Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 50
Текст из файла (страница 50)
12. Ргераге а ТЬС сап!с сопса!п!пд 200 пс1 оЕ Т|С ю)чепс. Р!асе сЬе Т|С р!асе !п сЬе сап)е, с)ояе йе сЬатЬег, апд а11оъч йе яо)чепс Егопс со томе -7556 оЕ йе д!ясапсе со йе сор оЕ йе р1асе. А иигиЬег оЕ еППегеис Т!.С р1асея аид яо1чеиь еаи Ье ияед со яерагасе осе!у!асед Гогии оЕ еЫогагирЬеико1. Чче гош!ие1у еье еЫогоГогиигиесЬаио! 195:5) аид 5уЬгои 5П. СЕСЧ254 ЕБг!и)ягиаии) Т!С р!асея, ТоиеЬясоие ! ! 992) ргочЫея а Поод !исгодиедои со Т! С гиейо<Ь аид ггоийеяЛоодиВ. 13. Ретоме йе Т1.С р)асе Егопс йе сап)е апд а1!очч Ь со дгу ас гоогп сегпрегасиге.
Р!асе адЬеяче дос 1аЬе1я шаг)сед яч!ЕЬ гайоасдче сп1с оп йе 1"1.С р1асе со а1!Пп йе р!асе чч!ЕЬ йе 6г)т, апд Ршгосо! 5: Меагигетепг оу САТ гп Ехггасгг оГ Матта11ап СеГЬ Гухгпе ТЬт-!ауег СЬготагоегарБу 17З9 ГЬеп ехроае йе р1аге го Х-гау 61ш. А!гегпаиче1у, епс!охе йе р1аге ш а рЬоарЬог1шаВ1пд саххеье. 5гоге йе саааегге а! гоогп !егпрегагше Гог аи арргорг1аге рег1о6 оГ 6гпе. Во пог сочег йе Т!.С р!аге пЬЬ вагап ХЧгар, аг й!г сочегаае чВП Ыос!г ЕЬе ге1а6че!у ч еа!г гайа6оп епбггед Ъу йе "С !гагаре. 14.
Ггече1ор ГЬе Х-гау В!иг ап6 а11ап Ь гч11Ь ГЬе р1асе. А1гегпагЬе1у, ехроае йе сЬгошасоВгаш го йе ппаВег р!аге оЕ а рЬоарЬог1шадег с1ечке ог апЬ1есг йе р1аге го асапи1па. ТургсаПу, ЕЬгее гагПоас6че гроь аге Пегесгей ТЬе крог ЕЬаг Ьая ш!агаге6 ЕЬе 1еазг Пшапсе Егоп1 ЕЬе опа1п сопгьгх оГ попасегу!аге6 сЫогашрЬешсо1 ЕЬаг рагс!г1опед шго егЬу! асегаге.
ТЬе пчо Еахгег-ш!ага6ва хрог~ аге пюбгПе6 Еонлг оЕ сЫогашрЬеп!со! ЕЬаг Ьаче Ъееп асесу1аге6 аг опе ог йе огЬег оЕ пчо рогепг!а1 ягея ЬПасегу1агег! сЫогашрЬешсо1 шау Ъе Пегесгес$ ах а ЕЫгй ечеп Гаяег ш!ага6па хрог оп1у гчЬеп Ь!аЬ сопсепггагюпх оЕ САТ ог 1епагЬу !псоЪаг!от чпй сорюы ашоппь оЕ ех!гас! ргогеш аге ихой 15. То с!пап!!гаге САТ асг1ч1гу, сп! ГЬе га61оасггче аро!х Ггогп ГЬе Т|С р1аге ап6 шеаапге ГЬе агпопп! оГ гасПоасги6!у гЬеу соп!а1п Еи а 1Ес1616 хс1п611а!1ои сопи!ег (р1еаае аее Арреп61х 9Ь ГЕае апогЬег а11г1ио! оЕ йе сеП ехггас! 1Ггош 5гер 3 аЬоче) !о дегегш1пе гЬе сопсеигга6оп оГ рго!егп ги ГЬе ехггасг, пяпц а гар16 со1ог1ше!г1с ахаау, гшсЬ аа !Ье Вгабуогб ахаау. Кейке ГЬе сопсепггагюп оГ Тг1!оп Х-100 го <0.196 Ьу 611п!юп Ье!оге бе!егшшшц йе сопсепгга!юп оЕ ргогеги го ргечеп! гпгегЕегепсе хч11Ь ЕЬе аахау.
