Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 64
Текст из файла (страница 64)
° )4о дебпйьче рге|Пссюп сап Ье |паде аЬоис ьчЬесЬег а рагбси!аг Гияоп ргосеш шчо!ч(п8 СРР чдП Вепегасе а 6»пс6опа! апд Пиоге»сепс ргосеш. То ачоЫ ргоЫепь, а чапесу о1' 6|яоп соп»спьсь»Ьои!д Ье Пепе»асс|1 апд сЬагассепгед. ° Очегехрге»яоп о( ргосеш ьп сеП» пьау сац»е ргоЫепь ьп Вепега!. 11 Ь йоцВЬ|, Гог ехагпр1е, йас ехрге»- яоп о( СЕР со Ь|ВЬ !ече!» (п уеая сап! еад со пьь1оса! ьгасюп о( |Ье ргосеш ьчйЬ)п сЬе сеП». 1с ь ипс!еаг, Ьоьчечег, ччЬесЬег |ЬЬ еКес1 Ь дие со йе очегаЬипдапсе ог сЬе пасцге о( йе ргосеьп.
° 11 гпау Ье гП(6си1с со десесс СРР-»рес|6с Пиоге»сепсе очес Ьас)»8»оипд ашобиоге»сепсе, а!йоиВЬ, ьп юше са»е», йЬ |пау Ье очегсо|пе цяп8 соп(оса1 гпкго»сору. То гесогд а Воод я8па1, 1Ье соггесс ес)и(ргпепс, саге(и) сЬоке о( 61сег», апд а 1ЬогоиВЬ )споьч1ед8е оГ писго»сору шау Ье песе»»агу. ° СРР ехЫЬ)1» я8шбсапс»респа) сЬап8е» ш ге»роп»е со ргосеш сопсепсгасюп, юшс»сгеп8й, апд РН. !с ь йеге(оге ипрогсапс со аыау СРР шн1ег»сап|1агд саиды)оп». ТЬе Ьесего!о8оьь ехргеяюп о( Ае|!иогеа СРР ш еПКегепс ог8ашяпюЬегесоге оп8)паПу пьес чдй оп1у 1ппПед юссем.
Рог ехагпр1е, |Ье рге»епсе о( сгур1к»р1|се ясе» ьп 1Ье оп8(па! с1опе гею!|ед ш |Ье де!е6оп оГ рог6оп» о( сЬе сосПп8 ге8)оп ш»оспе о»8апып»»исЬ а» р!апся сЬе сгап»1абоп ьшба6оп я1е ьча» пос орсппа! Гог ехргеядоп ш папу Гоге(8п Ьо»ь (Коха)с 1987), апд юпье оГ |Ье содоп» ьчеге ш(геь)цепс!у и»ед. ТЬе еп1йе с(Ы4А»еь)иепсе епсод)п8 СРР Ьа» по|ч Ьееп пшса8ешгед ог»упйеягед ш»ечега1 ПК(егепс ьчау» Ьу чапо|я Вгоир» со а1сег югпе ог аП оГ йе»е Геасиге», апд сЬе я8па! Ргодисед Ъу |Ье герогсег Ьа» Ьееп ьпсгеа»е|1 соп»ЫегаЫу (На»е!ой ап|1 Ашо» 1995; Пе(сЬе! ес а!. 1991|; Уо1о|Ып ес а1. 1991|; На»е!о(Г ес а!. 1997).
!п адс66оп, йе ргоЫегп о( а ге)а6че!у 1о Мече! о( сгап»спрсюп Ьа» Ьееп аддгемед Ьу йе ш»ег6оп о(»сгоп8 соп»сйи6че ргоьпосег» Ггосп чКи»е» юсЬ а» сусоше8а1очгьь (СМ'ьь), 5'ь»40, ог йе Ьшпап ипгпиподебсьепсу игсь (Н!'ьг) 1оп8 сегпипа1 гереас ирягеагп о( сЬе СРР-сосПп8 ге8(оп (Сегчаьх ес а). 1997), ьчЬ|сЬ гею1с» ьп я8пьбсапг )ече!» о( ехрге»яоп. !п ассепьрс» 1о очегсоьпе»опье о( йе 1|гпйабоп» о( ь)есессюп оГ СРР, ехсепяче»спьссше-|1гьчеп, ясегПгессед пшса8епея»»сиеПе» Ьаче Ъееп сагпед оис. А» а ге»и11 оГ йе»е»сисПе», ап шсгеаяп81у!оп8 1ьс оГ 17.86 СЬаргег 17: Апа1уж 07'Сепе Ехргезз(оп Еп Си1(игег) Матти)(ап Се)!5 чапапь Ьаз Ъееп г)езсг!Ьег), еасЬ Ьачпд а!гегег) Виогебсепсе ехсЬабоп апг)!Ог егпьяоп бресгга (Еог а зшпшагу о11Ьезе, р!сазе зее Р)аиге 17-12) (СгашеН ег а1.
