Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 95
Текст из файла (страница 95)
6. Кепюче |Ье!нрлЫ рогПоп оЕ йе пихсиге Ьу аар!гаПоп. А|Ы 800 )с! оЕ 1х Я35 Ве1-1оайп8 ЪиЕЕег со йе Ьеайя апг! ЬоП йеш Еог 4 пипшея 7. Еоа|! |Ье аагпр!е !псо сЬе 1аг8е |чеП оЕ сЬе йасоп0пиоиа Я>5-РАСЕ Вгайепс 8е1, апс! пш йе Ве! а| 10 п|А сопагапг сиггепг очегш8ЬС. 8. У!аиаПге |Ье ргосе!и ЬапсЬ Ьу аса|шп8 ю!сЬ Соошааа!е В1ие (Аррепйх 8). 9. Ехс!ае СЬе Ьап|1 оЕ!пгегеаг Егогп йе 8е1, р1асе |С ш а писгоЕи8е СиЪе, апг! юааЬ !С Сю!се Еог 3 ш!пигеа еасЬ ~п 1 ш1 оЕ 50аге асеСопКп!е. 10. ЕП8еас йе ргосе|п ю!|Ь сгуряп юЬПе К |а а|П! |и сЬе 8е1, апс1 е!ессгое1ше сЬе рерсЫея а.
Кепюче йе Ве! а1ке со а с1еап аигЕасе апсс аПою К со рагПаПу с!гу. Ь. А|Ы 5 )л! оЕ сгуряп й8еаПоп Ъийег апг! 2 )г! оЕ сгуряп ао1иПоп. с. АЕсег |Ье Ве1 аЪаогЪа сЬе сгуряп ао1ис!оп, а|Ы 5-р1 а!щиоса оЕ сгуряп ЪиЕЕег ип01 сЬе 8е1 а!ке ге8а!па !са оп8!па! яхе. й Р1асе сЬе Ве! а!ке ш а писгоЕи8е сиЬе, !пипегае П и| сгуряп й8еаПоп ЪиЕЕег, апс! !псиЪасе К Еог 4 Ьош а аг 30"С. Всор |Ье геассюп Ьу а|ЫКюп оЕ 1.5 )г! оЕ 0.198 спйиогоасеск асЫ. Ргосег)иге| Еог ч|ша!|ла|шп апг) йхееВоп ос |Ье ргосе|п чагу 8геа|!у. Сп раг|ки1аг, с88е|6оп сап Ъе регсогше8 юЬПе |Ъе ргошш ь |0!! )и |Ье ро!уасгу!агп|ае 8е! ог айаг и Ьаа Ьееп |гапаЕеггег) |о а иагосеПи!оае ог РУРЕ шешЬгаве.
11. РгасПопасе |Ье рерсЫеа Ьу паггою-Ьоге Ь!8Ь-регЕогшапсе!пдиЫ сЬгошасо8гарЬу. 5иЪ)есс сЬе соПессес! РерсЫеа со аисошасес! Ейиап с)е8гаг!ас!оп аедиепс!п8 оп ап АВ1 477А ог 494А гпасЬлпе. Ргосеы|их оу |Ъе аашр!еа Еог Рг)шап аедиепсгп8 ог М5 апа)уяа а!ао чаггеь апг) |8|а Ь Ьея гП|- сыаед мчй йе ш|Пч|аиа! юЬо ы орегабп8 |Ье шасЪ|пегу. Рог а гечгеы ос шейода, р!еа|е ьее Маии|!ааа !1993), Слп)с !1999), ап|! 5рес|ог е| а!. )1998, | Ьар|ега 62 апг) 63). РГО1ОСО! 5 РгоЬ~пц Рго1е~п ! п1егас6опь Оыпц СГР апд Г!июгеьсепсе Кеюпапсе Епегду Тгапйег А!Ьаа С.
Нагриг апд РЫ!1рре 1.Н. Ва56аеп5 |треаа! Сапсег ЯехеагсЬ Еппд, Еопдоп Оееоъинс гне ОБСОиеху Ан0 ееОн!нО Ое тне схеен ееООхе5сент РЙОте!и (СРР) ггогп йе )е1!у65Ь, Аег)иогеа лсГог!а (РгааЬег ег а|. 1992), шапу оррогГип!Г|еа Еог йе апа!уа!5 о|депе |ипсгюп апд ргосе|п-ргоге|п |пгегас6опа Ьахе егпег8ед.
