Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 92
Текст из файла (страница 92)
Ведисед В!и!а!В!еле (20 тм) |л 50 п|м Тгь-С! (рН В. О) Орсюпа!, р!еаье аее 5сер 8, 2х 505-РАСЕ Ве(-!оайлВ ЬиЕЕег Се!5 5О5 ро!уасгу!апдде ее! <! > Рог Веса!!а оп Ю5-ро!уасгу1агп(с(е 8е1 есессгорЬогеяа, р1еаае аее Аррепс((х 8. прес!а! Ес!пср|пеп$ ВосопВ |часег Ьай Елд-очег-елд ьатр!е го|агог С!и|ай|оле аВагоае Ьеада Ргераге аа а 50аа а1тгу 1п (уяа ЬпКег. 18.58 СЬаргег 18: Ргогет 1пгегаслоп ТесЬпо1о5!ез РгоЬе5 С5Т ргосе!л С5Т Гияол ргосет еаггу1л8 йе "Ьа1!" ог ргоЬе зес)иелее Сопягпсс аз сГезсг!ЬесГ ш СЬарсег ! 5, ргососо! 1.
СеП5 аМ Т!55ое5 СеП Гузасе т ъчЬГеЬ йе ргоге1лз аге лз5-!аЬе1есГ !с Ь розяЫе со ые оп1аЬе!есГ сеП 1узасез с1ерепсПпП оп сЬе цоаЬ оГ йе ехрепгпепс апс1 йе с1еягес1 с1есеспоп шейой рог ааеасюпа! Йесааз, р1еазе зее йе ргососо! !псгосГисс!оп. Адйбопа! КеацепЕ5 51ер !1 оГ !Ьсз рго!оео1 гес)о1гез геа8елсх Гог ГттилоЬ)ос!Гл8 алсГ зса!л1ла ргогетз зерагагесГ Ьу 5Р5-ро1уаегу)ат!ГГе 8е1 е1ееггорЬогеях аз !сз!есГ т Аррелс)!х 8.
МЕТНО0 Ргес!еаппе ЕЬе СеП ЕуьаЕе 1. 1исиЬасе ГЬе се11 1узасе ъч!ГЬ 50 1л1 оЕ а 50ага з1иггу оЕ 81исасЬ!оие а8агозе Ъеас)з аис) 25 щ оЕ С5Т Еог 2 Ьоигз ас 4'С ъчЬЬ епс1-очег-еис1 ш)х!п8. ТЬе ашоип! оЕ 1узасе иеес1ес1 со с1есес! аи шсегассюи !з Ь18Ыу чапаые. 5!ах! ъчЬЬ а чо1шие оЕ 1узасе ес)шъа1еп! со 1 х !Оа со 1 х 10г се1!з. Весаые йе апп оГ сЬе ехрепшепс ы со сошраге 65Т ъч!ГЬ а 65Т Гояоп ргосеш, Ь Ь песеяагу со ргераге епоиаЬ ргес!еагесГ 1узасе !ог еасЬ геасиоп. ПГ6ссепс ш!х!па оГ геааепсз ь йе Гсеу со засеем.
ТЬсз ь Ьея асЫечесГ 6 сЬе геасиоп ы сагг1ес! ош сп а геазопаЫе чо1шпе: 500 — !000 и! Ь а Поод зсагг!па ро!пс. ТЫз ргес1еаг1пд яер сз Лез!Плед со гепюче ргосеспз Ьогп сЬе !узасе сЬас !псегасс попзресс6саау счсй сЬе 65Т гпосесу ог сЬе Ьеадз а1опе, 1с Ь пос а1ъчауз песеяагу со ргес!еаг сЬе !узасез ъч!ГЬ 65Т ог а!осайюпе аеагозе ЬеасГз сГ сЬе шсегасНоп млП Ье сГегессесГ ргппап1у ъай ап6Ьосаез сагессес1 со а сапдгаасе !псегасг!пц ргосесп. Носчечег, ъчЬеп зз5-1аЬе!есГ сеП 1узасез аге ые6 со 16епс!Гу поче1 ргосеш-ргосе!п шсегасиопз, йезе яерз сап Ье!р со гебпсе ЬасГсагоипсГ. 1Г йе шсегаспоп ъаП Ъе аесессесГ счЬЬ апНЬосаез со а сапс$к$асе !псегасг!па ргосесп, Ь Ь ппрогсапс со !пс1ис1е съчо сопсго!з: 65Т р1пз ЬеасЬ ап6 оп1у ЬеасЬ. 1Г сЬе Гшегасипц ргосеш оГ шсегезс Ь Гспоъчп со Ье сои успес! со а зрес!Пс сеПп!аг согпрагсгпепс, сЬе ргоЬе сап Ье ппхес1 чай а !тассюп оГ йе сеП 1узасе соггезропсопц со йас согпрагспсепс.