Ехргеаа гЬе САТ ас6чЬу аа ршо1ех оЕ асегу1а!ес1 ргосЬлсг Еогшеб рег ппЬ 6гпе рег ии!Идгагп оГ се11 ех!гас! ргоге1п. ТЫп-1ауег сЬгошасоагарЬу оп я1Ьа ае!х ЕоПохе6 Ъу ассар!па ап6 хсш60а6оп соопг1па оЕ йе гпогППе6 сЫога|прЬешсо! ргобпсь сап Ъесогпе г!шге гегПоих гчЬеп !агае пппъЪегя оЕ гагар!ех аге ргерагей Ап а!гегпаге шегЬод Еог г!оапг!гаг!па йе агооопг оГ ргодисс !и ГЬехе сахеа Ь го охе а рЬоярЬог!шааег со гсап ГЬе Т1С р1асеа. "!пгппяс" асегу1а6оп оГ сЫогагорЬешсо! |п йе аЪхепсе оЕ сеПи!аг ехггась сап сопгпЪше го Ъас!сагоипй !Е йь Ь а ргоЫегп, ггу десгеаяпа йе сопсепггабоп оЕ сЫогагпрЬепьо1 !и йе аяаух пчо- го ЕоогЕоЫ ГНеаг6 ег а1. !987Ь Рго1осо! 6 Аььау аког Ыси'егаье ~и Ех1гас~~ о1 Маттаиап СеИь | ис!ггклзг ь гни кгкоктгк сгнв от сно!сг !и гпапу 1аЪогагог!ез: Г1) ТЬе 1пс!Еегазе аззау !з июге зепз!г!че йап аззауз Еог САТ ог ойег соиппоп1у изес) героггег цепез.
ТЬе ехсерПопаПу Ь15Ь зепяПчЬу оЕ йе!пс!Еегазе аззау аПоччз апа1уяз оЕ ччеа)г ргогпогегз апг) пзе оГ япаПег апюипгз оЕ )3Ь!А апд сеПз !п ггапзГесг!оп згпг!!ез. !2) ТЬе аззау г)оез пог тес)шге йе пзе оЕ гасПоасггче гиасепа1з. Г3) ТЬе аззау !з!шеаг очег е!5Ьг огг)егз оЕ шакп!гпг)е, апг) япаП ашоипгз оЕ ггапзЕесгег) сеП 1узаге сап йегеЕоге Ье аззауег) Гог епхугпе асПчку апг) ччЬо!е сПзЬ-го-г)!зЬ сошраг!зопз аге шаг)е еаяег. Г4) ТЬе ЪпГГег пзег) со 1узе сеПз !з сошраг!Ые тч!гЬ ойег аззауз !ог шаг)гег цепез зисЬ аз САТ, ойег 1псгТегазе депез, апг! !3-ца!асгоз!г!азе, ччЫсЬ зппрППез йе ргосезз оГ погшаПхаг!оп, апг) !и зогпе сазез, аПоччз йе аззау оЕ гччо шаг)гег Кепез )и йе загпе аПопос оЕ сеП !узасе.
(5) ТЬе 1псйегазе аззау сап Ье сагг)ед опт ш 96-тчеП р!агез го Еас)1иасе йе апа1узез оЕ !агре пшпЬегз оЕ ГгапзГесГег) сеПз (р1еазе зее йе рапе! оп АстеКНАт!Че РКОТОСОг: А55Аг' РОК ШС!РЕКА5Е !Н СЕЫ5 СКОЪМНС !М 96-ЪЧЕ1с Р!АТЕ5 ат ГЬе епг! оГ йгз рготосо1). 1.ппппогпегегз ог згапг!агг) зсшППаПоп соппгегз сап Ье пзег! го г!егесг 1$Ьг ге1еазег1 Ьу йе асПоп оЕ йе 1пс!Еегазе епхуше. ОЕ йезе гччо, гиеазпгешепг чч)гЬ а зс!пППаноп соппгег !з шоге зепяПче (НП! ег а1. 1993) Ъиг геошгез гпоге гппе.
