Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 52
Текст из файла (страница 52)
со)Г (ои), (3) (Ье ог(д(п о( гер((са(юп (ог 5Н40 йа( а))оъчк гер)кадоп )и гпагпгпа)(ап се)35, (4) ап агар(с(33)п гек)к(апсе гпагЕег (Атра) Гог ке(есИоп )и ргоЕагуогк се)35, апг( (5) а ро)у(А) агЫйоп к(дпа) )оса(ег! 5' о1 ГасУ (о гег)осе йе ЬасЕдгоипг) о( геайЬгоодЬ (гапкспрдоп Ггопь ирягеаиь кег(иепсек. ТЬе кег)попсе о( (п(егея (к с)опег( (п(о йе гпо(()р(е с)оп)пд я(е (МС5) а( йе 5 ' епг) о( (Ье Гас7 депе.
(А) р(3-да)-Вак)с (ас(ък еи(ъагуо()с ргоию(ег апг( епЬапсег кег)оепсек. ТЬ)к честг пъау Ье окег( ак а педа(гне соп(го3 ог ак а чеЬк(е го сЬагас(ег(ге с)опег) ргогпо(егк. (В) р()- да)-ЕпЬапсег )ас(ък йе 5Тг40 ргогпо(ег, Ьв( соп(а(пк (Ье 5ъг40 епЬапсег. ТЬ(к чес(ог сап Ье вкег( (о к(оъ(у с)опег) ргопъо(ег кег)оепсек. (С) рр-да3-Ргогпогег )асЕк (Ье 5Ъг40 епЬапсег, Ьог соп(а(пк йе 5ъг40 ргогпо(ег. ТЬ(к чес(ог сап Ье окег( со к(ог)у с(опег( епЬапсег кег)оепсек. (О) рр-да)-Соп(го( соп(а(пк (Ье 5Ъг40 еаг)у ргогпо(ег апг) епЬапсег, ТЬ(к чесгог сап Ье окег) ак а роядче сопгго3 ог ак а ге(егепсе ъчЬеп согпраипд (Ье ас(МПек о( 43(((егеп( ргогпо(ег апг( епЬапсег е)епъеп(я (Мог))1(ег), ъчо(Ь регги)кк(оп, Поги С$.О)4ТЕСН.) г(у).
ъ'ъг((Ь когпе таг)оег депек кисЬ ак 1ыс(1егаке, йе атонии(к оЕ 3)-да1ас(окЫаке аиг) 1ис(1егаке йа( аге ргекеп( (и (Ье кате адг)ио( оК сеП 1ука(е саи Ье г)егегт(иег( Ьу ик(пд 43111егепс 1ит!иексеи( киЪ- яга(ек к)пои!Гапеоок1у. Т)Пк ргогосо! 4)ексг)Ьек йе г(егесг(оп о1 !)-да1ассокЫаке ехргеккес( Егот герогсег нес(огк (р1еаке кее Р(доге 17-5) (гапк1ессе43 10(о таитоа1(аи се!)я ТЬе аккау г)ексг!Ъе<3 35 Ьой ягпр!е аи41 гарЫ аиг) сап Ье сагг(ег) оы( ок(ид а ч)к(Ые 1!дЬ( крее(горЬо(оте(ег. Р1еаке по(е (Ьа( кечега! гиапи1ас(игегк кеП Ы(к (Ьа( сап Ье икег) (о аккау Д-да!ас(ок(смаке )и еи1сагуоПс сеП 1укагек. ТЬе ачегаде сок( о1 а яид1е геасПоп 35 (ур!саду <1 г)одаг.
Мапу о1 (Ьеке 34335 сои(а)и йе кагпе Ьи11егк Пк(ег) Ьеге аис( аг)Ьеге с1оке1у (о (Ье ргососо1. Ноъчечег, коте Ы(к да!и а сдкПис( аг)чаи(аде Ъу сои!а(и)од а сеП )уяк Ъ|л11ег ънЬ!сЬ аПоъчк иш!ПР1е еиауте ас(пиПек го Ье аккауег), !ис1ысдид Д-да!асгояс(аке, САТ (Рго(осо) 5), аиг( 1пс(1егаке (Ргогосо1 6).
