Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 80
Текст из файла (страница 80)
1п сЬе Еттат деьспрт!оп оЕ СЬ!а арргоасЬ, лг!6а! еС а1. !1996а,Ь) с1еьспЬет) а гарЫ асгееп Еог шптат!опа йас йяпрсе|1 йе аЪ|1иу оЕ йе сгапаспрс!оп Гас|от Е2Р1 со атос!асе ъч)сЬ Ка рагспег РР1. 1п йе аЬаепсе оЕ шсегасбоп Ъеслчееп сЬе слчо рагспет ргосе!пя сгапаспрс!оп оЕ сЬе !УКАЗ герогсег цепе |чаа аЬо1|хЬей йегеЪу ртеаег|6пц |Ье ч)аЪ!1!су оЕ уеааса цгоччп ш йе ргеаепсе оГ 5-РОА, а тпесаЬо!Ке сохк со йе огас|! Ра|Ь|чау. Арр!касюп оЕ а ьесопт)агу роа)с!че ае!есс!оп е!птппасет) шпсасюпь йас геы1|ед ш сошр1есе!оаа оцсгапь1асюп оЕйе Е2Н Ьа|6 ТЬ!ь ьуасеш Ьаа Ьееп паед апссеааЕп11у |чиЬ ойег ра!гь оГ шсегассшц ргосешх ('таапц! ес а!.
1997). 1п ат)6!с!ои со Кь пае ш тпша6опа1 Ьппса, сЬ)а суре оГ гечегье ае1ессюп шау |Ьеоге6са11у Ье пает) со ьсгееп т)тица ог рер|Ые!!цап|)а йас йзгпрс ргосе|п-ргосеш 1псегассюпя А Елтас е!ецапс ехашр1е Ьаа Ъееп рпЫ||йе|! Ьу Нпапц ап|! 5сЬге)Ъет (1997). Ецпп!аг геыл!та сап Ье асЬ|ече|1 |ч)й а Уар)!С-ЬуЬптГ ауьтегп 15Ь!Ь ес а!. 1996). !)роп !псегас6оп, ехргеьяоп оЕ |Ье сесгасус1!пе тергеаюг !Те|К) |х инЬлсей |чЬ!сЬ Ь!пт)а со ап|1 тергеааех сгапаспр6оп 6ош а Те|К-орегасог-сопсго)!ед Н153 цепе. Р)хгпрс!оп оЕ йе опц!па! ргосеш |псетасбоп геьп1са !п е1ип!пасюп оЕ'1есК сгапаспрбоп, |чЬкЬ |и сиги тех|отея Н1$3 аупсЬеа!а ап6 а!1оъъ се1!з со цгоъч ш сЬе аЪьепсе оЕ Ь!ас)йпе. ТЬ!а арргоасЬ тчаа пает) со !6епс!Гу шпсапса оЕ |Ье сАМР геаропае е1ешепс-Ъин!и|ц ргосеш !СКЕВ) сЬас по 1опцег аааоссасе чч!|Ь СКЕВ-Ьлпйпц рюСе|п ГЯпЬ ес а!.
1996). т.лсла! Ва!Г ТЬе опц)па! с|чо-ЬуЬгЫ хуасеша гец!асег йе штетассюп оГ япц1е Ьаб — япц1е ргеу сошЪ!пас)опа сЬгопцЬ асбчабоп оЕ слчо Ъа!с-геьропа!че герогсег цепея 1Е сЬе сотпр1ехбу оЕ сЬе аухсеш !а СЪаргег 18: Ргогегп 1пгегасьоп ТесЬпо!о81еу яагапд Роиа Ргеу оааадепев!в, пвда1Ве ве1еобоп 1ог гераг1ег 1; Равв1Ые оМоогоев опд па~ ргеу ргеу 1овв пгога1еб ргеу оеая РоеНие ве!еогюо 1ог герог1ег Я РовЫЫе оо1оогаев по дгояВ дгоия Е!С()КЕ 18-5 йечегве ггчо-Ь Ьг|г) Ау уЬончп, гпига6опу (Ьас игеа)геп )Ье |пгегасг|оп Ьеьчееп Ьа|г апг) ргеу аге уе)есгег) |п гччо угеря Ау а 9(аг))п8 ро|п(, а Ьа11-ргеу 1п(егас(юп )у сопа(гас(ег) иу)п8 Пчо героиегу (опе о! иЬкЫу соуп(егуе!ес1аЫе) иЬоуе поггпа| ехргеуу)оп 'ь г)ерепг(епг оп ап |пгегасЬоп ечеп(. ЕоПоилп8 пв(а8епеу|у о( ГЬе ргеу сопягос(, а 6гуг соипгегве)есг)оп |у арр|1ей уеауг |п игЫсЬ (Ье |пгегасгюп Ьау Ьееп гейкег|, ог |Ье ргеу Ьау Ьееп !оу(, соп6пие Го 8гои, вЬегеау уеау( чч|ГЬ попгпи(а(ег| (ог)8|па!) ргеуу сопбпие Го ас(ва(е герог(ег у(гоп8)у, апг( аге )г)))ег).