Мапу ЙГГегепг !урез оЕ 1ппппошегегз аге сошгпегсиП1у ачаПаЫе (Гог геч!етч, р1еазе зее 5гап1еу !992). А)гЬоиКЬ йезе г!еч!сез аге г!и!ге ехрепяче ($20,000-30,000), йе аззауз гЬегпзе1чез аге чету г)и!с)с, апс) Ь !з гЬпз изиаПу розяЫе Еог зечега1!аЬогагопез го зЬаге опе шасЬгпе. 1п гЫз ргогосо1, чче г!езсг!Ъе шегЬодз Еог йе пгеаз пгегпепс оЕ !псИегазе ехргеззег! Ггогп чесСогз СгапзЕестег1 што шаиипа1!ап сеПз Гр1еазе зее Р)рпе 17-4).
АгЫ!Г!огта! епхуше аст!ч!Г!ез, зпсЬ аз йозе Еог САТ, !3-Ка1асгоз!г)азе, апг) аПсаПпе рЬозрЬагазе, сап а1зо Ъе сПгесПу шеазпгег! гп сеП !узагез ргерагег) аз Пезсг!Ъег) !и ГЫз рготосо1. Рог а пюге согпр1ете г)езсг!рт!оп оГ !псгТегазе, р1еазе зее йе ш!оппагюп рапе! оп ПЗС!РЕКА5Е 17.42 1744 СЬарсег 17: Апа!уыил о/ Сепе Рхргегяоп и Си/гигег/ Матта/гап Се/!а МАТЕК!АБ Войеуц апд оо!и6опц Р!еаае аее Аррепд/х ! Еог согпропепса оЕ а!ос/с ао1иоопеч Ьи//егеч апд геадеппь И!и!е а!ос/г ьо!01!опа Ео ЕЬе арргорПа1е сопсеп1гасюпа.
Се// /уа/8 Ьи//ег 25 шм 81усу!ц!усспе (РН 7.8) 15 шМ МццО 4 шм РОТА 19о (ч/ч) Тгпоп Х-100 /иас ЬеЕоге ые, адд йсЬюйге!со1 Ьогп а 1 М а!ос)г ю!шюп со а цпа! сопсепсгадоп о( 1 псм. Арргохипасе1у 1 пс1 оЕ сец 1уяа Ьи((ег Ь пеедед рег 100-ппп йаЬ оЕ се)1а со Ье аыауес1. !ис/Еегаье азаау Ьиу/ег ! 5 гпМ рогааяшп РЬоарЬаге (РН 7.8) 25 шм ц)усу181ус!пе 15 псМ МццО, 4 шм ИСТА 2 шмАТР 1иас Ъе(оге ые, адд д!ЕЬюсЬге)со! Егош а 1 м асос1с ао1исюп со а цпа! сопсепсгасюп оЕ 1 псм.
Арргохииасе!у 400 р1 оЕ 1ис(Еегаае епхуше амау Ъи(/ег Ь пеедед рег!игпшошесег аыау сиЬе. 1ис/Еепп ао/ипоп 25 гпм 81усу!ц!усспе 15 шм М8504 4 гпм ЕСТА 0.2 шм !ис)Еег(п 1ия ЬеЕоге иае, адд ййюсЬгеао! Егопс а 1 м асос1с ао1исюп со а Япа1 сопсепсгасюп о( 2 шм. Арргохпиасе1у 200 01 о( 1иссЕепп ю1шюп Ь пеедед рег 1ши(попсесег аыау сиЬе. ТЬе адд)с)оп оЕ 1-2 им СоА со йе 1ис(Еег)п ьо!исюп иг)11 ргодисе а псоге !псепзе апд аысашед 118ЬС еш)я!оп (Ъ)гоод 1991). а !мроаТАйст икцепп ь а цепепс сеггп Еог аиЬасгасеа сЬас цепегасе ццм г Ьеп ассед ироп Ьу а йсцегаае епгугпе.
