Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 47
Текст из файла (страница 47)
ТЬе !псогрога|юп оГ !||Р! !лТР |иго К|9А сап Ье пюсд|огед Ьу |исЫогоасеис ас|д !ТСА) ргес|риа|юп аз дезсг!Ьед |и Аррепйх 8. 1и а зцссеззИ 1аЬе1|п8 геасИоп сои|а|и!и8 100 1|С! оТ гайо!аЬе1ес1 1.|ТР аис| 1О ОТ| оГ ицс1е|, 80 — 90% оГ |Ье "Р ге|11 Ье |исогрога|ед 'ю|о ТСА-ргес|риаЫе гпа|епа!. Тгапзуег ап арргорпа|е пшпЪег оу а1!с)иола оу |Ье пис1еаг ргерага|юп Ггогп — 70'С |о ап ке Ъис)се!. ТА|Ьеп |Ье а!!с)иогз Ьаче |Ьаъчед, адд 400 ип!гз оу КХаып |о еасЬ |иЬе. Адд 200 р1 оу 2х геас|юп ЬиКег ялрр1егпепсед ъч!|Ь пис1еог!дез апс1 д!|Ь|огЬге!го1 |о еасЬ |иЬе оу пис1е|.
Адд 100 )|С! 0Г [а-злр) НТР. ~ ЪЧАКМ1МС Ехегсье ех|гегпе саге айег |Ье гайоас|сче |ЛТР Ьаз Ьееп аддед 1о |Ье зо!шюп. ЪЧеаг 8!очез апс! 8о881ез апс1 Ье саге|01 по| со сои!ага!пале ЬеисЬ зцгГасез, есс., |Мй ГЫз Ь!8Ь- !у гадюасВче зо)цг!оп. 17.28 СЬартег 17: Ала!ул|3 оу Селе Ехргеятотт |л Си(сиге|( Малтлта!тал Се()л Ь. 1псиЪасе йе пис1е| 1ог 20 пиписеа ш а 30"С 8ЬаЫпВ ччасег ЪасЬ. Ресочег |Ье пис1е! Ъу сепсг!ЙВас!оп ас 2000 грп| тот 1 — 2 шшисея Саге6л!1у т(!ьсагс( |Ье |шреп|асапс аа га|1юаспче лчаасе. Ргосеет( со 5сер 3. ТЬе |псогрога|гоп о( ("Р!РТР |ото КС4А ас ЙЬ яер сап Ъе о|оп!соте|С Ьу ТСА ртес|риабоо аа «Сеасг!Ьет( |о Арреот)тх 8. |п а аоссеаабт! !аЬе!го8 геасбоп ояп8 |00 рС| о( гасВо!аЬе! апт( 10 Отт о( оос!е(, 80 — 90~а о( |Ье яр тч(11 Ье (псогрогасет) гого ТСА-ргес!р!саЬ!е отасег!а1.
3. Кеаиарепт( |Ье пис1еаг ре11ес |и 1 тп! оу!се-со!а НВВ Ъи(уег, апт( асЫ 10 р1 оуРХаае 80!ил!оп. Ртрепе сЬе пис1е| ир апт( т(отчп ип61 йеу аге геаиарепг(ег( апт( йе ч!асоа!су от сЬе 801исюп !8 гес1исес1 (1-5 ш!питеа). А|Ы 2 |п! от' Яор Ьиттег. РЬ|аае |леал|пел| ьегчеа |о ге|Ьлсе |Ье чисоя|у ос |Ье ао!обоп аод |о ргечео| |Ье старр|п8 а( пааеео| тат(!о!аЪе!ет( КЬ|А |гапаелрь то 8епооис С|8|А. ТЬе чисоя|у печет согор1есе1у т(!аарреать апе( с!итра о( пос1е| ойеп гегоаш. 4. (Орттола!) То !псгеаае |Ье у!е1|1 о1 гас(!01аЬе!ед КХА, агЫ ргосе!пахе К айег сЬе РЬ!аае атер.
Ро(!очч!пВ йе ат(йс!оп от 2 тп! от асор Ъиттег, а|Ы ргосе!пахе К со а Впа1 сопсепсгабоп от" 100 (лц1ш1. 1псиЪаСе йе ао(итюп уог 30 ш!потех аС 42'С. Ргосеег( Со 5тер 5. рог |логе ехсепяче СЛЬ|А гетооча1 апе( тат(!о!аЪе!ет( КЬСА роибсабоп ргососо1а, р!еаае аее Стоит)!ое ес а1, (|981).
5. АсЫ 3 ш! от РЬепо1 апт( |псиЪасе сЬе пихсиге тот 15 ш!писеа ас б5'С ъч!сЬ чогсех!па счету 5 пипшея А<Ы 3 ш1 от сЫогоуопипаоатпу1 а!соЬо1, чогсех, апт( аерагасе |Ье огВаи(с апт( аг)иеоиа РЬааеа Ъу сепсп6лВа6оп ас 1900е (3000 гртп ш а ботча!1 Н1000В госог). Ехсгасс йе ас(иеоиа!ауег аВа!п лч!сЬ 3 |и1 оусЫоготопп, сепспблае аа Ьелоге, апт( сгапауег йе ас(иеоиа 1ауег со а (геаЬ сиЬе. б. А|Ы 0.3 ш! о1 5 м Е|С! апт( 2.5 чо!шпеа оу есЬапо!, апс( тп|х чче11. Со11есс ргес!р!галет( пис1ек асЫ8 Ъу сепсптиВат!оп ас 12,000д (10,000 грш ш а 5огча!1 55-34 гогот) тот 10 ииписея 7.
