Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 83
Текст из файла (страница 83)
Оо иос яе)есс йе ъчЫсе, иои8гоъчаи8 со)оп|ея ая йе ясап)и8 ро)иС |п а ПЬгагу ясгееи; Иеиегабу, йеяе со)ои)ея рояяеяя йеяе рйеиосурея Ьесаияе бсеу аге яуисйея)г)и8 Пи)е ог ио Ьа)с ргоСе)п (ая бе)егги)иеб Ьу ъчеягеги ЫоС, 81ер С 7). А!СйоиИЬ Сйе геаяоия (ог СЫ5 аге иог с)еаг, й арреагя Со Ье а Ьа)с-ярос)бс рйепогиепои аиб и|ау Ье Пи)себ со югие с)ебгее о) сохкйу о) сои))ииеб ехргеяя)ои о) рагбси)аг ргосе)ия )и уеаяс. 1с ъчП Ье иесеяяагу со аг))ияс йе яеиКСвйу о) йе аяяау со аПоъч ъчогй ъч)сй Ыие)кгоъч)и8 со)ои)ея (яее Ье!оъч), Гог а яисаП регсеига8е о) Ьайя, йе гергеяя)ои аяяау |1оея иос ъчог)с, а)сйоиИЬ йе Ьай ргосе|и В с)еаг!у гиа|1е а1 Ь)ИЬ )ече)5. )и йеяе саяея, й 'ь Иеиегабу геаюпаЫе Со ргосееб ъчай сйе ПЬгагу 5ЕГЕЕИ.
9. Яе)еес йе арргорнасе сапсйе)асе со!оп!ея, Ьаяес) оп сЬе геяи1ся ос сйе гергеяя)оп апс) асйчаПоп аяяауя. 1ГС.26 СЬарсег 1Вс Ргосегп ЕпсегагПоп ТегЬссо!оесез ! зе1ес1!оп оЕ Вас1 Рго$ессс Ехрге88сосс 10. Апа1уге ас 1еаяс ссчо ргипагу сгапзЕогшапсз Еог еасЬ поче1 ЬаП сопвсгисс. 1пс1ис)е сччо сгапз- Еоппапсз аз рояссче сои!го!з Еог ргосеш ехргеззюп (е.П., рйрНМ1).
а. 1)зе а всеН1е соосЬрк14 со рсс14 со!оп)ез 6огп йе СМ(С1и)-1)га-Нсз псазсег р1асе шсо СМ(С1и)-1)га-Нсз 1н~шс) гпес)1шп. СЕ 81очез аге июгп, сЬе соосЬРСсСс сап Ье сСгорресС 1исо сЬе си!сиге сиЬе апсС 1ей сЬеге зчСГЬоис Геаг оГ сопсапипаиоп. Ь. Сгосч СЬе си!Сигея очегпсПЬС оп а гоПег с!гиги ог оСЬег яЬа)сег аг 30'С. с. 1п йе пюгпспП, сП1исе ЕЬе васигасес) си1сигез !псо ЕгезЬ сиЬев сопсасгПпП 3-5 гп1 оЕ СМ(О!и)-С)га-Н!в, сч)СЬ а зСагПпП с!епв!Су оЕ О)3 оЕ -0.15. 1псиЪаСе СЬе си!Сигея Еог 4 — б Ьоигв ас 30'С ипи1 сЬе орска! с)епясу Ьаз с!оиЫес) арргохппасе1у съчке (013 -0.45-0.7).
ТгапзЕег 1.5 пс1 оЕ еасЬ си!сиге со а гп!сгоЕиПе сиЬе, апс) сепсг!ЕиПе сЬе сеПз ас псахппшп вреес1 Еог 3-5 пиписея Гп а пл)сгобсце. ТЬе чо1игпе оЕ сЬе чсз!Ые реПес яЬои!с! Ъе 2 — 5 П1. Саге6лПу с1есапс ог азрсгасе сЬе зирегпасапс. 5опсе Еа!сЬоиПЬ иос аП) ЬехА Еыюи ргоьПиз ехЫЬсс зЬагр лСесгеазез ш гСесессаЫе 1ечеЬ оЕ ргосе1и ччсй сЬе оизес оГ зсаьопагу РЬазе оЕ 8гоъчсЬ.
