Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 63
Текст из файла (страница 63)
1990; Кия апт( Рояее 1993). ТЬе гесотпЬ|папс лтыез сап Ье гесодп!хес) Ьесапзе сЬеу депегасе р1ат)иез |и п|опо1ауегз оГ шзесс седл йас аге еиЬег со1ог1ея (1асх) ог попдиогезсепс (СРР). Мапу г(сТГегепс сгаизЕег р!аяпЫз Ьаче Ьееп с!ече!орел( Еог а чапе|у оЕ арр!каПопз, Рог ехагпр1е, р1аз- шЫ чессотз аге ачадаЫе Гог ехргезяоп оГ ргосешз аз |ияопз со 81исайюпе 5-сгапзГегазе (С5Т) ог аз НЬ- 6-саддес( Гиз(опз. Ойег р1аяпнЬ адо|ч Гог сЬе япш1сапеоы ехргезяоп оГ с|чо ог |поте (пр со Гош зо Еаг) с(сТГегепс депез. А чапесу оЕ ргоиюсея сЬас Глтсче ехргеззюп ас с)сТЕегепс зсадез ш йе лгиз |пГессюп ргосея Ьаче аЬо Ьееи с)ече!орет); ргоп|осегз йас с)пче ехргезяоп еагдет |Ьап сЬе ро!уЬес)г!п ргоиюсет аге оЕсеп иос аз зсгоид Ьис рго| Ые Сот а 1опдег репо|1 оЕ ехргезяоп, ъчЫ1е сЬе сеП |з плоте сараЫе оЕ роз|сгапз1асюпаду и|о|Иушд йе депе рго|1псс.
Моте гесепс1у, гпесЬо|Ь Ьаче Ьееп с(ече1оре|1 со 1|дасе Ел|ге(дп депез йгесс1у шсо Ъаси1оч!гиз чессогз. Пгпзс ес а!. (1994) стеасес( а Ьасп1олгиз сЬас соп!д Ье Ппеапхет( ас а ппн)ие 5се1 ясе ап|1 сои1|1 Ье ые|1 со ргорадасе ап|1 ехргея Еоге|дп депез ел)и!Ррет( н4|Ь 5се! сегииш, ТЬе пзе6л!пея оГ сЬыпесЬот( |чае дгеас!у (псгеазе|1 |чЬеп 1.п апс) МП1ег (1996) Пече(ореРл а плоте чегза01е чешог зузсеи| сЬас сои!4 ассерс Р)4Аз ьчсЬ ЕсоП! сеппш|, Аз а сопле|)пепсе оЕ йезе ас(чапсез, Ьасп1оч|гпз ехргезяоп ау|се|из Ьаче аззегпЫес) а сгегпепс)оиз гесоЫ оЕ |ассе|я Моте йап 800 ййегепс депе рта|!пса Ьаче Ьееп ехргеззес) со 1ечеЬ йас аге зпГПс)епс Еог ЬюсЬеииса! апл( зсгпссша! апа1узез оЕ йе рипйе|1 ргосе|пз.
)4|Ьегеаз Ьасп1очп из чессогз |чете опсе изет) |чЬеп аП е1зе (адей йеу аге по|ч о(сеп |Ье Пяс зузсеты со Ье сг!етс Еог ехртезяоп оЕ а печт!у Ьо1асет( еи1|агуоис депе. 0гаитЬасЬз оГ Васи1оыгиз Ехргезз1ои 5уьсесиз ТЬе и|а)ог ат(чаи|аде оЕ Ьасп1оч|гы чессогз Ь сЬе|г сарас|су со ргос)псе чету ЬсдЬ!ече1з оЕ Ыо!од(саду асМе ргосешз. Ап а|ЫЬюпа1 Ьепед| ассплез сТ сЬе Еоге|дп ргосеш Ь ес(шрре|1 лч(сЬ а ядпа! зел!пенсе. 1п |Ыз сазе, |Ье ргосеш сап Ье стана!асюпаПу гпоййес( Ьу 14-1ш(сес( д!усозу! аПоп ас сопзепзпз Азп-Х-5ег!ТЬ| зел!пепсез апт) зесгесет) Ггоп| йе !пГессес) седл. Ао|Ьепск со- апг( розссгапз1ас|опа( ргосезяпд оГ еп(сагуоПс зесгесе|1 ргосе|пз Ь депегаду еззепПа! Еог сЬег ЕиП Ыо!од!са! асилсу. Впаду, Ьу сошрапзоп со |патпи|адап седл, Пиеа оЕси!сите|1 |ыесс сеПз аге ге!аПче1у еазу со дгосч, шехрепяче со ша|псаш, аи|1 сап Ье ргог(исетс ш 1агде ппшЬея. 14ечегсЬе!езз, Ьаси1очпы ехртезяоп зузсешз Ьаче сегсаш йзат(чапсадез.