2. Сеиспуиае йе иихсиге а! гиахииит зреес) Еог 2 ииишез а! 4'С Еи а ш)сгобг8е. 3. ТгаизЕег сЬе зирегиасаис Е).е., сЬе ргес1еагес) се11 1узаге) со а ЕгезЬ гисего6лце сиЬе. РгоЬ!пд Епе СеП Еу5аЕе 4. 5ес ир ичо т)сго6лае сиЪез соисашш8 ес)иа! апюипсз оЕ ргес1еагес) се11 1уаасе аис) 50 61 оЕ 81исасЬ!оие ацагозе Ъеас)з.
То оие сиЬе ас)с) -10 ГГП оЕ С5Т рго!еш; со йе ойег сиЬе ас)с) -10 )с8 оЕ ГЬе С5Т Еияои ргоЬе ргосеш. ТЬе агиоип! оургоЬе апс1 сопсго1 ргосеги асЫес1 зЬои!6 Ъе ес)и)гпо1аг гп йе съчо геассюиз ().е., ГЬе 6иа1 то!аг соисеисгаоои оЕ С5Т зЬои16 Ье сЬе хате аз йе С5Т 6ляоп ргоЪе ргосе!п). 1исиЪасе ГЬе сиЬез Еог 2 Ьошз а! 4'С ъч!ГЬ еис)-очегеис) ш!х!и8. ,Пъ 154рО!!ТАХТ И йе Ьоипд ргосе!пз ъчП! Ье гегпочес! !голь ГЬе Ьеабз Ьу ЬоП!пц 15сер 101, 1! !з ппрогсап! го 1пс1ис)е а сои!го! гиЬе солса!и!пП оп!у 81исасЫопе аПагозе ЬеасЬ апс1 сеП 1узасе.
ТЬ!з аПоъчз гЬе с1егессюп оГ ргосе!пз йас Ыпб попзрес!ПсаПу со йе Ьеаоя 5. СеиспйПе сЬе зашр1ез а! шахииши зреес) Еог 2 иииисез Еи а писгоЕиае. Ргогого| гй Оегесг(ои оЕРгоге(и-Ргоге|и 1игегасдоил Ул|ие йе С$Т РигГои Ргоге|и Ри!!дони ТесГли|л3ие 18 59 6. 5аче 1Ье ялрегпасапса ас 4'С (п ГгезЬ ш|сгоГийе сиЬея ТЬеае аашр1еа чч(1! Ье апа!ухег1 Ъу Я)5-ро1уасгу1аш(де Ве1 е1есггорЬогеяа апа1уяз лп Яер 10. 7. ТЧааЬ сЬе Ьеада ччиЬ 1 гп1 оГ ке-соЫ 1уа(а ЪиГЕег. Сепсг(Еийе йе сиЬеа ас псахппигп ареед Гог 1 пипше |п а ш|сгоЕийе. ЕТ(асагд сЬе аирегпасапся Кереас сЬе ччааЬеа 1Ьгее 6гпея 8.
(Орпоиа3) Е1исе йе С5Т 6ляоп рго1елп апд апу ргосе!па Ьоипд со 6 Ьу адд(пй 50 р! оГ20 псм гедисед 81исайюпе ш 50 шсчс Тг|а-С! (РН 8.0) со сЬе Ьеадя Сепспййе сЬе шЬеа ас гпахитпип ареед Гог 2 пиписеа лп а писгоййе. 9. Мсх йе Ъеада (Егогп Яер 7) ог йе е1и1ег1 ргосеспа (6огп 5сер 8) чч!1Ь ап ег!иа! чо1игпе оГ 2х Ю5-РАСЕ Ве1-!пад|ой Ьийег. Оейесйсщ !пйегасйсщ Ргойеспй 10. Вол1 йе аашр1еа Гог 4 ш(писеа апд апа1уге 1Ьеш Ьу Я)5-ро1уасгу1аплЫе це! е1ес1горЬогеяя 11. ТЬе шейог1 оЕ г1есесдпй ргосе(па аааос|асед чч31Ь йе С5Т Гияоп ргосе|п чч(11 дерепд оп ччЬесЬег ог по1 сЬе се!1 1уаасе ччаа гад|о1аЬе!ед апд оп йе йоа! оЕ йе ехреппсеп1.
