Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 45
Текст из файла (страница 45)
А сопСго! шсцЬагюп !а а!ао сагпес1 оцС СЬаС сопСашя по ехо8епоца Ратасе 1. ТЬе Вепопцс РХА Сгош йе Сгеагес) апс! сопСго! пцс1ес !а йеп рцг)6ес) Ьу рЬепоЬсЫогогогш ехтгас6оп апс1 !исцЪасесс чч)сЬ а геьспс6оп епхугпе. ТЬе Сга8шепса ог" РХА аге аерагасес) Ьу а8агоае Ве1 Ргососо! гЬ Марр!05 Р!хате-ВЬурегтепттсп е 5!тес 17.19 МАТЕВ!АЕБ САС)Т)ОЫ: Р1еаае аее Аррепепх 12 1ог арргорпате Ьапдппд ос татег!а15 таг!сед хиСЬ <1>. Вийет5 апс! Ьо!ойоп5 Р1еаае аее Аррепсах С 1ог сотропепта о1 атос!с ао!ибопя Ьис!егя апд РПите атосЬ 9010!!опа Со йе аррторпате сопсептга6опя Витуег А 50 гом ТпяС! !рН 7.9) с00 том ЫаС! 3 псм МВС), ! гом спсЬ)осЬгеио! 0.2 тиМ рЬепу!тпеСЬу!си!уопу! Йиот1т)е <! > 5соте Виссег А ас 4'С. АсЫ сПсЬгосЬгегсо! апо' РМВЕ со ВитТег А !иас Ьеготе иве.
ЕРТА !0.5 м, рН 8.0) Ейапоl суяа Ьиссег 50 осм Тп>С! !рН 7.9) с00 том КС! 5 осМ МВС!с 0.0594 !ч)ч) сароеап 5094 !ч)ч) а!усего! 200 шм В-шетсарсоесЬапо! < ! > 5соге !уяа Ьиуует ас 4'С. АгЫ !3-гоетсарсоейапо! со сЬе )уяв Ьийет )иаэс Ье1оте иве. РЬепоЬсЫогосогт <!> РЬоьрЬасе-Ьийегег) ьа!те сч!сЬоис са!сшт апс) таВпех!ит ьаlст 5Р5 Ьийег 20 том ТпяС! !рН 7.9) ! 00 шм СсаС! 70 гиМ ВЕСТА срН 8.0) 2% СМч) 5)75 5соге йе Ю5 Ьийет ас гоотп сегпрегасиге. геадептя е!ессгорЬогеяя сгапатеггес! со а тпешЬгапе 61сег, апсс ЬуЬпс1схес1 со а 1аЬе1ет1 ргоЬе с1епчесс тгош йе !агнес иепе. 1т'йе ртоЪе сотгеаропсЬ со йе 5' епд от сЬе цепе, сЬеп оп1у сЬе геаспс6оп тгаВ- гпепса апяпВ 1гош сЬас геВ)оп сч!П Ъе с1есессес1 Ьу сЬе ргоЪе ш сЬе по-РЫаке-! сопсго1.
!т РЬ)аде 1 счаа !пс1идесс ш йе )ппба1 )псиЬасюп апс1 а Ьурегьепяс!че ясе ех)аса !п опе ог гпоге от" сЬе РЫА сгаВшепса гесоВп!гет! Ьу сЬе ргоЪе, сЬеп госсет РХАа иоП Ье с!есессесс оп сЬе 5оийегп Ыос соггеароп6)пи со ттаВшепта сЬас счете с!еаче6 ас опе епс! Ьу сЬе геаспс6оп ептуше апс! ас сЬе осЬет епд Ьу йе Ратасе 1.