1996; Непа апг) Тяеп 1996; Соппас14 ес а). 1997). 1п гпапу оЕ гЬезе сазез, гЬе а)гегег) ргорегНез ргочЫе яцшйсапг аг)чапсааез очаг тчг1йгуре СЕР Еог пгапу арр1!саВопз. Рог ехагпр1е, шша(юп оЕТуг-66 Ьаз яВшйсапс ипрасг оп СЕР Ъесаизе йе 3)иогезсепг ргорегВез о1 йе сЬгогпорЬоге )агае)у г)его е Егогп гЬе х е1есггоп-соп)ицагег) Егагпегчог)г ОЕ гЬ)з апппо асЫ. Агйпо асЫ зиЬзбгигюпз аг роягюп 66 гези1с ш а1сегагюп оЕ ехс)гагюп/еш)зз)оп 4чаче1епдгЬз, ш зогпе сазез, аепегаг!па ргогешб гЬаг Виогезсе уе11огч, Ыие, апг) суап. Нои ечег, пшгаВоп оЕ Туг-66 сап а1зо гег)исе Виогезсепг оигрш ш 2096 оЕ гЬе ип1йгуре ргогеш.
Ву сап!газ!, пппапь аг йе аг()асепг роягюп ТЬг-65, еисЬ аз 565Т (Неип ег а1. 1995) ог 565С, 572А (Соппас)с ег а1. 1996), йзр! ау ап ехсЬагюп реа)г гЬаг и Еош- о нн~ч -о о р 0.8 о.в 600 о.б об 0.4 0.4 0.2 0.2 0.0 300 0.0 300 400 500 баа 400 500 о б ио и г Об 0.6 б по 0.8 0.6 0.4 0.2 0.2 0.0 зоо 0.0 зоо 400 500 600 400 500 600 г со н~, о.в о.в О.б 0.6 0.4 0.4 0.2 0.2 о.а зоо а.а зоо 400 500 600 400 500 600 Е!СОКЕ 17-12 Е!иогезсепсе Ехс!181)оп апг) ЕпзЫзюп 5 ес1га 1ог СЕР НаПап(б ТЬе Виогезсепсе ехс)(аг)оп апг1 еппббюп зрес(га аге гергезепгег3 аб зо)Ы апг) г(абЬег) 1)пез, гезресбче!у, 1ог (урка! гпешЬегз о1 (Ье ях ша)ог с)аззез о( СЕР гпи1апгз, гоае(Ьег ил(Ь йе сЬгошорЬоге 5(гисгигез Ье1)ечег3 1о Ье гезропяЫе 1ог йе брес(га.
5рес(га Ьаче Ьееп погша1)хег) го а гпах(шиш агпр(!(иг(е о( 1. ННЬеп оп)у опе 5(гисгиге 35 г)гагчп, Ьо(Ь ехс)(а(юп апг) апг( егпьзюп зресгга агье Егснп йе запзе 51а(е о( сйошорЬоге ргогопа(юп. ТЬе асгиа1 СГР8 с)ер!с(ег( аге илЫ гуре (С)азб 1) (А); Егпегай (С(а5511) (В); Н9- 40 (С)ааа (В) (СВ Торах (С)азз 1Н; уе1!ои 11иогезсепг рго(е)п) ((7); (Н1В (С)абб Н; суап 13иогебсеп( рго(е)п) (Е); Р-4-5 (С)абб Н(; Ыие 3)иогезсЕО( рго(е(п) (Р). (Аг)ар!ее(, гч(й регш!55)ип, (гоги Тяеп 1998 1©Аппиа) Кеч)егчз!.) Епуогтаг(оп Рапе!з 17.87 со яхЕо1с1 Вгеасег йап йас оЕ ъчл!ъ)-суре СРР.
