Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 89
Текст из файла (страница 89)
Ь. (оаг) Иъе сйееа(юп ргог)ос(5 оп(о а 2% айагоае йе1, апг) гоп 1Ье 0НА5 а еоййс(еп( гйе(апсе (о геео|не ГЬе гййе51(оп ргос(ос(5 |и Гйе 200-1 000 Ьр 5!ае гапйе. Аиа!ух)а Ьу е!есгюрйогех|х ъи)! Иеиегайу у!е)д г)яйисйче апд оиатЬйоове Игорь о( |ихеггв, !па)сайий ъчйегйег пюй!Р)е !хо(агах о! а яиай иогиЬег о( сОНАх Ьаче Ьееи оЫа(иео. 9. 1и рагайе| ъч4ЬЬ 1Ье Нае1И сййеа(юп, гоп (Ье гегпа|пс|ег о( еасЬ РСй (-10 н1) оп а 0 2% 1оън-те!1!ий-(етрега(иге айагоее йе!. Сопйпи Иза1 йгоора о( (паеае ргесйс(ес( оп 1Ье Ьае!5 о( 1Ье Наей) гййе51 арреаг (о Ье согпра(!Ые ъч4(Ь йгоорх ргегйс(ес| Ьу апа1уе!5 О( ГЬе попсййеа(ес( РСй ргос)ос(я 6 |МРОИТАЛ|Т 5опъейгпеа а 5(пй)е уеа51 со|опу соп(а!па Ьчо ог пъоге сй((егеп1 ИЬгагу р1аатЫя ТЫГ ънй) Ье иипъесйа(е|у генеа(ег4 Ьу РСй, Го (ойоъч!пй Ьас(епа| 1гапа(оста(!оп, сЬес(ъ аенега! !пг(ерепг)еп1 с|опеа 1о гес(все 1Ье роье)ЫИ(у о( !ояпй (Ье "геа|" |п(егас(ог. 10.
Рог)(у (гайтеп(5 (гопь !Ье (оън-те)1)пй-1егпрега(иге айагоее йе) (СЬар1ег 5, Рго1осо| 6 ог Т). |и саьее ъчнеге а чху !агйе иитЬег о( 'ьо|агех о( а яиа|1 иигпЬег о( сОНАь Ьаче Ьееи оЬга!под, гйе ~ичех(!Иагог иъау сйооее го еег)иеисе гйе РСй ргоаосг гйгесг)у. Оп|у гйе (оичагг) ритег, ГР), ъчог)ьг ъчей ~и хег)неис(иц о( РСй (гайтеией гйе гечегхе рииъег оп|у ъчогсь !и хег)иеис!ий (гоиь рог!Иег) р|аяихЬ. !и йеиега1, 16е ТАпсЬ па(оге о( (Ье АОН |сии!иа1ог ях(иеисег ооъчиъггеагп (гонь (йе Ро!уйпхег )и гйе р)С4-5 чесгог тахех й гИйси|1 1о г)еяйи ЫИЬ-г(май!у рг(тегг |и (Ых гей!ои.
11. Тгапа(оггп Е. сой (е!Иъег 0Н5и ог КС8) и4ЬЬ 0)(А (гот ее!ес(ес) роя)Инее, 05(пй е|ес|горогабоп аа с(ехспЬсх( !п ГЬе гпа|п рго(осо| (5(ере 2 — 5). (35е 2-4 Н| о( Иъе 8-й!исогоп(с(аъе-(геа1ес( Ггоаеп уеаъ1 (5(ер 4) аъ !Ье еоигсе о( ОНА. 12. Ргосеег) ич!1Ь 1Ье еесопг) сопйггпайоп о! роя(юе (п(егасйопа, аъ оо(йпес) |и (Ье та|и рго1осо|, сот- тепс!пй в41Ь 5(ер 6. Рго1осо! 2 Ое1есбоп о1 Рго1е~п-Рго1е~п ! п1егас6юп~ 0~~пц Гаг Чlейегп ъий С5Т Гияоп Рго1е~пь МагдгеС В. Е!пагьоп Гох СИаье Сапсег Сепгег, РГ771абе1рулГа, Репту1чапГа 79117 с 5т тссяон ввотннв нлчв встн ссвсо !н тнослвлноь от вво!сеть япсе сЬе!г шсгосЬлссюп аа сошропепь оГ гесошЪспаис ргосе!иь ехргеааеб ш Ъассепа (5ш)сЬ апд )оЬпюп ! 988), ТЬеу аге полч гои6пе1у иаеб со депегасе апс!Ьоб!еа со атис)у ргосеш-ргосеш !исегасс!опа апб со апа1ухе ЬюсЬеписа! теассюпя Ргососо1ь 2 апг) 3 г)еаспЬе йе иве оЕ С5Т Гияоп ргосе!иь аа ргоЬеь Гог сЬе Ыеп66сасюп оГ ргосеш-ргосеш шсегассюпя а1сЬоидЬ ойег зуасепь аге ачал!аЫе сот сЬе ргогсисс!оп оЕ гесошЪ|папс ртосе!иь (Гог г)есадеб б!зсиааюпя р1еаае аее СЬарсег 15).
