Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 51
Текст из файла (страница 51)
ТЬе ргехепсе о! ехсе|ь АТР (еадх |о а десге|ье (и еплуте ас|М|у с)ие |о ацояепс (пЬ (ОеЕиса апд МсЕ(гоу 1984). Гог (Ьехе гетьопя 3| 'ь а цоод Ыеа |о де|епи(пе егп р(псаИу йе ор|(п ю сопсеп|гадоп (ог еасЬ сец 3(пе (ог Ьи((ег) ихед (и !исцег|ье аххауя ТЬе атоип| о( (исИегтье ехргееьед |и а (гапх(ес(ед сец (гоги а ц(чеп сопхлгис! ь а (ипсдоп о(|Ье х! о! йе ргоп|о|ег, |ычеИ |ь йе 3|(пел(сх о1 (исцетхе |пКЪ(А (гапх род, |гаих(ацоп, апд епхуте |игпоче 33|ие а| УЧЬ(сЬ йсцега|е ехргееьюп ь гпахипа( (о((оъч)пц (гапх(ес()оп сап Ье ах |йог| ах 16 Ьоигх ог а еь 120 Ьоигя дереп|Ипц оп йе сеИ 3(пе. 27А6 СБар(ег )7г Апа!ук(к о~бепе Ехргекк(ап (п Си1(игег(Матта(гап Се!Ь 6.
То акакк йе аааау, ш)еск 200 р! оТ 1ис(ГеПп хо1шгоп (псо (Ье 1шшпошекек киЪе апк3 шеахике йе 1(ПЬ( оикрик Ток а реПо6 ор 2 — 60 аесопг(а ас гоош кешрегакике. ТЬе орбппип 6те ок 338Ьк соИесбоп гпикг Ъе 6екеггп(пей егпр(псаИу ап6 ч66 6ереп6 оп йе куре ок сеИ скапккескед ап6 кЬе раг6си!аг киЪккгаке апд 1ис(уегаае епхугае гьед, 7. Меахике йе ге!а6че 1(аЬ( ипйа цепекакек3 (п еасЬ шЬе ап6 «1екегпебпе (Ье 1(пеак капуе оу йе аахау. ~Ле йе ашоип( оГ се11 1уааке рго(еш (Ьас ркок)исеа а кеаропае (п йе гп(к)к)!е оГ (Ье!(пеак капде (п хиЬаек)иепк акьауя ТЬ(а ашоипк ииИ чаку с1ерепеИпд оп йе а(кепд(Ь оу йе ргошокек Ье(па акийей ап6 ко а 1еааек ехкепс, оп (Ье ер(3с(епсу оТ кгапаГескгоп ш (п6(ч(6иа1 ехреПпзеп(я Ехркехх 1ис(Текаае ас6чКу аа ге!акгче 1(ПЬ( ипКа!шд оГ ргокекп ш йе се1! 1уааке. (х(АТ1х(Е РКОТОСОЕ: !)Я)х)С А 5С1Ь(Т1ЕЕАТ1ОЬ( СО())ч(ТЕК ТО МЕА5Е)КЕ КА8Е а6оп соипкег сап Ье иае6 (п р(асе о( а (ига!погпекег ко 6екеск ПИЬ( егп(ие6 Ьу йе ас(юп о( !ис((егаае пп (НИиуеп е( а1, 1988; Еи!соп ап6 чгап Негь 1993).
А аогпекчЬак Ь(аЬег аепя(к(ч((у 'ь с(а(гпед (ог ас(поип((пц очег Ыпбпогпе(гу (Н)П е! а!. 1993); Ьоччечег 1ис((егаче ачаауа гекрлге пюге 6гпе ччЬеп иа(пИ 6 оп сои пкег, НПиуеп ек а(. (1988) ге рог(ег( йа( йе (пкепя)(у ап6 И(пебса о( 1(ИЬ( его(ие6 Ьу )исИегале аакех ччеге аепа(3(че ко рН ап6 йе рагбси3аг Ьи((ег гье6 (п йе )уааке. И йе (ис((егале ачаау Ьи((ег гес- ед (п йе ргокосо) доеа пок у(е)д сопяяеп( епхугпе ас(ЫИу гпеалигегпепкя йеп аиЬа(1(ике 25 тм Тгь-рЬоарЬаке (рН 7.8) (ог (Ье а!усу!8!ус(пе согпропепк о( аП йе Ьийегя МеТЬок3 С Ргераге сеП 1уаакеа (тога (капа(еске6 сеПл аа беасг(Ьед й 3(ера 3 3 о(йе гпа(п ргокосо(.