° !Е 1Ье 8оа1 Ы со г1есесс а11 оЕ 1Ье лл5-1аЬе1ед ргосешз аааосласег1 чч(сЬ 1Ье 6ляоп ргоселп, дгу йе Ве! оп а Ве1 г1гуег апг1 ехроае и со Х-гау 6!гп со ргог1исе ап аисогад(ойгарЬ. ° 1Г 1Ье Иоа1 ь со г1есесс арес~6с аааос(асед ргосешя сгапаГег йе ргосе(па Ггош йе ЯЭ5- ро1уасгу1аплЫе Ве! Со а псешЬгапе апг1 регГопп иппшпоЫоя|пй (Аррепсйх 8). ° !Е йе Воа! ь со г1есегпипе йе яхеа апд аЪипдапсе оГ ргосе!па аааос(асед чч(1Ь 1Ье 6ляоп ргосе|п Егогп а попгасбоаспче 1уаасе, ага|и 1Ье Ве1 сч(1Ь Соошааяе В1ие ог я1чег шсгасе (Аррепд|х 8).
Т|СОЕ)ВЕЕ5НООТЗМС С5Т РЕ)ЕЕООТИГМ ЕХРЕКЗМЕМТ5 ТгоиЬ|еайоос)пй а С5Т рийдоч и ехрепгпеп1 )а Гас)3)сасед Ьу апа)уг(пй апг| согпраппй айциоп (гоги чаг(оиа асайеа оГ СЬе ехрепплепс ияпй Ю5-ро|уасгу|авЫе йе| е|ессгорЬогеяя Гог ехавр|е, аерагасе йе Го()олч)пй аагпр(еа Ьу е)ессгорЬогеа)а 1ЬгоийЬ ап 5()5-ро)уасгу(ав)де йе|, (оад(пй арргохапасе|у егйляа|епс агпоипса (е.й., С Гч) оГ 1Ье со1а| сей (уаасе Ггопл еасЬ аавр(е: ° йе 1оса| сей (уаасе (5сер 1) ° 1Ье сирегпагапс аачед ас 51ер 6 ° 1Ье е|иа1е (51ер 8) ° сЬе е|иа1е (гоги сЬе сопсго| спаса)п)пй СИТ (51ер 8) ° Фе е(пасе Ггот 1Ье соп1го| соп1а|п|пй Ьеада апд сей )уааге (51ер 8) ° йе Ьеада айег е|и1юп (51ер 9) Согпраг)пй еасЬ оГ йсеае аагпр(еь Гог Сйе 9иапс(гу оГ а сагйеС ргоСе|п СЬас Ь|пда 1о СЬе С5Т Гиаюп ргосев гпау аи88еас 1Ье саиаеа апд геведсеа о( чапоиа ргоЪ|ева.
Гог ехагпр|е, а (очч а(йпа(, ечеп 1ЬоийЬ йе 1агйес ргосев ь аЬипг3апс |п сЬе соса| сей (уаасе, плау )пдкасе йас йе Ь|пд(пй сопд(1)огь аге пос орйпса|. А сЬапйе |п аа)с апд десегйепс сопсепсгасюпя )п аддсйоп со )псгеааспй йе 1)ве а((олчед Гог аааос)ас)оп, гпау 'апргоче йе геялй. Ву сопсгаас, сЬе совр|ех вау Ье геса|пег| оп сЬе ц|исасЬюпе айагоае Ьеада дие са )пей)с)епс е|ийоп. ТЬВ сап Ье де1егпл|пег| Ьу Ю5-ро|уасгу|аплЫе йе| е)ессгорйогеа(а апа)уа(а оГ сЬе "Гиа(оп-ргосе)п-Ьеада роас е)ос!оп" Ггассюп. ТЬе ргоЫепл вау Ье геведсед Ьу роойпй гпи(йр(е е|исюпя Ргес|еаппй а )уаасе ъч|ГЬ С5Т апд)ог Ьеада сап Ье3р 1о гегйлсе попарес)йс |псегассюпя Глесгеаа(пй Фе агпоипс оГ (уаасе аддег| апг| |псгеая )пй йе Яппйепсу оГ йе ччааЬ сопд(1)опа сап а1гю гедисе Ьассгйгоипд. Г|пайу, И йе |псегасйоп (ь апа)ухед Ьу лчеагегп Ыосйпй, 31 'ь ппрогсапс со ргоЬе сйе веплЬгапе ъчй апй- С5Т апс(Ьод(еа айег ргоЫпй ъчйй апйЬоду арес)йс Гог Иле сагйес ргосе|п, ТЬВ сопсго3 лч)33 гечеа| лчЬесЬег ай аавр(еа ччеге |псиЬасед лчИЬ сЬе ааве агпоиги оГ С5Т Гияоп ргосе|п апд ччй| Ье3р со де1егпмпе чч лесЬег ГЬе Гиа)оп ргосе|п В дейгадед диг)пй (псиЬайоп чч|сЬ 1Ье сей (уьасе.