5исЬ орроггипг6еа гап8е Егош |Ье г!5иа1 !гас!Пп8 ог" ргоге!па |и а араг|а! апд гегпрога! шаппег го гЬе г!иапгьагюп оу йе |пгдпыс РЬогоРЬуяса1 ргорегг!еа ог' |Ье СРР5 гЬешаеЬея аПоичп8 йеш со Ье иаед аз шгПсасогх ог хепаога ог" Ь!о!о8!са! асг|г!г|еа|ргосеааеа апд ргогегп !псегасбопа. СГР: !МРАСТ ОМ МОЬЕСЫАК АМЭ СЕШЛАК В!О!ОСУ АЫ0 АРРИСАТ!О)5! ТО РКОТЕ! Ч ПЧТЕКАСТ!ОЫЬ СРР ь !п|ппяса11у йиоге5сепг апд доеа поГ геци!ге ехо8епоиа со1асгога ог аиЬ5ГгаГея а ргореггу гЬаг гепдега Ь ЫВЫу иаей1 аа а Вепегка|1у епсодед героггег га8 (р1еаае аее ЕЬе |пуогшаГ!оп рапе1 оп ОКЕЕН ЕШОКЕ5СЕНТ РВОТЕ! Н гп СЬаргег 17). ТЬ15 15 рагбси1аг1у ча1иаЫе Еог апа1уяа оГ Вепе ехрге55|оп |п егпЪгуопгс апд |пгасг ог8апьпь ияп8 еВЬег епдо8епогь!у ге8и1а|ед (8епе ггаррпг8) ог 655ие-арес|||с ргогпогоь (СЬа!Ве ег а|.
|994; Моха ег а!. 1996). ТЬе и6|ду о| СЕР Ьаа а!ао Ьееп дешопаггагед |п еагаЫ!5Ып8 йе хиЬсе1|и1аг !оса!!ха!|оп оЕЬгяоп ргоге!па |СЬа|Ве ег а1. 1994; Моха ег а1. 1996; Агпопе ес а1. |997). Ог8апе!1е-арес|Вс |оса!Еаабоп 5!Впа!5 Ьане Ъееп аиссе556л11у Ььес1 го СРР пшгапга, гЬиа гаг8е6п8 |Ье СРР го |осагюп5 5исЬ аа гЬе епдор1аяпк гебси1шп, |Ье бо!8! аррага|и5 (|)ауе! ег а1. |999), пигосЬопдпа (%гга ес а1. | 999), апд йе р1ааша шешЬгапе (О)сада ег а1.
|999). 1п агЫЬюп го|оса!!гагюп оГ ргогегпя СРР Ьаа Ьееп иаед аа ап шггасе|1и!аг аеп5ог оу Ью|орса1 асг|г|гу Ьу ехр1о!Пп8 |ь РЬогорЬуяса1 ргорегбеа. Рог ехагпр|е, СРР сап Ъе иаед аа ап |псПсагог оу ргоге!и ргохипВу Ьу с1есес6оп ог' гЬе ехс!гед-агаге геас6оп, Виогеасепсе геаопапсе епег8у ггапауег (РВЕТ). То даге, гЬЬ гесЬпи|ие Ьаа Ьееп иаед ш йе апа1уа|5 оу са1с!иш-аепа!!|ге сопа|гисЬ (М!уаха)с! еГ а1.