ТЬиз, Ь Ь пос сСезСгаЫе со аПозч йе си!сигея со ргосеед со засигасюп ш сЬе Ьорез оГ Сисгеаз1и8 йе уСе14 оЕ ргосе!п со аззау. Гс гиау Ье Ье1РЕи! со Егеехе Пир!повсе заспр!ез ас сЫз зса8е П сиоге сЬап оие гопак оГ аззау ы аиис- Грзсей 12. Ас)с! 50 р1 оЕ 2х 5Ел5 Пе!-1оагПпц ЪиЕЕег со йе сиЪе, апс) чогсех йе шЪе чар!с)1у со гезизрепс) сЬе реПес. 1гпгпегПасе1у р1асе йе сиЬе еПЬег оп с!гу ке ог сп а с1гу ке/есЬапо! Ьай. 8аспр1ез спау Ье еСйег изеП Еог ипспесеасе аззау ог Ггохеп ас — 70"С, лчЬеге йеу сч111 гегиаш зсаЫе Еог ас 1еазс 4 — 6 псоьсЬз. 13. ТгапзЕег СЬе заплр1ея Сгогп йе с)гу ке ог — 70'С гПгесС1у Со 100'С апс) Ьос1 йегп Еог 5 пипиСез.
А РСК шасЫпе зес со с00'С ы шозс сопчеи)еис, аСсЬоиПЬ а лчасег ЪасЬ ог Ьеас Ыос)г сао асю Ье изей СЬП1 йе загар!ев оп ке апс) сепсгГЕиПе сЬегп ас спахипшп зреес) Сог 5-30 зесопс)я гп а гп)сго6лПе со реПес 1агПе сеП с)еЬгсв. аспас) 20 — 50 П1 Гпсо еасЬ 1апе оЕ а ЯЭ5-ро1уасгу1агп!с)е Пе1. 15. Кип йе це! апс1 апа!ухе йе ргос1исся со с1есепшпе счЬейег ЪаП ргосесп оЕ йе ехрессес) яхе Ев ехргезвес! ас геавопаЫе 1ече!в.
То апПссрасе апс) ЕогеяаП росепПа! ргоЫегпз, апа1уге сЬе 1узасез оЕ уеавс сопла!и!пП ЕехА6сзес! Ъассз Ъу иппшпоЫогПпП (р!еаве зее йе посе со сЬсз всер). СшпюпоЫошп8 гпау Ье регГогшеП аз дезсгСЬегС 1и АррепгПх 8. ЬехА йзюиз саи Ье Ызиа!гав ияи8 аиПЬоду со сЬе йяои даша!и, сГ ачас)аЫе, ог аСсегиаиче!у, изСп8 апПЬоПу со ЬехА. Ап ииропапс зсер зп сЬе сЬагассегСхасСоп оГ а Ьаи ргосеси Ь гПгесс абазу оГ зчЬесЬег сЬе Ьаи Ь ПесессаЫу ехргеззед апсС зчЬесЬег сЬе Ьаи Ь оГ йе соггесс яхе. Сп шозс сазез, ЬосЬ оЕ йе аЬоче лчСП Ъе сгие. Нозчечег, юиле ргосешз ГезрееаПу счЬеге ГЬе Газ!оп с!оспа!и ь -60 — 80 Сссл ог!аг8ег) лч1П еиЬег Ье зуисЬезСхесС ас чеху соля СечеЬ ог Ье роясгаиз!асюпаС!у с11рресС Ьу уеая ргосеаяез.
