Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 90
Текст из файла (страница 90)
МАТЕК1АЕЬ САНТ!О(Ч: Р!еахе хее Аррепд!х 12 Еог арргорг)а|е ЬапдПпц оЕ таСег(а15 шаг)гед тч(СЬ <! >. Вслйег5 апд Бо!с|Е1опц Р1еахе хее Аррепецх 1 Еог соп|ропепЬ оЕ асосК хо1ибопя ЬиЕЕега, апд геацеп|я 0Пи|е 51ос1с хо!011опх Со СЬе арргорпа|е сопсеп|га6опя Ваяс ЬиЕЕег 20 гпм НЕРЕ5 (РН 7. П 50 шм КС1 1О гам МИС1, 1 агм ййгосЬгеао! 0.1ОА гЧотое| Р-40 Рт|осо!2; Оесссг)оп о) Ргосет-Ргосегп 1пгегасс)опя Е)ыпе Раг Ыеягсгп ыгсЛ С5Т Рис!оп Рго|еть 18.5г 8)ос)с)п8 Ьиууег 59я попЫ с)гу пи1Е ш Ьаяс ЪпЕЕег. Еп!егасЬол ЬиЕЕег 19я попЕас с!гу пп1!с ш Ьаяс ЬпЕЕег. 2х РК ЬиЕЕег 1 00 шМ КРО| 20 спм МВС1, 10 шМ Ссар <1> 9 гпМ сВГЬюйге||о1 Кес)исес) 8)и!асЛ)опе 120 тМ) и 50 тм Тпь-С1 ЕРН 8.0) ОРВопа1, р1еаяе яее гаер 3.
ИгаьЛ Ьиууег ! РЬоярЬасе-ЬпЕЕегес! яа1|пе сопсашсп5 0.296 Тпсоп Х-100. ИгаьЛ Ьиууег 2 РЬоярЬаге-ЬпЕЕегесЕ яа1|пе сопгашспц 0.296 Тпсоп Х-100 ап|1 100 гпМ КС1. Епкуспе5 апе! Войег5 Рго!еаье ОРВопа1, р!саяе яее Рпер 3. Рго|е|л )сгпаье А Ргераге Еге|Ь ас еасЬ пяе ассог|пп5 со сЬе гпаппуасспгег'ыпясгпссюпя.
Вас!!оасбче Сопсросспс!5 Еу-ЯгР)АТР 16000 СЕ)тгпо1е) <! > прес!а! Ес!о!ргпеп$ АЕетЬгапеь ог Ясегь !Ла! ипП ЬЕпс) ргосеть 1о Ье ьсгеепес) Р!саяе яее 5сер 5. 5ерЛас)ех С-50 ьрип со1итп Орпопа1, р1еаяе яее 5сер 4. АЕЫ!Е!опа! ВеацепТ5 5!ер 3 оЕ !Л1ь рго!осо1 гес)и1геь геа8еп!ь Еог с)еаиа8е оЕ ЕЛе Еиьуоп рго!ет Егогп |П сагпег ог |Ле Еияоп ргосе|п а!!асЛео| со 81и!адпопе-ааагоье Ьеас)ь Еп СЛар!ег 15, Рго!осо1 5. 5!ер 5 оЕ ТЛ|ь рго!осо1 гес)и1геь еКЛег а ро)уасгу)ат)с)е 8е1 сопса10108 сае рго!е|пь !о Ье ргоЬес) Ер1еаье ьее АррепсВх 8) ог р)а!еь соп!а|л|п8 а сЭ)с)А ехргеььуоп 11Ьгагу Ер)еаье ьее СЛарсег |4, Ргососо) 2), апс) геа8еп!ь Еог ЕттипоЬ)о!!Еп8 с)еьегЕЬес) |и АррепоТх 8.
