Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 48
Текст из файла (страница 48)
Яечега1 г!!гТегепг ааааа аге ача!1аЫе со шелоге САТ ас6ч1- су, иа!п8 ргосес!ига апс! ес)шршепг гЬаг аге ачаПаЫе !и пюя 1аЪогагопеа. Реар)ге Пв ч!гшея САТ !а пог ап п1еа! героггег )п аП с)гсшпьгапсея Ойег героггег ьуяеша Ьаче гЬеге1оге Ьееп грече!орег! ш ап ейогг го шсгеаье гЬе ьепяг1ч)гу ог" <$егесг)оп апг! со ехрапг! йе гап8е ог" сеП 1шез гЬаг сои!6 Ье паей аа Ьоьгь (гог геч)еччя р1еазе атее А!аш апй Соо)с 1990; Вгопаге!п ег а1. 1994; Сгойгепгх апг! 8сЬепЪогп 1997; Хау1ог 1999). ЕасЬ ог" гЬеье печчег героггег ауагепь иаеа а с66егепг шегЬог! ог г!егесг)оп апг! еасЬ Ьаз гН1егепг аггеп8гЬ~ апг! хеа!гпеааея ° ТЬе 6гебу !пс!гегам депе ргог1исеь 68Ьг ггош 1ис!гег)п 1и йе ргеаепсе ог'АТР (г!е чтгес ег а1. 1987; р1еаяе атее йе !пгогшаг)оп рапе1 оп ШС!ГЕКЛ8Е). Меазигешепга ог!ис!гегам ас6чПу гЬегегоге гег)и1ге а !шишогиесег ог 1н~шд ьс!пППагюп соипгег и!гЬ а!п81е рЬогоп-сопп6п8 17.30 1пггос(игл!оп Го Ршлосо!5 5, б, апс( 7 17.31 ТАВЕЕ 17-1 Сотрагьоп оГ Сопппоп1у ()5ей Вериг(ег Сепеа КеРОЙгек беяе' АичАпгАсе5 ЕЛ!5АОЧАЯГАСЕ5 пассосе !спеас гапае; ые оГ гасйо(со!орел; ссаЫе САТ (Ьассепа!) по епйодепош ас6чсгу; апсошагед ЬЬ)5А ачайаЫе й-аа!асгояс(асе (Ьассепа!) сче!1-сйагаслег(гес$ апс! алаЫе; ягпр!е со!опспеспс геайопгас аепяйче Ью- ог сЬепп!ппппеасепл аяауа ачас!аЫе епйойепоы аейчйу (шапппа((ап се!!5) ! псйегаае (6гейу) Ь(ЕЬ арессйс аспчссу; по епйоаепооа асйчсгу, Ьгоас! с!упаппс гапае; сопчешепс аяауа гес)о(геа сшЬсггасе (!осйепп) апй ргесепсе оГО апд АТР 1осйесасе (Ьассепа!) ооой Гог шеааог(пй(апа!уг(па рго(сагуол(с аепе ггапссс(рг(оп !ея сепг(г(че сЬап йгейу; пос ашгаЫе Гог спапппа!сап се)!5 Айса(спе РЬоарЬалаае (Ьцшап р!асепса!) гессе!ей ргогесп; спехрепяче со!опгпеспс апй Ь(цЫу аепя6че (ош(пеасепг аяауа ачас(аЫе епс!ойепоы ас6чйу ш лойпе се!Ь; шсегГег- епсе чс(ГЬ сошроопйа Ьеспа асгеепес! СТР ()е!!у65Ь) аоеойоогеасепг (по ясЬаегаге пеес!ес!); по епйодепопа асйч(гу; пшеапи ЧВСЬ а!Гегес( среслга! йоа!(С(еа ачас!аЫе гес(шгеа росс!сапа!ас(опа! шойсТссас(оп; !осч аепа(с(ч(су (по 5(апа! апср66сасюп) "й-Еьсчгоп гласе Ь Ггеооепс)у псес) ас а героссег ш р)апи ()еГГегаоп ! 987).
