Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 60
Текст из файла (страница 60)
1992) ап|1 сЬе игапу! ва1|в (Оаупог ес а1. 1989) а1во с1еаче К|4А ап|1 сап йы Ье ивет! со тейпе К)в)А-ргосе(п |псегасбопв. 5е!ес41оп оЕ а С!еачаце КеадепЕ ТЬе сЬотсе ашоп8 РЫА с!еачайе геа8епь ь!агйе!у а п|ассег оЕ регвопа! рге1егепсе. Р)4аве 1 Ь ге!айче!у Ьийсу (450 х 400 х 350 шп; 5ис)с ес а1. 1984) апд пиВЫ Ье ехрессей со Ьаче гПЕйси1су |и Ва|шпй ассеп со пис!ео|Ыев оп йе репрЬегу оЕ а Ь(пйш8 ясе |Ьас аге яепсайу вйье1|1ед Ьу а Ьоипй ргосеш. ТЬь 1иппа6оп шау ехр! а|п |чЬу Еоосрппс|пй |чйЬ Р)4аве 1 сепйв со рче 1агйег 1евв-|чей-йейпес$ Еоосрпп6пй рассегпв, |чЬегеав Ьудгоху( гасйса1в у(е16 япайег Еосивед Еоосрппсв (5а|ча|(ор| ап6 Коедег 1985; Тийшв ес а1. 1987). Ржаве 1 п|арв йе оисег 1ппйв оЕ йе агеа оЕ сои|асс Ьес|чееп Р)4А апд рго|е|п, |чЬегеав Ьуйтоху! гагйса1в |1ейпе ап шпек, 68Ь| соке.
ОЬчюив1у, ЬосЬ р|есев оЕ |п(оппасюп аге ча1иайе, ап|1 й ь |Ьегесоге итогсЬ|чЬПе со савву оис Еоосрппбп8 ехрепшепь тч||Ь ичо д(йегепс геайепь. РЫаве 1 ь а ваЕе Ьес япсе и Ьав Вашей |чЫе ассерсапсе апй Ьав Ьееп овей виссепуийу Ъу !агйе пшпЬеь оЕ 1аЬогасойев. Носчечег, сЬеппса1 геа8епсв, висЬ ав 1,10-рЬепап|Ьго1|пе-соррег(1), аге а Ьессег сЬо|се |Е с1еачайе (1) саппос Ье |1есессе|1 Ьес|чееп ечету Ьаве ра|г счЬеп па)сед Р)4А сопса|тйп8 йе героп оЕ |псегевс Ь раг6айу дейгайей Ьу Р)4аве 1 (Са!ав ап|1 5сЬпшг 1978) ап|1 (2) |Е сЬе саг8ес герои (в )спосчп ог яьрессе|1 оЕ сопса|п|п8 1оп8 типа оЕ а|1ешпе ог сЬупипе гевЫиев.
Вой РЫаве 1 (Рарачаввй(ои 1993) апй 1,10-рЬепапсЬгойпе-соррег(1) (Ки|чаЬага апд Ярпап 1987) сап Ье ые|1 со с1еаче сЬе РМА гпо|есу оЕ ргосеш-РМЛ сошр!ехев сч(сЬ)п йе шаспх оЕ а верагайп8 Ве!. ТЫв ые айо|чв Еоосрппсшй со Ье соир1е|1 6(гесс!у гйй а Ве! тесаг|)абоп аяау. Ву сап|гав|, Ьу|)тоху! тай(са!в, счЬкЬ аге ргеуеггей |чЬеп ассигасе Пеутп(сюп ь гет(и(гей оЕ йе героп оЕ сои|асс Ьес|чееп сЬе ртосе|п ап|1 РХА, аге а1|чаув ивед оп ргосеш-РЕПА сошр1ехев |и Егее во1исюп. РЫаве 1 сап а!во Ье ые|1 со гййевс ргосе(п-Р)4А соп|р!ехев ш во!ибоп, Еойо|че|1 Ьу Ве! е1ессгорЬогев|в со вератасе ргосеш-Р)4А со|пр!ехев |хоп| Егее Р)4А.