ТЬе сесЬп!срлеа иаеб ате Гипс)ашепсаду япи1ат со апа1одоиа сесЬи)пиеа бече1орег! Гог десесс!оп оГ ргосе!иа Ьу ап6Ъойея Рог ехашр!е, !и лчеьсегп Ыоив ап апс!Ьос)у Ь иаег) со бе!ест а саит)Ыасе ргосеш Ъоииг) со а тпешЬгапе. 1п а Гаг лчеасегп Ыос, сЬе апс!Ьоду Ьаа Ьееп гер1асед Ьу а гесопсЬ)паис С5Т Гиаюп ргосесп ргог)исег1 лп апд рип6ед Егош Ьассепа.
ТЬе спсегас6оп оЕ с17Ь ргоЬе ргосе!п апс1 а сагдес ргосе!п оп йе шешЬгаие сап Ье г)есессед Ьу С5Т ри!Ыосчи, лчЫсЬ гедеа оп сЬе аЪл1иу оГ д!исасЬюпе адагоае ЪеагЬ со ргес)РПасе СВТ Гияоп ргосе)пь йас Ьаче ргетбоиа1у Ьоипд со арес66с рагсиег ргосе!па ш ю1и6оп. СВТ риддотчпь сап Ье !и!с)асей рпог со йе ачал1аЪ|16у оГ апс!Ьоб!еа со сЬе ргосе!п оЕ 1псетея, ог ччЬеп ап6Ьоб!еь Ьаче Ъееп Гоппер со лпсегЕеге чч)сЬ ргоселп-ргосе)п !псегассюпя !с аЬои16 Ье посей йас сЬеае шесЬосЬ сЬагассегие ш ч!сто !псегасбопя, лчЬлсЬ ьЬои1д юЪьегрлепс1у Ье ялЬьсаи6асег) )и ч)чо Ьу 1пгсерепс)епс гпеапа юсЬ аь соиппшпоргесгрда6оп (1лгососо! 4). А1сЬоидЬ Ргососо1ь 2 апс1 3 у)е1д гехи!та сЬас аге грладсас)че, С5Т 6ляоп ргосе)па а!ао сап Ье ивеб ш ЫВЫу г)иап6сас!че апг) юрЬ!ас!сасес) аааауа (е.д., р1еаве аее Роаегп ес а1.
!998; МсГ7опа16 ес а1. !999). Рат лчеасегп апа1уыз ччаь опд)паПу бече1оред со асгееп ехргевяоп ПЪгапеь лч!сЬ а 'лР- !аЬе1ес1 С5Т Гияоп ртосеш (В1ас)слчоод аиб ЕЬептпап !991; КаеПп ес а1. !992). ТЬе асЬеша оГ а сурка! Гаг ччеасегп ехрепгпепс Ь гСер!стеб ш Бдите ! 8-! 2. ТЬе ргоЬе рготе!п Ь 6гя ауисЬеа!гег! апг! РитлТсег) Ггош Ъассепа (р1еаье атее СЬарсег 15, Ргососо1 5). !и сЬе Глдиге, йе ргоЬе ргоселп Ь а С5Т йьюп сопсашлпд сЬе С5Т гполесу Еодолчеб Ьу а ргосеаае с1еачаде ясе апгс а сагдес ясе Еог а )спотчп ргосе)п Ыпаае сп-6.аше лч)сЬ сЬе ргосеш оЕ )псетеас.