|997, |999) апд ргогеаае аиЬ5ГгаГеа (Не!пг апд Тяеп 1996; МВга ес а1. |996; Хи ег а1. |998; МаЬа)ап ег а!. |999) апд Гог дегесг|п8 йе |пгегас6оп Ьеггиееп а пшпЪег оу ргоге!па (Рау |998; МаЬа)ап ег а!. 1998). Адд|г!опа1!у, РВЕТ Ьегюееп СРР апд СуЗ Ьаа Ъееп гьед со ипате се11и1аг ргосеааеа аисЬ аа йе РЬоарЬогу!агюп оГ |пггасе1!и1аг апд ггапяпегпЬгапе ргоге|па (Ы8 ег а1. |999; ЪЧоигега апс! Ва5г!аепа 1999). |и йь ргогосо1, а дега|1ед деаспргюп ог" йе !аиег суре оГ ехрегипепс ь 8|креп ияп8 !)иоге5сепсе Иегппе ппа8!п8 писгозсору (Н,|М). ! 8.69 18.70 Отартет18: Рготеги 1итегаст1оп Тес)тии!ое)ет ГШОКЕЬСЕМСЕ КЕЬОМАМСЕ Е!ЧЕКСУ ТКАЮГЕК РЬо1орЬу81са! Рт!тъс1р1еь оГ ГКЕТ Г1) ьцсЬ тЬат К = (х~ ДХ) и " ())"~ 9.7 10' (2) ънЬеге Л (птп) !а йе астца! Йьтапсе Ьетънееп тЬе септегь оГ тЬе ГЫогорЬогея Ла (пш) !х тЬе ъ)!я тапсе ат ънЫсЬ епегду тгапьГег еГГтс)епсу ГЕ) ь 509а (Р!Вите 18-16), апъ! с„(па) !а тЬе Пцогеьсепсе Ьретцпе оГ йе 6опог тп тЬе аЪаепсе оГ тЬе ассертог.
ВцЬяПцтюп оГ Ет!цат)оп ! шсо тЬе деПпт6оп оГ етъег8у тгапхГег ейк)епсу !Еъ)цат)оп 3) аЬоънь йас йеге !а аЬо а яеер 6)ьтапсе-ъ)ереиъ)епсе !и тЬе РЕЕТ ейк!епсу (Е): к ()т + т-' ) (Я' ~- А ') Растога ьцсЬ аа тЬе т)цапшш у!е16 Я) оГ тЬе с1опот, йе ге1абче опепсатюи оГ тЬе сгапябоп сПро1ех оГ йе ГйогорЬогеь (к'), йе геГгас6че шбех оГ йе шсегчеп!п8 шесПши Ги), апс1 тЬе очег- 1ар !пте8та! !Г!) ); сшъ ию1е ') оГ тЬе 6опог еш)вяоп апт) ассерсог аЪтюгр6оп хрестга ънП! аГГест Яа (С!е88 1996). ТЬе очег1аР ште8га! (Ц) );сш" шо!е ') !х 8)четь ЬУ: )РГ) )еР)) 46 Л)) = )Р() )тб (4) ънЬеге е(1.) Гм 'стп ') )а тЬе ехтшс6оп соеГГтс!епт оГ йе ассерсог, апт) Р().) !а йе Яцогеасепсе !птепяту оГ тЬе ъ)опот, ат ъначе1еп8тЬ ) . *ъ)птП гесепт1у, тпо!есц1аг ап6 сеПц1аг Ъ!о1о8!ага Ьаче Ьаб со асЫгехх тЬе оцехт!оп оГ прес!Пс рготеш-ртоте)п 1птегас6опх ънПЬ а 1ипЬет1 пшпЬег оГ тесЬпщцеа тЬас те1у Ьеач61у цроп тЬе цае оГ сЬешка1 стоя-1ш)с!п8 а8ептх апд ап6ЬотПех !р1еаае аее Рготосо1ь 2 тЬгоцВЬ 4 оГ тЬ!х сЬартег).
Ноънечег, сесЬпн)цеа ацсЬ аа цппшпортес!риа6оп ог аГПпиу сЬгошасо8гарЬу ъ)о пот ргеаегче тЬе рЬуяо!о8!са! сопсП6опа цпйег ънЬтсЬ рготе!их шау поппаПу !птегаст !и йе сеП. 1п атЫЫоп, тЬехе арргоасЬеь 6о пот ргочЫе )пГотшат!оп оп тЬе ьра6а! ъ)1ьтт)Ъц6оп оГ тЬе штегасбп8 рготетпя 1шшцпосусосЬеш!са! со1осаПтатюп, ънЬПе ргочЫ!п8 1пъ))тест ечтбепсе оГ тЬе ргеаепсе оГ тъно раг6сц1аг рготе!па ън)тЬ!п йе хаше сеПц1аг сотпрагттпепт, ГаПа то сопйпп ънЬейег тЬе ля рестеь! сошропепта астцаПу )псегасс 6!тест!у.
