Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 55
Текст из файла (страница 55)
!и 5(аПе 2, ГЬеае с!опед аге со(гапдЕес(ег) ач(ГЬ р1аяпкЬ епсог((пц (1) а р1аяп(41 сои(а(и(пд йе гагдег депе г(оъчпд(геаш Егош а пшшпа1 ргопго(ег ап11 (апг)еш!у аггапцег) ге(О ьег)пепси гагце( Пепе(д) апг( (2) а ьесопг( де1есгаЫе шаг)сег. !и йе ехашр1еа ргехепсе11 Ьеге, йе чесгог ро'1(2Н(д 19 пдег( го сопЕег йе Еггдг ье1есгаЫе гпаг11ег, ап11 РРСКРпго ргоч)г(еа (Ье десопг( хе1есгаЫе шаг(сег. Ойег р!аяп(439 саггу(иП хе!есгаЫе шаг)гегх шау Ъе пдег), епсЬ аа РТе(-ЯР!ке-)а)ео, чуЬ(сЬ сопЕегд пеошус!п геыдгапсе Яш апг( 5(ачпегег 1998). А!(егиаггче1у, РТе(-ГТА)с шау Ье со(гапдЕессес( чч(ГЬ (Ье ехргея(оп р1аяп(43 апг( а р1аяпи1 соп(ашшц а яиП1е ае1есгаЫе шаг1сег.
ТЬе сЬогсе оЕ арргоасЬ г)ерепг)д оп йе ЕеаяЬ1!пу оЕ дсгеепшП Еог йе ргойкгд оЕ ТЬе гагдес депея А1(ЬоиПЬ йе сопдеспг(че гпейо11 19 гпоге аудгешаг(с, ТЬе соггапдЕесг(оп Ргогосо! Ей Теггасус|гпе ал лхеди)агог оГ Гпг)ис)й)е Сепе Ехргеяуоп и Маплта))ап Се)31 ! 7.59 арргоасЬ гпау Ье Газгег 1Т а багга)дЬ)Гоглнагг3 зсгееп|пд шегЬог! Гог ехргеаа)оп оГ йе гагдег депе ь ачал!аЪ|е. 51аде 3 деасг|Ьеь йе апа)уяь оГ ехргеаяоп |п ггапхГесгег3 се3!х аз лче)! аа ап а)гегпапче арргоасЬ Гог 1гапяепг 1гапьГесг|оп. 51аЫе с)опеа ехргеаяпд 1ТА 3ог 1ТА л- гагдег депе )а! гТ со1гапьГесг)пд) шау Ье оЬ)а)пег! гп -32-)4 1|ауя Сепега)!у, ап аг)г)31)опа! 2 ччее)гь аге гег)и)гег) Гог ехрапяоп апс3 Гиг)Ьег 1еаг)пд оГ сапг)|с)а1е с|опек Яе)есг)оп, ехрапяоп, апг3 1еьг)пд оГ с)оиЫу 1гапзГогшег3 с!опек йаг ех|иЬ11 )пг)ис)Ые ехргеаяоп оГ 1Ье )агдег депе ич)! гег)шге апо1Ьег 4 — 6 ч ее)са оГ чгог)с.
А)гегпаг)че!у, яаЫе ггапхГогшапгь ехргеаяпд гпг)ис)Ые 1ТА пгау Ъе ггапяепг|у 1гапаГес)ег) чп)Ь ап арргорПаге гагдег депе сопьггисг. А|йоидЬ )пг)исг)оп оГ ехргеьяоп шау Ье )еаа г)гашаг)с, ехргекяоп оГ йе гагдег депеа шау Ье асЬ|ечес3 тлй|п 48 Ьоигя ТЬе Гсл))олн)пд ргогосо! 1чаь ргоч|г)ей Ьу Реппу Ялос)се11 апг3 Т)ач)13 дсЬагх 3Уа)е с)п)чегягу дсЬоо! оГ Мес))с)пе, )ч)елн Начеп, Соппесг)си1). ТВОЕ)ВЕЕВНООТ3)х)С ° ТЬе Ьаза! асйчгу о) гйе в)п)гпа! суготеда)он)гав рговогег наг)еа Ггогп опе сей йпе го апойег апг) гпау Ье аГ)есгег) Ьу Е)НА аег|иепсегяп йе геьропае р)оп)г) йаг ас| аь епйапсегь ог огйег гпогйл|агогь о! ггапаспрйоп.