Ву ссесегшсп!пВ сЬе яте от сЬе доиЫу Ьеачеб РХАя сЬе роясюп от сЬе Ьурегаепя6че ясе сап Ье дес!исес) апс! сЬе 1осабоп от" а росепба! сопсго! ает)иепсе шГеггей ТЬе ехасс!осасюп от' сЬе геии1асогу геВ)оп сап Ье гпарред со счссЬ1п +50 пис1еосЫеа Ьу ияпВ ЙСТегепс гевспс6оп ептушеа апс! РгоЬея САг!сЬ адсПсюпа1 еттогс апт! сЬе иае от" йе ро1ушегаае сЬа!и геассюп (РСВ), йе роябоп от" а Ьурегаепа!с)че ясе сап Ье р!про!псесс со счссЬш а тесч пис1еосЫеь от йе ясе (Рте)уег 1992).
1п яипшагу, Р)х)аде ! Ьурегкепяспбсу шарр!пВ 15 ап ехсеПепс тпесЬосс со шар росепба1 геВ- и!аготу геасопа Ьой ъчиЫп апс$6)аса1 со а сагаес Пепе. ТЬе сесЬпсс)ие 15 еарес)аПу ивето! (!) )п йе еат1у стареем от' ргопюсег апа1уяа ъчЬеп йе 1осас!опа от сЬе геВи!аготу аес)пепси аге ипЬпосчп апд (2) 1п апа1 улпВ иепеа сЬас ехЫЬгс с!ааие-прес!Пс геВи1а6оп (тот 16гйег с1есаПа оп сЬе ас6с66еа апд рторегс)еа отРЫаье 1, р!еаае аее Аррепйх 4). ТЬе уоПосчспд ргососо1 опВ)патей сп ВоЬ Т) )апа 1аЬ- отасогу !'с)п)чегясу ог" СаИогша ас Вет1се!еу) апс1 счаа ргочЫес1 Ъу Тип Носу (Ти1агПс, 1пс., 5оисЬ 5ап Ргапс)асо, СаИогп!а).
17 20 СЛарсет !7? Апа!уия оЕ Сепе Ехргеяя|оп !и Си!?иге?! Матта!!ап Се!Ь ТЕ Тгурап В!ие г/уе /0.4% сн/н) Р?яьо!че аи арргорпасе аиюиис оГ с?уе ш РЬоярЬасе-Ьиссегес? яассие всйоис са?есши аид шаяиея?иш яа!и. Ясоге ?Ье яосисюи ас гоош сешрегашге. Епгугпея аМ ВиЕЕегя РА/аье ! 00!ийоп Ьи//ег ?О шм нереЯ-кОн Грн 7.9) <! > 50 гим СаС1, 50 шм МЯС! 5098 Гч/ч) Ясуеего! РА/аье ! ьо!ипоп Рс?исе а ртерагаиои оГ ЕХаяе-Стее Р?хаяе ! то а соисеистасюи оЕ ?О ииси/р! ия!ия РХаяе гп!ииои ЬиЕЕет.
Ясоге сЬе яо!исюи ас — 20'С. Оие ииЬ Ь дегсиес? ая йе ашоиис оГ РЬ?аяе сЬас се!с! еаияе а еЬаихе ?и А, оЕ 0.00?/иииисе/ис! оГа геассюи иыия а са!Е йуишъ РЬ?А яиЬясгасе. Ргогетаье К ьо!иг/оп Р?мо!че ртосешаяе К ас 02 ш8/ш! !и а яо!ш?ои оГ 50 тим ТтееС! !РН 7.9) аи4 ?00 гим ХаС!. Я?ого йе яо!Шюи си яшами а!ирюся ас — 20'С. /сА/аье ьо!ипоп Рияо!че а ргерагасюи оЕ Рмаяе-Етое И ?аяе ас а соиееииапои оЕ 0 5 шх/ш! ш ТЕ (РН 8 О).
