Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 91
Текст из файла (страница 91)
Айег рго1е|п 1гапа(ег ъчаей |Ье пзегпЬгапе Ьч)се, еасЬ зиие зп 50 пз| о(г|епа1ига1юп Ьийег(ог10 е)пи1еа а1 4чС ън)1Ь цепйе ац)1а1)оп. тье ехасз но|игие о( ьийег 1о гье |и гьь апз( киьхелулеиз лзерь л)ереиил ои йе иле апд ииизьег о( изеизьгаиех ипз|ег хзииу. (лле епоиць ьийег зо сочег зье зиеизьгаиеп) соизр|езе3у. 2. Кегпоне гйе л|епавгайоп Ьийег (гоги 1Ье сопзалпег апз3 ге(а|и 25 гп| о( лз. Ас)г( 25 пз! о( Ьаа(с Ьийег го |йе 25 ги| о( л|епазигазюп Ьийег зо лиа)ъе а зоза! чо|ипзе о( 50 гп|. ТЫа |а зйе Его 1:1 й|изюп о( зйе з(епазигайоп Ьийег. Кезигп 1Ье з(3)изес) л)епазига1)оп Ьийег (о |йе сопзазпег апл| ъч ьЬ зйе Ыоз (ог 10 папах аз 4нС ън)1Ь цепйе ац)за1(оп. 3. Кереаз 1Ыа й1и1юп апс| ъчаей сус|е 35(ер 2) (оиг июге йизех.
ТЬе йпа3 ъчахЬ 1Ьеге(оге сои(а)пх 187 ем циап)йпвгп Ьус(госЫопс(е. 4. Ке(игп 1о 1Ье гпа|п ргозосо3 апс| ргосеег! ъчйЬ 5(ер 6. 18.54 Сйаргег 150 Ргогет 1пгегасбоп Тесйпо!орее АЕТЕКМАТ!ЧЕ РКОТОСОЫ ОЕТЕСТ!ОМ ОЕ РВОТЕ!М-РВОТЕ!М !МТЕКАСТ!ОМ5 ЪЧ!ТН АМТ!.С5Т АМТ!ВОО!Е5 А попгаг!!оасйче нега!оп о! Рпе 1аг ъчевгегп иееа ап ип!аье!ег! С5Т !иа!оп ргоге!и. Сопыпегс!а!!у анаг!аЫе апгр С5Т аега аге уьеп иаег! 10 г!е1ес! рго1е!и-рго1е!и !п1егасйопя ТЬе иае 01 1Ь!а арргоасЬ ъч ъеп асгееп!па а СОМА ехргеаа!оп БЬгагу В аиьагап1!а!!у пъоге ехрепяче (г!ие 1о йье сое1 01 1Ье апйюг!у апг! с!е1ес1юп геацеп1а) йъап гаг!!о!аье!!па 1Ье ргогепя !и асЫ!1!оп, саге пюя Ье ъа!ъеп 1о соп1го! !ог попарес!йс !п1егасйопа Ьеьчееп гье С5Т пъо!егу апг! йъе пъегпЬгапе-Ьоипс! ргоге!пя Аг!и!1!опа! Ма1ег!а!а АпйаС5Т апйЬоду ТЬЬ апВЬоиу В ача!!аЫе сопчпегс!а!!у 1гот Агпегъьагп Рьагпъас!а Вюгесь, 5ап1а Сгиа Вю1есь, 1!рага1е В!оъесьпо!ойу, апг! СопчапсеГВаьсо.
!псиЬайоп Ьийег 104 1ъчМ поп1а1 агу гп!!!ъ 1х рЬоарЬа1е-Ьийегеи яъ!!пе 0.3 !ъ!ч! Тъчееп-20 5есолс!агу ап1!Ьосlу тье ъесопйагу апВЬоду ъьои!В Ье ап апй-1ВС 0!гесъед айа!пъг гье ареоеь иеег! 1о ргераге гье апгчСВТ ъегипь !е.ц., ихе апг!-Воа1 !ВС й гье апг!-СВТ апйЬоду ъчаа оьга!пег! 1гопь Воаг хегипй. 1п асИ1!оп, гье ъесопиагу апйЬос!у кьои!ъ! Ье рагг о1 а г!егесйоп ъуяегп гьаг ъч!И репп!1 гье ргоге!и-ргоге!и !п1егасйопа о1 !п1егея го Ье ч!еиа!!хед, Рог ехагпр!е, гье ъесопоагу апйьог!у сои!0 Ье соп)ийа1ед го ап епхугпе юсЬ аъ ЬогъегаиВЬ регох!ъ!аъе, ъчь!сь сап Ье иъей !и а сьепч!!игп!пеъсеп1 г!егесъ!оп ъукгЕт. Гог аъ!гйг!опа! Йегайа р!еаке ъее Аррепй!х 9.