Ве)оге сопа1гисйпд а г)оиЫе-ьгаЫе сей йпе, саггу ои1 ггапяеп1 )сапа)есг)оп ехрепплепВ го совраге йе Ьааа) асг)н)гу о) йе гшп|гпа| ргогпогег 'в опе ог пюге гагдег сей 3)пеь чх1Ь |йе Ьааа! асйч)у в а "ыапг)агс)" сей йпе еисЬ аз Не|а. )г)еа))у, йе Ьаха) ас|М)у оНЬе геьропае р)аыпк) айпи)г) Ье по дгеагег )п 1гапа)есгег) 1агде1 седа гйап |п 1гапа)есгег) Не)а седя ° Сагейл| ье)есйоп оГ с)опт ехргеаа)пд 1ТА 'ь еааепг)а! аа ь гйе еиЬьециепг ае)есйоп оГ "г)оиЫе-ьгаЫе" сей 3)пеа 'в чгЫсй ехргеьа)оп оГ йе депе о) )пгегеьг 'ь аг)ег)иаге)у соп1гойег|.
То оЫа)п ЫВЫу геди)агег) депе ехргеаа)оп, 31 п1ау Ье песеааагу го ье)есг с)опеа оГ се|В чнйеге 1Ле Тег орегагог, годегйег их|1Ь 31х гп|п|гпа| ргопю1ег, ь )пгедга1ег) )пго а 1гапьспр1юпа))у "я|епг" год)оп Фа1 печепйе)ея гегпа)пь ассеяйЫе го 1ТА 3Соааеп апс| Ви)агг) 1995). 5исЬ |п1едгайоп ечеп1ь саппо1 Ье аггапдег| 1о оп)ег Ьиг вихг Ье )с)еп131)ег) Ьу |па| апг) епог. Ночечег, гесйпк)иеь Ьане Ьееп г)еьсг)Ьес) 1о асгееп роро)аг)опа о) ггапа)есгег) се|В,|ог |онн Ьаха) ехргеая|оп апс| Ь|дЬ )пйлс)Ы)3)у иа|пд |Ье геггасус))пе-геди)а1ег) ргогпо1ег 3К)гсййо)3 е| а|. 1995).
° Н)дЫечед о) ехргеах)оп саппо1 Ье ехрес|ег| )п х)аЫе се|1 3)пеа йа1 ехргеаь 1ТА апг) аге йеп ггапх)есгег) ч31Ь а р)ахи)г) сопга|п3пд 1Е1 орегагог аег)иепсеь апг! а 1агде1 депе. Тйе Ыдй сопсепгга1)опт о3 р)аавк) избег) Гог ггапх)есйоп гпау !!!гаге а|3 о) 1Ье ана)1аЫе 1ТА, йегеЬу гег)ис|пд гйе ар рог| ипйу Гог Ь|псй пд оГ пнл|- йр|е гергеааогь 1о 1апг)ев орега1ог аес)иепсеь (Соааеп апс| Ви)ап) 1995). ° |и вапу сааея йе |ече! о) гагдег депе ехргехх)оп сап Ье сап)гадес| Ьу нагу)пд йе сопсеп1гайоп оГ еВес1ог.
Вохусус))пе-НС! а1 а сопсеп1га1юп о! 1 — 20 пфп) )п си|илге плегйигп В депегайу аий)с)еп1 1о |пасйчаге 1ТА 'в гпоь1 г)оиЫе-ьгаЬ)е сей йпея 17.60 СЬаргег 17: Апа!уг!г о) бепе Ехргеяюл т Си!гигег)Матгпа!гап Се!Ь СТАСЕ 1: ЯаЫе ТгапВтесйоп о1 Г1ЬгоЫаьЬ м71й рТе$-1ТА1е ТЬ18 а!аае оЕ гЬе рго!осо) г1еаспЬеь а тегЬог1 гЬас сап Ье иае6 еПЬег 1о г1епче агаЫе сеП Пиеа ехргеаяпа шг)исгЫе сТА а!опе ог сап Ье пав го соггапаЕесг сеП Ппеа япш1гапеоиа1у гч1!Ь Ъой рТег-гТА)г ап6 гЬе р!аяпЫ ехргеаяпа йе геггасус1ше-геаи1аге6 гагае! пепе!а). 1п !Ьга ргогосо1, йе р1аяпЫа аге 1псгодисес1 1пго М1Н-ЗТЗ сеПа ияпа са1сшт-рЬоарЬаге-гпеспасед агаЫе ггапаЕесбоп. ТЬеае ргогосо!а сап Ье абарге6 Еог огЬег сеП суреа ияпа йе ргеЕеггед гпегЬода оЕ ггапаЕесгюп апд ае!ес6оп 1ог гЬоае сеПа ГЕог ойег ггапаЕесгюп ргогосо!я р1еаке аее СЬаргег 16).
