9).
Еа!сол сиЬех Г50 т(, хсег(!е) С!ахх Ьеас(а Г0.45-тт с((ате(ег, а!ел!е) 5!Пта) Орбопа!, р1еаае аее 5гер 9. Неа( Ыос!с ргезес Го 42 С М(его(г(ег р!асе (96-ччеП) ОР6опа1, р!еаае аее 5сер 21. Ми!1(сЬалле! р!ре((ог ог !лоси!абл8 талгуо!с()5го8дег (е.8., Г)ал)саг 5сгелсгПс) ОР6опа1, р!еаае аее 5гер 21.
А Его88ег Еог йе сгапа(ег оГ ши16Р1е со!оп!еа сап Ье ригсЬааес$ ог еая1у Ьошешабе; Ь ь опропапс сЬас аП оЕ йе аро1сеа Ьаче а Пас югЕасе апс) йас сЬе аро1се епсЬ аге 1ече1. ТЬе сго88ег сап Ье асеп! Ьес! Ьу аисос! аип8 ог Ьу Паппп8 ш а!соЬо1. Чес$ог5 апд Вас$ег1а1 ог ЧеаМ 81га1п5 5, сегейспае салс(гс(а(е ьсгатх саггут8 чес!оь ехргехх(л8 ГЬе Ьап алс( !ехАорпас2 геролег (Ггот 51а8е 1) 18.32 СЬаргег 1В: Ргогет 1пгегасг(оп ТесЬпо10ПЕез ТАВЕЕ 18-8 Уеаз1 СМ 5е!есВче Мег)!а Гог Тлчо-ЬуЬг!с! Апа!уз!з СМ СМ СМ СМ СМ (С!О) (Сги) (Сги) (Сги, Х-см) (Сли) -()-Н -()-Н-Т -()-Н-Т-Е -()-Н-Т -()-Н-Т !мскги!гмгз Мгошм Асах Асак Асак' Асак СМ СМ СМ (См, кагг) (САЬ кагг) (См,кагг,Х-см) -()-Н-Т -()-Н-Т-Е -()-Н-Т меи!им АсАк АСАКв 6.7 к 20 к 6.7 П 20 к 6.7 к 20 к 6.7 П 20 ц 6.7 П 6.7 ц го к 208 !оп 25 15 пг! 20 к шк 2к 20 к !ох 20 !5 гп! 20 !5т! 2к !5 ги1 10 ги! 2к 15 т! 2к 15 пг! ок 20 к 20ц 20 ц го к 20 к То ргервгв швишш ог вовс, инх йв шхгегиеиь ГохвгЬег !и в йивг чо!ише оЕ! !ивг оГ Н О.
Авгос!аче Еог 20 гишогвз. Соо! йв вхвг илвйши ло 50'С ЬеГогв роипиа р!влез: Г ввсшв яоск = 4 гихпик ТгургорЬвп згос!с = 4 илагилк Нилгишв яос!с = 4 шхгш!. "Рог илвйа союлгв1и1иа Х-041, ргсрвгв йв врргорпвгв Ьвзв швйши ш 900 ш! оГ Г! О, вии изс и !и ~Ьв гвс!ре Гог уевя зе!ссбчв Х-цв! юивспиш. МЕТНО0 Тгап5Гогш!щ Тпе ЫЬгагу УЬГВ с Посохе Св!велозо Пв(ггпозе Ргорот иих !.еислие ТгургорЬви Аког 1.
5е!ес1 а уеаз1 со1опу, ехргеыпк 1Ье Ьаи апс1 1ехАор-1асх, героггег, йа1 игах зЬоччп лп 5!аде 1 1о Ье оргииа1 1и 1Ье 1011(а! соп1го1 ехрепгпепь. Ргогп 1Ьлз со1опу, Вголч а 20-ш1 си1шге (и СМ(С1и)-(1га-Н(з 1(с)иЫ с(горои1 шес((иш очегп(ПЫ а1 30'С оп а го11ег с(гшп. А !МРОПТАЫТ ТЬе Ьа!1 апс) ГехАОР-ГасЛ героггег р!азт!с)з з!лоиЫ Ьаче Ьееи 1гаиз(огтес( !01о ГЬе уеаги <7 — Л 0 с(ауз Ье(оге ге!гааз(огта1!Ои ъмй ГЬе ПЬгагу.