Гсерсосгаеес), п)сй регтияоп, Ггогп Гсау)ос ( ! 999 ОЕЬейег 5с)епсе). аЬГ1иу. Рог 5огпе ехрегипепь,!иссЕегаае ь а Ъеиег героггег йап САТ. ТЬе аааау Еог 1ис!Еегаае !5 гпоге Еепяйче апг! Ы йегеЕоге ргеЕеггег( ччЬеп а ччеа!г ргоиюгег ь апа1ухег( ог ччЬеп йе 1!пе оЕ си1(игег( се115 !5 лгап5Еесгег( сч(ЕЬ 1очч ейксепсу.
Ьис!Еегаае ь а15о ЕЬе героггег оЕ сЬоке ччЬеп апа1ух!па ргоиюгег5 счЬоае асл(ч(лу ь ЕЕосчп-гейи1агег! !и геаропле го а 5!Впа(. ТЬе Ьа!Е-!!Ее оЕ 1ис!Еегаае ш Сгаи5Ееслей се115 ь 5Ьог! (-3 Ьоигл) апг! (Ье епгугпаг!с асл(ч!Еу г!ес1!Оеа гар!с!1у а5 а сеял!! ОЕ г!оччп-гейи1ал(оп оЕ ЕЬе ргошогег. САТ, оп йе ойег Ьапй, !5 чегу 5(аЫе (Т >50 Ьоига) апг! шашгаш5 с(5 ЕО11 епхуша(!с роччег 1опй айег йе гаге оЕ сгапасПрйоп Ьаа Ъееп гег(исег! (ТЬошраоп ес а1.
1991). А)(ЬоицЬ !г ь роаяЫе го Ео!1очч ЕЬе с(!5арреагапсе оЕ САТ и5!па шКХА Ьу ргипег ехгепяоп ог пис!еале рголесйоп, (Ьеае аяау5 аге Еаг исоге 1аЬопои5 ЕЬап ЕЬоае гьег1 го с!иап6Еу 1ис!Еегаае асг!ч!Еу. ° Сгееп йиогеасеп! Ргогесп (брр) апг) Ь5 епа!пеегес! чаПап(5 аге ЕЬе Ьеа! попепхушаек героггег 5у5(еш5 !п олггепл иае. брр ь ип!с)ие ашопй чагюгь 1!ВЬЕ-еш!Ел!ОВ ргоСеш5 си Ье!Ой аигойиогелсепг, !.е., Ь гес!и(ге5 по ехоцепогь соЕаслог5 ог !пг(ерепг(епл аиЬ5(гаге5 Гог асл!Ч(лу. Могеочег, а5 !ь ргеаепсе !5 еая!у г!е(ее!ее( Ъу сиеааиПпй аЬаогЬапсе а! йе арргорПаге ччаче1епй(Ь, ЕЬе 5уагеш ргоч!г(е5 а пошпчаяче гпеап5 оЕ июпиоПпй героггег Вепе ехргеаяоп ли ЬогЬ йхег1 апг! 1(ч!Ое се115. Ноччечег, Ьесаиае ЕЬе йиогеасепг яйпа! ь пог ашр1!Есег! (ечеп ш аоше оЕ йе ЪПВЫег пшгап(5 оЕ брр), г1егесгюп гес(и!ге5 ЕЬа! ехргеааюп оЕ брр Ъе г(г!Чеп Ъу чегу 5(гопц ргоиюгег5 ог огЬег седл!а!осу е!ешепея ТЬе ию5! 5ресласи!аг арр1лсагюп5 аге ш ° бгосч(Ь Ьогиюпе ь 5есгегес! !псо йе гпег1иип, ЧГЬеге Ь ь еая1у г1елессег! апс! ассигасе1у срлапг!йег) Ьу а соиииегсла!!у ачас!аЫе гаг!!о!шшипоа55ау.
Ноччечег, ЕЬе гайопа1е Еог илий агосчгЬ Ьоппопе а5 герогсег ь Ъш1! оп ЕЬе аыширгюп ЕЬа! йе гале а! ъчЬ!сЬ Еесгегег1 ргогеш ассипш!аге5 сп ЕЬе гпег!(иш рага1!е15 (Ье гасе а! ччЫЕЬ ЕЬе депе епсог((пц йе ргерголе!п ь сгап5сг!Ъег( ш йе пис1еия ТЬь аааширгюп спау аеегп геааопаЫе, Ьи! и Ьаа по! Ьееп ргочеп ш а1! с(гсишагапсе5.