А пе5ассче сопгго! оЕ О5Т а!опе ог а попяресс5с ргосе)п яЬоп18 Ъе!оас1есЕ оп|о |Ье 505-ро!уасгу!аписе Ве! м)й йе саг5ес ргосешя. !Е |Ье ргосеш оЕ п|гегеяс Ь а |пе|пЬег оЕ а сопяегчес1 Еаш1!у сЬе шсегас6оп оЕ йе ргосеш оЕ шсегеяс сап Ье сошрагес) со о|Ьег ргогешя Егоп| |Ье яагпе Еапп!у. ЧесТог5 апе! ВасТег!а! Яга!п5 С5Т Еиь1оп рго!е|п Ьоипс) !о 8)и!а!ЛЕопе-а8агоье Ьеас)ь ТЬ|я ргососо1 В Еог ргосешя сопсаш|пц а ргосе|п !с!пасе А РЬоярЬогу!аВоп яге |п сЬе Епяоп рсосесп !Коп апс1 Огеы1ег 1992). А!яо аса11аЫе Ея а массо| |Ьас сопсашя а сАМР-сЕерепс1епс ргогесп уапаяе гесо5псгюп яе0пепсе ЕАшегяЬаш РЬаппас1а ВюсесЬ),! Е пяспц ап пп!аЬе1ес! Г5Т Епясоп ргосе|п, р!саяе яее сЬе рапе! оп АЕТЕК!я1АТП|Е РКОТОСОЕ| ОЕТЕСТ1ОЫ ОГ РКОТЕ1М-РВОТЕ!!я! 1!я!ТЕКАСТ!ОЫ5 Иг!ТН АIЧТ1-С5Т АЫТ1ВОО1Е5 ас |Ье епс) оЕ сйя ргогосо1.
18.52 СЬиргет !8г Ргосесп Гпгегагггоп ТегЬпо!081ек МЕТНОО Ргерагабоп о1 ЕЬе Кас11о!аЬе!ес! РгоЕе1п РгоЬе Ргераге сЬе Г011оскчпВ геасооп ппхсиге сп а писгойВе сиЪе: !у-пр)АТР 16000 Сйпгоо!е) 5 01 ргосесп Ыоаке А 1 ипПЕР! 65Т Еикюп ргосесп оп 51шасЬюпе-аПагоке Ьеас)к 1-3 ПВ 2х РК ЬиГГег 12.5 р1 НО со 25 01 1псиЬасе сЬе геасс!оп пихсиге Гог 30 пиписек ас 37'С. ТЬе Ецяоп ргосе!и псау Ье с!еачес) мчсЬ а ргосеаке ЬеЕоге сЬс 1аЬеПпд геаесюп.! п сЬЬ «аке, коЬкисосе йе с1еахес) ргосесп 1ог сЬе ргосесп Ьоопс) со 51осасЬ!опе-ацагоке ЪеасЬ сп сЬе саЬеПоц геассюп, спеиЬасе Еог 30 пипосек ас 37'С, апс) ргосеес) со 5сер 4.
!Г сЬе 65Т псо!есу ь гека!пес) оп сЬе Гияоп ргосесп, сЬе ехреппсепс пюкс Ье гер!Ыасеи сессЬ 651' а!опе 11гоипс) со 51исасЬюпе-ахагоке Ьеас)к) ак а пера!!ге сопсго1. 1и сЬе саке оЕ а ПЬгагу кегееп кгЬеге сЬск сгоиЫ Ье спсргаеиса1, сс ь ппропапс со сея роясл е р!асСиек Еог сЬеп аЬс!иу со Ъспс) 65Т а!опе. ТЬВ сопсго1 ск игоаПу саггсес) ош ассег циасетагу ропПсасюп, ЬеГоге с1опе сЬагассег)хасюп.
АГсег йе 1аЬе!шу геасооп )к сошр1есе, схакЬ сЬе Ъеас)к Ъу ас)йпВ 200 р) оЕ 1х РК ЬиГГег со сЬе шЬе, апс1 сеп1НйлВе йе сиЬе а1 шахипшп креес1 Еог 1 пиписе сп а ппсгоГице. Г))ксагс) йе кирегпасап1 сои!а)п)пВ сЬе Ггее гас)101аЪе!ес) пис1еосЫе сп ап арргориасе гпаппег. Кереас 1Ье сгакЬ опе гпоге сппе. Е)сЬег с1еахе йе 1аЬе!ес! Ргосеш скчсЬ а ргосеаке ог е1исе йе!аЪе!ес) С'5Т ЕЬяоп ргосе)п Ггогп сЬе ЪеасЬ сг)сЬ 20 шм гес)исес! ц!исасЬюпе сп 50 гпм Тг)к !РН 8.0) (р!еаке кее СЬарсег 15, Ргососо! 5).
5соге йе гас!10!аЬе!ес! Ргосеш ргоЪе ш ап Ые Ъис)сес апс1 ике К оп йе каше с)ау й ыпас!е. 11 йе 1аЬе1ес! ргосеш сгак с1еахес) Ггосп сЬе С'5Т пю)есу ЬеГоге сЬе 1аЪе11пц геасооп (р1еаке кее сЬе поте со 5сер 1), йеп 1оас1 йе гайо!аЬе1ес) ргосесп оп!о а 5ерЬас1ех 6-50 со)ипсп ес)и)1!Ьгасес) ъчсЬ 1х РК Ъийег со гешохе сЬе Ггее гас)101аЪе!ес! пис!еосЫе. Опсе 1Ье ргоЪе ргосе)п ск керагасес) Егогп йе Егее пис1еосЫе, К Ь геас)у !ог ике.