Н|дЬ-1ече! ехргеяюп оГ ргосешз Ь йзсопПппопз ап|1 йотс Пчей Си!ситес) |жест седа пшя Ье дгосчп, |пЕессей ап|1 Ьагчезсес) ЬеЕоге 1уяз, ынаду сч!|Ь(п 1 |чее1| оЕ шЕессюп |ч)сЬ гесошЬ|папс лтизез. То очегсогпе |Ьезе ргоЫешз, яаЫе р!аз- тпЫ-Ьазес) ехргезяои зузсе|ы Ьаче Ьееп т(ече1орес) (Еот темечт, р!еазе зее МсСатгоП апг( К|пд 1997). ТЬе гезп1и оЬ|а)пег( зо Еат |ч(сЬ яаЫу сгапзГогплел) Пиеа оГ |пзесс седл аге епсопгад)пд |п йас а Ее|ч ргосе|пз Ьаче Ьееп ехргеззе|1 ас ге!аиче1у ЬьдЬ (ечйз.
Нонтечег, ойег ргосешз аге ехргеззес) ас ишсЬ 1о|чег )ече!з ш зсаЫу сгапзЕотшес( сеП 1шез йап |п |Ье сопчепсюпа! зузсетп оЕ асисе1у шГессе|1 седа. ТЬе геаюпз Еог сЫз чапаЬйсу аге ип)шосчп.!плес| седа т(о пос депегаду ргочЫе "соп|р1ех" 14-81усозу!ас!оп зисЬ аз асЫиюп оГ да1ассозе ап|1 яа!к асЫ гезЫпез. Гпзсеай сЬеу спш йе соте оддозассЬагЫе со Мапл,.С)сНас„сч!|Ь |огне Еисозе а|Ы|сюп оп О1с)з)ас. А1йоидЬ йЬ суре оГ Ы-81усозу1ас|оп Ь ыпаду ял|П|с|епс со рточ|0е Ьзо1од(саду асМе п|аиипадап ргог(пси, сЬе 1ас1| оГ сегиипа! соспр1ех 81усозу(асюп шау гезп1с ш я|Ьс!е |ИЕегепсез ш, Еог ехап|р1е. зо1пЬ|1иу, зсаЬ|1|су, атн1 ипишпе ге| ропзе.
1и а|Ыиюп, Ьесаизе оГ йе чету Ь(дЬ 1ече1з оГ ехргеяюп сЬас |Ье Ьаси1олгиз зузсеш сап асЬсече, йе розигапз1асюпа! и|асЬшегу оЕ |Ье сеП о(сеп л(оез иос 1|еер расе |ч(сЬ ехргезяоп, апт) ргосе|п |пойдсас|оп шау пос Ье еЕПс|епс Цаппз ес а1. 1990). Впаду, Ье |чагпес) йас зотпе депез )пзс с)о пос ехртея |чеП |п йе Ьаси1олгы ехргеяюп зузсеш; ш |ЬЬ гезресс, Ьасп!олгы зузсе|ы аге по йГЕегепс Егоп| ойет еи(сагуос!с апт) рго(сагуос!с ехргеяюп зузсешз. 17 В4 Сбаргег 17: Апа!уыь о)т Сепе Ехргеьь(оп т Си1гслгет( Маттиа!Еаи Се!!ь Сопьиьегс(а!1у Ача(1аЕ|1е Васц1оч(гоь Ехргеьь!оп 5уьсеяьь ТЬе Ьеьс |чау со оЬсаш |Ье с1опеь, чессогь, апд се11 Впеь |Ьас аге сои|ропепсь оЕ Ьаси(очи ил ехргеьяоп ьуьсешь В ятпр1у со Ьиу а Ыс. !пчигойеп апй СЪОЫ|ТЕСН Ьой ьей сот ртеЬепяче ьео оЕ геайепо сЬас аге ьиррйей чйсЬ ьсга|ВЬс(ог|чагй |пьсгиссюпь апй с1еаг!у лчпссеп сесЬпка) гпасепа1.