1п зопле пюсапся йе охЫасюп зсер геъ)и)тес) со Вепегасе сЬе ПиогорЬоге оссыз тпоге гарЫ!у гп сЬе пшсапс ргосеш йап сп сЬе чп1д-суре ргосеш. Рс8иге 17-! 2 сПизсгасез сЬе Пиогезсепс ехсиа6оп апс) еспьяоп зреесга Еот зечега! СРР пшсапь. СРР аз Риз!сля Тад ОРР шаг)сета аге тпозс сопипоп1у изет! еКЬег аз а са8 со стас)с сЬе (ече1з апс( 1оса1схаПоп оЕ сЬе Еияоп рагспег ог аз ап спгПеасог со с)есесс епчиоппъепса1 сЬап8ез ог ргоселп спсегаесюж.!п са88(п8 арр!сеасюпз, сЬе изе оЕ гесотпЬ(пап! сесЬп(с)иез аз ъчеП аз шиса8епез)з Ьаз тези!сел( ш йе ргос(исс(оп оЕ зечега! чеесогз сЬас орснпгхе ехргезяоп оЕ сЬе Еияоп ргоъ)исс. 5исЬ чеесотз сурлсаПу епср!оу а "Ьг(ВЬсепеь)" Еопп оЕ сЬе Пиогезеепс ргосеш ъчЬозе соъ)оп ыа8е Ьаз Ьееп орс)гп)тес) сот ехргезяоп ш а раг6еи1аг ееП!ше (е.8., р1еазе зее 7о(осЫп ес а).
199Еь), апъ) йе ехргезяоп оЕ зисЬ сопягись Ь суркаПу ъ)г(чеп Ьу мгоп8 ргопюсеь зисЬ аз сЬас Егопс еусоше8а(оч(гиз. ИВиге 17-13 с)езсг(Ъез сЬе ръ)2ЕСРР чеесог зепез сЬас оЕЕег шапу оЕ сЬезе Ееасигез. 'ътаг(оиз гесошЬлпапс зсгасе8(ез шау Ье изет( со Еые сЬе СЕР са8 со сЬе апппо сепплпы ог сагЬоху1 сегпипы оЕ сЬе саг8ес ргосеш (Еог ап ехсеПепс гПзеизяоп оЕ сгеасш8 Еияоп сопзсгиссм р!еаза зее НиВЬез 1998). 1п сазез ъчЬеге йе аъЫпюп оЕ сЬе са8 со йе епъ) а ргоселп В пос ъчеП-со!ага!ее(, и шау Ье розяЫе со шзегс йе ОРР са8 ъч(сЬш сЬе согПп8 зеъ) иепсе оЕ сЬе саг8ес ргосеш.
ТЕПз р1асешепс ъч61, ш зотпе сазез, аПоъч ргорег Ео1гПп8 оЕ йе са8 апс) ргос)иее а Еипсслопа1 еЬгопсорЬоге (е.8., р!еазе зее Яе8е1 апъ) 1засоЕЕ 1997). ТЬезе сопзсгиеь тпау Ье шсгос)иееъ) шсо сЬе сеП ог ог8ап(зш ияп8 зсапъ1агс) тпесЬоъ)з Еог стапз!епс ог зсаЫе ехргезяоп (р1еазе зее СЬарсег 16). ТЬе Еасе оЕсЬе сопзсгись (е.8., сЬе(г сгапзрогс ог ехргезяоп) В сЬеп ЕоПоъчес( ияп8 сопчепсюпа! Йиогезеепсе писгозсору. Весаые с)есесс)оп с)оез пос геъ)и(ге реппеаЬс(гхасюп ог 6хасюп оЕ ееПз, сЬеге Ь 1ли1е ргоЬаЪл!ссу оЕ шсгос1иссп8 агбраесм Мотеочет, ехргеяеъ1 СГР-Ьляоп ргосешз аге гапПу сохлс со сеПз, а!сЬоиВЬ 6ьюп рагспегз 1осаПхес) со сЬе сеП пие1еы тпау )пс)исе пюге с)аша8)п8 зЫе еЕЕессз сЬап сЬозе Еоипс) ш йе сусоз)се!есоп, Еог ехаспр!е (Т.
Мьсе!с апс1 Р. 5рессог, иприЬ!.). Апсоп8 сЬе плозс ялесеяуи! са886п8 аррПсасюы Ьаз Ьееп йе ые оЕ ОРР со шошсог сЬе с)упапие 1оса1- гхабоп апъ1 Еасе оЕ 6лзес1 ргосеспз ш!пПп8 ееПз апс( ог8ашяпз. Япее сЬе (пгба1 герогс йас ъ!езег)Ьес) сгае1ссп8 НЬопис1еоргосеш (К)4Р) раг6с!ез ъЬлпп8 )3тозор)л!)а оо8епеяз (ЪЧап8 апс) Нате!688 1994), СРР Ьаз Ьееп саг8есес) со апъ) ехргеззеь) зиссегь(иПу сп пеаг1у ечегу пъа)ог ог8апеПе оЕ сЬе сеП.