!1 'ь !гпроггаи1 го гпа!Ола!и з1еп!е сопсП- 1!Оиз ГЬГООПЬООГ. 2. %!иге 1Ье 20-гп1 очегп(кЬ1 си!!иге (пло 300 пл! ОГ СМ(С1и)-И..а-Н(з 1(с)шс) с1горои1 шее((иш ялсЬ йа1 1Ье Й1игес( си!!иге Ьаз ап ОГ) „оГ -0.10-0.15. 1псиЬаге йе си1шге а1 30"С оп ап огЬГГа1 зЬа1сег ип111 1Ье си11иге Ьаз Попе 1ЬгоикЬ 15 с(оиЬ))пкз, 1о геасЬ ап ОГ)з оГ -0.50. 3. ТгапзГег 1Ье си11ше го згеп!е 250-ш1 сеп1пйке Ьоп!ез, апс( сеп1пйке йегп а1 1000 — ! 500г (2500-3000 гргп ш а 5огча11 С5А гогог) Гог 5 пипшез а1 гоош Геплрегагиге.
Кешоче 1Ье зирегпагап1 апс( ас)д 30 пл1 оГ з1еп!е Н О 1о йе ре1!е1. Кезизрепс( йе ре1!е1 Ъу Веп11у гарр(п8 йе Ьо111е аВа(пз1 а соиплеггор. Тгапзуег 1Ье рггу го а злеп1е 50-ш1 Ра1соп шЬе. 4. Сеп1пйке!Ье се11з а1 !000-!5000 (2500 — 3000 гргп ш а 5огча!1 С5А го1ог) Гог 5 пипи1ез. Рош ОГГ 1Ье Н О апс( гезиарепс1 1Ье уеаз1 се11з ш 15 ш1 оГ ТЕ (РН 75) соплашшк 0.1 М 1НЬлшп аселаге. 5.
Ас(д ! )Гк оГ11Ьгагу Г))з(А апс) 50 )ГП ОГ ГгезЫу с)епагигес) сагпег Г)ЬГА Го еасЬ оГ 30 згеп1е 15- ш1 писгоуике шЪез. Епипес(гаге1у асЫ 50 ф оГ 1Ье уеазл зизрепяоп (Гхош 51ер 4) 1о еасЬ ОГ 1Ье 30 йЬез. А кооб ггвизГопивПои зЬои!д у!е!д - ! О' ггвиз(огтвигз)рк оЕ 1лЪгвгу РМА. ТЬе сье оЕ япвП чо)- итез оГ РВА (орПплвПу, <!О и!Агвиз(огтвИои тЬе) кеиегвау еиЬвисез ггвиз(оппвгюи еЕЕГ- слеису. Тгвиз(опивПои оГ уевзг ли ит1глр!е япвП в!Гоиогз !и рвгвПе! Ье1рз гес!исе ГЬе Пке!ГЬоос( оЕ соигвгишаПои, вис! и Егес)иеиг!у гези1ь !и ядигасвиг!у Ьеиег лгвизЕопивгюи еГПслепсу ГЬаи ГЬвг ОЪгаГиес) Ьу ияик !вгкег чо!итсз ш в яивПег ииплЬег оЕ гиЬез.
Ро пог сье ви ехсеы оЕ иаизЕогт(ив 1ГЬгвгу РЬГА рог вПс)иос оГ согирегеиг уевя сеПз, ог евсЬ согирегеиг сеП гиву гв!се ир или(- Пр1е !ГЪгвгу р!взт!с(з, соплр!лсвНид зиЪзес)иеиг впа1узее Ргогосо! 1: 5гаее 2: 5е!есгЕпц ап 1пгегасгог 18.33 6. То еасЬ гиЪе оЕ |Ье се11 яиярепя)опя, абс! 300 )л! оЕ я|еп1е ТЕ (РН 7.5) сопла)п)па 4090 РЕС 4000 ап|1 0.1 М 1!йиип асе|а|е. М!х Ъу Веп|1у ЕпчеггшВ |Ье |иЬея а пшпЪег оГ йпея (с(о по! чоггех).
1псиЪасе йе |пЬея Еог 30-б0 пипи|ея а| 30 С. 7. То еасЬ гиЪе, а|Ы 40 р1 оЕ 13М50, ап|! пих йе ялярепяопя Ъу шчегяоп. Р1асе йе |иЬея ш а Ьеаг!лла Ыос1| Еог 10 пипигея аг 42'С. В. Р!аге йе ггапяГогшаг!оп пихгигея ая Ео!1очгя: ГОК 2В ОГ ТНЕ ТОВЕ5 ТО ВЕ 05Е0 5ОЕЕ!Х ТО СЕНЕКАТЕ ТКАН5ГОКМАЫТ5 а. Р)репе |Ье сопгепь оЕеасЬ |иЬе оп|о 24 х 24-сш СМ(С1и)-Бга-Н)я-Тгр |Ьорош р1а|ея. Ь. 5ргеа6 |Ье се1!я ечеп1у апс) !псиЬаге йе р!асея а| 30 С ип61 со!оп!ея арреаг. 24 х 24-сгп р!алея |ч|!! еасЬ ге9шге 250 — 300 гп! оЕ гпейшп, апг! яЬоп!д Ье а!!оччея! |о агу а| гооп| |е|прега|пге Еог | — 2 чЕауя аЕ|ег роиглпц, ЬеЕоге Ьеяпц очей То гег!осе |Ье сЬапсе о!соп|аейпабоп, Ваше |Ье яогЕасе оЕ р!алея аЕ|ег роиг!п5.