ТЬе и|ап|ри1айопь аге яп|р(е, |Ье ьиссеьь гасе )ь чету Ь|8Ь, апй |Ье Ып аге геаюпаЫу |пехрепяче. 5о Во Еог и! СКЕЕ)х( ГШОКЕ5СЕВ)Т РКОТЕ1)х( ТЬе Ью1шпшеьсепс )е11уйьй Ае()аогеа Ысгопа (61иьсгасед оп сЬе сочет оЕ сЬсь Ъоо)с) еш(сь а сЬагассепя(с Вгееп йиогеьсепсе, ч|яЫе аь а пп8 оЕ 68Ь| агоипй сЬе еййе оЕ |Ье шпЪге11а (Нагчеу 1952). ТЬВ В т)ие со йе асспйсу оЕ с|чо ргосешя |Ье са1с(иш-Ъ(пй(и8 РЬосоргосе|п ае|)оопп, апй |о сои|рапюп, |Ье Вгееп йиогеьсепс ртосеш (ОРР). 1п йе 1аьс 1О уеагь, СРР Ьаь Ьесоше опе оЕ йе гпоьс |псегеьйпй ргосешь ш ЫосЬеш|ягу апй пю1еси1аг Ью)ойу.
1п а|Ыйюп со ргочЫ|п8 а соо) со ипс1егьсапд апд гиашри1асе йе ге1айопьйср Ьес|чееп ргосеш ьсгиссиге апй ьрессгоьсор|с Еипсйоп, ОРР Ьаь Ьееп мед чйй |псгеаяп8 ьиссея аь а п|аг)сег Сот Вепе ехргеыюп апт)!псгасейи!аг ргосеяеь ш огйашяпь гап8)п8 йоги Ъассепа со сгапь8ешс писе. СРР, ейьсочетей Ъу Яи|пои|ша ес а1. (1962), )ь а 238-геыйие ро!урерсЫе (М, = 26,888) епсойет) Ьу сЬгее ехопь артеага очек 2 6 )сЪ оЕ йе А, сйстопа Вепои|е (Рга|Ьег ес а1. 1992).
ТЬе ргосе|п |ь ьсаЫе со а |чЫе чапе|у оЕ Ьаг|Ь сопсйсюпыпс1исйп8 Ьеас, ехпе|ие РН, апд сЬеииса) Иепсигапо (Жагй апй Во)опап 1982) апй сопИпиеь со еиш йиогеьсепсе айег 6хайоп ш (отша!йеЬус)е (СЬа)6е ес а). 1994). Но|чечет, сЬе йиогеьсепсе В гарЫ1у с)иепсЬей ипйег гадис)п8 соисйсюпь Дпоиуе апд Тьи)1 1994). ТЬе еи|йяоп ьрессгши оЕ СРР реа)сь ас 508 птп ()оЬпьоп ес а). 1962), а лчаче1епйсЬ с)оье со |Ьас оЕ йчш8 Ае|)аогеа |Илие, Ьис сйьсикс Егои| сЬе сЬепи!ши|пеьсепсе оЕ рше ае|рлопп, |чЫсЬ |ь Ыие апс! Реа)сь пеаг 470 пш.
Ч|1|Ь йе |пй|а1 рипйсайоп апд сгуьса11|гайоп оЕ СРР, й счаь гйьсочегей |Ьас са)сшш-асИ- часами асс)оопп сои)И еЕ6с|епс!у сгапьЕег )сь 1шишеьсепс епегйу со ОРР |чЬеп сЬе пчо |чете соайьогЪет) опто а сасюпк ьиррогс (Мог(ье ес а1. 1974). Сгееп 1|ВЬс (ь ргойисей лчЬеп епегйу (ь сгапьуеггед Ьу а Рояег-суре гпесЬап|яп Египт Салл-асс)часей ает)оопп со ОРР. В1ие 1|ВЬс еш(след Ьу асс(часей аесрлопп )ь сартре|1 Ьу а Ьехарерит(е сЬгопюрЬоге (Ъей)пп(п8 ас гея|1ие 64 оЕ Срр) сЬас сопсашь а сус1(с ьсгиссше (4-(р-Ьус)гохуЬепгу!Ыепе) ииЫаго1Ыш-5-опе) ассасЬед со сЬе рерсЫе Ьас)|Ьопе сЬгоиВЬ сЬе 1- ап|1 2-рояйопь оЕ|Ье пп8 (Яшпопшга 1979). 1псегеьйп81у, ЙВ ьспксиге арреап со Ье сопьегче|1 аи|оп8 Йлогеьсепс ргосешь, счет| Йоье йои| попЬю1ши|пеьсепс отйашяиь (Масг ес а1. 1999).