!раей ЬиКег 1х рьоърьаге-Ьийегед аа!!пе О.ЗК Мч! Тъъееп-20 Ме! Ьо 1! !. Веа!и 1Ье пъа!и рго1осо! а1 51ер 2 апг! ргосеег! 1Ьгоиеь 51ер 10. 2. !псиЬаге 1Ье гпегпЬгапе ъч!1Ь апй-С5Т апг!Ьог!!еа ассогг!!пе 1о гье гпапи!асгигег'а гесопипепдагюпя 3. Кегпоне 1ье апй-С5Т апйЬоду ао!01!оп. йпае йье гпегпЬгапе ьъп!се, еасЬ йгпе ъч!Въ 25 пъ! о! чная Ьийег го гепюче геяг!иа! ипьоипг! апйЬог!у. 4. Хаъь 1Ье гпегпЬгапе ьч!се, еасЬ йпъе чч!йъ 20-30 пъ! о! ъчааЬ Ьийег !ог 10 гп!пигеа а1 гоогп 1епърегагиге ъч!1Ь депйе пъ!х!пд. 3. О!!иге уье аесопь!агу ап1!Ьог!у ъч!1Ь |псиЬагюп Ьийег ассоп!!па 1о 1Ье гпагиФасгигег'а гесогпгпепдагюпя 6. Роиг 1Ье апйЬги1уЬийег ппхгиге !010 1Ье сопга!пег ъч!1Ь 1Ье гпепъЬгапе.
!псиЬа1е 1Ье пъегпЬгапе !ог ! Ьоиг а1 гоопь 1епърега1иге ън!1Ь ееп1!е гп!х!пц, у. !3!Всагг$1Ье ап1!Ьгх!у ао|ийоп, й!пае 1Ье пъегпЬгапе ьн!се, еасЬ йгпе ъч!1Ь 25 пъ! о! ъчааЬ Ьийег 1о гепюне Упе гпа!оп!у о! ипьоипг! ап1!Ьоъ!у. 8. Хаъь 1Ье пъегпЬгапе ьч!се, еасЬ 1!гпе ъч!йъ 20 — 30 пъ! о! ъчаяь Ьийег !ог 1О гп!пи!ее а1 гоогп 1епърегагиге ъч!1Ь ееп1!е пъ!х!па. В. !Зече!ор 1Ье Ыо1 ъч!1Ь 1Ье арргорпаге еиЬагга1е !ог 1Ье соп!идагег$ аесопг$агу ап1!Ьог!у. Рго1осо! 3 0е1ес6оп о1 Рго1е~п-Рго1е~п!п1егас6опь 0ыпу Йе СЗТ Гиьюп Рго1е~п Ри! Ыо~еп Тес'пп~с~ие Магеге$ В. Е!пагзоп Гох СГлазе Сапсег Сепгег, РГлг7аг7е!РИГа, Реппзу7мата 79777 т НГ С5Т Гияогл Р807Е$ГЛ $ХлггллоъЧГЛ ГГСНЗЛ$С)ГЛЕ (КАЕВЗЛ ЕГ АС 7997) изез гЬе ай!пЬу оЕС5Т Еог 81шагЬюпе-соир!еъ1 Ьеабз го рипГу 1пгегас6п8 ргоге(пз Ггогп а зо1илюп оЕ поп(пгегасг(п8 ргоГешз.
ТЬе зсЬепла оЕ а С5Т риПдоъчп ехрепплепл (з г(ер(съел! ш Р$8ске $8-$3. Т!ле С5Т Гиз(олл ргоЪе ргогелп гз ехргеззе6 апс( рипПеъ1 Егош Ъассепа (р1еазе зее СЬаргег 15, Ргогосо1 5). !п рагаПе1, а сеП!узале (ъчЬлсЬ сап Ье зз5-!аЬе1ес1 ог ип!аЬе1ег() гз ргерагес1. ТЬе С5Т Гияоп ргогеш ргоЬе апд ГЬе сеП 1узаге аге ш(хес( лп йе ргезепсе оГ 81игагЬ(опе-аВагозе Ьеабз ап6 (псиЪагеъ$ го аПоъч ргосе(п аззос(агюпз го оссиг. ТЬе С5Т Гияоп ргоЪе ргогеш апл$ апу аззос(агеъ$ пло1еси1ез аге соПесгес1 Ъу сепг66лВабоп ап6 йе сошр1ехез аге ъчазЬес1. ТЬе согпр!ехез сап Ъе е!игег$ Ггош йе Ьеаг(з ълй ехсезз Егее 81шагЬюпе ог Ьол1ес1 ъ11гесс1у (п 5Е75-РАСЕ Ве1-1оасПп8 ЪиЕТег.