ТЬе Р)4А сап |Ьеп Ье ехсгассей 6 огп йе сошр1ехев, Пепасыей апй апа!угей оп вет)иепс(п8 Ве!в. !п Мчо Р(ЧА Еоосрг(пЕ(пд ТЬе 5'-йапЫпй геропв оЕ шапу еи(сагуоск Вепев сопсаш йогепв оЕ Ь|пгйп8 ясев Еог тййегепс сгапвспрйоп Еассогв. А1|Ьои8Ь ьс (в ге!а6че!у в!та(8Ь|Еог|чтагй со |1осшпепс |Ье аЬ|1йу оЕ ргосешв со Ь)пй со сЬеве ясев ияп8 Р)4А Еоосрпп6п8 аяаув ап|1 йе с1еачайе геайепсв гйвсипе|1 аЬоче, П ь Еаг тпоге сййки1| со Песеггпше |чЬьсЬ Ь|псйп8 впев аге иве6 |и ч|чо апй |чЬьсЬ аге а сопвет)иепсе оЕ йе ые оЕ Ь|ВЬ сопсепсга6опв оЕ па)тей Р)4А апй еппсЬей ргерагасюпв оЕ пис!еаг ргосешв. ТЬеве с(иев6опв тпау Ье апв|чегей Ьу регЕоппш8 |а чтчо Еоосрппипй ехрепшепь ш |чЬтсЬ йе аЬ|1иу оЕ ргосе|пв со Ь(пд со йе тейп!аготу теропв о! йе саг8ес Пепе ь десетш(пей |и ап ехргея|п8 сеП.
ТЬе еаг1иьс ехрептпепь оЕ сЬсв пасите |чете сагпе6 оис Ьу Сеогйе СЬигсЬ апй Жа1сег СПЬегс, счЬо овей сЬеписа1 с!еача8е геа8епь со ехагп(пе п|ейу!асюп ратсегпв (п |Ье 5'-йапЫп8 геропв оЕ п|иппе иппшпо81оЬийп Ьеачу-сЬаш Пепе| (СЬигсЬ апй СП!Ьетс 1984). То 17.78 СЬарсег17: Апа!ув!в о)" Севе Ехрчевв(оп т Си!гигег(Матта1|ап Се1!в |1есесс йе чегу ъчеа1| ядпа1в ешапас|пд 6ош сЬе япд!е-сору сагдес депе ап|1 сЬе|г ййегепс!а! гпесЬу1абоп гес)и!ге6 Ьегок п|еавигев йас !ссчо1чед сЬе депегасюп о( чегу Ь|дЬ врес|6с асбйсу ргоЬев, верагасюп о( деачед депоппс РЕСА Ьу е!ессгорЬогеяв сЬгоидЬ веъ)иепс!пд де!в, !одоъче6 Ьу е1ессгорЬогебс сгапв(ег о( сЬе Р)ъ)А со пу1оп 6!сегв, ап6 доийегп апа1уяв со |!есесс п|ейу!асюп-вепя6че чапа6опв ш |Ье с!еачаде ргос1иссв Пегйеб (гош сЬе !пппипод1оЬи1ш депев.