АГ а уесопг) роы(ве уе|ес6оп у(а8е, оп|у уеау( соп(а1п|п8 а ргеу сараЫе о( |п(егасбп8 иг)ГЫЬе Ьап уов)че. |псгеааег) ао (Ьаг уеааг ехргеууез а ып81е ргеу апг( гво |пг1ереп11епг Ьа|ЬЬ еасЬ гаг8егед го йя Г)псг герог(ег 8епея уенега1 поче! арр1|са(|опу Ъесоше роуу|Ые (Р!8пге !8-6). !и опе усепаг|о, и |а ровяЫе Го усгееп !и а яи81е яер гог шп(а(|оиу (ог гог соехргевуес) ргосе|пя ог рЬаппасепгка1 а8епгу) (Ьас уе1есг|не1у а1(ег ! Ье |игегасг!оп Ьепчееп а ргеу апг1 опе ог гво йуг|псг рагспегя рог 8епоппс арр1каг|опу (уее Ье1огч), арпа! ЪаЬу гас|11(аге (Ье ауу|8пшеиг ог" ргоге!п шгегасг|оп раггегпя 1и 11Ъгагу усгеепя (Ье ргеуепсе ог гво !ис)ерепг)епг ЪаЬу нч|(Ь йуг(псг героггег геаг)оп(у игпи!1) а!1онч (Ье рег(огшапсе ог гио уерага(е !пгегасгог асгеепу (гош а яп81е 11Ьгагу | ггеачепвб 1о1егаодап (в!огг) дгое1Н оо 1огегао!юп агоева 18.14 СЬаргег 18: Ргогет 1пгегас6оп Тес)лпо!оц!ел ЬТВЕАМЕ1ММС ТНЕ ВАБ1С ТЕСНМЯБЕ: М1ЬСЕИАМЕА А пшпЬег ог" !пчезбцасоь Ьаче цепегагес1 гпосППед геацепь ог ргогосо1з деяцпед го пиргоче 1Ье уппсг!оп!пц оу йе "Ьаяс" гнно-ЬуЬг!д ауяепл; аогпе оГ гЬеае геацепь тау а1ао Ппд пае !и гпоге гесеп11у дене!пред ауагетя (атее аЪот е) ог гп цепоппс арр1каг!опа деаспЬес1 Ъе1онн.
1гпргочед нес!ига чн!лЬ ехсепдед ро1уПи)сега апдгог а1сегед геасцпц ггатеа (!атеа ег а1. 1996; Водег ег а1. 199б) аЬоп1д Гасг!Ваге сопагпкл!оп оу асбча6оп доташ (А(л) апс1 сЛй(А-Ьдпд!пц доила!п ((лВТЛ) йяопя ВогЬ АгЛ апд ТЛВЕ! сап полн Ье Пьес( го рголе!па оу!плегеы ал еПЬег йе ат!поог сагЬоху-легпппа) епд (Вегапцег ег а1. 1997; Вголнп апд МасО!!!!нгау 1997) Го ишшигхе йе г!а)с ол яепсаПу ЫосЫпц дота!па !пчо1нес1 т ргоге!п !пгегасгюпя !н(енч нес!от сопсцгюпацу ехргехяпц аихП!агу Ьагш уасППаге ЛЬгее-ЬуЬг!д апа1уа!а (Тггос1е ег а1. 1997; Рицег ел а1.