ТЬе рип6еб Гияоп ргосеш Ьоиис1 со 81исайюпе ЬеасЬ Ь гайо1аЬе1ег) чч)сЬ ллр ияпд а соиипетс!аду ачадаЫе ргоселп Ыпаье. ТЬе Еияоп ргосе!п Ь лчааЬег) со гешоче ипспсогрогасег) пис!еосЫе, апд йе габ!о1аЬе1еб ргосеш Ь с1еачег) тч)сЬ а ргосеаае (е.д., Рассог Х ог йгошЬлп) ог е!исеб сч)сЬ д! исасЬюпе со ге!еаае сЬе гайо1аЬе1ег) ргосеш ргоЬе. ТЬе ьагпр1е со Ье ргоЪес1 Ь ргерагеб еПЬег Ъу гею1ч!ид сЬе сагдес ргосеша оп ап Я>5-ро1уасгу1агп!бе де1 апб сгапаЕегппд сЬе ргосе!пь со а шешЬгапе (е.д., р1еаье вее Рохеги ес а1. 1998; СтдитечГсЬ ес а!.
! 999; Нипсет ес а!. 1999) ог Ьу р1абпд а ргосеш ехргеьа!оп 18.48 Оат р гегпХ гаЬе! Ьу гп нгг о Ипаве геаоооп вар-гаье1еб яаоп ргогегп оат ого!его Х бгрев1 еаь ргогеаве го гепгоне йзт ого!в!у рго!егп Х) 4= ВВР-1аЬе!еб р ЬЬе рго1еп ргоЬе Яе ехргеввоп 11Ьгагу ргоЬе гое оврага!еб г РПХЕ1ПВ е о е о е г о ог о Е!СЕ(!СЕ 18-12 Оо(1!пе о(а Гаг ечеа(егп ТЬе рог(((ес( гесогпЬ(пап( С5Т-(ох(оп рготею 'ь гас((о(аЬе(ес( аС а Ыпахе сопхепвоь яте сиота(пес( гп СЬе сояоп рог(юп о(СЬе ргоСе(п.
ТЬе яр-1аЬе(ед ргоЬе ргоСею 'ь ьерагагес( (гоги СЬе С5Т пюгеСу Ьу рготеаве 6(аеас(оп. ТЬе (аЬе(ес( рготегп сап Ье ивед со ргоЬе гпегпЬгапех депегасед егйег Ьу сгапв(ег о( ргосе(пь верага(ед Ьу 505-ро(уасгу(апис!е це! е(ессгорЬогеь(в ((егс) ог р(ас(пц ап ехргеаяоп !(Ьгагу (гга(ус). Наг(ат(опт оп СЬ(ь ргосесйзге аге с(евсг(Ьег( гп йе техт. 11Ьгагу ап6 сгапхсегт!па йе ргосе)их со а шешЬгапе (Масагецог еС а1. 1990; В!ас)ссчоод апд Есаепшап 1991; Кае!ш ес а1. 1991; В1апаг апс1 Вииег 1992; Ауег ес а1.
1993; Ешагсюп аис1 СЬао 1995). ТЬе спешЬгапе (а ъчахЬес1 апд Нос)сед Ьеуоге асЫЬюп оу сЬе гадюас6че ргосесп ргоЬе. Аусег спсиЬабоп уч(сЬ с1се ргоЬе ргосе)п, сЬе шешЬгапе (х вчааЬе6 апс1 хиЬ)ессе6 со аисога6)оагарЬу. Ваб(о1аЪе1(па йе Вляоп ртосе!п (х гарЫ апс1 еаку, ап6 аепега11у Ьах !Вс!е ипрасс оп сЬе хиЬ- хесрлепс асбчиу оусЬе ргосе(п, Ьесаихе сЬе РЬоарЬогу1а6оп ясе сх !и сЬе Еияоп рогсюп о('сЬе ргосе!п.
