Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 96
Текст из файла (страница 96)
1п ргастгса! сегшк, тЬеке ластогк тпау Ъе сопят)егес) ш ге!а6оп то ачега8е ргосеш к!гек. Аккиш)п8 тЬат тЬе крее(Пс чо1шпе ог" а ртотеш ь -0.74 сшк/8, йе гаъ)1ик ол а 100-)с)3 пю1еси1аг-тпакк 81оЪ|л1аг ртоте)п сап Ье са1си1атеъ) Ъу киЬ- ктпибоп ол йе Уопоичп8 ет!иа6оп, ъчЬеге К (к тЬе гад!ик (пш): К = б 7б х 10 л ъМлът (5) геки1тш8 ш а га6(ик от 3.1 пш. А рготе)п ог 200 Ю Ьак а са1си1ате6 татПик ог 3.95 пш.
ТЬеке са1- си1абопк от га66 г)епюпктгате тЬат РКЕТ (к!тае1у то оссиг Ьетъчееп ЛиогорЬогек оп пчо штегас6п8 рготешк ъч!тЬ лпо1еси1аг шаккек Ье!оъч 100 Ил, ъчЬегеак тЬе 1Псе1лЬоо6 ог" РКЕТ Ьетъчееп дуек оп рготешк ол пю1еси1аг шаккек аЬоь е 200 Ю ь 1оъч. ГКЕТ РЕТЕСТ!ОМ тЧЕТНОРЯ Яеаду-81а1е Е!тлоге8сепсе 1п$еп8!$у Меа8огегпепЬ РКЕТ 1к дегестаЫе апт( ъ)иапт!ПлаЫе ик!п8 а гап8е от тесЬпн!иек, гуркапу Ьу апа(уг(п8 тЬе ъ)опог!ассертог епикяоп га6ок ог" ктеаду-ктате Пиогексепсе (Адатпк ес а!. 1991; М)уаъчаЕП ет а1.
1997). Ргетегепт!а! ехсиагюп ол а ъ(опог ПиогорЬоге йас ь 1осатед (п пю1еси1аг ргохиппу то ап арргорпате ассертог ЙиогорЬоге мчП геки1т лп кепят)хег) еш!ккюп ттогп тЬе ассертог апд с!иепсЬ- лп8 ог" йе ъ(опог Пиогексепсе. ТЬе сЬап8е лп йе га6о от" тЬе ъ!опог апъ! ассерсог епикяопк сап Ье шеакигеъ) тоПоъч(п8 ап ечепт тЬас шдисек рготеш аккос(агюп. ТЫк шеакитетпепг Ьак а пшпЪег от" 1цппа6опк. Рог шктапсе, Ъесаике йе татю ь пот ап аЬко1ите т!есегпппатюп от" тЬе РКЕТ ейюлепсу, кисЬ шеакигетпеп~пикт Ъе регготшеь) очег а типе соигке ъчЬегеЪу а сЬапае ш галю ь с)есестеъ! йат сап Ъе акст)Ьет( то ргоге)п аккос(а6оп.
5!псе Пиогексепсе (птепкпу ь ргорог6опа1 то сопсептта6оп, йе ъ(опогт'ассертог штепягу га6о ъчП1 дерепд оп!оса! сопсептга6опк от !аЬе1ет( рготе!пк. ТЬ)к !к рагт(си1ат1у ртоЫешабс ъчЬеп йете ь т1ПРегеппа! геспктНЬитюп ог" тЬе Пиогексепт рготелпк ак а геяй ол Ью1о8(са! аст(ч(ту с1ипп8 тЬе шеаялгешепт. Катютпетпс сопсептгатюп егтестк ате пот ап ькие ъчПЬ йе ъье о( герогтег ргоЬек йат епсоъ)е йе допит апд ассертог СРРк оп тЬе каше ро1урерт!с)е, ак )к тЬе саке ъч!й шо1еси1ек кисЬ ак йе са!сшгп кепк!п8 "саше1еопк" (М(уаъчаЕП ет а1.