2. Тгапа(ег ап а((г(иок о( сеП (ухаке !и а 1.5-гп) гп(его(иИе киЬе, ао6 1исбегаче агьау Ьийег (оПоччес1 Ьу (Ье 1исИепп ао(ик(оп, ап6 куле(г!у пбх йе (пдге6)епка Ьу аепбу (арр(пд ог чопех(па йе киЬе, кАг((Ып 10-1 5 лесопбл о( гп)х(п8 йе геаИепЬ, р(асе йе (иЬе !и а ас(п66акюп соипкег ап6 соипк (ог а 3-гп(пи(е 'вкегча1, иа(п8 еЬЬег а чрес(аПхе6 сЬаппе) (ог сЬегп(1игп(пеасепсе ог а Ьгоаб сЬаппе! (о г1екес! аП 1очч-епегау еп1ьаюпя И ь 'апрогкап( (о акапбаг6(ге йе Игпе Ьепчееп геаИеп( гп(х(п8 ап6 ас(пИПа6оп соипбп8, ал чапа((опа (п йь Игпе сап а(че гье (о 2-3",' Иискиа((опа (п (игп(пелсеп( )пкепя(у 04диуеп ек а1.
1988). 6 (Ье ас!п(П!ак(оп соип(ег Ьал а яч((сЬ (о (игп о(( (Ье со(пс(6епсе с(гси~! ().е., а хрес)а)ыег( сЬаппе) (ог гпеааиг(п8 сЬегп(!игп(пеасепсе), апс3 КЬь с!гсЫК 'ь Кигпе6 о(3 Ье(оге сои п((пд о( йе (ис((егале-соп(а(п(пИ (иЬе, (Ьеп йе соипь рег гп(пи(е 6е(ес(ед аге гйгесбу ргорог6опа) (о (Ье апюипк о(!исИегаае епхугпе ргеаепк (п (Ье а1х!иок о(сеП !уха(е (пбпих апу Ыап)г ча)ие оЬ(а(пед ччПЬ гпосИ(капа(ес(ед сеП (укаке). 1( йе со)пс(6епсе с(гсшк 'ь пок (игпе6 о6, йеп йе апюип( о( (ис!(егале епхугпе 'ь ргорог6опа! со (Ье ак(иаге гоо( о((Ье соипь рег гп(пике, ).е., Агпоига о( епхугпе = (сргп (п вагпр1е — сргп (п Ь(апП)1а ТЬе со(пс!6епсе с(гсЫ! (п а ас)п(36ак(оп соипкег !(п)ка 6иа) агпрППега (рЬокогпиИ(р!(ега) йак Пап(г (Ье с сЬагпЬег ап6 гесогд яешиПапеоих яапа)л (га6(оас6че десау) егп(пей Ьу (Ье чагп р!е, А 6еИгаба((оп оп!у соипке6 И И 'ь бекеске6 Ьу Ьо(Ь агпрППеь ак йе аяпе Игпе.
ТЬЬ гпейо6 о( 6е(ес6оп е!(пбпаке Игоип6 поЬе геаи13(пц (гогп акгау га6(акюп апд Ьеак. 'ччЬеп гпеааиг(па сЬегп(!игп(пелсепсе, йе сЬап Ьчо !(ИЬ(-егп(6(пц ечепь чКП оссиг Йпи(капеоиа1у 'ь ргорогбопа) ко (Ье сЬапсе о( Ьач(пд Ьчо со ечепимп пчо (пберепс3епк аег)еа о((окаИу гапг1огп ечешъ, а Йек)иепсу (Ьак ь безспЬе6 Ьу йе хк)иаге 1игп(пехсепк (п(епя(у.
ТЬия Ьу ка(к(пИ йе я)иаге гоок о( йе оЬхегче6 !п(епя)(у (сргп оЬ(а(пе6 ччЬеп 3 с(6епсе с(гсиП (а оп), (Ье ас(М(у о( 1исИегаче )п (Ье аагпр)е ь ассига(е(у оЬ(а(пе6. Рго(осо( б: г(ыау (огЕис((егазе т схггась о(Л4атта((ап СеЬ 17.47 АЕТЕК(ъ(АТ!ЧЕ РКОТОСО(а АВВАЧ РОК ШС(ЕЕКА5Е !(ъ( СЕЕЕ5 СКОЪЧ!(ъ(С (Ы 96-ЪЧЕЕЕ РЕАТЕ5 То (асй((а(е ЫВЬ-(ЬгоиВЬри( асгееп(пВ, (гапа(ес(ег( сейа сап Ье си((игег( (п 96-ъчей пйсгоййег р(а1еа апг( асгеепег( (п а (ипппопъе(ег сараЫе о( геагйпй (Ье аъаау гйгесйу (гопь (йе р(а(еа ТЬе (ойоъипд рго(осо( 'ь аг(ар(ег( (гопь опе хиррйег( Ьу Майо(о Май(5Ыта апг( Оач(г( Мапае(аг(ог( (Е(п(чега((у о( Техаа 5ои(Ьъчеа(егп Мегйса( Сеп(ег, Оайаа(.