А час!осу оургосеш Ыпаье ясех Ьаче Ъееп спсецгасед шсо 1ияоп ргосе)п честить (В1апаг апс1 Вииег 1992; Кае1ш ес а1. 1992; Воп апд Тггея)ег 1992) со а11оъч Тот ллр 1аЬе!(па оу гесошЬ(паис ргосешх ехргеые6 (и Ъассепа. ТЬе шохс согпиюп1у ахею Ыпахеь аге ртосесп Ыпахе А, сАМР- дерепбепс ргосе!п Ыпахе, апд епсегоЫпаае. Ап еат1у чапа6оп оп йь сесЬп(с)ие исс)суе6 епдоцепоих РЬоьрЬогу!а6оп ясеб ш йе ргосе!п ог шсегеас Тот ллр РЬохрЬогу)асюп (5)со!пкЬ ес а1.
1991; Ауег ес а1. 1993). Ап а1сегпабче шесЬо6 оуга61о!аЬе11па сЬе ртоЬе счссЬоис сЬе пее6 со депегасе а 6ляоп ртосе(п 1а со 1аЪе1 Ь чбсЬ ло5 (и ап ш чиго стаивает)р6опусгапа1асюп геас6оп (1.ее ес а1. 1991). Тучи осЬег шесЬобх аге соиипоп1у паем со 11есесс !исегас6опх Ьесучееп СВТ Еияопх апс1 сатаес ргосешя Апс(-С5Т ап6Ъо61еь сап Ье ихе6 со !осасе ип!аЬе1ед Тияопх ртосеша оп Еаг вчеяетп Ргососо! 2: (3егесг(оп о~Рготе!и-Ргогет!псегасс!опт Ету!пч Рог Хеугегп сч!(Ь Б5Т Риу!оп Ргосету 18.49 18.50 СЬаргег 18: Ргосегп 1пгегагдоп Тег)гпо!оцгел Ыоь. А1сегпабче1у, Ьюбпу1асед СБТ сап Ье десессе|1 ЬЬсосЬеписаПу Ьу 5стерсач(дш-соп)ицасед епгуп|ея Вю6пу1а6оп оЕ ргосепь ь посч ге1а6че1у еаку дие со йе ачацаЪ|1Пу оЕ )с)са (АшегаЬапс РЬаппас|а ВюсесЬ).
Носчечег, Ь|о6пу1а6оп шау Ьаче ап ппрас1 оп |Ье аЪ|1Пу оЕ сЬе ртоЬе ргосе|п со аххос(асе ичсЬ осЬег ргосешя ТЬе |ье оЕ сопппегс!ацу ачацаЫе ап6-СоТ ап6Ьогцеа ь а цоод орсюп 1ог десесбпц !псегасс!опт оп шешЬгапеа оЕ сеП 1уаасея ТЬе!ассе| слчо шесЬодх Ьаче йе адчап1аце оЕ Ьешц попгад(оасс(че. 11о|чечег, !Е а ПЬгагу асгееп ь р1аппед, йе соя оЕ |Ье ап6- СЦТ ап6Ъоду апд де1ессюп геацепсх тпау Ъе ехселяче, ТЬе деыцп оЕ йе Еиаюп ргосеш дерепда оп сЬе сЬоаеп десес6оп шейод ап|1 оп йе суре оЕ хсгееп |Ьас Ь р!аппед. Опе (ааие со сопядег ь ияпц с1еаче|1 чегяь Еиц-1епцсЬ СЦТ Еияоп ргосе(пя ТЬе СВТ тпо|есу ь )гполчп со гцшепге апд сап цепегасе Ьас)гцгоипд.