1997, 1999). ТЬеке сурек о( ргоЬек сопыкт от а т(опог апд ассертог Пап)с!п8 ап "ас6ч(гу"-крее(Плс пюъ(и1е. ТЬе кто!сЫогпетгу ог' тЬе с(опог/ассерсог ь сопктапс лог аП р)хе1к, ап6 апу сЬап8е тп епикяоп га6о, тЬегегоге, сап Ье акспЪе6 то сЬап8ек 1п РКЕТ е(Тле(епсу. Ноъчечег, саге кЬоиЫ Ъе та1сеп то епкиге тЬат оЬкегчес1 сЬап8ек )п га6о аге пот ъ1ие со аЬета6опк (п рН, ъчЫсЬ ъ)1(тегепг!аПу аллес! йе лптепяту ол СРР чапапь (Е1ор(к ес а1. 1998).
АЬегпа6че!у, йе ъ(етест!оп ол ассертог-кепят)геъ) егпьяоп а!опе сап Ье икеь! ак а тпеакиге от" РКЕТ (МаЬа)ап ет а1. 1998; Хи ет а!. 1998). ТЬь арргоасЬ (к икети! (п ятиа6опк ъчЬеге 6опот (псепыиек аге 1оъч апт(лог йеге ь соптапипа6оп ъч(тЬ Ьл8Ь Ьас)с8гоипд (аито)йиогексепсе ш йе т)опог сЬаппе!.
Ноъчеъет, аЪкогр6оп крессга сЬагастепкттсаПу ехЫЬлт 1оп8 тал1к ш тЬе кЬогтег ччаче1еп8тЬ (Ыце) ге8!оп, чнЬтсЬ тпау сагье йе сбгест ехспа6оп оГ Ъо|Ь с1опог апт| ассерсог тпо1- есц1ея |Ьгь геш16п8 |п пцхш8 оГ сбгест апд аепят!хек егпьяоп. Сопчегае!у, 6цогеасепсе етпьяоп септЬ го та|1 цпо йе гет( ратг оГ гЬе зресгтцш, сацяп8 с1опог Вцогеасепсе ЫеейЬгоцВЬ шго |Ье ассертог с(егест!оп сЬаппе|. Соггеспопа Гог тЬезе ейесь Ьаче Ьееп с)осцшептед (ботс(оп ет а1.
1998) апс1 |пни|не |Ье асти!яг!оп оГ Вцогеасепсе !ша8еа оГ аатпр1ех сопса!и!п8 тЬе допит, йе ассергог, ап<1 Ъо|Ь Гог тЬгее т|тТГетепс 66ег аетппая А Кцапт!ту |Ьас Ь рторогтюпа1 то |Ье РКЕТ ейктепсу сап йеп Ье т(ет!чей 0опог ОоепсЬ!щ апг! АссерГог РЬоГоЫеасЬ|пе РЕЕТ с1егеспоп ь а!хо роаяЫе Ъу ехапип!п8 т)цепсЬ|п8 оГ йе т(опог еш!аа!оп (Вахпаепа апд 5т|ц!ге 1999). 5Ьоц14 ЕКЕТ оссиг, |Ьеп тЬе штепяту оГ т(етесгаЫе с!опог епиятоп ь гедцсед ш ргорогтюп со йе ейктепсу оГ |Ье епег8у !тапа(ег: 3 =1 — ( — ') (6) тнЬете 1, апс1 Г,„тергеаепг тЬе атеат(у-агате т|опог Еиотеасепсе шсепягу ш гЬе ргеаепсе апс1 аЬхепсе оГ ЕКЕТ. ТЬе |птепяту (Г ) ат еасЬ ртхе| 1' Ь ргорог6опа| то йе т(опог сопсептгатюп апс1 тес)и|тех са!1Ьгатюп чч!тЬ гЬе !птепяту ш тЬе аЬаепсе оГ ассертог (Г ) |п отс(ег го са1сц1ате |Ье ЕКЕТ ербктепсу ат еасЬ р!хе1 цяп8 Еццат!оп 6. ТЬЬ геГегепсе тпеаацгегпепт (1,„) ыпас(е оп йе хаше аресппеп Ьу арес~6са11у рЬотоЫеасЫп8 |Ье ассерсог Ьу ехспа6оп аг (та аЬаогрт!оп шахтпшгп (Вахт!аепа ег а1.