1750 СЬаргег 17: Аиа!угь о) Сепе Ехргеьгоп т Си1гигег( Магита)(ап Се11г О ХРС (о-п!!горЬеиу)+О-Ва1агЕоругапоаЫе) ь|Ье тоя ччЫе)у иаег) юЫга(е |и аааауа Гог П-Ва)ас(оа с аае |и Ьас(епа! апг) еи)яагуп()с се)3 1уаа(ея ОНРС ь со|ог1егь Ьи( оп Ьуг)го)уа)а у(е)г(а и-п((горЬепо) |Ьа| ь уеПои |и а))са))пе ю|иВоп (Х 420 пгп а) рН 10.2), ч1гЬеп ОНРС ь )и ехсеая |Ье ОО о( (Ье агьау ю|иПоп )псгеаа| еа Пиесу аа а йпсбоп оl Пгпе апс1 епхугпе сопсеп(гаиоп (Еег)егЬегВ 1950; Йеа1пп е| а|.
1955; Рагг)ее е) а|. 1959; МИег 1972, 1992). ТЬе геаг Поп сап Ье а(оррег) Ьу аг(г))пц а сопсеп(га(ег) ао)иПоп оГ Ха СО, ччЬЫЬ аЫйа )Ье рН Ео -11, )пас()ча(еа П-Ва)ас(оаЫаае, апг) гпах)т)хеа ЕЬе аЬаогЬапсе о( о-п!(горЬепо! а! 420 пгп. )ч1АТЕК1АЕ5 САЕ)Т1ОЬ(: Р1еаае аее Аррепг|)х 12 1ог арргорпа1е Ьапг|1|пд оГ гпа1епа18 гпаг)гег3 ми| Ь <1>. Вийег5 ап(1 Ьо1и6оп5 Р|еаае аее Аррепйх 1 Гог сотропепи оГ 81ос)г ао1и1|опа, Ьийега, апг3 геаееп(а.
333!и(е а(ос(г ао!ииопа 1о 1Ье арргорпа(е сопсеп1гаиопа. 700х МВа" ю/ипои 03 м МПС|, 4.5 М П-гиегсаргоеГЬапо| (! > )гьг ЬеЕоге иае, аг)г) ап арргорпаге агиоипс оЕ П-пгегсарсоегЬапо| Егош а 14.7 м яос1с. А)а СО, (7 м) Р|аю!че ) 0.6 8 оЕ ЕЬе апЬудгогь ао|Ы ш 100 ш1 оЕ Н О.
7х ОАЕРС Рьюае О)4РС аг а сопсеггггаг|оп оГ 4 гп8)гп1 ш 0.1 м аогишп РЬоарЬаге (РН 7.5). 5ооПит рЬоарЬаге ЕО. 7 м, рН 7.5) М|х 41 ш1 оГ 0.2 м 1(а,НР04 2Н,О (М, = !78.05; 35.61 ВЛ|гег), 9 ш! оГ 0.2 м )4аН,Р04 2Н,О (М, = 156.01; 3!.21 ПЛиег), апг) 50 пг! оГ Н О, Тгь-С| (7 м, рН 7.8) Епгу|пе5 апд Вийег5 Е, со(! 33-да)ас(ох)г(аде ТЬе епхуше ь сопнпегс|а)!у ачаааЫе (е.8., ЯПгпа). АЕЫ16опа! КеацепТ5 51ер 7 оЕ ЕЬ(8 рго(осо) гегЕи|геъ ЕЬе геаВеии Ъ(ег( )и Рго(осо) 5 оГ|Ь)а сЬар(ег. Се!15 апд Т155ие5 Си)(игег) гпатта)гаи се!18 ЕгаиаГес(егГ вЛЬ ЕЬе (3ХА оГ ги1егеа( Е)ае опе оГ |Ье ггапа(есг)оп ргогосо)а гп СЬаргег 16 со ггапаЕесг ЕЬе се1В в)ЕЬ а р1аяпЫ сопга)и|и8 а ППа!асгоаЫаае героггег Пепе (е.8., ЕЬе РВ-Па! геропег аепеа Егош СЕОХТЕСН) р|еаае аее Р|8иге!7-5).
!)-САЕАСТО5133АБЕ 537ВВТ31АТЕ5 ТЬе аааау геПеа оп !Ье аЬЙ(у о1 |Ье Е. сой П-Ва)ас(оаЫаае епхуте )о Ьуг)го(ухе ОЬ)РС Ео 6 ее и-пагорЬепо! апг) П-о-Ва(ас(оае (Еег(егЬегц 1950). ТЬе юЬяга|е о-пагорЬепо! ь уе))очч |и аг)иеоиа ю106опа апг( аЬюгЬа 3)еЬ( оГ 420 пт ччаче)епВ(Ь. 5)псе |Ье )пчеп((оп о1 ЕЬь аааау Ьу)оаЬиа Еег)егЬеге, гпоге юпаа)че юЬяга(еа Еог ЕЬе с)е(есПоп о( П-Ва(ас(оа)с3аае Ьаче Ьееп г(ече)ориг). ТЬеае |псПЫе 4-гпе(Ьу!игпЬе(33(егу! П-о-Ва(ас(оаЫе (5)Вта, са(а)оВ по.