Моас Еияоп чессоь сопсаш с!еачаце ясеа со аерагасе йе СВТ рогбоп Етош сЬе ргосе!и оЕ (псетеас. !Чите, Ьолчечег, йас !Е сЬе Ьляоп ргосе!и ь с1еаче|1, йе шсегассюп сч(сЬ |Ье сагцес ргосеш сап по 1опцег Ье десессед ъч(сЬ апс(-СЦТ ап6Ьод(ея То сЬооае |чЬ~сЬ с1еа| аце ясе со иае, П ь ипрогсапс со асап сЬе ргосеи| апд епялге йас и дое5 пос сопса|п |Ье гесоцппюп ясе оЕ |Ье ргосеахе. А хесопд Ьяле со сопя|1ег ь лчЬас гец(оп оЕ йе ргоЪе ргосеш оицЫ со Ье |псогрога1е|1 !псо |Ье СоТ Еияоп ргосе|п. Рог а ПЬгагу ксгееп, |пс1исцпц аа пшсЬ оЕ сЬе ртоЬе ргосе|п аа роаяЫе 1псгеааеа |Ье пшпЬег оЕ |псегасс)опх |1есессе|1. Оп йе о|Ьет Ьапд, (Е сЬе ргоЪе ргосе!и сопса)па (гполчп шсегас6оп допласпа ап|1 сЬеае аге Ье|пц сеасед со сопйпп ргегцссед !псегассюпя сЬеп а Еияоп ргосеш сопса|шпц оп1у сЬеке тпо6В |чои!д Ъе ртеЕеггед.
РегЬара йе шохс ипрогсапс сопл!дегасюп !п р1апп|пц а Еат гчексегп ехрепшепс 15 йе аЬ|1- Пу со хуп1Ьеяхе йе Еияоп ргосеш тч)сЬоис ипг)ие |1ецга|1асюп ап|1 !пхо1иЪ|Псу. 1Е сЬе Еияоп ргосе!и ь ехсеаа!че1у децгадед диппц рипйса6оп, йе ргоЪе ртосеш М11 Ье а пихшге оЕ децгадасюп рго|1исся УапаЫе гехи!15 |пау Ъе оЬсаше|1 Еготп ргерагайопа оЕ йе д)ЕЕегепс Еиа!оп рто1е|пя И 15 сЬегеЕоге ипрогсапс со пюпПот сЬе хсасиа оЕ сЬе Еияоп ргосеш диппц ап|1 аЕсет рипйсасюп ап|1, 1Е йе ргосеш Ьаа Ьееп яогед, ЬеЕоге иае. Тъчо сои|то!5 |Ьас ОП! Ье!р со сопйпп йе крее)- ПсПу оЕ йе ргосе!и-ргосеш !псегас6опа аге (1) со ргоЬе ичсЬ а пшсасе|1 чегяоп оЕ сЬе Еияоп ргосе|п сЬас !псегтирсх |Ье !псегасбоп ап|1 (2) со ргоЪе сЬе п|егпЪгапе ичсЬ 1аЬе1ед СоТ.
А Ппа1 |!ее!яоп Ь тчЬесЬег со ргоЬе |Ье тпетпЪгапе ичсЬ ог ъпйош а сус1е оЕ с)епасигас!оп/гепасигасюп, лчЫсЬ 15 деяцпед со ацо|ч ш)хЕ01дед ргосе!па со геЕо1д |псо сЬе(г па6че сопЕоггпас|опя 1п цепега1, ргосе!пк сгапаЕеггед со а п|ешЬгапе Егош ап о)Эо-ро!уасгу1апл!де це! до пос гег)и(ге депасига6оп апд гепасигасюп. Ночгечег, п|апу !пчеа6цасога ъчЬо ргоЬе П!сета Ьоияпц (шрппса оЕ ап ехргеаяоп ПЪгагу Ппд депасигасюпг'гепатита|!оп со Ье ап еахепс(а( ксер. ТЬия (Е ргоЪ|пц ап Юо-ро1уасгу1аш(де це1 у!е)да по ргосеш-ргосеш |псегасбопя |псогрога6пц а депасига6оп!гепасигас!оп ргоседиге шау у(е!д рояиче гехи!са (Сот десаця р1еаае зее йе рапе1 оп А001- Т|О|ЧАС РКОТОСОО КЕГОСОПЧС ОГ МЕМВКА(ЧЕ-ВОСЛ(Ч0 РКОТЕПЧ5 а| йе еп|1 оЕ йь рго1осо!).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