СеП 1шеа йаг агаЫу ехргеаа 1>огЬ аигогеаи1асогу 1ТА ап6 сагце! аепеа Ьаче Ьееп депчед Ьу яти)гапеоиа ггапьЕесгюп оЕ аП оЕгЬе р1аяпЫя ТЫыпегЬос1 гпау Ье Еаагег йап аег)иепг)а1 ггапаЕес6оп оЕ гЬе геггасус1ше-соп!гоПег1 р1аяпЫя Ьш 17 сои1г1 гег!шге асгееп)па тоге с!опеа гЬап гЕ агаЫе 1шеа гч)гЬ 1оъч Ьааа! агЫ Ь)аЬ 1пбисе6 1ечеЬ оЕ !ТА аге Ппп Пепчег1, апд аиЬаег)иепг1у ггапаЕесгеб ъч)гЬ р1аяпЫ8 епсо6)па йе гагцег аепеа.
ТЬеоге6саПу, Еог !Ье Пег)чаг!оп оЕ гЬеае с1опея апу сотЪшагюп оЕ ае1есгаЫе гпаг1сега аЬоиЫ гчог)с Еог сопаеси6че соггапаЕес6оп. МАТЕК1АЬЬ ВНЕЕег5 апг! йо1611оп5 Р1еаае аее Аррепгпх 1 Еог сотропеп!а оЕ 8!ос)г ао1и1юпя ЬиЕЕега, ап6 геадепгя Опи1е 8!ос)г ао)ипопа 1о 1Ье арргорпа1е сопсеп1га1юпа. СаО, Г2 м) 5геп!ые гЬе ао1пгюп Ьу 61ггагюп, апг! агоге гЬе 61!гаге ш 5-гп1 а1!грюга аг — 20'С.
Са)Е аегит Г70;4) СЫогос)иГле Г70 т67т!) ОР6опа1, р1еаае аее 5гер 7. Ргераге йе сЫогог1п!пе ш НгО, агеп!пе йе ао1пгюп Ьу 61гга6оп, апг! яоге гЬе Еаггаге ас — 20"С. СЫогоошпе аг 10 пг87гп! га ег7пгча!епг го 19 шм. Р!еаае аее гЬе шуоппа6оп рапе! оп СНЕОКОО!71)ЧЕ 01РНО5РНАТЕ ш СЬаргег 1г1. С)усего! Г75;4) и НЕРЕ5-Ьиууегес7 аа77ле НЕРЕ5-ЬиЕЕегес7 аабле РЬоьрЬаге-Ьийегег7 аапле Бпгугпе5 апс! ВНЕЕег5 Арргорпаге геялспол елсГолис7еахеГа) Р!еаае аее 5гер 2. 7х Тгурагл-ЕЕЗТА 0.059б ггуряп 0.5 гпм ЕОТЛ ГРН 8.0) 1762 СБартег 17т Апа1ут!т оГ Сепе Ехргетяоп т Си!тагес) Матти!топ Се!!т МЕТНО0 СетИгтге апг! ТгапдГес6оп оГ СеИд !.
Си1тиге аПЬегепт се1Ь Гп РМЕМ сошр1ете. ТЬе Пау ЪеГоге тгапаГест)оп, тгапаГег ГЬе се1Ь што РМЕМ сотпр1ете соптатшпд 0.5 рдГтп1 теггасус!тпе-НС1 (тесгасусПпе). Арр!у епоидЬ сеПа рег 10-сш сПаЬ ао йат оп йе дау оГ ГЬе тгапаГес6оп, ГЬе сеПз чтП! Ье 33% сопйиепт. А 1МРОПТАЫТ Егопч йь ро1пт оп, пча!пта!и седа 1п йе ргеаепсе о!0 5 рдтгп! тетгасус1ве-НС1 ат 37'С, !и ап атгпоарЬеге оГ 5% СО., ип1еаа ойепч!ае патей. 2. 1Ппеапге ГЬе р1аашиЬ ат ап арргорпате геяпс6оп епдоттис!еаае яте апт1 а6)иат тЬе Р)ч)А сопсептгатюп оГ еасЬ р!аяпЫ то >0.5 тпдуш1. М!х 10 — 20 Гтд оГ рТет-ГТА1с р1аяпЫ апт1 1 — 2 рд оГ рдчт2-Н)а Г-1О:1 гпо!аг га6о оГ Те! р1аяпЫ то ГЬе ае1естаЫе птаг1сег р1аяпЫ) чт)ГЬ 500 Гт! оГ НЕРЕ5-Ьийегед ааПпе !п а с1еаг 4-тп! ро1уяугепе тиЬе.