1998), лнЬегеаа !пгецгабпц, 1олн-сору, ог сопсП6опацу ехргеаяпц нес!ига у!е1д тоге гоЬгьг гели!га !и ГгагП6опа! Ичо-ЬуЬпд апа!уяа (е.ц., р1еазе аее сЛиггее еГ а1. 1999). челн героггег цепеа йаг Ьане 1Ье росеп6а1 го Ье гпоге аепябне апд(ог пюге геПаЫе апд сопнеп!епг аге Ьегпц шсгодисед: уеаы а-ца1асгоаЫаае (МЕЕ1) (АЬо ел а1. 1997), Еле)гегк)л(а соБ (3-81псигоп!даае (Н!гг 1991; БегеЪпь)сц ег а). 1999), апд СРР (Маис!и! ег а!. 1997; Согтас)с ег а1. 1998; Мауег ег а1.
1999). ТЬе пае о( ьи!гаЫе ап6Ьюгк геяагапсе цепеа (е.ц., Хеогпус!п геяагапсе, Хеоа, апс1 ойеь) ал ае1есгаЫе р1аыпЫ таг)сега гп уеаы (Ниапц апд цсЬге!Ьег 1997) !псгеааеа йе пшпЬег оур1аяп!дв 1Ьал сап Ье ыиш1- саиеогь!у ехргеьед !п а япц!е уеааг, гасП!гаг!пц гЬе аег-ир оГ йгее-ЬуЪгЫ ог гечегае ино-ЬуЬгЫ ехрегппепЬ. Ойег чеслог аега соплашгпц а1гегпаге ап6Ью6с геа!аГапсе цепеа (нЛгаЬоп еГ а1. 1996; ВаппаасЬ апд ЯсЬлнаЪ 1999) гедисе ГЬе пшпЬег оу игера гег)п!гед !и гесочеппц роыбче ПЬгагу р1аып!да го Е. соВ айег а ьсгееп. Веуопд чесгогя а пшиЪег ог' ге!агед гесЬпнрлеа Ьаче гЬе росепг!а1 го зреед гхо-ЬуЬг!д апа1уяя !пс1исцпц (1) йе иае ол" ацагоае онег!ауа го зсоге асбна6оп оГ !асх апд !)-ц!пспгоп!дале героггег цепей (Эпгггнецег 1996), (2) ро1утегаае сЬа!п геасг!оп (РСВ) асгееи!пц о! Рога!!че роя Йгче с1опеа (Каьег ег а).
1994; К!еЪаполн апс1 'нЧеП 1999), апд (3) нн!дег пае ог гоЪог!с писго6гегр1аге-Ъааед гер1ка гесЬпкрлеа (ВисИю1х ег а1. 1999). Веацепла вагит ГЬе Глно нног)сЬогае гнно-ЬуЬг!д ауыепь, депнед аерагаге1у 1гопл ОАЕ4 апд ЕехА, Ьане !опц Ьееп деасг!Ьед аа гпсогпра6Ые Ъесагье оугЬе очег!арргпц пае оГ ае1есг!не пгаг1сегя Ноннечег, а гесепг герогг аиццеага йаг геацепга лоте!!тел сап Ье сотЬгпед, гедпсгпц йе пеед го гес1опе Ъа!га! Ргеуа ънЬеп чног)с!пц нн!гЬ сИГегепг аега ау с!опеа (ЕгацЬег апс1 ЕПЬо1-СосЬег 1997).
1п асЫиюп, !псгеаяед иае ол Хеоа апд ойег ап6Ъюгк таг)сега (Ниапц апс1 цсЬгелЬег 1997) гпау уасППаге ехсЬапце о11гЪгапеа Ьеллнееп йе САЬ4 апд ЕехА- ог с!-Ьааед зуяепь. А гесотцдпаг!оп-Ъааед сесЬп!с)ие го (ге)сопягпсс гнно-ЬуЬг!д р1аяп!да гарЫ1у ш уеая лнаа дене!пред Ьн Регегтапп ес а1. (1998). ТЬь !есЬпкцие доеа по! гес(п!ге р)аяиЫ Ьо1аиоп апд !игегтед!а!е Ьояя апс1 П сап Ье иаед со уасП!гасе !пгегасг!оп гпабпц апд!ог гесеаг!пц ог !пгегасПопа Ьу геггапагогтаг!оп.
