Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 46
Текст из файла (страница 46)
То оЬ(а! п гехи де о( йд юг( гег)вгее йа| (Ье арр гор па(е геди 1асогу год(опе о( (Ье депе Ье ехагп(под млй ~ йе арргорпа(е ргоЬе. нНЬеп а(агбпд йе апа1уеь оТ геди|а(огу год)опе |п а пенн депе, Н 'ь а доо6 'к1еа (о ю( ир а яег(ее о( соп(го! геасбопе !и ъчЫсЬ а ОЫаее-1-Ьурегеепе|6че еде |и а соп(го! депе 'ь ехат(под едй а дедпед гегкпс6оп И!дех( ап6 ргоЬе.
16еаИу, 61е соп(го| депе хЬои!6 Ье геди)а(ед Ьу йе еате рЬуе!о!од(са( ечепь ах йе (агде( депе. ТЬе сЬо|се о( ргоЬсь е дои Ы Ье гпаИе чч(йои( ж хит(пд ччЬеге геди 1агогу юг(иелсее т!ИЬ(!|е, ТЬид ргоЬеа хЬои!с3 Ье Иее(даоса (о а1|очч ехап1|лабоп о( аП год!опх о( а (агде( депе. АНЬоидЬ гпох( геди|а(огу гед!опе оссиг !гпгпеИ(а(е!у 5' (о (Ье депе, Н ь по( ипсотгпоп (ог соп(го( хециепсее (о гоар (о йе ех(гете 5 '- апИ 3 '-ИапЫпд гед(опа о( а депе ог $п ап |п(гоп. ОЫеье-1-Ьурегюпы6не еде гпарр|пд юдеге (гогп юнега! |пЬегеп( ИгпНабопк 5та(! ОНА (гадтеп(е (<1 (гЬ) апе!пд Ного (Ье ас(юп о(ОЫахе оп а ипк(ие депе $п а сотр|ех гпагпгпа1ил депоте аге гИИсиН (о ч(еиадее Ьу Ыо(6пд апИ 5оийегп ЬуЬг(И(еадоп.
Гигйеггпоге, йеге 'ь а доог| деа( о( чапаИоп !и е(дпа) е(гопы ! Ье(ччееп ехрепгпепь. ТЬею ргоЫете сап июаду Ье онетоте Ьу иипд гпоге йап опе гегкпсИоп епхугпе апс| ргоЬе (п (Ье ехрепгпеп(д Ьу иь(лд гпоге (Ьап опе се|! юигсе о( лис!е| (е.д., ехргееи|пд апд попехргеее|пд се|!д айпи(а(е6 ог попедгпи(а(еИ се!!е, апд 6)Иегеп( се|1 !(пеи), апг| Ьу е(гпр1у гереа6пд еиссегь(и1 ехрег(гпепь. Ву ие(пд гех(псбоп епауте с$оиЫе сИдееЬ ал6 чаг(оие ргоЬез, Н 'ь рога!Ые со роеН)оп йе ипИ!дев(- е6 апс! с$!дее(ед ОЫА (гадтеп(е (п (Ье галде о( гпахопит гею!одоп (1 — 1 О 1гЫ оп йе 5оийегп Ыо(. |п агЫ)- (юп, йею соп6$$)опт а||оьч Ипе-е(гис(иге тарр!пд апд и|6гпа(е роеШовпд о( |Ье Ьурегюпы6че я(е оп (Ье, депе тар.
Ае теп6опес1 !и йе )п(гобисИоп (о йь рго(осо|, Ьурегеепедве и|(еа оНеп таг)г юс(иепсее йа( аге ~ )тропап( (ог (агде( депе ехргееи|оп. Опсе а Ьурегюпя6че а((е Ьах Ьееп 'к1епИИе4 (Ьеп Ь~ИЬег-гею!идол (есЬпк(иез юсЬ ая Ог(,ье (оо(рппбпд (Рго(осо| 1) апс| де! ге(агбадоп юхауе (Рго(осо| 2) сап Ье июд (о ~~ Иедпе йе рго(е)пх йа( Ь|пИ (о йе ОХА.