Весгегюп апг! ЕгапасПрйопа1 соплго1 1се а! оррояге епг)5 оЕ йе сопйпишп оЕ ечеп(5 (Ьа! соп56(иге депе ехргеляоп апй аге 5ерагагег) Ъу а 1агае пшиЬег оЕ 5(ер5, еасЬ оЕ счЫЕЬ гпау Ье 5иЬ)ее!ее( Ео сопгго1. Яесгел!оп спау Ъе а аоог( аиггойаге Еог ггагьсПргюп ш пю5! саае5, Ьи! ЕЬеге аге ягиайоп5 ш ччЬкЬ !! сеггаш1у Ы пог, Гог ехашр!е, сп се11 1!пе5 йа! Ьаче йеЕесь !и ЕЬе Еесгесогу ра(Ьсчау. 17.32 СГгаргет 17г Апаlугь оГ Сепг Ехртея(оп ги Си)гитег) МаттаБап Се1Ь Е!СОКЕ 17-2 Еоса1тха6оп оГ а 8(аЫ !п(е га(ед Тгапч епе апд РЬ Рго(е!п Ргодис( А депе епсогдпд а Гиа(оп рго(е)п согпроаед о( суап Г!иогечсеп( рго(е)п апг! а регохьогпа! Гагдедпд а(дпа! ъчач с!опег1 доъчпа(геапь Ггогп а сеггасусдпе-геъропяче е1егпеп( (ТКЕ) соп(гоП(пд а пдпипа! сугогпеда!оч(гиъ ргопъогег.
Еас орегагог аег(иепсеа Ггот (Ье Е. соЯ /ась депе ъчеге (осагег! ирягеагп о( (Ье ТКЕ. ТЬе сапа(гисг ъчаа ичег) (о (тапа(ес( ВН(С сеПя апг( а агаЫе сеП Ппе ъчаа ъе!ес(ег( йаг ехргеааег( суап Г!иогечсепг рго(е)п (топь 'в(едга(ед сор(еа о((Ье ггапздепе. ТЬе сЬгогпочогпа! яге о( (пседгаг(оп сап Ье г)е(есгег) (п ((че )псегрЬаъе седа Ьу (гапъ|епг ехргеъъ(оп о( а Гияоп ргосе)п сопа(аг)пд о( уеПоъч Яиогеъсеп( ргосе(п апг( (Ье (ас гергеяюг (Ьаг Ыос(а орегасог аег(иепсеа (р)еаае чее аггоъч 'и йе Ядиге).
ТЬе суап Яиогеасепс рго(е(п ехргеаъег( Яотп йе (гапчдепе Ь ъдяЫе (и регохьопъеа гдч(г(Ьи(ес( (ЬгоидЬоиг (Ье су(ор!аяп о( (Ье сеП. (РЬого ргочЫес! соиггеву о( ТочЫго Таи)гапъо(о [Н(гпе)! )па(доге о( ТесЬпо(оду, )арап) апг) ОачЫ !.. Яресгог (СоЫ дрппд НагЬог (аЬогагогу1.) йе п61Ьагюп оГ СРР аа а Гияоп раггпег го Го1!оъч (Ье ггапарогг, 1оса!Ьагюп, апс) Гаге оГ а гагдегед ргосеш (е.д., р1еахе аее Р)доге 17-2).