1996; Ваапаепа апт( |онтп 1998; ЪЧоцтега ег а|. 1998). 1п ргас6се, тЫх арргоасЬ !пчо1чеа (1) йе ассрцятюп оГ а с(опог цпа8е, (2) РЬотоЫеасЬтп8 оГ гЬе ассертот, апт( йеп (3) асс)ц!ят!оп оГ а аесопт( с1опог цпа8е. ТЬе ЕКЕТ ейк!епсу шар Ь са1сц1агет( ах опе ш(пцх йе га6о оГ |Ье допит ипа8еа ЬеГоге апт( айег рЬогоЪ|еасЬтп8 оГ йе ассергот. Ву сопттахг го аепят!тес| еппь!оп шеаацтешептя рЬогоЫеасЬтп8 сап Ъе рег(огшет| тч!тЬ ЬтЕЬ ае|еспчтту оГ йе ассертог япсе аЬшгр6оп арестга тепт| го та|1 ш йе Ыце рагт оГ йе арестгцш Ъцт аге атеер ат йетг тес! ед8е. Саге аЬоц1д Ье са)сеп тч!тЬ ассерсог РЬогоЫеасЫп8 РКЕТ шеаяцгешепга тЬат |Ье рЬососЬеписа1 ртос1цсс оГ йе ЫеасЬет| ассертог т(оеа пот Ьаче геядца! аЪтютртюп ас |Ье с(опог егпьяоп апд, пюге !шрогтапт1у, тЬат К доеа пот Яцогеасе ш йе г(опог арестга! ге8!оп.
Весатье оГ птагь гпонегпепт оГ рготе|п т(цг!п8 йе ехтепдег( типе гет!ц(гет( Гог рЬотоЪ|еасЬ!п8 (турка1|у 1 — 20 ш|пцгез), |Ьь гуре оГ ЕКЕТ т!есегш!пат!оп ь рте(етаЫу рег(отшет| оп Гтхес( се|1 ааптр1ея 1.л е-сеП ЕКЕТ шеаацгешепть аге тоге ГеаяЫе цяп8 Вцогеасепсе Иейпе ппа8!п8 Ьесацае !тТегнпеа аге !пс)ерепс(епт оГ ргоЪе сопсепсгатюп апт| 1!8Ь| рай 1еп8|Ь. г!ооге8сепсе НеГ!тпе ЕКЕТ тес!цсеа тЬе 6иотеасепсе Ие6тпе оГ йе с1опог ВцогорЬоге (т, а шеаацге оГ|Ье ехсКед-агате с|игатюп), япсе К г(ерорц!атех Ка ехс!тес( агате (С1е88 1996). ТЬь ейест ь аЬо шаш(еп аа а тес|пег!оп ш йе с|опог т)иаптит утеЫ (|Ье гаг!о оГ |Ье пшпЬег оГ Вцогеасепсе рЬотопя еш!гтет( согпрагес1 то тЬе пшпЪег оГ рЬогопа аЬзогЪе4. СВчеп гЬат т ь ап шгппяс 6цогеасепсе рататпетег — тЬас К ь |пс(ерепт(епт оГ ргоЪе сопсептгатюп апс1 1!8Ь| ра|Ь !еп8й, Ьш т(ерепт|епт оп ехстгет| яаге ргосеьеа — РКЕТ сап Ъе т(етестет( рцге1у н!а с)опог Вцотеасепсе.
5тпсе гЬе ассертог 6цогеасепсе !х пот т(есестес(, арестТтс!ту оГ |Ье ассертог ртоЬе Ь пот ап !яше. Ехрепшепь сап тЬегеГоге Ъе сагпед оцт ияп8 аатцтапп8 атпоцпь оГ ассертог шо1есц!ех ог роо1а оГ ассертот-1аЬе1ег| рготеш тч!тЬ попйгпстюпа! ацЬрорц1атюпя Ву цпарп8 с1опог 6цогеасепсе Иетппеа цяп8 Вцогеасепсе Иетцпе ипа8!п8, п Ь роаяЫе то са1сц1ате ЕКЕТ еГГтс!епс!ех ат еасЬ р|хе1 оГ ап !ша8е: Ртотосо! 5т РтоЬт8 Ртотет |итетаспож ((ттц8 СРР аит( Р!иотетсецсе Леюиалсе Епет8у ТтагьГег 18.73 Ргогосо! 5: РгоЫпц Ргогеги 1лгегассгопя Игпц СРР апг1 Р!иогеясепсе 1хеяоиалсе Еверу Тгапя)ег 18.75 1пппаре Ргоседдпщ РЬ1М дага сопяя! о( а яег)пепсе о( рЬаяе-с(ерепг(епс ппацея очег а (пП сус1е (2гг гаг(!апв) о( а япы (Ргцпге 18-17, 5(ер 1).