Реъч 1аЬогасопев сои!6 шассЬ йе сесЬпка1 ъч|хагбгу гес)и!ге6 со реггогш |Ьеве геас6опв ап6 йе!г арр!кас|оп со |п тчо (оосрг!пс!пд. ТЬе шесЬод пидЫ Ьаче виКеге6 ап |дпоЫе Пеа|Ь о( пед1есс Ьад пос ВагЬага Свго!6 апд соПеадиев ивед РСК врес|6саду со ашрП!у !и-ч!чо4оосрг!псе6 Р)4А 6адшепя (Миедег ап|1 Счо!о' ! 989; Рсе!(ег ес а1. 1989). !п й|в а|1арсасюп, ъчЬ!сЬ йеу саПес1 Пдас!оп-спе6!асес$ РСК, сЬе депоп|- |с РХА о( Пч!пд седа В Егвс сЬаПепдед ъчЬЬ а Р)ъ(А с1еачаде геадепс висЬ ав 6!шесЬу!ви1(асе, ап6 йе (гадшепсе6 РЫА !в риг!Еед Ьу ехсгассюп чбй РЬепо1 сЫогоСопп ап|1 ейапо1 ргес!Р|са6оп. А гоипд о! Ргипег ехсепяоп оп сЬе сгеасес) РКА с)ейпев сЬе с!еачаде епс1ро!псв ап|1 ргос)осев Ыипс-собес) сгадшепсв со ъчЫсЬ Пп)сегв о( а бейпе6 вес)иепсе аге а|Ые6 Ьу Пда6оп. А РСК !в пехс сагпед оис ы|пд а рпп|ег йас В соп|- р1егпепсагу со |Ье айс1ес$ Пп1|ег вес!иепсе ап6 а весоп6 ргппег сЬас Пев |!оъчпвсгеап| !гош |Ье виврессе6 РЫА (оосрпп|, 1п йе аЬвепсе о( ргосе|п Ьспйпд, а!асЫег оГ ргобися !в ап|РПЕе6 |Ьас сап Ье Ывиа!|хе6 айег верагасюп Ьу де! е1ессгорЬогеяв, ЕасЬ РХА 6адшепс ш йе!асЫег гергевепсв а йвсшсс с!еачаде рошс а1опд йе сагдес депе.
Ноъчечег, !( а ргосеш |чав Ьоип|! со а ясе сЬас Пев Ьесъчееп йе съчо ашрПЕсабоп рпгпегв, РЫЛ !гадгпепсв ъчЬове епс)ро!псв аге члсЬш сЬе Ь|пйпд ясе ъч|П Ье ши!еггергевепсе|1 с)ие со ргосессюп о( |Ье 0)ъсА 6 огп |Ье с1еачаде геадепс. ТЬеве М11 Ьаче а ге|1исе|1 |псепясу оп сЬе де! ъчЬеп сошрагес) со РЫАв депегасес) |и йе аЬвепсе о( ргосе|п Ь|пйпд. Реса|1е|1 ргососо1в (ог Пдасюп-шейасе6 РСК аге воъч ача|1аЫе (Лаге! 1997), ап|1 ш депега1, |Ьеве шесЬобв аге ъ)и!се гергос)ис!Ые ш пювс гпо1еси1аг Ью!оду 1аЬогасопев.
ТЬе гпейо|1 Ьав Ьееп шее со Пешопвсгасе сЬе |и ч|чо Ь|пйпд о( сивое-вресгдс сгапвспрсюп (ассогв (МиеПег апс) 'ъ'ъго!6 1989), со гпар п|е|Ьу1а6оп ясев |и шас6че депев (Р(е!(ег ес а1. !989), апс) ш сов|Ь|па6оп ъч!|Ь осЬег епхугпа6с, сЬеписа! с1еачаде, апс) сговв-1шЫпд геадепсв со бе6пе ргосе!и-РЫА |п|егассюпв апд йе ргевепсе о( ипивиа( РЫА сопСогшас!опв |и сгапвсг!Ъес) депев (Еагес 1997). Ву чагу!пд йе сопсПс!опв !и ъчЬссЬ йе сеПв о(шсегевс аге си!сшей ог сЬе сипев ас ъчйсЬ сеПв аге Ьагчевсес) ггош ап огдашяп, П В ровяЫе со ра|пс а бесаПед рксиге о( сЬе соосрппя 1е6 Ьу сЬе дупаш!с аяос|абопв о( чагюив сгапвспрбоп сассогв ъч(сЬ йе геди1асогу гед!опв о( а Сагдес депе. СЕЕ КЕТАКОАТ!ОК АЫАТ$ Е!ессгорЬогеяв о( ргосе!и-РЫЛ со|пр!ехев сЬгоидЬ поп6епасиг!пд асгу1ашЫе ог адагове де!в !в |Ье вивр!евс ап|1 псов| ъчЫе1у овес! о( вечега( РЬуяса1 амаув со с)есесс врес!Пс шсегассюпв Ьесъчееп Р)ъ(А-Ъ!п6!пд ргосешв апд |Ье|г сагдес вес)иепсев.