СепЕгсЕоцеЯ апс! ВРЕогЯ 5огна!! Н!0000 гогот ог ег/и!на!еп? Яресса! Ех!осргпеп$ Яегеъч-еар сиЬеь /50 т0 5Ла/г!па счагег Ьайь ргеьег Со 50'С апг/ 55'С Ас!ЙЕсопа! ВеацепЕЯ 5сер !0 оЕ ?Л!ь рготоео! гег/и/геь ?Ле геаВепсь !!ьсег/ т СЛарсег 6, Ргосоео!ь 8 апс/ !О. СеПя апх! Тсяяоея Еи!сагуопе се/!ь Арргохииасе!у ?0я ее!!я ате теои?тес? рег Р?4аяе ! Ьурегяеия?ссч??у исарргиЯ ехреписеис. МЕТНО0 1. НагчеяС -108 се!18 6отп ьршпег си1?итеь, Ваь)сь, ог с!!яЬеь, апс) счаьЬ йе се1!ь Инке ъчЬЬ 25- ш1 а!ирюсь оЕ !се-со!с! рЬоьрЬасе-ЬиЕЕегес) яа!спе сч!?Ьоис са!с)иш апс! шаВпеь!шп ьа1п.
А!сегиаичесу, ?Е ясагииЯ ъий ГгеяЬ Вшие, Ьосасе сЬе иие?ет ая с?еяет?Ьес? си Ргососо! с, Ясер !. 2. ?хеьиьрепс1 йе се!1 ре11ес 6ош йе 6па! счай ти !.5 гп1 оЕ !ее-со!с! 1уяя Ьийег. !псиЪасе ?Ье се!18 Еог 10 пиписеь оп ке со а11осч се!1 1уь!ь со осеиг. 3. М!х а 10-С?1 а1!?1иос оЕ се!1 )уьасе счсй ап ес!иа! чо1шпе оЕ 0.4% Ттурап В1ие с!уе апс! ехатпше йе ьо)исюп ипт!ег а гп!егоьеоре ес!и!ррес! сч!?Ь а 20х оЬ!еспче. !.уьес1 се!18 апс! пис!е! са1се ир сЬе с!уе апс! арреаг Ыие, иЬегеаь ип1уьес! се!18 аге 1тпретшеаЫе со йе т!уе апс! гегпаш сгапь!исепс. Сопбпие йе !псиЬасюп оп ке ипс!! >80% оЕ се!18 аге 1уье?1. 4. Весочег пис1е! 6ош йе 1уьес! се!18 Ьу сепспйлВасюп оЕ йе ьиьрепь!оп ас 1300К (2500 грш !и а Яогча11 Н 1000В гогот) Еог ! 5 ппписея ас 4"С. 5. СагеЕ011у гешоне ?Ье ьирегпасапс апс! геяиьрепс! сЬе ре11ес оЕ пис!е! сп 15 ш1 оЕ !ее-соЫ ВиКег А.
С01!есс тЬе пис1е! Ьу сепст)Гилас)оп аь с)еяет!Ьес! 1и Ясер 4. Ртогосо! 3: Марртд Р//азе-1-Ьуретзепз/г/че бйез 17.21 б. Еезизрепс1 сЬе пис1еаг ре!1ес ш 4 ш1 оу ке-соЫ Вийег А. 7. 5ег ир а зепез ог Й1ийопз о/СЬе згапс)агс) Р)х)азе 1 зо1игюп (1/40, 1/80, 1/160, 1/320, 1/640, 1/1280, апс1 1/2560 си Ревазе сИис!оп Ьийег). 5соге сЬе Й1исюпз оп ке. 8.
ЕаЪе! а зейез оу сиЬез 1 сЬгоидЬ 9 апд асЫ 180 р! осгезизрепбеб пис!ес /гош 5сер б со еасЬ сиЬе. 9. То ТиЬе 1, асЫ 20 р1 о/ Ревазе ! Й1ийоп Ъийег сопСасгйпд по Ревазе 1 апс1 зсоге сЬе СиЪе оп !се ипй! 5гер 12, Ье1осч. То ТиЬе 2, асЫ 20 р1 ог Р)ч)азе! Й!ийоп Ъийег сопгапипд по Р)ч)азе апсс !псиЬасе аз безсПЬес1 1и 5сер 11, Ъе1очч. ТиЬез 1 апб 2 аге сопсго1з.