Ргоп! (Ьеве г)а!а, йе рЬаве ПЬ11(в (2гф,), апг( пюг(п1аг!опя (М,) о( еасЬ япы аг еасЬ р!хе1 (!) аге ехггасгег( 1п огдег (о са!сп1аге (Ье Йпогевсепсе 1!Рег!гпея ы!пц Ег)па(!опв 9 апг( 10. 5(апдайк Роппег Ггапя(оггпаг!опв аге овей Го са1сп!а(е 1Ьеяе рагап!е1егв (гоп! йе га!и г(ага. Роггпа11у, (Ье РЬаяе-11ереп11епг ганн Н.1М 1!ага О,()с) сап Ъе туг!(геп ая а Роиг!ег пег!ея! го2 Р,()г) = Е! -у ~ (а,! сов()сг151(г) + (г„я!и ()ггггхг(г)] и=! ТЬе яцпа1 !в пагпр!ед Ъу асс(п!г!пц ап ппаце а1 еасЬ пег!пеп(!а! егер (11 = 0,1,2,5...1х(-1) оу и!(г ш йе рЬапе оу йе ппаце !пгепяР!ег гпог)п!аг!оп.
ТЬе сг!г!са! рагагпегегв Р„, ае, апг( (г„аг йе Ьаг- пюпк (ге!)иепсу (и) аге са1сп1агег) чч((Ь 11!Псгеге япе ап11 сояпе ггаппГоггпаг!опв пяпц вгапдагг( согпрпгег а1цоп(Ьгы (япсЬ ав ГЬопе г(еясг!Ъег( Ъу Ргеяп ег а1. 1990) (Нцпге 18-17, 5(ер 2): ввтр!е ге1егепсе 51ер 1. !спаде авдо!в!боп: А равве-берепбеп1(гпвде вепев п асдюгеб а1 гедс!вг !и!епгв!в в!опд в (сг равве сус!е о1 ЗПО бедгеев. 51ер 2.
Роог!ег вгпр1аобе св!со!в1юпв 1гогп Пае рпвве вЫП: Я Еоспег 1гвпв1опп в!опд Фе рПвве вхя 1ог евсд р!хе! !и Спе япвде вепев Ь ребоппеб; Ягее вгпрП1сг!ев вге бе1епп!пеб !гого Йе внегвде ге1егепое Ппвде вепев. ~(с2Яо [(с'Я ~(сЯо под вод Ьод ЕЯ ЕЯ Яер 3. РЬвве-вЬ!П впб бегпобо1вбосс Ровсе вдуа впб бегпобс!а1юп япвдев аге бегепп!пеб 1гогп Фе Роопег вгпрП1обев о1 яе РС!М ба1в апб ге1егепсе вгпрП1сбев. ЫЫ 51ер 4. Огепгпе св1сп!вбоп: Рдвве впб пюбо!ваоп Оебгпев вге св!спв1еб Ьогп Фе ровсе вара впб бепюбс!вбоп нв!сев. НСОКЕ 18-17 !гпа е Ргосевяп Нонн 01а гаго 5ее (ехг (ог дега(ЕЬ 18.76 С)гаргег )В| Ргосе|л Тлсегаес|ол Тес)лио)ли|ел А)ъс ЕХРЕ|ъсМЕЫТАЕ 5ЕТПР ГО|с ГЙЕОПЕЫСУ 33ОМА|Ы ГЕ|М ТЬе |сеу е|егпепси о1 а 1ге||иепсу доела|п йиогеисепсе Иебпсе |исай)пй иуиселг аге (1) а Иапсйпй юане асои со-орбс глас|и |асог (5)Аг-АОМ) сйас гподи!асеи сйе |псепясу о1 сйе ехс|сабоп ! |фс или гсе ас Ыф 1гегсиепсу ап (2) а (гессиепсу гп(х)пй дечсе юсЬ аи ап |гпаие |псепййег со рег(олп рЬаие-юпи)с)че деСессюп о1 сЬе йи геисепсе епс)|ь(оп.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