М1633), ччЬоае Ьуг(го)уа)а ргос)ис1 4-гпе(Ьу|игпЬеПВегопе В г)е)ес(ег( Ьу йиогогпеиу (ехгр (а(юп ччаче)епВ(Ь = 364 пт, епгеьюп ччаче)епВ(Ь = 440 пт) апг) В Ыие |и ЬиПГега чч)(Ь а Ьаа(с рН (йо)Ь 1969), апс| сйогорЬепо! гес| П-о-Ва)ае(оругапоа сне (ВоеЬппцег МаппЬе)т), ччЬоае Ьуг)го!уха ргог)ис( В г)е(ес(ег) |и а ч)а)Ые ПВЬ| арес|горЬо(огиесег а| 570 пгп ъчаче(епВ(Ь (ЕгьПсе е( а!. 1991). Ап аиау иа)пц 4- гпе|Ьу|итЬе)33(егу)+О-Ва)ассоа(ие аа а ягЫга(е В а|хе) 1еп(оЫ игоге аепяВче|Ьап опе ияпц ОНРС, ччЬегеаа ап аааау иа)пВ сЬ|огорЬепо( гег) П-о-еа)ас(оругаиоа|сЗе  — 20 Вгпеыпоге аепа)1)че1Ьап опе ияпВ ОНРС.
Е|паПу, сЬеп61иинпеасеп) аиЫга(еа Гог П-ца)ас(оаЫаае ччЬоае Ьудго|уяа ргос)ие( сап Ье г)е(ес(ег) !п а )ит)- погпе(ег ог ас|п|Иа1юп сопи)ег аге юЫ Ьу аечега! согирап|еа (е.е., Еит)-Са), Еипщеп Согр., Ое(го)1, М|сицап; Са(ас(о-Е!ВЬ(, Тгор)х Согр., Вег)(огг), МаааасЬиаеиа). Еог а гемеч ог опе о( )Ьеае г)иа)-аааау Ы(я р)еаае аее МагПп е! а3.
(1996). Аааауа и а)пВ сЬегп)(ит )пеасеп1 юЫга(еа аге 20 — 1 000-Ео)г) гпоге юпайче (Ьап ОНРСЬахег) аааауа Па)п апс| Мацга| Ь 1991; Веа1е е( а!. 1992). Еог Еиг|Ьег с1ега|38, р!еаае аее Аррепсйх 9. Ргогосо1 7: Аяау Гог )3-ца!асгоягЕаге ги Ехг асп оГ Матта!Еаи Се!Ь 17.5! МЕТНО0 Ргераге сеП ехсгас18 Егош ГЬе СгапхЕесгегЕ сеца ах сЕехсг!ЬегЕ гп Ргогосо! 5, 51ерк 1-4. Яег ахЫе -30 р1 оЕ йе ехггасг Гог йе !3-ца!асГоядахе аяау. ТЬе ехасг апюпп! оЕ ехГгасг гег!шгесЕ ипП сЕерепсЕ оп йе 81гепцй оГ йе ргопюГег гЕг!ч!пц йе ехргехяоп оЕ йе !3-ца!асГоядахе цепс, !Ье еЕЕгс!епсу оЕ ГгапхЕесг!оп, апгЕ ГЬе !пспЬаНоп ыпе оЕ !Ье аахау.
1Е а Ьеаг ггеагшепг !8 го Ье пхесЕ Со шасПчаге епс1оцепопх /3-ца1асГояс1ахея !пспЬаге йе сеП!уаагеа Еог 45 — 60 ппппгех аГ 50'С ЬеЕоге аяау. 1псЕЕегаае асгп41у !8 а!80 шас!!на1есЕ Ьу ргеЬеаНпц; аххау 1псЕЕегахе апс1 П-ца!ассоясЕахе асг1н111ех !п херагаге а11срлогх оГ сеП 1уаасе !Г а ргеЬеаПпц агер Ьах Ьееп паей Рог еасЬ хабр!е оЕ !гапясесгед сеП 1ухаге го Ье аааауей ппх; 100х Мцф ю1п6оп 30! !х ОНРО 66 р! се!1 ехггасг 30 01 0.1 м ьогцшп РЪоьрЪаге !РН 75) 20! р! 1г Ь еяеппа! со !пс!пбе роя6че ап6 пеца6че сопяо1я ТЬеге аяаух сЪес!с Еог йе ргегепсе оГ епдоцепоы гпРПЪпогх апд !3-ца1ассох!бай, гехрес6че1у.
