Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 86
Текст из файла (страница 86)
01ЕЕегепс!а! 8госесЬ оп 1епеше се!11 8епега11у Ъе аррагепс Ьессгееп 48 апс1 гт Ьопгь. ТО А55АТ с/518!с А мАмГОГ0/ГВОссей а. 1)е1!Чег 25-30 р! оЕ ьсеп1е Н,О шсо 48 сее1!в оЕ а 96-суе11 гпкгойсег р1асе. Ь. с/ве а Его88ег со сгапвЕег рассЬеь в!шп1сапеопь!у Егот а ргеййсЫес1 гпаьсег р1асе со йе сее1!ь оЕ а ткгосйег р!асе. АВ!тасе йе р1асе Вепс!у. с. 1Ле сЬе Егоййег со сгапвЕег уеавс Егош йе посто!пег р1асе со еасЬ оЕ сЬе Ео!!осе)п8 р1асеь. ТЬсв арргоасЬ а11осеь арргохппасе1у ес)па! сртапййев оЕ се1!в со Ъе сгапвЕеггес! со еасЬ р1асе. СМ(С1п)-Ссга-Н)в-Тгр СМГба!)-Уга-Н)в-Тгр СМ(С 10) - Уга-Н!в-Тгр-Ьеп СМ(ба1/йаЕЕ)- с)га-Н)ь-Тгр-Ьеп й 1пспЪасе йе р1асеь Еог 3-4 с1аув ас 30'С. Айег 1 с)ау оЕ шспЬайоп, оье опе СМГС1ц)- С/га-Н!ь-Тгр р1асе апс1 опе СМ(Са1)-Юга-Нсв-Тгр р1асе со аььау Еог асйуасюп оЕ сЬе /асХ герогсег, пяп8 йе сЫогоЕогш оуейау аььау !р1еаье ьее йе рапе1 оп АГТГВМАТГЧГ рВОТОСОСя А55АЧ ОГ 8-САГАСТО510А5Е АСТ1Ч1ТЧ ВЧ СГСГОВОГОВМ ОЧЕК!Ау ат йе епс1 оЕ Майе 1).
18.36 СЬаргег 18с Ргогегп 1птегагбоп ТегЬпо!о8гея СМ(б1п/Х8а1) — Уга-Нсь-Тгр СМ (Са1/)!ай/Хйа1)-0га-Нсв-Тгр СМГС1п)-С/га-Н)в-Тгр-Ьеп СМ(ба1/йаЕ)-Уга-Н!в-Тгр-Ьеп 1 р1асе 1 р1асе 1 р1асе 1 р1асе Ргогосо| 1: 5гаде ай 5е!есг(пц ап Тпгегасгог 18.37 е. Сопйпие го пюпйог йгоччй: Т)|ТТегеп(|а! йгоччй оп 1еис|пе в(11 цепега11у Ъе аррагепс Ъеги ееп 48 апг! 72 Ьоига оп йе -|еи р1а(ея ТЬе аесопс) СМ(б!и)-Е)га-Нь-Тгр р1аге сап Ье са)сеп аа а (геаЬ шах(ег р1а(е. 22. !пгегргес йе геаи1(я Со!оп!еа апс! (Ье 1гЬгагу р!аяпиЬ (Ьеу сопса!и аге г)еяйпа(ес( аа йга(- гоипг! рояйчеа |й ° Х-ба1 апа1уа|а !пс)!сасеа Ыие со1ог Го1!ов!пц си!(иге оп СМ(ба!)-И.