РВЕТ сап Ье шеаацге6 со асЫгеах ацсЬ ъ)цеатюпа оГ ьресгТтс!ту тп тптаст сеПх (Ваабаепх апъ) Бъ)ц)ге 1999). РПЕТ ь а попга6!ат!че, ъ))ро1е-т)!ро1е соцрПп8 ртосехх ънЬетеЬу епег8у Гготп ап ехс!тед ъ)опог ПцоторЬоге тх тгапаГегтеъ1 то ап ассертог ПцогорЬоге !и с!оке ргохцпЬу (туркаПу ън!тЫп 1О птп), Ехсаа6оп оГ тЬе допит ънП! тЬца ргоъ)цсс зспябаеъ1 сш)ааюп Ь.ош тЬс ассертог тЬат огсПпа61у ъноц16 пот оссцг ш тЬе аЪаеисе оГ РВЕТ. 11 ргосе)пх аге Гцхеь! то ВепеткаПу епсоъ)ед бРР чат)апта ог сЬеицсаПу шобтТтес) Ъу соча1епт аттасЬтпепт оГ ьуптЬет!с ГйогорЬогеа нбй арргорпате сЬагастег!атка то аПоън и!аца!мат!оп оГ 6опог-ассерсог !итегаст!опа (Вахт)аепх апъ) )очш 1998; ъ пГГтп ет а1. 1998), тЬеп тЬе шо!есц1аг штегас6оп оГ йе рготепь тп пиит!оп саи Ье 1пГеггес1 Ьу РВЕТ Ьетъчееп йе ГЫогорЬогея ТЬе тате ()с;, па ') ас ънЬтсЬ Ротхтег-туре епег8у тгапьГег оссцгх !а 8!чеп Ьу йе еъ)цат!оп: А 60 л с Ф 'о2 0.6 я Ф ы О 0.0 0.0 1.0 2.0 3.0 )( (Опас 01 ((о) Е(СЕ)КЕ 18-16 Е)иогеасепсе Еш)аа)оп апс( АЬаог 6оп 5 ес(га (А) ГКЕТ еЕВс(епсу (Е) аа а Еипсгюп о( (п(егсЬтошорЬоте с)19(апсе 10 ипйа о( 8 .
(В) зресгта! онет)ар (ейас(- ед атеа) Ьегснееп (Ье йиогеасепсе еш)99юп арес(гигп о( ЕСЕР апс) (Ье аЬаотргюп аресСгит о( ЕЧЕР То ае1есг а япгаЫе сЬгогпорЬоге ра)г Еог РКЕТ-Ьааед ргогеш шгегас6оп де(ест)оп, ьчо гпаш Гас(огх гпихг Ье сопяс)егес! ш оп)ег Со орбппхе Яо) (1) ГЬе с)иапгшп у)е16 оГ йе с)опог С2 апс) (2) йе арессга1 очег1ар Ъеьчееп йопог еш)хяоп апс1 ассерсог аЬгюгрбоп с1егегпппес1 Ьу йе очег1ар (пгейга! Д)с), учЬ(сЬ !х с1ерепс1епг оп 1Ье ассергог ехбпс6оп соеййс)епг е() ). 1п асЫ)г!оп го (Ьеае сопядега6опя (Ье сЬоке а1гю дерепсЬ оп (Ье ра)г Ье(па аресггаПу с)166псс епоиуЬ го Еасй)гаге ипашЪ!аиоиа с)егесг)оп ог йе с1опог и ЬЬ ап арргорпаге Ъапс) раба й!сег.