Уяпц йь арргоасЬ, РСВ-агпрПВед !гЬгагу !паеггя оЪга!пед 1гот РН- шагу роя!хне лгапауоппапгя сап Ъе гарЫ1у сопчегсед !пго р!аяиЫя а1гегпаг!не!у, йь арргоасЬ сап Ье паед го сопаггпсг еп6ге ллно-ЬуЬг!д 1гЬгапез (Ниа ег а1. 1998; Риасо ег а!. 1999) ог го цепегасе упП-!епцгЬ с1ЛЫА то!еси1еа (гот уеааг ино-ЬуЬгЫ с1опеа апд ВАСЕ (гарЫ атрППсагюп оу сР)н)А епда) ргодисла (Нетепччау ег а!. 1999).
Сопядегаие е1уогг Ьаа цопе илло ао!н!пц 1Ье ргоЫет ол ла1ае рояггчеа ш ино-ЬуЬгЫ асгеепы Рагатегега аууесбиц !ао1аг!оп оу уа!ье роя6неа !и глно-ЬуЪг!д ясгеепа Ьаче Ьееп япд!ед, апд лоте пелн арртасЬеа Со ГЬе!г дегеси!оп Ьаче Ъееп дене)пред (ЯегеЬг!!а)сй е! а1. 2000). А Ьоал алга!и йаг сопла!пл ГЬгее героггег цепеа пидег йе сои!го! оГ д!гТегепл СА1.4-гпйк!Ые ргогпои ега аПонна е1птпа6оп ог чдггиаПу аП уа!ае роя!!чу аресгВс Со гЬе рготогег е1етепл ш йе ОАЬ4 атлет (!атея ес а!.
1996); апд, ая д!аспааед еагПег, ичо-Ьац ауяепь яЬоп!д Ье!р ш гарЫ десес- Ргогосо! 1: Тъчо-)луБгЫапг) ОгЬег Тччо-сотропепг 5улгетл 18.15 гюп апг! е!пп1пабоп оу Та1ке роа1г!неа ас ап еаг1у а!аде !и 1лЪгагу асгеепа (е.д., р1еаае аее 5егеЬг!!а)с!! ес а1. 1999). А басаЬаае оГ ла1ке роя!!чек ачал1аЫе оп гЬе Чгог16 'ъъг!6е М:Ъ КВП Ье1р со ча1Ыасе сРХАа оЬгатес1 )гогп асгеепа (Ьггр:Пъчъчъч.уссс.еъ)п!геаеагсЬЛаЬа!до!ет!а! 1пгегасг!опТгар1пЧгог)с.Ьгт1). ТЬь апъ! огЬег ягеь оп йе !пгегпег ргочЫе а ъчеа!й оу !пГогтагюп оп ъеь!пд пр апс! апа1уг!пд геап!га ог ьчо-ЬуЬгЫ апа!уяя ъ!еаспргюпа оГ йе ачал1аЫе чесгогя !лЪгапея гпаря апъ) ъеъ)пепсея ргогосо!з ап6 геуегепсея лп11 гехь оу ппроггапг агг!с!ек оп гъчо-ЬуЪгЫ ауагетя ап6 енеп !пуогтаг!оп оп прсопппд гъчо-ЬуЪпс1 сопгаеа !!Т гЬе !пчеаг!да!ос кЬои16 Ьесоте очегъчЬе1тес1 Ьу гЬе орг!опа апс1 геадепь анал1аЫе). БОШТ1О)ъб РОК АСТ!чАТ! МС ВА!ТБ: "ЯА!АРРЕ0" ПА/О-НУВК10 А)ъ!О К)ЧА РОЕТМЕКАЬЕ-П1-ВАЬЕ0 ТЪЧО-НъгВК10 $УБТЕМЬ Опе оугЬе гпа!ог )ппЬагюпк отйе гъчо-ЬуЪг!6 ауагет ь йас гЬе ЬаП ргосеш !гга6!г!опа!!у 6лзе6 го РВР) аЬоп1с$ пог Ье ае1дасбчабпд Тог ггапъсбр6оп.