СА((ТЮЫг Р(еаъе ъее Аррепойх 12 (ог арргорг(а1е Ьапг($(пй о( гпа(епа(а гпаг$гед ъч((Ь <! >. Аг(с($1(опа! Ма1ег(а$5 0.1 мАТР 50 тм СоА 10х Соге Ь06ег 500 вм !попе (РН 1.8( 80 тм тайпеъмт асе(а1е 2 гпм ЕОТА 10 гпМ (ис( епп (1-тегсаргоеейапо( < ! > РЬоьрЬа(е-Ьийегег(хайле (РВ5( (асх(пд са!оит апс( та5пеа(ит ъа((5 10% (ч(ч) тп(оп Х-100 Ме1Ьог( 1.
Ргераге (Ье (исйегаае аааау-(уа(5 Ьи((ег аа (ойоъча: 10х соге Ьийег 2 10% (гйоп Х-1 00 2 в( 10 тм (исйепп 1 т! 0.1 мАТР 300 р( 50 пъм СоА 200 Н! П-гпегсар1оегьапо( Ыо р( НО го 20 т( А 90-пчп си(юге дьЬ ъчй ргоиде епоийЬ се((ъ 1о (посЫаге (оиг 96-ъчей р(а(еа ЕасЬ р(аге гМИ гейи(ге -5 гп( о( (ис((егаъе актау-(уяь Ьийег. 2. 5ЧааЬ (йе 1гапа(ес(ег( сейа (Ьгее 1(теа ъч((Ь РВ5, 1арр(пй (Ье (пчеаег( р(а(е реп((у оп1о рарег (оъче(5 Ьеьчееп еасЬ ъчааЬ. 3. Аг(г( 50 р( о((ис((егаае аъаау-!уа(5 Ьи((ег (о еасЬ ъчей ог'сейа. Ачо(г( тай(пц ЬиЬЫеа (п Ейе ъче!Ь. (псиЬа(е (Ье р(а(еа (ог 1 пнпи1е а( гоогп (епърега1иге. 4. Меае иге !Ье ((аЬ( оыри1 (гот ейе геас(юпа (п а (ипипоте(ег ассоггйпц 1о ЕЬе тапи(ас(игега (па(гисйопа ТЬе ор(ипигп йпе о( йаЫ сойес(юп гпиа( Ье г(е(егт(пег( етр(псайу апс$ ъчй( г(ерепг( оп ЕЬе (уре о( сей 1гапа(ес(ег( апг( (Ье рапгси(аг аиЬ5(га1е апг( (исйегаае епауте иаег(.
Рго1осо! 7 Аюау аког Д-ца!ас1оыс1аье 1п Ех1гасЬ о1 Мамша!чаи Се!! ь т нг Е. сои )3-слслсгок!иляг скясг 5 огсгяс 0кго лк лн ~снпаяслг акгеакмск ш сгапкЬюсюп ятй !ек !НаП ес а!. 1983). 1п а сурка1 ехрепгпепс, а секс р1акт!6 сопса!п!гсц а еи)гагуос!с цепе ргопсосег Пп)се6 со САТ ог )ис!гегаке 1к сосгапкгессе6 шсо а гиапипаПап сеП Ппе чн)сЬ а ктаП апюипс ог а р1актЫ сЬас сопсашк сЬе !3-ца1ассокЫаке цепе Пп)сед со а ксгопц сопк6си6че ргогиосег.
Агсег а регюд ог" 6гие со ацогн ехргекк!огс, епхугие ассп66ек апсцпц !тот сЬе ехргексцоп ог секс апг) соисго1 р1актЫ аге Песегт)пеб ш сеП 1уяасек. Ву гцчЫшц йе атоипс ог" САТ ог 1ис!гегаке ас6чПу Ьу сЬе )3-ца1ассок)Паке асс!н!су, а погтаПхе6 ехргеккюп ча1ие сап Ье оЬсашед !р1еаке кее Ъе1очн). Соиксгиеск аге анацаЫе сЬас саксу сЬе )3-ца!ассокЫаке цепе с1очнпксгеат Сгот ргогпосегк сЬас ехргекк ксгопц1у гп а гнЫе напесу о! еи)гагуо6с сеП сурек (е.ц., сЬе Яг40 еаг1у ргопюсег, сЬе Коик кагсота н)гик !опц сегиипа1 гереас ргопсосег, ог сЬе )тте6!асе еаг1у гец)оп ргогиосег ог" суСотеца!он)гик; гог а деяспрбоп ог йеке р!акт!6к, р)еаке кее Р)циге ! 6-2 ш йе !пСгобисг)оп Со СЬарсег 16).