Р)па! сопяй егаг)опа аге ргасбса1ййех хисЬ аа йе ЕеаяЬ!!йу оу йе сопхггисйоп оу Еипсбопа1 Еияоп ргогеша ог йиогорЬоге соп)иаасех апс) 1Ьепл с)е1)негу )пго се!ЬЬ ТЬегеуоге, (Ье оргппа! Ко шпаг Ье сопяс)егес) Ъеагшй !и ш(пс) (Ье ехагп(пес) ргогеш хуагеш. ТЬе епй)пеег)пй 01 Ыие- апс) ген-9Ыйей чапапга оГ СРР, тшсЬ аа суап (СЕР) апс) тес) (Е)аКес)) йиогеасепг ргогеш, Ьаа Еасй!(агес) (Ье шеагшгегпепг оЕ РКЕТ Ье(ннееп СРР шигапга (Гог геч(езн, р!еаае атее Непп апй Тяеп 1996; Тяеп 1998; Ма(2 ег а1. 1999; Ро1!о1с апс) Непп 1999) ((Ьехе чаг(ап(9 аге ачайаЫе сошгпегс)а11у )гош СЕ014ТЕСН). Ап ехагпр1е оу а йепейса11у епсос)ес1, аресгга1!у согпра6Ые, сЬгогпорЬоге согпЬгпа6оп 19 (Ье епЬапсес1 суап йиогехсепг рго- ТАВЕЕ 18-10 И Ча)иеь (пгп) (ог СЕР апс) Су ЕЗуеа Ассгргоа =6 ЕСГР ЕСЕР ЕУГР Снз Снз.5 Сн5 а) Еуопоа паЕ 6.0 п.с1.
4,4 в.с1. 5.7 п.с1, 5.1 4.6 п.с). п.с1. пай 5.3 6.4 ЕСГР ЕСЕР ЕУЕР суз СуЗ.5 4.7 4.6 55 5.1 ТЬе еа1оеа сеете са(со1асед аа аеасс(Ьед Ьу Вааиаеоа аоа )обо (1996), ояоа роЫ(аЬед ехстяссюп сое(ас(еяса Уос 6РР еапс аяса (Тяеп 1996) аоа сЬоае ясрр1(еа Ьу сЬе тоаоо(ассосег (ог сЬе Су ауеа (АсяесаЬат РЬаяяас(а ВюсесЬ). оах юясасеа пос ЙеСетпояед. Ртогосо! 5с РтоЫтсн Ртотет 1пгетасг!опу 1Л(пр СРР апс( Ниотеусепсе Яехопапсе Епетру Ттап~ет 18.71 18.72 Отартег 18: Рштегп!птегаст(оп ТесЬпо)о8тек теъп (ЕСРР) ак а т(опот со епЬапсет( уепоъч Пиогексепт ргосе(п (ЕУРР).
ТЬе К„ча1ие (от йь ралг )к 4.9 пш (ТаЫе 18-10) ъчЫсЬ епаЫек РКЕТ г(етесгюп очет гПктапсек ог -1.б х Ка = 7.8 птп согтекропсПп8 то а т(есесгюп 1ишт от 598 РКЕТ ейюлепсу (Р(8иге 18-1б). ТЬе арр1гсатюп лог 8епестсаПу епсос)ед Пиогексепт РВЕТ раггк П еч(ь!епт: 1т апоъчк тЬе апа1уык ол ртосеш штегастюпк ъч)тЬоит тЬе пееь! то соп)и8ате ЙиогорЬогек то рцпйег1 рготе(пк апг( те(птгоъ)исе йетп (пто сеПк. )г, Ьочтечет, тЬе ике от" ки1(олпдосуашпе с1уе соп)и8атек ь леаяЫе, тЬе 1аг8е ехппстюп сое(6с)епт апт) крестга1 очепар тпа1сек Су3 (АтпегкЬаш РЬатшас!а ВюсесЬ) а кштаЫе ассертог лог епег8у тгапкгег тготп тЬе т(опог ЕСРР ()к8 ет а!.
1999; ъъоитегк апд Вак6аепк 1999). ТЬе Ла ол гЬ|к ралг ь б птп епаЫ(п8 егглс(епт РКЕТ т(етесйоп очег а гПктапсе ир то 9.б ппл. ОЪч!пик!у, йе ЫВЬег йе К, йе 8геатег йе сПктапсе очег ъчЬгсЬ РВЕТ сап Ье белеетесь. Ноъчечет, ечеп ипг(ег ортипа1 ъ)опогт'ассертог крессга! соп6!г!опк, Ка ицП 8епегапу пот ехсеег) 7 пш, ъчЬ!сЬ сопГегк ап иррег спктапсе 1ипп о(-11 ппл гог йе с1есесбоп от" РКЕТ.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