Атпоп8 сЬе ъчЫе гап8е оЕ герогь ш сЬе Рпегашге аге зшйез ъ)еа!ш8 ъч(сЬ Ызиа1гхш8 йе с)упатпк ргорег6ез оЕ ог8апеПез ялсЬ аз йе Сто(81 (Со1е ес а1. 199б; Ргез!еу ес а1. 1997), оЬзегчш8 ечепь ш йе сусоз1ъе!есоп (О!зоп ес а1. 1995) апъ) а! оп8 зесгесогу расЬъчауз (Сътас)сег ес а1. 1997), апъ) ЕоПоъч)п8 йе ечепь оЕ ртосеш сга(6сЫп8 (1ее ес а!. 1996) апс( сусоЫпемз (Рш8ег ес а1.
1998). ОЕ рагски1аг посе аге зсигПеь йас ые а зес оЕ СРР чапапь со стас)с йсуегепс ргосешз япш!сапеоиз1у ъчПЬсп сЬе сеП (Мьсе!с апс) 5рессог 1997; Тяеп апъ) МсуаъчаЫ 1998). Кесепс1у, Пиогезсепс ргосеспз Ьачш8 я8шбсапс Ьопю1о8у ъчлй СРР Ьаче Ьееп )ли!асей 6осп йе попЬю!ипнпезсепс зреслез оЕ Апйоаоа (Маса ес а1. 1999). Ашоп8 сЬезе, а тес) Йиогезсепс ргоселп ъчаз зЬоъчп со ехЬлЬсс а плахлпппп епизяоп зресспип ас 583 птп, "тес)-зЫйесГ' ъчеП оисяс)е йе гап8е оЕ осЬег С*'РР чапапь.
Аз ь с(ерксес( сп НВиге 17-12, сЬе 1аг8е зЫйз ш сЬе пшсапс Оррз аге сп сЬе ехелсасюп, гайег йап сп сЬе епизяоп ъчаче1еп8сЬз. ТЬе тес( Пиогезсепс ргосе(п сап Ье еая1у с)есессет( ияп8 есйег сЬе зсапъ)агъ) ергПиогезсепс пиегозеоре ог сурка! соп!оса! писгозсоре, апс) сЬегеЕоге ргопизез со Ье оЕ Вгеас иъе лп ъ)оиЫе- ог сПР)е-1аЬе1ш8 зшеПез, ТЬе согпЬлпабоп оЕ гапъ)ош апл) Жгессет) шша8епезь зсийез Ьаче ргос)исес( а!сегес) сЬготпорЬоге зсгиссигез йас епайе ОРР со зегче аз шгПсасоь оЕ епчггоппсепса! еЬап8ез ш йе сеП ог оЕ лпсегассюпз Ьепчееп ог апсоп8 ргосеспз (Еог а тпоге сошр1есе ъ)езсг)рс(оп оЕ сЬезе зплгПез апс) сЬелг роза(!ППс(ез, р1еазе зее сЬе гечсеъч оп ЬюсЬеппеа! ппа86п8 Ьу Тяеп апъ) МсуаъчаЫ 1998).
ТЬезе миеПез оЕ гезопапсе епег8у сгаыЕег аге Ьазет) оп зузсешз Еог ъ)есеес(п8 йе сгапзуег оЕ епег8у Ьесъчееп пчо гпо1еси!ез, зегч!п8 аз с)опог апс) ассерсог, оп ЖЕЕегепс ргосешз. Весаые йе ргоЪаЬл!пу оЕ епег8у сгапз(ег Ъесъчееп съчо тпо!ееи1ез гПшлпьЬез аз сЬе яхсЬ роъчег оЕ сЬе гПзсапсе Ъесъчееп сЬеш, с!Пз зсгасе8у ргочЫез ап ех9и(з)се!у зепясгче плеазиге оЕ сЬе гПзсапсе апъ) лпсегае6оп Ьесъчееп йе шо1еси!ез. ТЬе ые оЕ СРР чапапсз ш епег8у сгапзуег ехреппсепсз сап ЕаеППасе, Еог ехашр1е, сЬе с)есеесюп оЕ еопЕоппа6опа1 сЬап8ез ш а ргосеш аззос(асес) ъчПЬ сЬе Ьлпйп8 оЕ са1елшп со са1шос(иПп (МлуаъчаЫ ес а1. 1997), аз ъчеП аз йе т(еро1аг(гасюп оЕ соп еЬаппе!з (Яе8е( апс( !засоЕЕ 1997).