А11 оГ йе сопсго1г хЪоп16 сопса1п 30 01 оГ се11 ехсгзсс Егогп гпос1г-ггапгЕесггЫ се1!я !и агЫ!г!оп, йе роягце сои!го!ь гЪоп!6 Ыс1пде ! р! оЕ а сопппегс!а! ргерагабоп оЕ 8. гпЬ Д-ца1асгохЫаге !50 пп!ьйпП. ТЪе сопппегс!а1 егяугпе ргерага6оп хЪоп16 Ъе 6!5501ге6 аг а сопсепгга6оп оЕ 3000 пп!Гяш! гп 0.1 м юЕПшп РЪогрЪаге !РН 73!. Епхг ЪеЕоге пхе, ггапкГег 1 01 оГ ЕЪе хгос1с го!пгюп оГ 0-ца!асгоябахе гпсо 60 01 оЕ 0.1 м хогцшп РЪохрЬаге !РН 7 5! го ша!се а нчогЫпц ггосц оЕ ЕЪе епхугпе сопгагпгпц 50 пп!ггйп1.
Опе пшг оГ Е. соЬ 8-ца1асгог!бахе Ь 6е6пе6 аь йе агпоппг оЕепхугпе ЕЬаг нпц Ъубго1ухе ! ршо1е оЕОНРО хпЪ- гггаге гп 1 пппше в! 37'С. 3. !пспЬаГе йе геасГ!опа Гог 30 ш1ппГех аГ 37'С ог пп61 а ГашГ уецонч со!ог Ьаа дече1орей 1п гпохГ сеП Гурея 1Ье ЬасЬцгоппгЕ оГ епсЕоцепопх !3-ца!асгох!Пахе ас104!у гх чегу 1ои, ацоиппц шсиЬаПоп Гппех ах 1опц ах 4 — 6 Ьопгх Го Ье пхегЕ.
4. 51ор йе геасГ!опх Ьу асЕс11пц 500 р1 оЕ 1 М ЬГа,СО, Со еасЬ гпЬе. аеас! ГЬе орПса1 сЕепя!у оЕ ГЬе хо!п!!опх аГ а и ане!епцй оЕ 420 пгп ш а хресГгорЬогошегег. ТЪе 1шеаг гапце оЕ ЕЬе аяау я 0.2-0.8 О13оя 1Е йе аяау Еай опьЫе гмбх гапце, гереаг ЕЬе ехрегппепг пяпц 1ея ргоге!п ехггасг. ТЬе ехггасг сап Ъе сц!ше6 !п 0.25 м ТпяС! !РН 7.8! го 6есгеахе ЕЪе ргогегп сопсепггагюп. В!осЬегп!х!ь са1со1аге йе хрес!Пс асгм!у оЕ ГЬе 8-ца1асгох!бане епгуте ап6 ехргехх йь ча!ие ах пп!Гь оЕ ! епхуте асгмгу рег гп!!!!цгагп оЕ се!! ргосе!п, и Ьеге ! опц о! Е. со!! 8-ца1асгояЫаье 'ь децпег! ах йе агпооп! оЕ епхупге йа! ил!1 Ьубго1ухе 1 ргпо1е оГ ОНРС хоЬ5!гаге !п ! гп!поге а! 37С. ТЫх на!ое сап йеп Ье охе6 го поггпа1ые ехргехх!оп оГ йе гпаг1сег цепе, и4Ьохе прес!цс асгмгу Ьах а!хо Ъееп бесепп!пей Мох! гпо1ес01аг Ь 01оц!5!х ягпр1у 6!ч!6е йе агпооп! оЕ САТ ог Ысцегахе асцчьу Ьу йе апюоп! оЕ 1Г-ца1асгох!6ахе асгв!!у ргехеп! !п а ц!чеп но1огпе го поггпа!Ье Еог ггапхГесг!оп еГцс!епсу, ГЬоь !цпоппц ГЬе са1со1а6оп оГ хрес!Е- !с асгм!у.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