ТЬе ргоге(пз аге гезо!чес( Ъу 5Р5-ро1уасгу1ашЫе Ве1 е1есггорЬогеяз апс( ргосеззе6 Еог Еигйег апа1уяз Ьу ъчезгегп Ыог6п8, аигогас)(о8гарЬу, ог ргоселп зга(п(пц. ТЬе С5Т риП6оъчп гесЬп(ъ)ие (з езресла1- 1у изейл1 Еог ргоЬ(пц ргосе(п (пгегасг(опз (п зо1и6оп йас ш(ВЬг цо ипдегесгег( (п а шеплЬгапеЬазег( аззау. Т чо Вепега1 изез оГ йе С5Т риПдоъчп ехрегипепг аге го Ыеп6Гу поче! (псегас6опз Ъепчееп а Еияоп (ог ргоЪе) ргогелп ап6 ип)споъчп (ог гагВег) ргоге(пз (КаеПп ег а!. 1991; Ог!лп(с1с апс1 СЬао 1996) апъ( го сопйпп ялзресгес1 (пгегас6опз Ъегъчееп йе ргоЬе ргосе(п апг$ а 1ъпоъчп ргогеш (е.8., р1еазе зее Розегп ег а1. 1998; СгВигеч(сЬ ег а!.
1999; Нипгег ег а1. 1999; 5ип ег а1. 1999). ТЬезе гъчо ехрег(шепгз аге г(еяВпе6 апг( ехесигес1 с1(ЕГегепг!у. реп аиегпр6пВ со Ыепг(Еу поче1 (псегас6опз Ъепчееп а ргоЬе апъ( ип(ъпоъчп ргогелпз, а (з розяЫе гЬаг гЬе ип1споъчп ргогешз ълП Ье лп 1ип(6п8 сопсепгга6опз. То Ыеп6Гу а поче1 (пгегас6оп, $Ье ип1ъпоъчп ргогеш шизг Ье ргезепс ш зийк)епг г(иапг(г(ез го аПоъч йе (пгегасбоп го Ье ч(зиаПхег( ълй йе сЬозеп шегЬо6 оЕ г(егесг(оп.
Каъ((о1аЪе1ес( сеП 1узагез аге ЕЬе шоя Егесрлепг!у изе6 зоигсе оГ ргоге(п Гог ехрегппепгз оЕ $16з суре. 5огпе ппроггапг г(иезг(опз го аз1с ЬеЕоге сЬооз(пВ гЬе зоигсе оГ гезг ргоселпз аге: 1з йе ргоЬе ргосе(п поппаПу ехргеззес1 (п гЬаг раггки1аг сеП ог г(ззие! $Г поЬ йе РЬуз(о!о8(саПу ге!ечапг гагВег рголелпз гпау пог Ье ргезепг е(гЬег. 1з гЬе 8оа1 со сопъраге с$лТГегепг !урез оЕ сеП роро!а6опз (е.8., г)и(езсепг сеПз чегзиз сус1(п8 сеПз ог ВгоъчгЬ-Гассог-ггеагег$ сеПз чегялз ипггеасес$ сеПз)? Сопгешр1аг(п8 зисЬ чапаЫез ас ап еаг1у злее сап шеап гЬе 6(йегепсе Ьегъчееп зиссезз апл$ Еа(!иге. 1Г а ргесПсгес1 (пгегас6оп Ъепчееп йе ргоЪе ргогеш апг$ апойег ргогелп (з Ъе(пВ лез!ей йе ехрепгпепса1 с(ез(Вп (з лпоге згга(ВЬгГогъчагй А ъчЫе чапе!у оГ ргогеш зоигсез сап Ье изей со Ыеп6Гу апг( гпар гЬе шгегасгюп.
ТЬе шегЬог( изес1 го ъ(есесс гЬе (пгегас6оп ь г(егегпипеъ( Ьу гЬе 78.55 Ргососо! Зг Е|егесг!оп оЕРгогет-Ргосет 1пгегасдот Еугсп5 йе С5ТРидоп Ргогет Ри!!до|оп ТесЬп(г)ие !В.57 ача|!аЬ|16у оЕ ап6Ьоебеа со йе сагцес ргосе(п. 1Е попе аге ача|)аЫе, сЬеп '55-1аЬе1ед ш-ч(сгосгап81асед ргосе|п сап Ье ис(!!сед ог |Ье сагеес ргосе(п сап Ъе саееед ъч(сЬ ап ериоре. 1Е песеааагу, се!18 (п си1сиге сап Ье сгапаЕессес1 ъч!1Ь а р1аяпЫ епсо| ВпВ йе сагеес ргосе(п со 1псгеаае |Ье аЬипдапсе оЕ йас ргосеш Еог апа(уяя Ноъчечег, 6 Ь иирогСапс со сопСго1 Еог ейесса оЕ |лая асбоп (е.е., попарес!6с аВегецас!оп) апд со епаше йе арес|6с(су оЕ йе аааос!ас(оп Ьесъчееп сЬе ргоЪе ргосе|п апс1 (ь риСабче рагспег. ТЬе Ьеа( сопсго1 Еог арес)Е|с)су оЕ Ь|псбпц Ь йе шс)ияоп оЕ а СВТ |ияоп ргосе!п ъч!|Ь а шисасед шсегас6оп дота!и. 1088 оЕ Ъшд(иа ъч|й сЬ!а шисасес! РгоЬе ргосе(и аиеееаса сЬас |Ье поппа( аааос(акоп Ъесъчееп сагцес апс( ргоЪе Ь арес!6с.