СПсЬег оГ йезе ьчо оиссошез сап сеас) со ргоЫеьп 1и !сЬгагу зсгеепз. РгосеСпз ехргеззеП ас Созч!ечеСз, апгС аррагепс!у Спасиче сп сгаыспрсюпа! аеичаиоп аыауз, сап Ъе ир-ге8исасеП со шисЬ ЫПЬ- ег сече!з ипдег 1еисСпе зе1есиоь аизС сЬеп зис)с)еьСу зСеспопзсгасе а ЫПЬ ЬасСг8гоипсС оГ сгаизспрПопа1 асичаьои, ЪчЬеге ргосе1из аге ргосеоСуьеас!у сПррегС, зсгееиз гиау Ье регсоппеП СпазЬ егсеис1у счСГЬ ЬехА Гизесл оп)у со йе апиио-сеппшас еисС оЕ сЬе!аг8ег Сисепс)езС Ьагь 17.
Оп сЬе гпаяег р1асе, гпаг1с йе со1огПев сЬас аге со Ье аззауес! Еог ргосесп ехргеззюп. с)ве йе со!опу йас Ьав Ъееп яЬосчп со ехргезз Ъап арргорНасе1у аз сЬе Еоипс)ег со цгосч а си!сиге Еог сгапвЕоппаПоп оЕ а 1сЬгагу Есп 5саПе 2). Ртгосо1 1: Яюаее 1: Оюагасюег(ха!гоп оу а ВаЕЕ-Е.ехА Риююои Ргоюет 18.27 Т$$ОЕЕВЕЕВНООТ!МС АМО МО01Е!САТ1ОМ5 ОГ ВА1Т5 5опте Ьае|с ЬаИ ргоЬ|епь сап Ье $6еп((Еюед ап6 соггес(ед Ье1оге есгееп|пИ: ° ТЕюе Ьа!! ас((чаюея !гальсир8ои. ТЫь ргоЫет сап Ье а66гетед Ьу сопе(гост(пИ а ьег(еь о1 (гипса((опь о1 йе рго(еюп юп ап аиегпр( (о е3(т(па(е йе ас|ва(юп 6огпа|п.
И йе Ьюб( асюва(ев (гапьсг|р((оп чеюу ь(гоар|у, |.е., аь е(Еюс(еп(3у ае йе рое3((че соп(го|, йь а(ер бич|И ргоЬаЫу Ье песетагу. 11 йе ЬаИ ас(Ма(еь гпос3ега(е|у, йе ь(гор(ее( арргоасЬ 'ь то геди йе соп(го| ехрепгпепВ их|од Земь(г(идеи( герог|ег р|аегп(сЬ апд я(га|ль (р|еазе атее ТаЫе $8-5|, (о с$е(епиюпе И ас|Ма6оп 'ь гебисею3 (о ап ассер|аЫе |ене|. АИегпа(|че|у, йе рго(еюп сап Ье (гипса(ею|, аз Еог а е(гопИ ас6часог. Г|паИу, 3( ь рот(Ые (о иве ап |п(еега((ле Еоггп о1 Ьай чес(ог (атее ТаЫе т 8- ю $, ччЬюсЬ еИИ гегюИ |и а ь(аЬ|е гею|ис(|оп о1 рго(еюп |ечеИа И йе ЬаИ ь а ъчеа(ю ас(юча(ог, опе ор6оп |е (о иве (ехе-ь(г|пдеп( герогтег р|аетк|а; аИегпа6че|у, йе ю инее(|цасог пзау сЬооье то ргосеею3 чн((Ь йе (еь(ед геаИеп(ь, ассер((пИ (Ье г|ь|ю йас а Ьас|юИгоипд о1 Еа|ее рое3$(чез гпау Ье юбеп((Еюес$.
|л Иепега(, И 'ь а 8 ю6 36еа |о иее (Ье гпоь( ьепе3$(не зсгееп(пе соп63$(опь роье|Ые; |и ьогие сехема, иее о1 чету ь(г(пИеп(|п(егас6оп ь(ге|ив е3|гп(па(ее ю|е(есбоп о1 Ь|о|оуса33у ге|енап( (п(егас((опь (Еь(о|а|ю е( а!. 1995$. ° ТЕюе Ьа|ю р!ахт(юЕ ргою(исех ап 1парргоргюаюе !ече! ог е(хе оЕргоюеюп. И йе рго(е|п В роог|у ехргеаеед ог 'ь негу (агре, 3$ пюау Ье еиЬ6|н|6ес3 |п(о (и о ог йгее очег|ар рюппю сопа(гис(А еасЬ о1 чнЫсЬ сап Ье (ее(е6 3иберепс$еп((у.