В%ел %ею гпе(ЬскЬ аге согпЫпег$ ччНЬ ехргегьюп апа(уюыыпд ! (гале(ес(ед герог(ег депее (е.д., р)еаяе еее Рго(осо(е 5-7), а согпр|е(е р(с(иге о( йе геди|агогу год(опе о( а /7.24 СЬаргег /7: Апа/уа/г о/ бепе ЕхргеЫоп т Си/гигег/ Мат таВап Се1Ь гег/п/гег/ го гаг/ю1аЪе1 1Ье паасепг К)х/А, апг/ ЬуЪпг/12агюп аЬоп1д Ъе сагпег/ опг Еог ехгепдег/ регюгЬ о/ Нгпе. ТЬе Г011охе/па гпе/ЬогЬ хчеге г/епчег/ /гого ргогосо18 ргочЫег/ Ьу Т)огогЬу Упап, Иапе /е1/пе14, апг/ Каг1 Ь/огпппегоп (а11 о/ 1)п/уега/гу о/ Техаа Яоп!Ьгееагегп Мег//са! Сепсег, /)а/1аа). МАТЕМАЕ$ А 1МРОКТАМТ А!! 1еа1 гиЬеа апг/ ао)ибопа гпиаг Ье ргерагег/ К/4аае /гее. СА/)Т1О)х/: Р!еаае аее Аррепг/1х 12 /ог арргорпа1е Ьапг/!!пав о/ гпа1епа18 гпаг/гег/ хе/1Ь <! >.
Вг/йег5 ап41 Ьо!1/111Рп5 Р1еаае аее Аррепг//х 1 /ог согпропеп/а о/ 8!ос/г ао1иНопа, Ьи//ега, апг/ геадеп/а. 01!иге 8!ос/г ао!иНопа 1о !Ье арргорпа1е сопсеп1га1!опа. СЬ/ого/оггп <1> СИ/ого/огпи/аоагпу/ а/соЬо/ <1> О/х/А г/епа/ига//оп ьо/и//оп 2 м ХаС! 0.1 м НаОН <1> Е/Ьапо/ С/усего/ хгогаде Ьи//ег 50 гпм Тпа-С! /РН 8.3) 5 гпм М8С! 0.1 гпм ВРТА !РН 8.0) 4058 /г/г) 81усего1 йоге гЬе Ьо//ег аг 4'С. НВВ Ьи//ег 10 гпМ Тгь-С1 (РН 7.4) 50 п м М8С!, 2 гпм СаС! 0.5 М ХаС! йоге гЬе Ьпйег аг гоот гетрегагоге.
/.аЬейпВ Ьийег 20 тм Тгп-С! !РН 8.0 аГ 4'С) 140 тм КС! 10 тм М8С!, 1 тм МоС1 2088 /г/е) 81уеего1 14 тм 13-тегсаргоеГЬапо! <1> 1 тм еаеЬ о/АТР, СТР, апг/ СТР 10 тм РЬоарЬосгеаг1пе 100 и8/пг! РЬоарЬосгеаВпе /г/пахе 0 1 им /пр)1/ТР 500-5000 )гС//пг! <1> /паг Ье/оге оае, а~Ы гЬе !ааг Вче /п8гег//епп апг/ 1геер гЬе ао!опоп аг 4"С. Ехегеье ехггегпе саге а/гег гЬе гаг//оасг!ге 1)ТР Ьаа Ьееп аг/г!ег/. НС/ (5 м) /ух/х Ьи//ег 10 тМ Тпа-С! /РН 8.4 аГ 4'С) 15 гпм М8С1 0.14 М г/аС! йоге гЬе Ьпйег аг 4'С. А/аС/ /2 м) А/аОН Ю./ м) <1> А/оп/г/е/ Р-40 /5% о/о) Ртососо! 4с Тгапзспрйопа! Пип-оп Аззауз 17.25 Гт7ис!е! чгазЬ ЬиГГег 20 шм Тпз-С! (РН 8.0 аС 4'С) 140 шм КС! 10 шм МЕС), 1 шм МоС) 209о (ч/ч) 81усего! 14 гпм 11-шетсаргоейапо) 5соге сЬе Ьийег ас 4'С.
!изс ЬеГоге изе, атЫ сЬе й-тпегеарсоесЬапо! со сЬе ЬиЕЕег йопс а сопсепсгасет) зсое)с зо!и!сои. РЬепо! <1> РЬозрйасе-ЬОГГегес( за!те ГРВ5! РгейуЬг(г((аас(оп/НуЬпг)!гас(оп зо!ийоп <1> НуЬгЫыайоп Ьийег сопсасшп8 ЕоппашЫе Ь Оепега11у изет) )п пие!еаг тип-оп аззауз, е.8., 50'уз (Ич) ЕоппашЫе, бх 55С, 5 шм зотйшп ругорЬозрЬасе, 2х ЕзепЬагт)с'з зо1ийоп, 0.598 (тч(ч) ЯЭ5, 10 )с8)ш! ро1у(А), апт) 100 )с8)ш! за1псоп зрепп ОНА (р!газе зее СЬаргег 6, Ргососо1 10).