ТЬе гпоя согпгпоп )исцегаае цепе )и иге !ь 6едче6 Егогп сЬе цгеЯу апд асса оп а рагски)аг )исаепп юЬасгасе. ОЕЬег !исцегаае епхушея якЬ аа сЬоае Егогп йе аеа рапау (аепг//а гепаоппгз) ог сегса!п гпаппе Ьассепа, ые сбегп!са!!у 6!Е/егепс !исцепп гюЬасгасея Ма!се аиге сЬас сЬе !исцепп аиЬасгасе шед )и йе аЬоче Ьи((ег гпассЬеь сЬе !исаегаае цепе !псогрогасед !псо йе ехргем!оп р!аяп!д. РЬоьрЬасе-Ьиу/егег/ за//пе (Рйо) чг//Ьоис са/с/ит апг/ тадпеа/ит ьа//ь прес!а! Еееосрпсеп1 1иттотесег апг/ /иттогпе/ег аахау /иЬеа КиЬЬег ро/ссетап СеПц апд Т!ццоец Си//игес/ татта/сап се//а /гапьуес/ег/ ид/Ь (Ье ОА/А оЕ/и/егеас ТЬе се1! ь аЬои16 Ье !сапа(ессед (ияпц опе оЕ сЬе !сапа(есс!оп ргососо1а )п СЬарсег 1б) иг)сЬ а 1ис!Еегаае герогсег сапа!гас! (р!еаае аее Нциге 17-4) апд ап ехргеыюп р!аяпсд сопсашшц йе !)-ца)ассах!даае цепе (РСМТг-5РО!1Т-/)-ца1; р!еаае аее Р)циге 1б-2 !п СЬарсег 1б) ог апойег герогсег цепе ашсаЫе Еог погша1)а(пц сЬе гееи1са оЕ !ис)Еегаье аыау.
Ргогосо) б: Аллау Гог Гглс( егале т Ех|гасгл оГЛ4атта!Гаи Се!1л 1745 ОЕТ|МШНО ТНЕ МЕЙЕОЙЕМЕНТ ОЕ |ОЙ||ЕЙ|ЕЕ ЕМ|УМЕ ЕСТ|ЧЕТУ МЕТНО0 Ве(|чееп 24 аид 72 Ьоигх аГ(ег ггаихГесл!оп, лчааЬ йе се1!а 1Ьгее 1(тех а1 гооги (етрега1иге лч((Ь РВ5 чл(Ьои( са1с(ит апд тациеяит ха1|я А|Ы аид геточе йе РВ5 цеп(1у, Ьесасье лоте таиипа1(ап се1Ь (е.ц., Ьшпаи еп|Ьгуоик 1сЫиеу 293 се11х) саи Ье еая1у йхр1асед Ггот (Ье д)зЬ Ьу лцогось р(реп(пц. А)|ЬоицЬ 24 — 72 !юга| и|ау Ъе а |ур(са) реиод оГ |иие |о а1!о|ч |пах(ила! ехргеыюп оГ йе (ис|Гегаее цеие |п |гап|ГЙс|ед сй()е, р(еа|е еее |Ье со|и|иепыи йе раие1 оп ОРТ)М)23Ь(С ТНЕ МЕА5(ЛКЕМЕНТ ОГ ШС1ГЕКА5Е Е|4ЙЧМЕ АСТ)Ч!ТУ А|Ы 1 ги1 оГ ке-со1д се11 !уях ЬиГГег рег 100-гиги д)зЬ оГ сгаихГес(ед се1!я 5|ч!г! йе ЬиГГег цеп(1у апд хсгаре (Ье 1ухед се!Ь Ггот (Ье д(лЬ ияиц а гиЬЬег роцсе|иап.