10. То ТиЪез 3 йгоидЬ 9, асЫ 20 р! о/еасЬ оссЬе ргодгезсбче Й!ийопз, ).е., со ТиЬе 3, асЫ 20 р! оу сЬе 1/2560 Й!исюп, со ТиЪе 4, асЫ 20 р! ос сЬе 1/1280 Й1ийоп, есс. 11. 1псиЬасе ТиЬез 2-9 Гог 20 пшшсез ас 37'С. 12. Тегпипасе йе геассюпз Ьу асЫшд сЬгее шйчЫиа1 айг!иосз оГ 16.6 р1 оу 0.5 М ЕРТА со еасЬ сиЬе, сч!сЬ чогсех)пд Ьессчееп адййопз. ччЬеп а11 оГ сЬе сиЬез Ьаче Ьееп сгеасед, асЫ 12 р1 оГ Е)ч)азе зо1ийои Со еасЬ СиЪе.
1псиЬаге СЬе геасСюпз сог 30 пппиСез аС 37'С Со а1!осч Йдезгюп о1пис!еаг ЕХА. 13. Ейдезс пис!еаг ргосеспз Ьу адйпд 40 р1 о/ ргосешазе К зо1шюп со еасЬ сиЬе. М!х йе зо!и- йоп депс!у Ъу рсресйпд йе ппхсиге ир апс1 с!оччп. АсЫ 100 р1 оГ 5Р5 Ьийег со еасЬ сиЪе апс1 ппх опсе псоге.
1псиЬасе сЬе сиЪез 1ог 16 Ьоигз ас 50"С чч!сЬ госайоп ог госЫпд. 14. АсЫ ап адййопа1 а!щиос ог 100 р! осргосеспазе К зо!ийоп апс) соппиие йе Йдезсюп гог а СигСЬег 2-3 Ьоигз аС 50 С. 15. Ехсгасс сЬе Йдезйоп пихсигез йгее сипез счссЬ рЬепо1:сЫогоуогш. Ве депс1е. Ргессрйасе сЬе РХА чг!сЬ сЬе ас1Ййоп оу 3 чо1шиез иске-со!6 есЬапо!, шсиЪасе Еог 30 ппписез оп ке, апс1 со11есг СЬе РХА ргессрйагез Ьу сеигпйадаСюп аг 1200д !2400 грпс си а 5огча11 Н100ОВ гогог) ш а ЬепсЬсор сепсг)Сиде. Ресапс йе зирегпасапс апд с!та!п йе 1азс дгедз ог ейапо! 6.ош йе шЬез оп а рарег сосче1. 16.
АсЫ 200 р1 оу ТЕ со еасЬ сиЪе апг) а11очч сЬе РХА со гейззо1че счссЬ госЫпд ог госайоп очеги!ВЬс ас 55'С. ~ !йЗРОВТАЫТ Ап ехгепдед )псиЬабоп )з тес)и)ген Сот согпр)есе зо)иЫ))гас)оп апд гесочегу ос йе 0Ыазе-Сгеагеб РЫА. 17. Ресегпипе сЬе А „оу сЬе гезизрепс1ес1 Р)ч)А апс1 езсииасе йе сопсепсгайоп. 18. Ейдезс сЬе РХА сч!сЬ а гезспсйоп епгуше(з), со11оччес! Ъу 5оисЬегп Ыосс!пд апс1 ЬуЪпйха- йоп аз с1езспЪес1 1и СЬарсег б, Ргососо!з 8 апс1 10. Еоасс 15 — 30 рд ог гезспссес1 депоппс РХА рег 1апе оп йе адагозе де1.