А3(егпа6че|у, йе чесюог р13С202 (псогрога(еь а пис|еаг 3оса|аа(юп яею|иепсе, ъчЫсЬ 3псгеаееъ Ите сопсеп(га6оп о( йе Ьа|$ юп (Ье пис|еие, тнЬеге |1 'ь иве(и3; (Ь|в арргоасЬ пюау гпа(юе йе Ьеью о1 а а((иат(оп ннЬеге а рго(е|п саппо( геаюИ3у Ье ехргетед а( ЫИЬег |ече|т ° Мегу Еечч Егапь(огтап(т соп!а(и(п8 ЕЕюе Ьаюю р!ахтюю! ехргехх дюе Баю! Ргоюеюп, ог уеахЬ ехргеаююид ЕЕюе Ьаю! ~ ргоюеюп Вгоию по|юсеаЬ$у тоге Роог!у ЕЕюап сапего! уезд! юп йе аЬхепсе оЕ апу хе!естюЬп. ТЬеье гееи3В тнои36 хощет( йа( йе ЬаИ рго(е|п 'ь ьотетнЬа( (охюс (о йе уеае6 Весаиье (ох|с|(у сап саиее 6|ЕГюси3(3еь |и 3|Ь гагу ьсгееп|пе, 3$ гпау Ье деа|гаЬ|е (о тес |опе йе рго(ею п о1 (п(егер |п(о рС||с$а, июЫсЬ а33отчь (абис(Ь|е ехргетюп о1 (Ье рго(еюп !гоги йе САЕ$ ргогпо(ег, (Ьие |пт66пц 6пте о1 ехргетюп о1 |Ье рго(е|п (о ас(иа$ ее|ее($оп.
Мо(е, Ьоччечег, йа( (еьте тч((Ь а рС|36а сопе(гис( еЬои(6 Ье рег(оггпес$ оп пюес$вгп сопсаюп3пе еа(ас(оее аь а сагЬоп еоигсе. 18.30 СЬартет 18: Рготет /лтегасйоп Тес/тло/о8тет СТАСЕ 2: Ье!есйпд ап 1п$егас1ог 5сгееп!п8 Гог !исегассога 8епегаПу !ичо1чеа пчо вес)цепс)а! Пгас р!ас!п8х оГуеаас.
1п а Пгя тоцпс1, уеаас асса!па сопсашш8 рВай апд йе 1ехАор-/ас2 герогсег ате р!асей со ке!есс Гог сЬе ПЬгагу р1ая шЫ. Е)Ъгапеа аге 8епегаПу с1опес1 !и йе чесСог р!С4-5 (Б8иге 18-8) ог а ге!аСет1 р1аяиЫ йат ехргеяеа сЕтХАх ак а саяессе тч!сЬ ассгчасюп йотпа)п апт! ойег шо!ес)еа ипс!ег йе сопсго1 оГ йе !ис!ис!Ые ОАЕ! ртопюСеп ТЬе Пгат р1айп8 ь регГогшес1 ипдег поптпт)исш8 сопсП6опя оп СМ(С!и)-С)га-Н)яТгр.
1п сЬе аесопс! гоипс1, ехргея)оп оГ 1тЬгагу-епсот1ее1 ргосеиь и 1пс)исет! ълсЬ Ва1ассоае, апс) уеаас йас сопсаш шсегасбп8 ргосе!па аге ае1ессед Ьу р1а6п8 оп СМ(ба1/КаГГ)-С)га-Нь-Тгр-1еи т!гороит р!аСея РшаПу, 1тЪгагу р1аяиЫх епсосПп8 сГ2ХАа йаС арреаг роя6че оп хе!емче тпегПа аге рипйет1 Ьу раяа8е йгои8Ь Ъассепа, апс1 аиЬает)иепс1у гесгапаГоппес! тисо уеая сеПа со сеас йе арес!Пс!су оГ шсегасбоп тч)сЬ йе рВай, аа с!еаспЬесс ш 5са8е 3 оГ сЬ)х ргососо1.