Вхсгасск ог токс сурек ог" еи!сиге6 таипиаПаи сецк сопса)п ге!аси е1у 1огн!ече!к ог епс1оцепоик )3-ца1ассок)Паке асс)ниу, ап6 ап !псгеаке ш епхуте асс)ч!су ог ир со 100-Со!6 сап икиаПу Ъе Пегесгеб Пиппц СЬе списке ог а Сгапкгес6оп. 'нгг)СЬ е)уогг, )3-ца!асгок!Паке сап а1ко Ъе ике6 ак ап гпсегпа) сопсго) сп сегсаш кресга1схе6 сеПк !е.ц., цш ерПЬеПа! сеПк ап6 Ьшиап етЪгуопк Ыбпеу 293 сецк) йас ехргекк Ь!цЬ епбоцепоик 1ече!к ог )3-ца1ассок16аке асс!ч)су. Весаике епбоцепопк В-ца1ассок!Паке ас6Ысу )к икиаПу пюге Ьеас-!аЪг1е йап йе Ьаесепа1 епгуте, а Ьеасшц ксер сап Ье икес) со е1пигпасе йе епс1оцепоик )3-ца1ассокЫаке асс!ч!су сн)61е ргекегн)пц сЬе Ьассепа1 асс)н)су ехргеккес) Поги йе сопсго! р!актЫ (Уоипц ес а1.
!993). 1п агЫПюп, исокс тапииа!гаи !3- ца1асгокЫакек аге аккос!аСе6 гн)СЬ йе 1укокогие апд СЬеге)оге Ьаче ап аеЫЫ рН орСипши. ТЬе Е. еоП епхуте Ьак а пеисга1 со кПцЬс!у аПгаПпе рН орсипши. ТЬе сопсг!Ъис!оп ог' сЬе игаиииа!саи епхуте сап сЬеге)оге Ъе гебисе6 Ъу саггушц оис сЬе !3-ца1ассок!Паке аккау ас рН 7.5. рог гигсЬег г)есацк, р1еаке кее сЬе )игогтас)ои раие! ои )к-СлслСуоясолке. 5ечега! 6)йегепс арргоасЬек аге икесом со погта1ие САТ ог осЬег герогсег епхуте асс!н)бек со )3-ца1ассокЫаке асс)н)су. !и опе арргоасЬ, йе атоипс ог ргосеш !и ш6)чЫиа! ехсгасск ргерагед !гипс а кепек ог' сгаикгессе6 се!В )к Пгкс теакигей ап6 САТ ап6 В-ца)ассок!Паке аге йеп аккауе6 керагасе!у ик)пц а ксапбагд атоипс ог' ргосе!п !и еасЬ аккау.
Р)пацу, сЬе САТ ассицсу )к поппа1схед со сЬе )3-ца1ассок!Паке ас6лсу. !п апосЬег гиесЬод, сЬе !3-ца! ассокЫаке ас66су гп а сопксапс чо1шие ог ехсгасс 1к С)гкс гиеакигед, апд САТ аккаук аге йеп саспенс ош игцпц атоипск ог' ехсгасс сопса!п!пц сЬе кате апюипс ог' )3-ца!аесок!Паке асс!н)су. А1сегпабне!у, ЬосЬ епгутаск аккаук аге сагпе6 ош ш а сопксапс но1ите ог' ехсгасс, ап6 сЬе геки1ся аге сЬеп погтацхе6 со а децпег1 1ене! ог" )3-ца)ассокЫаке асспцсу (!.е., йе агиоипс ог" САТ асс)н!су !к сцнЫед Ьу сЬе агиоипс ог')3-ца1ассок!Паке ас6ч- 17.48 Ргогосо) 7: Агкау Гог 3)-даГасгок(Иаке гл Ехггасгк оГ" Маиггиа((ал Се1(к 17п49 5Н40 епоап 5Ч4О р вкпа~ 5Ч40 а~род кч40 ~пооп кч40 ~пчоп 5040 епоап 5Ч40 р ярпа~ КН40 арпа КН40 ппгоп 5Н40паоп Е)СЕ)34Е 17-5 1)- а! Ъгес1огк 5огпгпапхег) Ьеге аге (Ье (еагогек о( р()-да! героггег чес(огк (Ьа( саггу (Ье сойпд кег)оепсе Гог 3)-да(ас(окЫаке. А)3 чес(огк )и (Ье кепек соп(а(п Л) йе ог(д(п о( гер)(садоп г(епчег) (гоги 61агпеп(овк рЬаде (11 ог)), (2) ап ог(д(п о( р)аяпЫ гер((садоп (и Е.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