Тгапхуег ТЬе се!1 1ухасе го а 1.5-|и1 т!сгоГице (иЬе. СепгпГице (Ье се11 !уха(е а| тахииши хреед Гог 5 пиишех ас 4 С т а т!сгоГице. СагеЬлПу (гаиаГег (Ье хирегиагапс |о а Гге|Ь 15-т) писгоГице тЬе. Ре(епшпе йе сопсепгга(Ып оГ рголе|п |и йе!улаге ияиц а гарЫ со!огипе(пс агьау, хисЬ аа (Ье ВгадГогд аеьау. Ведисе |Ье соисеи|гадои оГ Тп|оп Х-100 |о <0.1% Ьу д)1и((ои ЬеГоге де|епп|шиц йе соисеи1гаВои оГ ргоге|и (о ргечеи( |и(егГегеисе |чКЬ (Ье а|ьау. ТЬО сец 1у|а|ее гиау Ъе ||огед а| |30| яер а| яиаИ ЙЬИиоь а| — 70'С.
А)г!юицЬ йй 1ис|Гега|е В |лие|аЪ)е |ЧЬеи ||огед а| 4 С ог — 20'С |и |Ьь 1уя| Ъис(ег (Вгаяег е| а!. 3989), йе еихуюе саи Ъе Йа(О)у ||Огед а| 4'С |и (уяе ЪОГ(ег соига(и(иц 35% (члч) ц)усего! апд 3% (чт(ч) Ъолпе |Опии а)Ъипип. Тар (Ье яде оГ (Ье гиЬе соп(а!и(иц йе )уха(е (о цеи(1у т(х (Ье сои(еи(я А|Ы 5-200-р! а1!г)ио(х оГ сеП 1ухасе |о (ид)ч!диа1 1ипипоп|е1ег (иЬех сопса|птц 360 р1 оГ 1ис|Тегахе аеьау Ь~лГГег аг гоогп (етрега1иге. Р!асе а (иЬе |и йе!ииииоте(ег.
Аи а1|егиадче |о ияпц а )шп(пои|Олег |о |ига|иге йе )исеуегаее епхугие асил|у ь рге|еп|ед |п йе раие1 ои АЕТЕК(9АТ)ЧЕ РКОТОСОЕ: (35)НС А 5С!39Т)ПАТ)ОЪ( СО()39ТЕК ТО МЕА5(ЛКЕ Е(ЛС)ГЕКА5Е. 4. 5. ТЬе (гпрог|апсе о1 ччог(г(пц (и йе Ипеаг гапце о(йе (исцегахе агьау саппо| Ье очесе|и рЬаа)лед. А ичо!оЫ ! д(((егепсе (и яцпа( Ьеичееп Ьчо епгуте ргерагаИопх аххауед )и |Ье поп((пеаг гапце сап (гапх(а(е (п|о а ! 1004о1д д(3(егепсе |ЧЬеп йе хате ргерагацопх аге аеьауед (и |Ье 3(пеаг гапце.
Еог еасЬ (гапх(ес(ед си(-: йге, || (х (и|рог|ап| |о еяаЬИТ Ь (Ьа| йе яцпа! оЪ|апед ь ргороиИопа1 |о йе чойп|е о( !ухасе аддед |о |Ье, аеьау. Еух(х о1 се)В Ъу (геелйц апд (Ьачч(пц ге| иИТНп йе (пас||ча|юп апд (пе8)с(еп( гесочегу о( (исцегахе (Вгаяег е| а1. 1989). Еог йь геахоп, а ЬиГ(ег сои|а(п(пц а попюп(с де|егцеп| еюсЬ ах Тп|оп Х-100 'ь сьед |о (ухе 3 йе р(аяиа тепзЬгапех о! (гапх(ес(ед се)В апд Со ге(еахе с)аор(ачгп(с (ис((ег|ье.
АС |Ье сопсеел(га((опх о( ' де|егцеп| ихед, |Ье пис(еаг п|егпЬгапе геша(пх )п|ас( апд доех по| ге(еахе сЬгота((п (п|о |Ье сец ТЬе сопсеп|га(юп о( АТР ге|!|Игед |о оЫа(п тахииип| 1исцега|е асбед(учапех дерепд(пц оп йе се (гапх(ес(ед. Гог ялкапе се(!я хисЬ Еь НерС2 сеИВ йе орИ |пот сопсеп|га|(оп о( АТР (и йе ах|ау 'Ь (Вг|ыег е| а1. 1989), и|Ьегееь (и ойег сеИ 3(пех хисЬ ах гпосье 3 сеИВ |Ье ордтип| 'ь 0.3 гпМ (Ъ(ци а). 1988).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