1Е йе тагдет депе Ь Ье!пд сотгаптЕестетГ Ппти1тапеопт1у, атЫ а РТет-Брдсе гесотпЬтпапт саггушд йе тагдет депе !п ап апюппт тЬат ы ет!шшо!аг то РТет-тТАГт. Ргераге а соптго1 Гог гпос!т тгапаГест!оп сопта1п!пд йе НЕРЕ5-ЬиГГегед аадпе апд по РЬГА.
АН оГ ГЬе гпосЕ-тгапаГестет! седа аЬоиЫ 6!е !и Ье Псдпе4гее РМЕМ сиота!о!од т-Ььт!6!по!. 3. АтЫ 32.5 р1 оГ 2 Гчт СаС1, то йе РГчГА п6хтиге. 1тпшесПате1у пих ГЬе ао1шюп Ьу депт!е чогтехшд. 5тоге ГЬе ао!и6оп ат тоотп тетпреташге, ппхшд и Ггош 6тпе то типе. А с!оиру ргес)рпате аЬои16 Готш очет йе соигае оГ 15 — 30 пипшеа. рог атЫт6опа! тГетадь оп тгапаГес6пд седа ияпд Сарои р1еаье тее СЬартег 16, ртотосо1ь 2 аптГ 3. 4.
Аартгате аП оГ йе гпе61иш Ггош йе 6)аЬеа оГ сеПа ргерагет1 тп 5тер 1. 5. Миг ГЬе СаС1,-РХА ргестр!Гаге а Гечч типеа Ьу ртрет6пд чч)ГЬ а Раатеиг р|ретте. Арр1у йе пнхтиге с1горчч)ае апт1 61атт!Ъите П ечеп!у очег йе сеП шопо1ауега. 6. 1псиЪате ГЬе сеПа ш ап атшоарЬеге оГ 5% СО, Гог 30 пипитеа аГ 37'С, госЫпд Йе р1ате аГтег 15 пипи!ее то епаиге ечеп сочетаде оГ йе Р!ч)А ргестрпате, 7. То еасЬ 6!аЬ оГсеПа, атЫ 10 ш! оГ РМЕМ сошр1ете соптатп1пд тетгасус!ше. 1псиЬате йе сеПа ш ап атгпоарЬеге оГ 5% СО, Гот 4 — 5 Ьоига а! 37'С. 1Е тЬе седа тчд! то1егате Ы сЫоготГшпе тпау Ье атГПет! ат тЬ!а типе то а Ппа1 сопсептга6оп оЕ 25 рм. ТЬе ор6тпа1 тпсиЪа6оп Ппте Еог иаптЕестюп тпау гагу Еог тПЕЕегепт сеП туреа 8.
Сепг!у аар!тате ГЬе шесПитп Ггопт йе се1)я АчоЫ еПагиртюп оГ йе ргес!рпате йас Ьаа аетс1ед опто тЬе се1)я 9. 5иЬ)ест Йе сеПа то а д1усего1 ьЬос)с Ьу атЫшд 25 гп1 оЕ 15% д!усего1 Ы НЕРЕ5-Ъийегеб ааПпе ччатшес1 то 37"С, йоге йе се1Ь Гот 2.5 пипитеа ат гоош тешрегатиге. АтЫ йе 81усего! Пгорчч)ае то йе си1тиге. 1т ь поггпа1 Еог седа то 1ооЕ когпеччЬат таддет! айег д!усато! тЬосЫ ТЬе иге оЕ сЫоготГшпе 1дтер 7) птау ЕигтЬет гет!исе сеП !птедпту, Ьит птау тгпргоче тгаптГестюп еГГ1с!епсу.