Рог Гигйег шГоппагюп оп брр, р1еаке аее Тяеп (1998) ап6 йе шГоппабоп рапе1 оп ОКЕЕН ЕШОКЕ8СЕНТ РКОТЕ)Н аг йе епг) оГ йь сЬаргег. ° ЕРЬоре гадд)пд ргочЫеа апогЬег гпейог1 го шошгог ехргеы!оп апд 1оса1иаггоп оГ рго(ешя А ъче11-сЬагасгеггхед ерпоре гад ехргехаег! аа рагс оГ а ргосеш оГ )пгегеаг сопГега пппшпогеасбчпу го а ъче11-сЬагассепге<1 ап6Ъог)у. ЕРЬоре сада сап Ье иаег) Ьой Гог пппшпо!оса1Ьа6оп оГ йе гагдег ргосегп апг) Гог г)пап()гайоп Ьу сошгпегсга11у ачадаЫе гаг)!оппшипоаааауя Рог ГшгЬег шГогшагюп, р1еаае атее (Ье ехсе!1епс геч)ечг Ьу )агч))с апс1 Те1гпег (1998) апг) йе ш1оппа6оп рапе1 оп ЕР(ТОРЕ ТАОО)НО. ЕресгТгс ргососо!а 1ог епд(пеег)пд Яаяоп сопаггисга ияпд ерьоре гадг апд Яиогеасепг ргоге)па шау Ъе Гоипг) гп СеПя А Еа(гота(агу Мапиаl (дресгог ег а1.
1998; СЬар(ега 71 апг! 78, гезресг(не!у) Т!сА)ъбРЕСТЮ!ъ) СОМТ(сО15 'ъ'ъгЬеп гпеаепппд (Ье еГГесг оГ ргошогега апг) епЬапсегк оп депе ехргеыюп, 11 ь еааепг(а) го шс1иг)е ап ш(егпа1 сопгго1 йаг ч611 гЫшди(кЬ ЯгТГегепсех )п йе 1ече1 оГ ггапаспргюп Ггош гИГегепсек )п (Ье еГГгс(епсу оГ (гапаГесг)оп ог ш (Ье ргерага6оп оГ ехггась. ТЬЬ соп(го1 ь Ьея асЫечег) Ьу соггапаГес6пд (Ье се!!к ъч((Ь ьчо р!аяп(6я опе р1аяпЫ йаг сагпеа (Ье сопа(гисг ипг)ег (пчеаг)даг!оп апс) апойег р!аяпЫ (Ьаг сопьбгигтче1у ехргеааеа ап ас6чьу (Ьаг сап Ъе аааауед пъ (Ье каше се11 ехггасгя Е.
соБ !3-да1асгоябаае Ь а сопъеп(епг епкуше Гог (ЬЬ ригроае апд гпейогЬ го аъаау (ЬЬ епкуше !п сеП ехсгась аге дезспЬе6 ш Ргососо! 7. Рго1осо~ 5 Меаыгегпеп1 от СЫогагпрйеп~со1 Асееву!1гапйега~е ~п Ех1гасЬ от Магпгпа1 ~ап Се!15 051 пд ТЬ! и-1ауег СЬгогпа1одгарйу т не еядет ехееямемть то мле аесислтоач Ресл ьег)ссенсю $п а еп)сагуос)с ргопюсег паес$ ргнпег ехсепа)оп со с)есесс сгапскг) рса оГ а чбга! йутЫше )с)паве репе йас Ьад Ъееп )п)ессес$ спсо Хепорссс оосусеа !МсКт8Ы апс) бачса 1980; МсКтВЫ апс) К)п8аЬпгу $982). А1СЬоп8Ь йе ргеча)1)п8 чсечгроспс ас сЬе сппе ччаа сЬас еп1сагуопс Вепеь ччеге ипроя)Ыу еотр!ех апс$ с!шсе Ьеуопс1 апа)уась Ьу тесЬос)а сЬеп ачас!аЫе (1есч)п 1974), МсКп)КЬс аЬоъчес$ сЬас сЬ)а чгаа пос йе саяе апс$)п хо с)осп8 )п)с!асе6 йе Ве!й оГ еп)сагуоск ргогпосег апа1уяс.
Тос)ау, спапу Ьппс)гес)а оГ ге8п1асогу е1етепса Ьаче Ъееп Ыепссйеб пяп8 чапа6опз оп Ь)а тесЬос)я апс$ а 1аг8е пшпЪег оГ ппс1еаг ргосе)па йас )псегасс ччссЬ сЬеае аес)пепсеа Ьаче Ъееп рппВед апс) сЬесг Вепес с1опед. Аь гпоге апс$ пюге !аЬогасопеь Ье8ап тарр)п8 еп)сагуос)с ргопюсегя и юоп Ъесате аррагепс йас а яппр!ег апс$ тоге гарЫ аяау сЬап ргппег ехсепь)оп счаь пеедес1 со спеазпге ргопюсег асссч)су. ОГ сЬе тапу ао-са!1ес$ герогсег 8епеь йас Ьаче Ьееп с)ече1орес$ со спеес сЫь пеед, йе Ьассепа1 епсуте сЫогатрЬеп)ео1 асесу!сгапаГегаае (САТ) апс1 йе Вгейу епхуте!пссТегаке $р1еаье аее Ргососо! 6) Ьаче Ьесоте йе пюя рорп1аг.