1с Ь а!80 ипрогсапс со сея Еог Ъ!ид(пе Ьесъчееп йе рисабче сагаес ргосе|п апс1 СВТ. ТЬе СВТ ри!Ыоъчи сесЬпн!ие тиас Ъе ор6ш(ген Еог еасЬ ргосеш со|пр1ех Ьеше аааауей Опе ипрогсапс чапаЫе Ь сЬе Ьийег (п ъчЬ|сЬ сЬе !псегас6опа ъч61 са(се р1асе. ТЬЬ Ь ойеп йе Ьийег |и ъчЫсЬ йе росепба1 рагспег ргосепь аге ргерагед апс1 сап чагу Его|и а сеП !уяа ЬиЕЕег (я|сЬ аа ИРА) со ап !и ч|сго !гала!ас!оп геассюп иихсиге. А ъч(де чапе|у оЕ ЪиЕЕега ъчог(с; Ьоъчечег, |Ье е(6с!епсу оЕ сЬе !псегасбоп спау Ъе аЕЕессед Ьу сЬе ЪиЕЕега иаей Апойег чапаЫе со сопяс1ег Ь сЬе аиюипс оЕ !агнес ргосе(и иихед чдй йе 6|яоп (ргоЬе) ргосе|п. ТЬе аи|оипс оЕ |пасепа1 гес!шгед Ь десегшспед сЬ~ейу Ьу |Ье аЬипдапсе оЕ сЬе !агнес ргосе(п апд йе аЕ6шсу оЕ сЬе шсегассюп (Ьой рагагиесега аге аепега!1у ип)споъчп ъчЬеп сЬе ехрепи|епс Ь (пйасес1).
Р(па!!у, йе сопс66опа иаес( со ъчааЬ сЬе ЪеасЬ 8Ьои!6 Ье орбиикей (и сЬ(к ргососо1, |Ье се11 1уяа ЪиЕЕег Ь иаес) Со ъчааЬ |Ье С5Т-ри!(доъчп согпр1ехеа; Ьоъчечег, Ъийега оЕ часу!пе аа)с апд десегЕ(епс сопсепсга6опа сап Ъе иаед ас йЬ асер со е)ишиасе попарес|6с (псегасс|опа. СВТ ри116оьчп ехрепгпепь Ьаче ап ас1чапсаце очес Еаг ъчеасегпа (Ргососо) 2): ТЬе ргоЬе ргосе!п Ь (псиЪасес1 ъчп|Ь росепба1 рагспег ргосе)па (и а июге па6ъе епч(гоишепс, йегеЬу епЬапс!пц сЬе еЕ6с|епсу оЕ |псегас6опа.
МАТЕК1АЕ$ СА()Т10(Ч: Р)еаье аее Аррепд)х ! 2 Еог арргорпа(е Ьапд(!пе оЕ п|а(епа18 таг(сес( ъч!СЬ <1>. ВоЕЕег8 апс! 6о!оЕ!оп8 Р1еаае аее Аррепс((х С Еог соп|ропеп|8 оЕ 8(ос(с ао106опа, Ьи((ега, апд геаееп(8. 01!и(е агосЬ 80101(опа Со СЬе арргорпа(е сопсеп(га(юпа. Еуага Ьиууег 20 гпм Тпа-С1 (РН 8.0) 200 гпм Ь|аС! 1 шм ЕЕ|ТА (РН 8.0) 0.5еа ЬСОП(ССЕГ Р-40 !пас Ье(оге ые, ас(0 ргосеаае |пЫЬ|сога со сЬе ЕоПоъч(п8 Влас сопсепсгапопа: 2 щ'Р! аргодпох 1 08/01 1епрердп, 0.7 08ггп1 рерасадп, апс) 25 08!го! РЬепусгпеиъу!ап!(опус Впог(с(е (РМВР) <! >.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