5соге сЬе гайо1аЬе1ес) ргосе!и ргоЬе )п ап Ые Ьис)сес апс) ике сс оп йе каше с)ау Ь ыпас)е. РгоЬ1пк 1Ье МегпЬгапе5 Ргераге йе шешЪгапе со Ье ргоЬес) Ьу сгапкГегйпц ргосеспк со 1Ье спегпЬгапе ассогйпц со ксапс)агс) сесЬпн)иек. Ргосе!пк сгапксеггес) Ггопс ап 5Р5-ро!уасгу! ашЫе Пе! (Аррепйх 5) сап ПепегаПу Ье ргоЬес) йгесс1у. 1Е ргосеюк аге сгапксеггес) Егогп а ергу!А ехргекяоп ПЬгагу, Ь гпау Ъе пеееяагу со сапу ош йе АОО1Т1ОМАЕ РКОТОСОЫ КЕГОЕОВк)6 ОГ МЕМВКАЬСЕ-ВООЬСО РВОТЕ!015 Ьесоге рго- сеесПпП со 5сер б. Сохег сЬе спеспЬгапе сошр)есе1у ссчсЬ Ъаяс Ьийег апс) ъаакЬ сс Гог 10 гпшисек ас 4'С скчсЬ Кепс!е аВ)сас)оп.
Е)1ксагс) сЬе Ьаяс ЪиГГег. Сочег сЬе спешЬгапе согпр!есе!у ссчсЬ Ыос)с)пц Ьийег апс) 1псссЬасе и скчсЬ Вепс1е аВ)сасюп Гог 4 Ьоигк со охегп)ВЬс ас 4'С. Ргераге а ко! ис)оп оЕ 1аЪе!ес) ргосеш Ъу ас)йпВ 1-3 )сВ оГ сЬе к!ос)с ргоЬе (Гхош еЬЬег 5сер 3 ог 4) 1о епоиВЬ )псегассюп ЪиГЕег со ша)се а Кпа1 сопсепсгас)оп оГ 1-5 пм. ТгапкГег сЬе шегпЬгапе со а с))кЬ сои!а)п)пц сЬе 001исес1 ргоЬе. ск4а)се сиге йас йе ргоЬе ко1иооп сопсась сЬе епоге кигГасе оГ сЬе шешЬгапе ечеп1у.
1псиЬасе сЬе шегпЪгапе Гог 4 — 5 Ьошк ас 4'С ичсЬ цеп11е аВКагюп. Ргогосо( 2( Т)егесглоп и( Ргогели-Ргогели 1и(егасйогь 'с)л(пц Раг Ыел(егп т(Ь С5Т Риз(ои Ргогеел (В.53 9. Г)засагс3 (Ье газ!лоас(зче ргоЬе ао!01(оп зп ап арргорпа(е гпаппег. Сочегзйе гпегпЬгапе сотр1езе1у ънч(Ь ЪЪгааЬ Ьи((ег 1, апз! |псиЬа(е зйе гпегпЬгапе Гог 10 пипи(еа а(4'С ънч(Ь цеп(1е ацзч (а(юп. Кереа( 1Ье знай 1Ьгее гпоге зппев Т О. Сочегзйе пзетЬгапе сопзр1е(е!у ънз(Ь ЪЪгааЬ Ьи((ег 2, ап(3 ънааЬ 1Ье пзепзЬгапе (ог ! 0 пшш(ея а1 4'С ънч(Ь цеп(3е ац|(а(|оп.
Кереа( |Ь)а опсе. 11. Ъз)гар (Ье еееЬгапе саге(и!!у |п р!ах(|с ънгар апс1 ехроае лз (о Х-гау 61гп. 1МТЕКРКЕТАТ1ОМ ОГ ТНЕ КЕ51)ЕТ5 АМ0 ТВОЕ)ВЕЕ5НООТ1МС ТНЕ ЕХРЕК1МЕМТ ° ТЬе (а||иге 1о с)езесч апу р го(ели )из егасз)оп а сои)(3 Ье а соггесз гехи)1. Ноъчечег, й 1Ьеге 'ь пи ррогйпц емр с(епсе 1Ьаз йз|ь 'ь по( 1Ье ргес)|слег( гехи)1, згу 1Ье А00!Т|ОМА1 РКОТОСОЫ КЕГОЕ0!МС ОГ МЕМВКАМЕ-ВО(ЛМ0 РВОТЕ(М5 апй |йеп ргоЬе 1Ье пзееЬгапе ацав ъч)1Ь 1Ье гас)(о)аЬе)ес( рго1ев.