САТ са епсодед Ьу а рго)сагуос)с депе сЬас сопГега геа!асапсе со сЬе ап6Ьюбс сЫогапсрЬепко!. ТЬе епхуте сгапьГега ап асесу1 Вгопр Ггот асесу1-соепгугпе А $асесу1-СоА) со сЫогагпрЬепко1 апс$ йегеЬу )пасс)часес сЬе аЬ11пу оГ сЬе аппЬюск со Ыпс) со апс$)пЫЪсс рго1сагуобс г)Ьоаотес (Гог ГпгсЬег десас!я р1еасе атее сЬе )пГогтас)оп рапе) оп снсес$слменечсесс лСЕЕчСТкл$ч8ЕЕал8Е). Весапае йеге аге по САТ Вепеа ш гпапппа!)ап се!1я апс$ Ъесапае сЬе аыау Гог САТ епгутас)с асбчпу )с аепа)ссче апс$ гергос)пс)Ые, сЬе рго1сагуоск САТ Вепе Ьая Ьесогпе а рорп1аг герогсег оГ еп)сагуос)е рготосег опсрпс.
1п а сурка1 ехрегппепс, а Гга8тепс оГ еп)сагуоск РЬ)А )а р1асед прягеагп (5') оГ сЬе сос$)п8 ге8$оп оГ сЬе САТ депе апс1 йе геьп1$$п8 р1аяпЫ са сгапаГессес$ )псо псапппа!$ап сеПя АГсег а репой оГ сппе со а1!осч ехргея)оп оГ сЬе сгапьГессес$ депе, САТ асспбсу !а теаапге6 пяп8 опе оГ сЬе аыауь дескпЬед ш сЬ)ь ргососо1. 1Г сЬе аяау са вес пр соггесс1у, сЬеге чч$!1 Ъе а 1$пеаг ге!ас)опаЬ)р Ьесччееп сЬе атоппс оГ САТ аесс псу апс$ с!се 1ече1 оГ сгапьсг)рсюп оГ сЬе сгапаГессес) сопасгпсс. Ву та)с)п8 т пса6опа ш сЬе рпса6че ргогпосег РЬ)А Гга8тепс апс$ аяау!п8 сЬе аЪ|16у оГ сЬе птсапс сопасгпссь со йгесс йе аупсЬеяа оГ САТ ас6ч)су аГсег сгапзГесс)оп, и Га роя)Ые со бейпе ге8п1асогу аес)пепсеа )п сЬе Р!4А.
17.33 17.34 С)таргет 17л Апа!ултл о~бепе Ехргея|оп и Си!гигед Мапгта!|ап Седл Тлеар!се йе с!иапйадче пасите оу йе САТ аааау, Ь аЬои!д а1ъчауа Ье )терс |п пипт1 йас сгапасг!рсюп ь пос д|гесс1у шеааигед лп йе аааау апд сЬас рагашесега гшсЬ ах сЬе Ьа!И!Те оу йе САТ ргоселп ш а сгапалессед се11 сап !п))иепсе йе геял1ся ТЫа сопядегадоп Ьесошеа еарес!а!1у ипрогсапс ъчЬеп зсоппд Сот ялрргеаяоп оу сгапасдрсюп. АпосЬет росепс!а! ргоЫетп !а йас САТ асс!ч|су шау Ье депегасед Тгош сгапксдрь йас аге ассигасе1у |п)с!асед Ьой ас йе ргопюсег оГ !псегеас апт1 Сгош сгапасдрь !и!с!асед ас ессортс ясеа |п сЬе чессог (Еапдпег ес а!. 1986).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