Рго1осо~ 4 Иеп66са6оп о'г Аьюоа1ед Рго1е~пь Ьу Со~ гп ти поргес~рйа6оп Ре!ег О. Адата Рох СЬахе Сапсег Сеп1ег, РИ!!атуе!РЬ!а, Репту!ната 19111 МЫЬае1 ОЬЬ Оапа-РагЬег Сапсег !па!1!иге апт! Нагнагт! МесВса! 5сЬооl, Вот!оп, МатзасЬияеят 02115 нкм л сы !5 счхю ттмтткк монтъеылгттк!нс сомэшон5, шапу оЕ йе рготетп-рготетп атос)а6опа йат ехтат ъч)тЬ)п йе )птаст сеП аге сопаегчей ТЬ)х Еаст сап Ье паем то адчапта8е то бе!ест ап6 !6епт)Гу РЬуяо1о8тсаПу ге!ечапт ргосеш-рготетп )птегас6опя Аъ П1цатгатет) Гп Р18цге 18-14, тТ рготетп Х ь цппшпоргес)РЬате6 ъч)тЬ ап ап6Ьобу то Х, тЬеп ртоте)п т', иЫсЬ 1а атаЫу аааос)атет) ицЬ Х )п лчо, птау а1ьо ргес)рцате (р1еаье атее БВше 18-14, Сошр)ех 1). ТЬе )пцпцпоргес)РПабоп оГ рготеш т', Ъаьед оп а РЬуяса1 тптегастюп ълй Х, )а геЕеггет) со аь соцппшпоргестрцатюп. ТЫа арргоасЬ та гпоьт сопцпоп1у цке6 то техт ъчЬетЬег ти о рготе)пь оЕ штегеат аге аааос)ате6 )п чтчо, Ьцт п сап а!ао Ъе цке6 то Ыепт)Еу поче1 )птегас6п8 рагтпегь оЕ а рагткц1аг рготеш.
Пхаптр!ез оЕ йе !аттег арргоасЬ тпс!цс)е йе Ыепбйсатюп оЕ р21с)р! аз а рготеш йат штегаста ълтЬ сусПп Е)!С6)с4 Ыпаке (Хюп8 ет а1. 1993); е1опа)пк В апт1 С, Сц12, апс) ПЪгопесбп аа рагтпегт ълтЬ тЬе чотт Н)рре1-1)пдац тшпог ятрргеяог рготетп ГрътНЕ) (Е)цап ет а). 1995; КГЪе1 ет а!. 1995; Рацае ет а1. 1997; 1опег8ап ет а!. 1998; ОЬЬ ет а1. 1998); апс1 тгапаЕогтпатюпАгапьспртюп т)оша)п-атос)ате6 рготетп (ТОВАР) аь а рготетп тЬас штегаста ънпЬ тЬе Е2Р1 апд с-Мус тгапьспрбоп Гастога ГМсМаЬоп ет а1. 1998). РегЬаря тЬе тпоя г18огоцк с1ешопктгат)оп оГ а РЬуяо1о81са! штегас6оп Ьетънееп тъно рготешз га йетг соцппшпоргестрПатюп Гготп сеП ехтгастя А рцтатгче тпсегастюп пцВЫ Етгят Ье Ыеп66ед Ьу цае о!а рои егуц! Ь18Ь-тЬгоцВЬрцт арргоасЬ ацсЬ аь а уеаьт ти о-ЬуЬгЫ асгееп апд ацЬьет)цепт1у ьЬоъчп Ьу соцпгпцпоргес)РЬатюп оЕ тЬе пчо ргосешь со Ье а тгце РЬуяо1о8)са) Гптегас6оп.
Оетес6оп оГ а ргосецт-рготеш тптегасбоп )п тЬ)ь шаппег сап ойеп Ье ЕасПцате6 Ьу тгапяепт !тапи!ест)оп оЕ се!Ь ън)тЬ р!аяпЫь епсотПп8 тЬе ге1ечапт рготешя ГоПои е6 Ъу ехргея яоп оГ йе рготетпя Ноънечет, очегехргезяоп оГ тЬе ргосеша Ггош тЬе р1аыпттЬ ппВЬт с1пне Гптегаст)опь Ъетъчееп тЬе тип рготе)па тЬат аге пот РЬуяо1о8)са1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