2х йеасйоп ЬиГЕег 10 шм Тгсз-С.1 (РН 8.0) 5 шМ МЕС1с 0.3 м КС) ейоте СЬе Ьиг(ег ас 4чса )изС ЬеЕоге изе, атЫ 5 р! оГ 1 М г))сЬюСЬгессо1, 1ОО 01 оГ 100 гпМ АТР, 10 и! оГ 100 спм СТР, апс) 1О р) оГ 100 шм СТР со 1 тп1 оЕ 2х геаейоп Ьийет. ЙА)аз!и КЫаяп!з а Еепега!)сет) сепп Еог сЬе гас 1Ьег )С)ч)азе спЬсЬссог ргосе)п. Ргерагасюпз оЕ сЬсз епсугпе аге ачас1аЫе Егопс зачета) еопграпсез (р!еаза зее сЬе 1пЕоппассоп рапе! оп 1Л)Н)В1ТОК5 ОЕ $ИЧА515 сп СЬарсег 7). 5О5 (0.5;4 зч)ч) бх 55С 51ор ЬиЕЕег 50 шм Тпз-С! (РН 75) 20 шМ Е)7ТА (РН 8.0) 0.896 (тч)ч) Ю5 5соге сЬе Ьийег ас гоопс сешрегасиге. Т(ззие Лотойеп)лайоп ЬОГГег 1О тпм НЕРЕ5-КОН (РН 7.6) 25 шм КС1 0.15 шм зрепшпе 0.5 тпм зрегпиейпе 1 шм ЕРТА (РН 8 0) 2 М зпегозе 1096 (ч(ч) 81уеего) йоге йе Ьийег ас 4'С )изс ЬеЕоге изе ш 5сер 1, асЫ еййюйтессо! со 1 псм апт( ргосеазе шЫЬссогз (05 гпм РЬепу!гпесЬу1зи)Еопу1 йиогЫе, 1 08(гп! 1епрерйп, 1 08)ш1 рерзсаип, ог осЬегз аз пеес)ес)).
Тгурап В!ие г(уе (0.496 и Гч) Р(ззо!че ап арргорпасе ашоипс оЕ с)уе сп РЬозрЬасе-Ьийегес) за1)пе ълйоис еа!епип апг) гпайпеяшп за1ся 5соге сЬе зо1иьоп ас гоосп сешрегасиге. Епууспеб апе$ Войетб ОХазе зо!ийоп Ойзо!че 2 тп8 оЕ Кразе-Етое ОНазе (е.8., Ъгогс!Вой!оп) сп 1 ш1 оЕ 0.0025 сс НС!, 5096 (ч)ч) 81усего1. 5соге сЬе зо1ийоп ас — 20'С. Ргосе!пазе К Горйопай Вез!г!сс(оп епауте(з) Р1еазе зее 5сер 9.
Вайоас69ге Сопс роопе!5 !и-ззр!УТР (500 — 5000 РСгрт!) <! > Озе 100 РС( Еог еаеЬ загпр1е о! пие1ес со Ье тасйо!аЬе1ей !5ОЕАТГО|Ч ОГ !ъ!ГЛСЕЕ! ГКОМ Т155ГЛЕ 2. КасКо1аЬе1 |Ье пазсеп| КХА ггапзспргз !и |Ье 1зо1агед пис!е!. |САО1ОЕАВЕЕ|ЧС ОГ ТНЕ ТКАМСК1РТ5!Ч |ъ|ГЛСЕЕ1 15ОЕАТЕО ГКОМ СИТТЛКЕО СЕ|05 |ъАО1ОЕАВЕЕ|НС ОГ ТНЕ ТКА!ъ!5СК1РТ5 1Ч Н|ЛСЕЕ!15ОЕАТЕО ГКОМ Т!55|ЛЕ а. Ь.