° ТЬе ргеаепсе о(ап ехсезь)не пипзЬег о( яцпац сап гехи)1 (гоги а пипзЬег о(саиаев Оецгал(ес( ог |гприге ргоЬе рго1е|п 'ь опе рось(Ь|3|зу. СЬесй 1Ье зпзецпзу о(|йе ргоЬе оп ап 505-ро)уасгу)ае|с)е це|. С5Т Лоеосйпзепхайоп сап Ье апо|Ьег гюигсе о( Ьас|сцгоипд. |п 1Ых съье, згу с3еачлпц 1Ье С5Т пзолезу (гопз 1Ье Ььюп ргозе|п.
й |Ьь 'ь поз ргасйса3, а(3(3 ап ехсехх о( ип)аЬе)ес( С5Т Ье(оге Ь|ос)с|пц зйе изепзЬгапе ог йиппц зпсиЬазюп о(1Ье ргоЬе ВЬь арргоасЬ саппоз Ье ияес( й апзл-С5Т апйЬскйеа аге Ье|пц иаес( зо с(езес( (Ье )изегасз)оп). ТЬе!псиЬазюп |иие сап Ье аЬоиепес) |о геоисе роль)Ь|е попхрес|йлс |пзегасйопк Айегпайче|у, й|йе ргоЬе 'ь |и ехсеац саггу оиззйе ехрепеепз иа)пц аенега) ййегеп1 ргоЬе сопсепзгайопа зо с|езегиипе зйе орйеа| сопсепзгазюп. ° ТЬе Ьсьз соп1го| (ог ехзаЬ||хЬ! пц арес)йс |(у о(|йе оЬаегчес( р гоге! и |п(егас Кои а |х зо цепегазе а ргоЬе рго1е|п ъч)1Ь а ивзазюп |п 1Ье |п1егасйоп г(опта)п.
0еиюпазгайпц |озь о( |пзегасйоп зп ап ехреигпепз рег',|оггпес| ън)1Ь зйе ив1ап1 ргоЬе сопзрагес| 1о а рагаИе| ехрепизепз гип ъч(1Ь 1Ье ън)3(3-гуре ргоЬе В сопн|пс|пц еч|л(епсе 1Ьа1 1Ье )пзегасз(оп(а) 'ь ге|ечапз. А00!Т1ОМАЕ РКОТОСОЫ КЕГО101МС ОГ МЕМВКАМЕ-ВОЕ)М0 РКОТЕ1М5 |и хоппе )иъзапсец |Ле рго1е)пя оп |йе гпеизЬгапе аге ипаЬ3е зо |пзегасз ън)1Ь 1Ье ргоЬе рго1е|п, рогь|Ыу йле зо |изргорег (о3йпц г(иг)пц ехргегь)оп ог згапъ(ег. Оепа(игазюп апс| х)оъч гепазига1юп о( (Ье рго1е)иа еау Ье песеаиагу. ТЫа 'ь ассогпр)|аЬе(3 Ьу ънаъЬ|пц 1Ье пзеизЬгапе лп а с)епазигаз)оп Ьийег |Ьаз 'ь й|и|ег! аег)а))у 1о а31оъч (ог х|оъч гепазига1юп йлппц аиЬаел)иепз ъчааЬ~пц.
Яап ъч)1Ь а а(ос)с хо)из(оп о( 6 м цлапгйпвпз Ьуг(госЬ|опс(е ргерагес| |и )хь|с Ьийег апс| й|изе й хепаПу аъ 1Ье изееЬгапе 'ь ъчаъЬел(. СА()Т(ОМл Р(еахе хее Арреигйх 12 (ог арргоргза1е Ьаиз(1)иц о( лиа(еиаЫ ваг)зел( ъчл(Ь <|>. А(3(331(опа1 Ма1епаЫ 0еиа(ига((ои Ьийег Ргераге 6 м циаи)йие Пуз)госйог|л)е < 3) (и Ьаз)с Ьийег |(ог гес)ре о( Ь;ь)с Ьийег, р)еазе ъее зйе пса)и ргозосо|), Ме(Ьог| ; 1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