ТЬе де! гесагбас!оп аяау суркаду ш'чойев йе адйс!оп о( ргосе|п со Пейпеб епй!аЬе1е6 (гадшепсв о(6оиЫе-всгапс)ед РЫА, верага6оп о( ргосе!и-РЫА соспр!ехев (гош па)сед РЫЛ Ьу е!ессгорЬогеыв, апс! ч|я|аПга6оп о! |Ье РСъСА Ъу ашогайодгарЬу. Вшйпд ог ргосеш а1вюя а1ъчаув гебисев йе е!ессгорЬогеск споЬ|1пу о( сЬе сагдес 0)ъсЛ, геви1сшд |и с$!всгесе Ъапбв сЬас соггевроп|1 со |пйчЫиа! Ргоге!и-Р)ъ)А сошр1ехев. Ре! ге!асс(ас!оп |чав !псгобисе6 Ьу РаЫЬегд ес а1. (!969) ап6 5Ьаир ес а1. (1970) ав а сесЬп!с)ие со аяау шсегассюпв Ьесъчееп пЬовоша1 ргосе|пв апд пЬовоша1 КХА. ТЬе шесЬос) ш сопнпоп иве собау, Ьоъчечег, !в а йгесс Певсепдапс о( всийев ш сЬе еаг1у 1980в о( сЬе еъ)иП!Ъг!а апд Ыпе6св оу аввос|асюп о( риг!Ееб рго)сагуос!с геди1асогу ргосе|пв ъчпЬ |Ье|г сагдес РЫА вес)иепсев (Рпеб апд Сго|Ьегв !981, !983, 1984а,Ь; Сагпег ап|1 речет !981; Неп|16с1|воп 1985; Непс$г!с)своп апд 5сЫе||: 1985).
Сегсаш!у, ас йас 6ше, |с |чав пос гесодп|хе6 йас сЬе сесЬп!ъ)ие сои!6 Ье тес! со Песесс веъ)иепсе-врес!Ес РЕСА-Ъ|п6!пд ргосешв ш согпр!ех пихсигев, висЬ ав сги6е 1увасев о( п|апипа1|ап седа. ТЬьв абчапсе сагпе оп!у айег ип!аЪе!ес) сагпег РЫА (все Ъе!оъч) ъчав вЬоъчв со вирргея попврес|6с Ь|вйпд о( ргосе|пв со |Ье га6!о!аЪе!е6 сагдес РХА (дсгаия ап|! ЪагвЬачв(су 1984; СагсЬеъч ес а1. !985; 5!пдЬ ес а1.
1986). 5!псе йеп, |Ье сесЬп!с)ие Ьав Ьееп ехсепде6 со апа!ухе согпр!ехев (огшес$ Ьесъчееп ргосе|пв ап|1 шп|я|а1 соп(огшас!опв о( РЫА, шс!ийпд НоПЫау ) шкс!опв (Рашопв ес а!. 1990; Рипбегба!е ес а1. 1991), ш!япассЬес) Ьаве ра|гв (П пспу ес а1. !988), апд У.-РЕСА (Ыогсйеип ап6 Мееве 1988; Сог геч|ечв р)еаве вее Ъапе ес а!.