НУВСС101ХАТ)ОЫ РВОВЕ5 РЫА Сгадгпепсз ргобисеб Ьу РЫазе ! с)еачаде сап Ье ргезепс )п зиЬзсо)сЫогпесг)с гпазз ге)абче со сбе рагепСа! ипс)еачес! 6адгпепг. ТЬ)з з)гиаСюп сап апзе бие Со )псогпр)еСе с)еачаде о/ зепзШче з)Сез, )псогпр)еге оссирабол о/ а Ыпб)пд з)ге Ьу а пис)еаг геди)аготу Сасгог, )пгегсе))и)аг чапагюпз )п депе ехргеззюп, ог и4зеп и огЫпд и4)Ь сйзиез, бсе ргезепсе о/ 6)чегзе се!! )урез сч)сЬ 6)бегепс депе ехргеззюп рассегпз. гог СЬезе геазопз, Ь 'ь сгис)а! со изе Ыф-зрес)бс-асбпбсу габ)оасбче ргоЬез и~Ьеп гпарр)пд Ьурегзепягйе з)гез.
ТЬе зрес)бс асбн)су ос сЬе ргоЬе, аз бесепп)пеб из)пд гпесЬобз с!езспЬег! )п Аррепб)х 8, зйоиЫ Ье >5 х 10з сргп/)гд. 5)пд)е-зггапдед РЫА ргоЬез бег)чеб Сгогп ЬасСегюрЬаде М13 Сесар)аСез (СЬарсег 3, Ргасосо! 4) аге зепз)с)че Ыдб-зрес)бс-асбч)су ргоЬез сЬас аге согпр)егпепсагу со збогс гед)опз !-200 пис)еобг1ез о/ СЬе Сагдег РЫА). ТЬеу аге СЬиз )деа! /ог Ыф-геюЫбоп Ьурегзепз)С)ч)гу псарр)пд ехрегчпепбх 1722 СЬаргег $7: Апа|уяз оу Сепе 1сргеее(оп т Сидигег) Митта!(ап Се)(е СОЬ(ТКОЕ5 ЕОК ОЬ(А5е 1 НУРЕК5ЕЬ(51Т1Т(1ТУ МАРР1Ь)С АНег согпр|е(юп о(5оийегп Ыо(дпд апс1 ч(еиаИеа(юп о( йе ЬуЬг(6(ход ргоЬе Ьу аи(огаИ(одгарЬу ог рЬоерЬопгпад(пд апа|уыд опе ог пюге агЫНюпа) Ьапбе еЬои)с1 Ье яееп |п )апее соп(а|п|пд ОЫА 6)дех(ест ччНЬ ' ОЫаее |. ТЬеее ЬагкЬ аге еЬог(ег йап йе |п(ас(, ипИ(дех(ед ггадгпеп( Ие(ес(ед Ьу (Ье (аЬе!е6 ргоЬе, ихиа1- |у по( ае еЬагр, апд, югпеИгпех, по( ах (п(епю. ТЬеу еЬои(И по( Ье ргеееп( !и йе соп(го(е!асЫпд ОЫаю $ (ТиЬсь 1 апс| 2 | п йе рго(осо|).
д йе соггес( гапде о(ОЫ ье | сопсеп(гад опе ччае ию6, йе асЫ|и о па| ЬапсЫ ччд! Ье аЬюп( $п йе (очч епИ о( йе (дга6оп гапде, с|еаг|у ч(е(Ые |п (Ье гпк$-гапде, алИ !ое( Ы а Ьгоаб япеаг а( йе Ь|дЬ епг| о( йе гапде о( пис|ео1уИс епхугпе. ТЬе агпоип| о(06(аее 1 адсе6 (о (Ье пис|е| сап Ье (псгеахед ог десгееьеИ (о согпрепеа(е (ог ипс$ег- ог очег6!деедоп |п оп|ег ю оЬ(а|п 61е рег(ес| соетедс гееид. 56ее йа( арреаг а( ге|абче|у 1онч сопсеп(гадопе о(ОЫье 1 епхугпе аге югпедгпее ге(еггег$ (о ь "гпа|ог" х((ее, чнЬегеае (Ьоее йа( арреаг а( ЫИЬег епхуте сопсеп(гадопе аге |аЬе!ес| "пхпог" Ьурегюпед(не едее (е.д., р)еахе юе Тиал е1 а|. 1985).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