51госсвге апт1 Гипс(!оп ТЬе геьо1ис|оп оЕ |Ье сгуьса) ьсгиссше оЕ СРР ргочЫей ап ехр)апасюп Еог шапу оЕ |и оЪьетчей РЬуяса( ргорегйеь (Оппо ес а1. 1996; уап8 ес а1. 1996). ТЬе ргосеш сопыьсь оЕ а й-Ъатте! |силе|иге согпроье|1 оЕ 11 ьсгапйь (В ьЬееп) сЬас епсарьи1асе а сепсга) а-Ье)пс. ТЬе сЬгопюрЬоге, Еоппес) Ьу |Ье сус1|гайоп оЕ гея|Ьлеь 5ег-65, Туг-бб, апд С!у-67, (ь сои!алей ъч(сЬш а ьЬогс Ье1|са) |стас|иге, |чЬ|сЬ иН|ье!( Ьипе|1 |пьЫе |Ье ИВЬс!у |чочеп ! 1-ьсгапдед (3-Ьагге) (Оппо ес а1. 1996; таи8 ес а1. 1996; Вге)с ес а1. 1997). ТЬе шьи(асюп оЕ сЬе сЬготпорЬоге (пыйе |Ье В "сап" сопЕегь шапу оЕ сЬе РЬуяса) ргорегйеь оЕ СРР, |пс1иейп8 геяьсапсе со игеа, Иесетйепеь ргосео1уск а!гас)с, йеггиа1 Иепасигас(оп, апй ш ьогие саьеь, со Еоппа!йеЬуйе 6хасюп.
ТЬе ьесопдагу апд сегйагу ьсгисыгеь оЕ СРР ьи88еьс а шесЬапВтп Еог йе | ипсйоп оЕ йе ргосеш. ОЕ тесепс пасе, |Ье тело!ийоп оЕ сЬе сгуьса) ьсгиссиге оЕ сЬе ает)оопп !тоси Аейаогеа аейаогеа, герогсей Ъу Неай ес а1. (2000), Ьаь ргочЫес! Ешйег |1еса|)ь оЕ йе гпесЬапйгп оЕ йе Ь|о1штипеьсепс геасс|оп Еог йас са1с|шп-ьепяйче РЬосоргосеш.
ТЬе ОРР сЬготпорЬоге |1оеь пос тел)и!те ареста) Ьюьуп|Ьейс рай|чауь |Ьас аге ьрес|6с со СпЫапа. 1пьсеа|1, й сап Ье Соппе|1 ш а |чЫе гапйе оЕ се!В сЬас поппа11у с)о пос ргос(исе 118Ь|. СРР ипйегйоеь ап аисосаса1уск, |псгагпо1еси1аг геассюп со сгеасе Йе сЬгоиюйиог ш а роьссгапь1айопа) сопиайоп Йас оссигь чйй а сипе сопяапс оЕ пеаг!у 4 Ьоигь ш Йе пас|че ргосеш (Неип ес а1. 1994; 1поиуе апд Таир' 1994). ТЫь геасс|оп )пчо1чеь сус1|гасюп апд охЫ|гайоп оЕ йе спгиег 5ег-65, деЬудго-Туг-бб, апд С1у-67 (Неии ес а).
! 994). ТЬе (ьо!асей сЬго|порЬоге, |Ье шсасс СРР ргосеш, ап|1 ьуи|Ьейс сЬгошорЬогеь а)1 т))ь- Гп(огтагьоп Рапе!» 17.85 р1ау чесу Впи1аг»росс»а! сЬагас1еп»ися ТЬеу аЬюгЬ ПВЬ| спахипаПу ас -390 пгп ьчйЬ а япаПег реа1| оГ аЬ»огЬапсе ас -480 ппь (Моп»е е1 а!.