а-Нь-Тгр р1а(ея ° Х-ба1 апа1уяа !псйса(ез вЬ|(е, ог оп1у Та!пг1у Ыие, То11ов!пй си1(иге оп СМ(б1и)-Е)гаНь-Тгр р!а(ея ° Со1ошеа йгочг ие11 оп СМ(ба1гКа(Т)-Е)га-Н(яТгр-Ееи р1агея ° Со1ошеа цгохч роог1у ог пог а( а11 оп СМ(б! и)-Т)га-Нь-Тгр-Ееи р1асея ТКОЕ) ВЕЕ5НООТ!ЫС(А)6АЕУ5!5 |п чегу гаге сааея й ап |п(егас6оп оссига ччйй Ыай ай3пйу, апй Ьой рго(е)па аге а(аЫе )и уеая, а ъчеах епйапсегпеп( о( йгов(Ь апд Х-йа! асгв(чу илП оссиг оп фкоае ь веП аа ца(ас(оае спей(игп. ТЫа оссига Ьесаиае |оъч )ече)а о( йапаспрйоп (гогп (Ье САП ргогпо(ег оп фкоае гпед|игп айов ассигпи|айоп о( аи(йс|еп( |ечеЬ о( аггопй|у (п(егасйпй, а(аЫе асгвагюп с(огпа)п (иа(опа (ог ап |сйегасгюп (о Ье г)егесгед. |и гюгпе сааея а(гопе ас(ва(юп о( опе о( йе пчо |ехАор геропега чйП Ье оЬаегчег), ччйегеаа оп|у роог асйчайоп члП Ье оЬаегчег) о( (Ье ойег, 5огпе Ьа|(-(пгегас(ог согпЫпа(юпа рге(егепйайу асйча(е!асЛ чегяь !ЕЙ, ог ч)се чеьа (Еа(о)а)с е( а|.
) 995). |и цепега), гйе сопйдепсе |ече| (ог аисЬ ауяеш-арео|йс )п(егас(ога ь аиЬЯапйайу |оъчег (Ьап (ог )п(егас(оь йа( а(гопй)у асйча(е Ьой герог(егя Тйь )а рагйси|аг|у (Ье саае вйеп а(гопй дгомг(Ь (а оЬаегчег) оп гпед|игп )ас)йпд |еис|пе, апс! ч)йиайу по Ыие со|ог ь оЬаегчес$ вйй Х-еа). Игйе(йег йеае )ао)а(еа аге ригаиег) ь (Ье г)ес(я|оп о( (Ье )пчеаййагог. й по роай)чеа аге оЫагаед (ог а ц)чеп Ьа)г, (Ьеге аге аечега! ро)п(а (о сопяг(еп () ) Тйе ПЬгагу аоигсе 'ь |парргорпа(е ог ап )паий)с(еп( пишЬег о( со|оп(еа Ьаче Ьееп асгеепег(; (2) 61е Ьай г)ось по( (п(егас( в)(Ь апу япй)е раг(пег рго(е|п ччйЬ аий)с)еп( а(йпйу (о Ье с|е(ес(ег! (Еа(о)а(г ег а|. 1995); апг( (3) йе Ьа( )а по( (и а пайче соп(оггпайоп, еййег Ьесаиае о( а (гипса(юп ог Ьесагье о( а(ег(с ейегасйопа ейй (Ье (иа)оп догпа)п, ог й 'ь по( )пгегасйпе ънеП вйй йе )ехА орега(ог а)псе гюгпе гпо|е(у оп (Ье йьюп рго(е|п 'ь аег)иеа(епой (Ье рго(е(п (бо|егпь апг! Вгеп() 992).