с. Ргогосо! 4: ТгапзспрКопа! Кап-ои Аззауз 17.27 Пззесг апс1 пипсе 10 — 15 8 оу г!ззце. Ад)изг йе чо1шпе оу пипсед 1)ззце |о 30 ш1 ъч!|Ь |сесо!с1 г!ззце ЬопюВепиагюп ЬиКег, апс1 Ьопю8еп!хе !и а г!8Ьг-Кгг!п8 13оипсе Ьошо8еп!лег. То гиопдог 1уяз, ппх 10 )л! оу йе се11 зизрепяоп ъчпЬ ап ес)иа! чо1ише оу 0.4% Тгурап В1ие с1уе апс1 ехаш!пе |Ье зо1игюп ш|дег а писгозсоре ес!ц!Рред ъч)й а 20х оЬ)емче. Еузед се1!з |а1|е ир |Ье с)уе апс1 яа!п Ыие, ъчЬегеаз |и|асс се11з ехс1ис1е с1уе апд гешаш |гапз1исепг. Сопдпие |о Ьогпо8еп|хе |Ье г!ззие ипг!! >80 — 90% оу йе се!!з аге Ъго1сеп. И!цге йе Ьогпо8епа|е го 85 ш1 ъч!|Ь |се-со1д г!ззие Ьопю8ешхадоп ЬцКег.
Ьауег 27-гп1 а1!с)иогз очег 10-ш1 сизЬюпз оу ке-со!д Ьопю8еп|хаВоп ЬиКег ш и11гас!еаг ог ро!уа1- 1о|пег зъч!п8!08 Ьис1се| сеплпуц8е гиЪез. СепгпЬ|8е |Ье гиЪез ас 103,9008 !24,000 гргп |и а Весйпап ЯЪ'28 го|ог) Гог 40 пипи|ез а1 4'С. !Зесапг |Ье зцрегпагапг апс1 а1!оъч йе гиЬез |о сЬа!п ш ап шчег|ед роядоп Гог 1 — 2 пипц|ез.
Р!асе |Ье |цЬез оп !се. Кезцзрепд еасЬ ре11е| ш 2 ш! оу 8!усего1 з|ога8е ЪиКег Ьу р!Ре|6п8 |Ье пихшге ир апс1 доъчп. 10рдоиаВ |Лзе а |ают Ыас!е |о сга оГТ |Ье |ор ичо |Ь|гсЬ оГ йе |иЬе аи|1 р!асс |Ье Ьоио|и опе |1юд соп|зюю8 |Ье слцс!ел ои |се ЪеГосе ге*шреас|ш8 йе реПеь |и 8!уеего! з|оса8е Ье|Гес. М|х 10 )л! о1 геялзрепдед пис!е| чдй 990 !|1 оу 0 5% Ю5.
Меаялге |Ье О)3 |п а Т)ъг зресггорЬо|оше|ег апс1 Й1и|е гезцзрепдес1 пис1е| ъч!|Ь 81усего1 з|ога8е ЬиКег |о а Впа! сопсеп|га|юп оу 50 О)3 Йп!. 13!ч!сне |Ье ргерагаВоп оу пис1е! Впо 200-1|1 а1|срюгз !и 1.5-ш1 ш)сгоЬ|8е ГиЪез, |пар Кеехе йе а)!с)иола ш 1!с!ц!д пЬго8еп, апд |Гоге ГЬеш а| — 70'С. Ргосеед го 5|ер 2. Кешоче аз пшсЬ зирегпа|ап| аз розяЫе Когп 1Ье 1аз| ъчазЬ !5|ер 1с), апд гезизрепд |Ье пис!е) !и 50 — 100 )л1 оу 1аЬе1!п8 ЪиКег. 1псиЪасе |Ье пис1е| Гог 15-20 пипи|ез аг 30'С )и а зЬаРдп8 ъча|ег Ъа|Ь. .Къ ЪЧАКН1йС Ехегс!зе ех|гегпе саге айег йе гайоас6че |ЛТР Ьаз Ьееп аддед 1о 1Ье зо)ииоп.
'чъ|еаг 8!очез агк1 8о88!ез аид Ье саге|01 ио| |о согпагйпа|е ЬепсЬ зц|Гасез, е|с., |М|Ь й|з ЫВЬ- !у гайоас Вче зо)иВоп. Ре11ег |Ье пис1е! Ьу сепгпЬ|8аг!оп аг 8008 !1900 грш ш а 5огча11 Н1000В голос) !ог 5 пппи|ез |и а ЬепсЬгор сепгг|КцВе, апд саге|01!у д!зсагс1 йе зирегпасапг аз га|Коасдче ъчазге. Ргосеес1 го 5гер 3.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