1974; ЪС|агд ес а!. 1980; Соду е1 а1. 1993). Ноьчечег, оп1у йе шсасс СРР еп61» Вгееп!|ВЫ (|чйЬ а реа1| ас 509 пш ап|1 а»ЬоиЫег ас 540 п|п) (Магие ес а!. 1974). Весаи»е сЬе га6о о( сЬе 1|»о аЬ»огрсюп реа1|» Ь»епясьче со»исЫассог» а» РН, сегпрегасиге, ап|1 юшс ягеп8сЬ (Чьагд апд ВоЬпап 1982), П Ьа» Ьееп»и88е»сед сЛас сЬе сЬгопьорЬоге пьау ехЬс ш пчо еПКегепс Гопп». Песец| »сгиссига!»сигПе» депюп»сгасе йас сЬе сьчо реа)с» о( аЪ»огЬапсе, -390 ппь апд -480 шп, герге»епс с|чо Гопп» оГ |Ье сЬгогпорЬоге, Ьачш8 ргосопасед апд дергосопасед гуго»у1 Ьудгоху! Вгоир», ге»рессьче!у (Вге) с ес а!.
1997; Ра1ш ес а!. 1997). Мо1еси!аг с)упагпк»сисПе» о(1Ье чд!д-суре ап|1 пшсап1 чегяоп» оГ йе ргосеш, юсЬ а» СРР-565Т апд СРР-Р64Ы65Т (ЕСРР), ргочЫе ап ехр!апабоп о( Ьо|ч сЬе»е сопсогшасюпа! ап|1 сЬеписа1 сЬап8е» чдй|п йе сЬгопюрЬоге аКесс ьь 6|пссюп (Напр|» ес а1. 1998). СЕР аа Керогсег ТЬе дегпоп»сгаСюп 1Ьас СРР гпашсашед й» аЬ~1йу со Пиоге»се ш ог8апьяп» ойег йап Аеь)иогьа (СЬа16е е1 а1. 1994)»и88е»сед йа1 по ойег а8епс» юсЬ а» апиЬогПе», со(ас1ог», ог епгуше юЬягасе» аге песеыагу Гог й» ас6л|у. ТЬе»е ьшба1 Гьпд)п8» орепед йе ьчау сог СРР со Ье сьед а» а шаг)сег ш Саеььог)ьаЫьгь» е1ечап» (СЬа16е ес а1.
1994), Ьассепа апд уеа»1» (Р!асЬ е1 а1. 1994; ЫаЬе»Ьипа е1 а!. 1995; УеЬ е1 а1. 1995; ЬПедепйа! ес а1. 199(ь), Ого»ор)ьь!а ('ьььап8 апд Неге!»188 1994; ВапЬпьа(ег апд РугЬе»8 1995); геЬга6»Ь (Агп»се»Ваш ес а1. 1995), р!апь (СЫи ес а1. 1996), апд си!шгед шапйпа!ьап сеП» (Маг»ЬаП ес а1. 1995; МЬсеП ес а!. 1997). ТЬеге аге поъч»ечега! герогь сЬас СРР гпау Ье и»ед е((есйче!у а» а геропег ш сгап»- Вепк писе (Псаьча ес а1. 1995; СЬюссЬеш ес а1. 1997; О1|аЬе е1 а1. 1997; био ес а1. 1997). ТЬе»е еаг!у гепьаг1|аЫе юссеьье»»и88е»сед йас гпапу росеп6а) сПК|си)сье» ьп йе Ьесего)о8ои» ехрге»- яоп оГ йе )еПу(ь»Ь ргосеьп |чесс пос ьпяьппоип1аЫе.
Гье»рйе сЬе»е деспоп»сгасюп», Ьоъчечег, ьчПд-суре СРР юКегед 6о|п»ечега1 1|писасюп» сЬас пьау Ьаче ипрасс оп ехрегцпепса! |)ея8п. ° ТЬе роя1гап»1абопа! пьое66сасюп» геь)и)гед 1о Гопп сЬе сЬгогпорЬоге ап|1 |Ье шассе»яЬ|!йу о( сЬе сЬгогпорЬоге ьп |Ье с)ерй» о1 сЬе !! "сап" ге»и!с ьп а 1а8 (>! Ьоиг) Ьесьчееп»упсЬея» о( СЕР ап|1 ьс» аЬ|1- йу со ешй Пиоге»сепсе. ТЫ» де!ау ьпау согпр1|сасе»сисПе» о( Пепе ехргемьоп ъчЬеге ап пшпееПасе геа|1- ои1 ь деягед. ° ЕКкьепс ехрге»яоп ш ЫВЬег еи)сагуосе» апд р!ап1» шау гес)и(ге орбпига6оп о( йе со|6п8»ес)ыепсе о( СРР.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