й ь аогпейгпеа рога)Ые (о гпосй(у (Ье Ьай апг) асгееп)пй сопй6опа |п огг)ег (о оЬ(а|п |п(егас|огя Ьовечег, аогпе Ьа|Ь а(шр)у до по( депега(е )п(егас(оь. й 'ь )ей (о Фе й(асгейоп о( йе |пчеайда(ог аа Со Ьов гписй ейог( Го арр|у |п аисЫпяапсея 18.38 Огаргег 181 Ршге)п 1пгегасггоп Тес)гпо!очгез СТАСЕ 3: $есопд Сопт1ггпабоп от Роыбче 1п$егасйопь гчагеооове с!осев апс гевгаг1 всгеепгпд РСВ б~гесзу 1гопг уеав1 сПагас1епаеуроп1у явеггв 1 Оа сПагасгегае ~пвеив У ~п 1оуг-гпеа адагове де~ е!ес1гороогевв Пу И И адевг 4-З Оаув уеавг со)опу Пуопсиаооп 1гапв1опп уеав1 4-5 Оаув апс 1вв1 1ог вресгасау сооове рояаче с)осев ведоепсе 1Пе РСй 1гадгпеп1в 1-2 Оаув 1гапв1опп Е. сое ггапв1опп ував1 апг! 1ев1 1ог вресйсггу 1-2 Оаув 4-З Оаув Е!С1)!ЕЕ 18-11 1!Ьгагу 5сгееп!пд Г1овч СЬаг1 5ее гех1 Еог г)е1аг1з. !Кег)гагчп !гого 5рес1ог ег а1.
1998.) ТЬе пшпЬег оЕ роя6чез оЬга!пег) ш ап гпгегас1ог Ьипг с)ерепг)з оп 1Ье !пг!!ч)с)иа! Ъаб апс! 1Ье япгаЬ1111у оЕ йе 1!Ьгагу. АпузчЬеге Егопг хего го зечега1 Ьипс!гес) роя6че !пгегасгогз ш!2Ь1 Ье н)еп66ей ас!чапсес) ргесбс6опз аге цепега!1у йЕ6си11. !Е а геазопаЫу япа11 пшпЬег (1 — 30) оЕ шгегасгогз аге оЬга!пей, 1Ье згерз с!ега!1ег) Ье1озч сап Ье Ео11овчег) еззеп6а11у аз гчг)11еп. !и сазез зчЬеге а чегу !ауде пшпЪег оЕ !пгегасгогз аге оЪга!пей, !1 шау ог гпау по1 Ье деягаЫе го зчог)с ир а11 оЕ йегп аг опсе. Ап а11егпа6че зггагецу )з го "ъчагеЬоизе" пгозг оЕ йе роз)1!чез, апс1 гчог)с ир 24 — 48 оЕ 1Ье Еазгег-егозу)пд с1опез, ъчЬкЬ Егес)иеп11у сопгагп йе зггоп8езг шгегасгогз.
ТЬезе с1опез сап Ъе зсгеепес) Еог зрес!6спу оЕ !п1егасгюп апс! дгоирег) Ьу гезггкгюп Й8езг апа1уяз апг)гог зев)иепсес) го 11егегпппе вчЬейег йеу аге а11 ишс)ие сРХАз ог гчЬегЬег 1Ьеу аге гереагес) !зо1агез оЕ а 1ппбес1 пишЪег оЕ сРХАз. Еп 1Ье Еоппег сазе (еврее!а)!у !Е 1Ье )зо1агес) сРХАз 11о пог гпа1се зепзе Ью1о8)са11у !и 1Ье сопгех1 оЕ йе Ьаа), !1 гз зогпейпез аг)ч!заЫе го гесоп6аиге йе шгЬа! зсгееп сопс1пюпз апс1 ггу ара!и, ияпа а!еяизепяпзе согпЬ!па6оп оЕ ягаш апс1 р1аяпрЬ ОЬгаш!п8 шапу г)1ЕЕегепг шгегасгогз сап Ье а яип оЕ а 1он-арбппу попзрес16с гпгегас6оп.