Кесепс1у, СРР арр1лса6опз ияп8 Пиогезсепсе гезопапсе епег8у сгапзуег (РКЕТ) Ьаче Ьееп изет! со с)есесс апс) гпеазиге ргосеш ас6часюп апъ) шсегассюпз (Е)ау 1998; МаЬа)ап ес а1. !998, 1999; ъ'ътоисегз апъ! Ваз6аепз 1999). Рог а ъ)есаПес( гПзсияюп оЕ сЬе ые оЕ РКЕТ со с)есеес ргосеш лпсегасссопз, р1еазе зее СЬарсег 18, Ргососо( 7. А чапасюп оЕ йь арргоаеЬ, )Споъчп аз Ью! шпшезсепс гезопапсе 17 88 СЬарсег 17: Апа1уы о~Сепе Ехргебб(оп лс Си(сигег( Матта!(ап Се!15 юссап 5Н40 епоапс 5040 ро аббаюп арпа 5040 епаапс 5040 ро аббао 5040 р абббюп ядпа) пмпо!ес 5040 р аббаоп вдпа Г!СЕ)КЕ 17-13 432ЕСГР Чес(огд 5игпгиаг!хес( Ьеге аге СЬе 1еаСигед о1 СЬе рс(ЕСГР герогСег чес(огд. АП чесСогд (и СЬе депед саггу СЬе сос(- (пП дессиепсе 1ог а с(едсаЫ1(хес( чаг(апс о1 (Ье епЬапсес( СГР (с(ЕСГР). ЕСГР Ьад а 5!пц(е, гес(-5Ыссес( ехср Са(юп реа)с апс( 1!иогедсед — 35 Ппсед тоге (п(епде(у СЬап с(оед СГР ТЬе сос(оп праце о1 ЕСГР 35 орП- гп(хес( 1ог Ьигпап сос((па рге1егепсед.
ТЬе с(едсаЬйхег1 напапс Ьад а ЬаЬЕИе о1 -2 Ьоигд (п гиагппсаПап сеП5, Ьу соп(га51 Со ЕСГР ъчЬ(сЬ Ьад а Ьа!1-Ие о1 -24 Ьоигд. Весаиде о1 3(5 гар!03 Сигпонег, 432 ЕСГР 35 иде(и( ад а герогСег 1ог гпеадиг)пе сЬе ИпеПсд о1 сгапд(еп( гпту)4А сгапдспрПоп 1гогп а геПи!асес( ргопсоСег. А33 ЧЕССогд И (Ье 5ЕИЕ5 Саггу (С) ап ог(П!п о1 р(адиСИ герПсаПоп (п Е.
со8 (р()С оп), (2) ап агар(с(П(п гед!5- сапсе гпаг(сег (Агпрд) 1ог де(есПоп (п рго(сагуоПс сеП5, апс( (3) а гпи(Пр!е с(ои!пВ 5!се (МС5) ас сЬе 5 ' епс( о1 СЬе ЕСГР дес(иепсе 1ог (пдейюп о1 СЬе дес(иепсе ипс(ег 5(ис(у. (А) рс(2ЕСГР 35 (п(епс(ес( рпгпап1у ад а доигсе о1 (Ье 032ЕСГР-сос((п8 дег(иепсе. ТЬе сос(!08 геи!оп сап Ье агирП((ес) Ьу РСР ог ехс!5ес( ид(п8 сЬе 1!апЫпц гед(псПоп 53(ед (и СЬе МС5. (8) ТЬе Ьад!с чес(ог (ас(45 еи14агуоПс ргогпо(ег апс1 епЬапсег дес!иепсед, аПоиб(пП гпахптнли 1!ех)ЬП!Су !и с(оп(п8 геди(а(огу дег(иепсед. ТЬе ехрге55)оп о( ЕСГР с(ерепс(5 оп (Ье (пдегсюп апс( ргорег опепсасюп о1 а (ипг Попа) ргопсосег ирдсгеапс о1 (Ье (и(гоп апс( ЕСГР Пепе. (С) ТЬе епЬапсег чессог 1ас(45 (Ье 5Ч40 ргогпосег, Ьис сопса1пд (Ье 5Ч40 епЬапсег.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