Ргососо! 8: Егаче 1: 5лаИе ТгапфесгЕоп оГЕЕЪгоИахгх лчЕЕЬ рТег-гТАЕ !7бЗ 10. Ахр!гасе сЬе ц!усего! ао1идоп аГсег ехасг!у 2.5 ппписея 'л'лгог)с с)и!сЫу, Ьесаые 81усего1 сап Ье чегу сохк со се1Ря Ехроялге со ЕЬе 81усего! ло!ис!оп сап Ье !исгеааед со 4-5 пдписеа со ордгиае йе сгаичЕесссоп еЕЕи с!епсу Еог сегсаш геяПеис ссП сурея Ал а 8еиега! ги!е, сепа лЬои!д Ье ьЬосссед Еог с!ле !олхея рапсод оЕ дгие йас аполчл ъигчЕча! оЕ -509о оЕ сЬе сепя 11. !пппейасе!у, Пепс1у, апд с)шс1с!у лчахЬ йе се1Ь Ьу асЫш8 ! 0 пл) оГ ЕлМЕМ соспр1есе сопла!и!08 сесгасусПпе.
1пппейасе1у гегпоче сЬе лпейшп слу ахрлгадоп апд гереас йе лчахЬ. 4 сМРОРТА!ЧТ Весаиье йе се05 сепд со десасЬ еая!у Егопл йе р!асе ассег 8!усего! сЬос!с, асЫ аП оЕ йе тейипз со а х!пц!е хрис оп йе р!асе. 12. АсЫ 10 гп1 оГ 13МЕМ согпр1есе сопсалп!п8 сесгасусПпе со сЬе сеПя апс! !псиЬасе СЬе си!сигех очегпл8Ьс ас 37"С. 13. Арргохппасе1у ! б — 24 Ьошх аГсег сгапхЕесс!оп, ахр!гасе сЬе лпейшп апд гер1асе и ъч!ЕЬ 10 пл) оГ ЕсМЕМ сошр!есе сопсаппп8 сесгасусПпе.
1псиЪасе сЬе си1сигех Еог а соса1 оГ 48 Ьоиш ас 37"С аГСег СЬе СгапаГесС!оп (!.е., СЬе япп оГ СЬе лпсиЬагюп Сипев лп 5Серх ! 2 апс1 ! 3). 5е!ес1!оп апс! С!оп!пе оЕ Тгап5Еесгес! Се!!5 14. Россу-е!8Ьс Ьоигх аусег сгапхГесдоп, рахха8е хечега! й!ис)опх оЕ йе сеПх лпсо хе1есс!оп тейшп сопСалпш8 ! 25 ЕЕЬ4 Е;Ьлхпйпо! апс1 0.5 )с8)ш1 Сеггасус!ше-НС1. СеП с1епядех аЬои1д гап8е Егот -! х !0~ со 3 х !О" се!Ь рег !О-сш р1асе. 1пс1ис1е хечега! р!аСех сопса!и!08-! х !О' се1Ьи 15.
АГсег !псиЪадп8 сЬе си1сигех лп ае1есдоп гпейшп Гог 4 дауя Геес1 сЬегп лч!сЬ а Гигйег 3 — 4 пл! оЕ хе1есс!оп плес1нпп сои!а!и!08 !25 рМ т.-йхс!д!по! апс1 0.5 Сл8/гп! сесгасус1лпе-НС!. 16. 55ЕЬеп со!оп!ех Ьаче Еогшед (сур!саПу айег -! Π— 12 дауь оГ хе1есПоп), гер1асе йе спес1шсп лч!ЕЬ ае!есс!оп плейшп сопса!и!пц 250 )сЬЕ Ъ-Ьладйпо) апд 05 )л8Еш! сесгасусПпе-НС1.
с,-Ылдспио! ы иоппапу сох!с со сепя ТЬе соисепсгас!оп оЕ !.-Ьслдйпо! !и йе ле!есдоп илейши Ь сЬегегоге га!сед оп!у аЕсег сЬе пшиЪег оЕ се!Ь ехргея!и8 р5Ч2-Н!л ас ЫПЬ !ече!л геасЬеь а соска! шая. 17. члгЬеп со!оп!ех аге иеП-ехсаЫ!5Ьед (ас с1ау !2-!5 оЕ ье!есдоп), де1шеасе йелг Ьогдегь Ьу дгаичп8 а слгс!е оп сЬе Ъопот оЕ сЬе си!сиге д!5Ь агоипд еасЬ со!опу. Ахр!гасе йе плейшп Егогп йе р!асе, апс1 р1асе а хсеп1е р!ахс!с с)олл!08 Нп8 оп сЬе р1асе со ялггоипс1 ап !пйчЫиа1 с1опе. Кереас сЫх ргосехх Еог еасЬ со!опу со Ье рк1сед. СЬоохе се!Ь Егош р1асех оп ччЬкЬ шйчЫиа1 со!оп!ех аге иеП храсес1 апс1 сап Ье еая1у с1!хс!08и!5Ьес1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