ТЬе арргоасЬ га)сеп с)ерепс)з оп 1Ье 8оа1з апс) гезоигсез оЕ 1Ье )пчезг!8агог. Р!аяпн!з )зо1агес) Егопг уеазг пшзг Ъе ггапзроппес) !пго а зггагп оЕ Ьасгепа зшгаЫе Еог пгашри!а6опз зисЬ аз зег)иепс!па. 51апс)агг) 1аЬогагогу зггагпз зисЬ аз РН5и зчог)с зче!1. 1Е ияпц 1Ье р1аяпн)з гесопппепг)ег) аЬоче (рМЪЧ112, рМчуг102, егс.), гчЬкЬ сопгагп с)ги8 геязгапсе шаг1сегз йЕЕегепг Егогп йозе оЕ !С4-5, йе оп1у егер гес)и)гес! )з го ггапзЕопп Е. со6 РН5а Ъу е1ес- 28.40 Сйарсег 1В: Ргосееп 1псесаспоп Тесйпо!оП(ея ТАВЬЕ 18-9 Уеая( СМ Ве1есВче Мейа Еог Тсчо-ЬуЬг!В Апа1уяя СМ СМ СМ СМ СМ(САЬ, СМ (Оси) (Сси) (Сси) (Сси) (Оси, Х-сас) Вхее, Х-САЕ) (САЕ,КАее) -Т -О-Н -О-Н-Т -()-Н-Т-Ь -О-Н-Т -Ы-Н-Т -О-Н-Т-Ь 1нскеосентя Меогим Асак АсАк Асак АСАКа Асак' Асхк УЫВ 61исозе Оа!ассояе Ва(Ппозе Огороис пих Ьеистпе ТгурсорЛап НЬПйпе Ь)гася! АВаг 6.7 8 208 6.7 8 20 8 6.7 8 го 8 6.7 8 208 6.7 8 20 8 6.7 8 208 108 28 !5 ш! 208 !08 28 28 !5 гп! г8 15 ш1 10 пт1 28 15 сп! 28 15 гп1 5 сп! 5 сп! 208 208 20 8 208 208 208 Мейа Р1еаяе яее АррепоПх г Еог сотропепся оЕ уеая! тес()а.
СМ яе/есгп е тесйигп Ь)зе ТаЫе 18-5 со езПптасе ГЬе агпоипс оЕ шейа гет)и(гет( апс) ТаЫе 18-9 со ргераге ГЬе песезяагу яе! ест!че гпейа. Уеаяс шсго8еп Ьазе ш(ЕЬоис апипо асссЬ (ТИВ) тя яо1Й еЬЬег ичй ог чНсЬош апипопштп зи!Еасе, ТаЫе 18-9 аяишез сЬас сЬе у)(В сопсаспз апипоппип 501Еасе. !Г сЬе Ьои!е оЕ уеая птсго8еп Ъаяе !пастись ЕЬат 1.7 ВВтсег Ье асЫет) со гпа1се гпейа, йеп тс йгез пос сопсаш агпгпошшп ял!Ьпе апг( 5 8 оЕ апипошшп ш!Еасе рег 1Ьег оЕ птейа зЬои16 Ье асЫей ЬВ аВаг р)асея поп!агате 50 ссВ!т) атрсЫЕЕ!Еп Мспста) (-сгр) тес((ит Еог Ьассепа Ргераге сЬе ЕоПоичп8 аисос!ачег) я!ос)сз: 1.
20% (ъчсч) пта8пеяигп ял1(асе П. 4 ш8/пт! игасП П1. 4 пт8йп! ЬЬПйпе си 4 ш8йп! 1еисше ч. 2()% (тч/ч) 81исозе Ргераге йе ЕоПоичп8 Исег-яеп1Ьег( зо1иПопз: чг. 50 гп8йп1 ашр1ссПш и1. 1% йсапипе Ьус1госЫогЫе Аисойаче йе ЕоПошш8 стчо зо1шюпз зерагасе!у: чПЬ 15 8 оЕ а8аг тп 800 гп! о( йзППед Н,О гх. 10.5 8 оЕ росаяшгп РЬоярЬасе (йЪаяс) 4.5 8 оЕ росамшпт РЬозрЬате (гпопоЬаяс) 1 8 оЕ апипопшпт зи1(асс 05 8 оГюйшп спгасе 160 гп1 оЕ ЙЬНПес1 Н,О Соо1 5о108опз ий апг) сх со 50 С, апг) пих йеш со8ейег. ОшсИу асЫ ! ш) оГ 5о106оп 1, !О ш! оГ 5о1исюп П, 1О ш! оЕ 5о!шюп ПЬ 10 пт1 оГ 5о(иПоп ь'ч, 10 гп! оЕ 5о1иПоп ч, 1 гп! оЕ 5о!исюп чс, апг) 05 пт! оЕ 5о1шюп и1.