5оп|е шчеяпаа|огя |аЕе йе аййг!опа! я|ер оЕ р!аслп5 |Ье ореп р!алея ап|! '!пчеггегя !иЬ оп|Еег ЕЛ' !!5ЬЕ ш а яаапг$агг! 6яое сп!шге Ьоо|Е Еог -|0 пипшея. ГОК ТНЕ 2 ВЕМА!М!9С ТЕ2ВЕ5 ТО ВЕ 05Е0 ТО А55Е55 ТКА!95ГОКМАТ!О!ч! ЕГГ!С!Е!9СХ а. Р|регге 350 р1 Егош еасЬ гиЬе |о 24 х 24-сгп СМ(С1и)-Г)га-Е!1я-Тгр |1гороиг р1агея. Ь.
5ргеас) |Ье се!)я ечеп1у апд шсиЬаге |Ье р1а|ея ас 30'С ип61 со1оп|ея арреаг. с. Р|репе йе гегпашша 40 р! Ггош еасЬ гиЬе |о ша1|е а яепея (аг 1еая| 3) оЕ 1: 10 й!06опя |п ягеп!еТВ (РН 7.5) о| Н,О. |1. Р1а|е 100 р1 оЕ еасЬ Й1игюп оп 100-пип СМ(С10)-()га-Н!я-Тгр 6гороиг р1а|ея, ап|1 шспЬасе йе р1агея аг 30"С ип6! со1ошея арреаг. Лпа!уия оЕ йе й!п|юп яепея ъч|П ргоч|ае ап еябп|а|юп оЕ |Ье пшпЬег оЕ |гапяЕоппапгя оЬга|пей Оссаяюпа!!у, йе пцп|Ьег оЕ ргес!!сгес! |гапяуоппап| со!оп|ея апыпц оп |Ье |00- пип Епйса|ог р!алея йпеп я5пЬТсап|!у |тот |Ье пшпЬег оп |Ье 24 х 24-сгп р!ас и рагбсп!аг!у |Е |Ье р!алея аге Оош г!!ЕЕегепг Ьа|сЬея. А Вопя! |гапя|огп|а|юп яЬоп!д у!е!д 20,000 — 40,000 со!ошеяЛаг5е р!а|е.
Нагхе5Г!пк апг! Роо!!щ оГ РПгпагу Тгап5ГогптапЬ 5геря 9 — 14 иепегасе а Ггохеп я!ос)с гергеяепгапче оГ йе сошр1еге яес оГ ргипагу ггапяГогшапгя, ччЬкЬ сап Ье ияег) 1п яиЬяея!иепг яе1ес6оп.!п |Ь~я ргосеяя а Ьошоиеп)хеб я1иггу !я ргерагес) Его|и |Ье роо1 оГ рпшагу агапа!оппапь (-10я се11я), Ггош ччЬ~сЬ а1н)иогя сап Ье ияе6 го р!аге оп |о яе1есг)че шейигп. ТЬ)я гесЬпкрле ялЬягпигея Еог пюге сопчепгюпа! шейосЬ оГ ггапяЕегппц уеая| (е.а., гер1ка р1аг!пи), ччЬ|сЬ ггапяЕег яисЬ 1агие пшпЪегя оЕ се1!я |Ьа| яоше г!ецгее оГ Вго|ч|Ь |я оЬяегчес1 оп яе!ес6че р1агея, геял16пВ !п яриг)оия Ьас)|Вгоппй 1Г гйяЫе гпоЫя ог ойег сопгапи'- папо аге оЬяегче|1 оп |Ье р1асея, ияе а ягеп!е гахог Ыабе го сагебл11у ехс)яе йеш ап6 |Ье яиг- гоипйпВ геи)оп ЬеЕоге Ьагчеяг!пи 11Ьгагу |гапяГоппап|я. 1п 5гер 9, йе йгя гесЬпи)ие (Ьу аВ)га6оп) Ея Еаяег |о регГоггп, апд а11о|чя 1пдисг!оп оЕ |Ье 1|Ъгагу ап|1 ясгееп)пВ оп яе1ес6че р!агея го Ье сагпе|1 ош оп |Ье яагпе дау, апс) и а1яо пипип|хея йе 6|пе йе р1асея аге ореп, |Ьпя ачо(с))па соп|агпша6оп Его|и а)гЬогпе шо1<)я ап|1 Ьассепа.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