А стао-хсер хе!ест)оп 1а сЬоц8Ьс со Ъе асЬ апса8еось Гог а пипсЬег оГ геааопя Моас ппрогСапт, шапу Ью1о8)саПу 1птегект!тс8 сВХА-епсот)ет) ргоСеша Ьаче Ьееп Гоцпт! Со Ье Сохк тчЬеп сопайийче!у ехргеяед си уеая, апс) Ьепсе ип8Ьс Ье ке!естес) а8аспхс си ап спгйа1 исая р1ацп8 оп шйис)п8 шесПшп. АсЫйюпаПу, ипшесПасе1у айег яшц1сапеоиа сгапхГогисассоп апс1 Оа1 1пт)ис6оп, аоше тпсегасбп8 ргосе)пк шау иос Ье ехргеяес1 ас ат1ес!пасе !ече)а со аяостасе еГГесс!че1у тч!сЬ а ЕехА-бьем рагспег апс! хцррогс 8готчсЬ оп тпесПши 1асРПп8 1еисше. Ои гаге оссахюпя Ьать сЬас рая !пша1 сои!го!а 8тче пхе со 1аг8е пцшЬета оГ "роя6чеа" 6ипп8 ап ассца1 ксгееп. Оп апа!уяя сЬеае рояс)чеа арреаг со апас Ьу т!е почи асс)и!яс!оп Ьу сЬе Ьай оГ сЬе аЬт1йу со ассгчасе сгапаспрс)оп.
ТЬе шесЬатияи Ьу тчЬ!сЬ сЬтв оссита и сиггепс!у ип)сиотчп. То ачоЫ ъчах6п8 спие апт) геа8епся аоше 1пчеа68асогв сеас песе Ьайа Ъу регГопшп8 аса!ед-домчи хсгеепа (оп!у 5 — 10 р1асеа оГ сгапаГотшапса) апт) аяея)п8 шгйа1 геят!ь ЬеГоге ргосеегПп8 со а ГиП асгееп: 1Г сЬе Ъас)с8тоипд !х ипассерсаЫу Ь!8Ь, йе !пчеас18асог сап хтчтссЬ со !отчет-аепяссчссу герогсег асса!иа апт!/ог р)аяшс!я А!цй оГ ачаПаЫе ПЪгапеа йас аге сотпрастЫе гай йе шсегас6оп стар сх ргочЫет) ас счтчтч.Гесс.еди/геаеагсЬ/)аЬа/8о!еш)х/ПЬгагуаоигсеа/. 1п агЫГСюп, ойег ПЪгапеа ргерагет) Ъу СЕОЫТЕСН, Опбепе, апс) 1пчйго8еп аге сопциегстаПу ачаПаЫе.
ТЬе ГоПотч!п8 ргососо1з аге с!ея8пед Гог аасигасюп асгееи)п8 оГ а сТсХА 1тЪгагу т!епчет! Ггош а 8епотие оГ шаиииаПап сошр1ехйу, Ее1чег р!аСеа аге гет)шгетс Гог асгеепа тлй 1тЪгапеа т)епчее! Гуош от8ап)аша гай 1ея сатир!ех Вепотпея МАТЕК!АЕй САС/Т1О!х): Р1еаае аее АрреисПх 12 Гог арртортсаСе Ьаис!Пи8 оГ шаСепа1а шаг)тес! млСЬ <! >. ВссГГег5 апс! Ьо!сс1!оп5 Р)еаае аее АррепсПх 1 Гот соптроиеиЬ оГ а!ос!с ао!и6опя ЬиГГегя апсС теа8еиСя ОПиСе аСосЬ аосиСюпх Со йе аррторпаСе соисеигга6опя О/тесЬу/хи/Гох/т/е ГОтИ5О) <1> Ейало/ Орйоиа1, рсеаее тее ецер 9.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