! 992). Ноъчечег, сЬе сЬ!е( иве ог" ГпГотта6оп Рапе!ь 17.79 |Ье агаау геша|па Ьу Еаг йе Пезесз)оп ап|1 апа!уяь оГ сошр1ехеь Гоппе|1 Ьезъчееп ттаиь-аспид рго|ешь ап|1 с|еас6пд Р)ъ)А ьес)иепсеь йаз сопзго! депе ехргеяюп |и Ьо|Ь еи)сатуозеь апд рго)сагуотеь. Атпопд йе абчапзадеь оЕ йе де1 гетагбазюп аыау Еог йеье ригроьеь аге йе Годочппд. ° Брее|Г, ЫПЬ ьепьзтзч!ту, аи|Г |Гиспттатюи. решрзоп|о!е т!иап66еь оЕ ьециепсе-ьреобс Ь|псдпд ргозе|пь сап Ье Петесзес$ Ьу йе|г еЕЕест оп |Ье п|оЬздту оЕ а га6)о!аЬе!еъ) |а где| Р)ъ)А ечеп ъчЬеп ойег Р!ъ)АЬ|педпд ргозешь аге ргеьепз, аь, Гот ехазпр!е, ш а сгибе сеП ехзгасз. ТЬе де! гезагбазюп аяау сап Ье сопзр1езе6 ъчПЬ|п а Геъч Ьоигь ап|1 )ь йегеЕоге Ыеа! Еог шошзоппд йе рипдса6оп оЕ тгаиь-асбпд згапьспрзюп Гассогь ап6 о|Ьег ьециепсе-ьрес|дс Ь)пс!)пд ргозешь. ° Татдет ьез)иеисеь Гот а рат6си)ат РХА-Ьзит)зид ртотетп саи Ье Гт)еит))зет) Ги а т!хезГ рори)айви оГ ВХА Гтадшеп ох ° Сотр!ехеь Ьепчееп РХА-ЬГпзГ!пд ртоте)пь аизГ йезг заедет ьез)иеисеь сии оутеи Ье теьо)четГ ш|о ьечета! сотпропепзь йаз гедесз а1|егпапче ьзо|сЫопзетпеь, штегасбопь Ьезъчееп ьечега1 6)ЕЕегепт ргозешь, ог пш16р!е ргозешь соп|ре6пд Еог |Ье ьатпе яте.
° ТЬе тейозГ сап еаы)у Ье а|Гарте|1 Гот т)иаитзта6че з)ететш)иайои оЕ аььооа 6оп газе сопыапть, йяос|абоп газе сопьзапзь, соорегабчпу, аЬипбапсе, ап6 ьресзТзс)ту. Мапу оГ йеье рошть аге 6)ьсиьье6 1п дгеазег де|ад Ье!оъч. МесЬап!8|п оЕ Се! КеГагт1а11оп ТЬа| ргозеш-Р)ъ)А соп|р!ехеь пидгазе аь сдьсгезе Ьапбь ш де!ь ъчаь ипаптк)рате6 япсе йе Ьа1Е-Ие оЕ шапу сотпр1ехеь 6 |папуЕоИ йогзег йап |Ье 6ше гез)и)ге6 зо гип а де!.
Тъчо йеопеь Ьаче Ьееп ргороье|1 зо ехр1а|п ъчЬу ргозеш-Р)ъ)А сошр!ехеь аге 16пе6саду тоге ьзаЫе |и де1ь |Ьап ш Ггее ьо!итюп. ТЬе Пл| |Ьеогу ьиддеьзь ГЬас йе де! 6)тест!у аЕГесть |Ье йыосзатюп сопьзапз оЕ рготе)п-РХА сотпр1ехеь. А1йоидЬ |Ь|ь Ыеа ъчаь ьиррогзед Ьу еаг!у ехрептпепза! дата !рпед ап6 Сго|Ьегь 1981), ьиЬьеъ)иепт апа1уьеь Ьаче Еадеб зо сопдггп де1-тпе6)азе6 ьзаЬП|та6оп оГ ргозе)п-РХА сошр!ехеь.!пьзеай П ьеешь |Ьаз |Ье де1 ас|ь аь а ПеЬуПгазеб саде йаз ргечепп 61ГЕиьюп оЕ йяосзатед сошропепп. ТЬзь саддпд еГГесз пзашзашь ЫПЬ 1оса1 сопсептгаз|опь оГ йе согпропепо апс) еГГест)че1у т)пчеыЬе ецшПЬпшп оЕ йе Ьипо!еси!аг геагаос|азюп геас6оп зо |Ье пдЬ|.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