Мсх йе Ппа! яо1шюп игеП агк( роиг сЬе р1асея итипейасе!у. Уеая( яе(есггче Х-еа) гпеейипт !. Ргераге йе Ьазе шейшп ш 900 гп1 оГ Н О, ассогйп8 со ТаЫе 18-9. Ашос!аче йе Ьазе гпейпгп апт) соо! П со 55"С. й. 1и а зерагасе Ьосс!е, аисос1аче 7 8 оЕ яойипт РЬозрЬасе (йЬаяс) апг( 5 8 оЕ зойшп РЬоярЬасе (пюпоЪаяс) тп 100 пт! оЕ йзППег( Н О. ш. Мтх ГЬе сшо аисос1ачес1 зо1исюпз со8есЬет, апс( агЫ 0.8 тп! оЕ 100 пт8йп! Х-Ва1 Вп Ас,)яс-сПгпесЬу1- ЕоппашЫе <1>).
Роиг сЬе р!асез. 'Еог птейа сопсагшпс Х-са1, рте рагс йе арргорпасе Ьазе гпейшп ш 900 гп! оЕ Н О, апд ше и Сп йе геегре Еог уеая яе!есиче Х-84! шейипт. То ргераге шейши ог асаг, тшх йе гпсгейеиь тосесЬег гп а Епа! чо1шпе оЕ т 1пег оЕН О. Аисое!аче Гог 20 пшшсез. Соо1 йе шейшп со 50 С Ьесоге роиппс р)асез: Ьеисше зсосх = 4 шсйпЬ '1гурсирЬап яос1с = 4 гпсспт1с Ньийпе поест = 4 шссшЛ ЬтгасП яос14 = 4 гпссги1. Ргогосо! 1: 5гаее 3: 5есопИ Сел)ггтаг!оп о) Роьгг!Ре Епгегасполь 18.41 СепЕГЫще5 апд К01ог5 5огчаИ ИТ6000 сел!с)ЕОВе, Н1ОООВ МРС апс! НбОООА МРС гогогь ЕЕог селгпуи8!п8 глгсго!Иег р!агеь) прес!а! Ецо1ргпеп1 С!аьь ЬеаИь Е0.45-тт еИате!ег, пел!е; 5!ета) М!сгогугег р!аге 124-чгеИ ог 96-и еИ !оргуопа!!) КереаИп8 р!репог Орсгоаа, р!еаьа ьее 5гер !. Адс1111опа! КеацепЬ 51ер 2 оЕ гЬ)ь ргогосо! гедшгеь йе геаВепгь Еог е!есггорогасюл Иьсед т СЬарсег 7, Ргососо! 26. 51ерь 3 апд 4 оЕ ГЬгь ргогосо! гедиИе йе геаеепгь Еог йе ргерагапоп оЕ тул(ргер Е)НА Вот р!аьткЬ Иьгед т СЬаргег 1, Ргогосо! 7.
гаер 70 оЕ ГЬ!ь ргососо! гес!и!геь йе геа8елгь Еог ьедиепс!п8 оЕ уеаьг Е)Ь)А Иеген т СЬаргег 4, Ргогосо! 73. 'ь)ес$ог5 апд Вас$ег1а! апс! геаМ Яга1п5 Е. со!! Е)Н5а ог Е. со!! КСВ ЕругГ!еиВ600 ггрС Ь!ьВ463; СЕСгб)ТЕСН), сотрегепг Тоге!есггорогаиоп Р!еаье ьее СЬаргег 1, Ргогосо! 2б.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