ТЬе Вгъг туалет го очегсопле гЬ!а 1ппЬагюп ъчаь йе ъо-садех "ячаррес) ауагегп" !Рп ег а1. !996) лп ъчЫсЬ а депе епсойпд а ргогелп ол !пгегезг ъчаа 6лаес1 го ап асг!нагюп дота!и апъ) асгеепе6 ада!паг а 1!Ьгагу ол РВР-лпъеь! ргогешя 1п гЬЬ лпгба1 ъчог1с, гЬе гпа)огп) оу !ао1аге6 с!опек ъчеге ке1дасбча6пд РВР Ьляопя а ргсЪ)ет йаг сап Ье аПеч1агес) Ьу ргеасгееп!пд аз йаспье6 лп йе !проста!!оп рапе! оп СЕНОМ!С5 АХО ТНЕ!ХТЕКАСТЮХ ТКАР. А тоге гайса1 ао1пг!оп ь ргонЫе6 Ъу а гъчо-ЬуЬгЫ туалет Ъааеь) оп КХА ро1утегаъе П1, ТЬе ргогпогег ол гЬе еаъепг!а! 5ХК6 депе Ь геаропяче го ро1утегаае П1; героггег депеь Ьане Ьееп дене!пред ш ъчЬЫЬ а Ь!пйпд яге уог ОАЬ4 ь !псогрогаге6 ъч!гЫп гЬе сопгехг оГ гЬе 5ХАб ргогпогег.
ТЬ!а ауагет бесесга йе лпгегасбоп Ьегъчееп а ОАЬ4-6лаес$ ЬаК апд а г!38-Епзед ргеу ргосе!и; проп !пгегасг!оп, г! 38 гесгшь гЬе гелпа!и!пд сотропепь оГ йе ТВП1С гасгог, епаЫ!пд гЬе ро1угпегазе П1 тасЫпегу го ггапъспЬе гЬе уеаъг еааепг!а) депе 5ХЯ6. ТЬеге аге по )споъчп ггапзспр6опа1 асбь алога оу ро)утегаае П1, апъ! ро1угпегаье П и апяас6чагоь до пог гедп1аге ро!угпегаае-П1-тейагед ггапъспр6оп ш уеааг. 1п Гас!, аа ъ!егпопаггагей аггопд сгапъспрбопа! асгзчагогз апсЬ аз ОА14 ог ъгр!6 Вьеб го САЬ4 РВР ъчеге ъ)шге !псараЫе оу ас6чагшд ггапкспр6оп ог" йе Е)А5(6)-5ХЯб депе (Магао1!ег ес а!. 1997; Маьо!кг апс1 5епгепас 1999). АсЫЬюпа1 гпоййсагюгьЬаче а11оъче6 гЬе г)ече1ортепг оГ опе- ап6 йгее-ЬуЪгЫ арргоасЬеа Ьааед оп йь ауъгет.
ЯЗ ММАК'ъг ТЬе пшпЬег оу рогеп6а! Тьеа гог гъчо-ЬуЪг!с1-бег!чеъ) аузгепь Ьаъ ехрапбе6 аг а ЬгеагЫаЫпд расе дпппд йе!ая аечега! уеагя РегЬарк Ъесагье йе Ьаяс ауяепл геадепгз — уеааг апд р1аяпЫь — аге шехрепяче апъ! ге!а6че!у еаау го таплрп1аге, а дгеаг плапу !пчеаг!да!оса Ьаче ге1г Егее го ехгепь! гЬе Ппнь ог йе гесЬпо1оду. ТЬе геял16пд с)етопаггаг!оп оу лппочабоп апд сгеа6чЬу Ьаа 1ес) го йе депега6оп оу а дгеаг пшпЬег оу Ьаяс гоп!а гЬаг сап поъч Ье гесотЫпеь! Еог гье !п ечег плоге аорЬ!аг!сагес) зсгеепа !е.д., р!еаае аее ЫЬег!ез ег а1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