Кеяырепт( сЬе ре11ес ш 0.4 тп! 01 Н,О апт( сгапатег К со а 1.5-ш1 ш!сго6лае сиЪе. А|Ы 40 р! от 5 Ьс Е!С! апг( 25 чо1шпеа оу етЬапо!. Сепсг!(иВе сЬе ао1ибоп тог 10 пиписеа ас шахппшп преет( !и а писготиае. В. Кеаиарепг( йе ре11ес ш 100 )л! ол Н О апс( шеааиге |Ье сртп/)л! ш а 1(г)иЫ асш6!1асюп соиптег. НуЬг!с(!ха1!оп о(' !Ье ШЧА 1о !пап|о(3!!(хес! 0МА 9. Е!пеапге 10 (ла ол гесошЬшапт р1аяпЫ РЬ(А сопла!и!иВ йе сРЬ(А ог Вепе от !плетей апт! 10 )лц 01 ешрту р!аяпЫ честог ияпа а гевСпсбоп епгуше ччЬоае ятеа оу с1еачаае аге ргеаепт |п йе чессот аетр|епсея 10.
Кесочег йе с!еачег( РХАв иа!па асапт!аЫ е|Ьапо! ргес!РЬасюп, апг( геаиарепс( еасЬ оГ |Ье ре1!еса аерагасе1у ш 20 р! от" РХА т(епасигас!оп ао!иВоп. Вот! сЬе геяьрепс(ег( РЬ(А8 уог 2 пиписея апт( тЬеп асЫ 180 )л! 01 бх 55С со еасЬ шЪе. 11. Сис а р|есе от" пу!оп ог и!сгосе1!и1оае шетпЬгапе со сЬе арргорпасе ыге тот иае |п а т!ос- ог 8!ос-Ыосс!па аррагасия ЪЧес сЬе тпешЬгапе !и Н О ап|1 йеп ьоа)с Ь уог 5-10 ш!писеа |п бх 55С.
С1ашр сЬе ччес шетпЬгапе !и йе Ыосс!иа аррагасия ассасЬ а часишп 1|пе, апт( арр1у ялссюп со сЬе т!ечке (р1еаае атее СЬарсег 7, Ргососо1 9). 12. Р!)тег СЬе т(епатигет( РЬ(А8 СЬгоиВЬ аерагате 81ота апт( тчааЬ еасЬ 61|ег ъч!СЬ 200 (т! от бх 55С. 13. Р|япапс!е сЬе т(еч!се, т(гу йе шешЪгапе ш йе а|г, апт! Вх йе Р)ч(А со сЬе |пеп|Ьгапе Ьу Ьа1|- !иа ог Ьу ехроаиге Со сЛт 1!0ЬС. Ргогосо! с0 Тгап>сг!Рг(опа1 Лил-ол Аггауз 17.29 14.
Р1асе йе гпешЬгапе ш ргеЬуЪг)д)ха6оп ьо1идоп апд шсиЬа(е К Тог а( 1еаьс 16 Ьоига ас ап арргорпа(е 1еп>регасиге (е.д., 42'С Тог ао1чеп(ь сопса(п(пд 5098 Тогшаш(де). 15. Адд (Ье гасдо1аЬе!ес1 ргоЬе (2 х 10 со 4 х 10 српйп! оГ >2Р-!аЬе1ед КМА 1гоп> 5(ер 8) д(гесс!у со (Ье ргеЬуЪг(д(ка6оп ао!ис)оп, апд шсиЬасе йе 61(ег Еог а 6>г(Ьег 72 Ьоига. 1Г>. ТАгааЬ (Ье >пегпЬгапе ас Ь(дЬ асппдепсу апд ехроае К Го Х-гау 61гп ог а РЬоарЬопшадег р!а(е. Турка1 ехроаиге сппеа аге 24-72 Ьоша Еог Х-гау 61ш апд 4 — 24 Ьоига Тог а РЬоарЬо- гппадег р1аге. НУВК$0$2АТ(ОМ СОМТКО! 5 АМО ТКООВЕЕ5НООТ1МС ТЬе (пс(иа(оп о( а-агпап1йп < ! ) )п (Ье )аЬейпд а(ер ас 0.5 ифп! сап Ье иаед (о дешопаггаге (Ьа( ап оЬаегчед ЬуЬпсйхас(оп а(дпа( ь дие (о (гапаспрсюп Ьу КМА ро(угпегаъе П (Масх!иП апд Ниапд 1984).
5ечега! ЬуЬпд(ха()оп сои(го!а еЬоиЫ Ье (пс(идед (и а пис1еаг п>п-оп ехрептепг. Аа а педа(ве соп(го) Еог арипоиь ЬуЬпд(хагюп, 'ьо)асе апд апа1)ие пис(еаг КМА Егогп седа (Ьас до по( ехргеаа йе депе о( (псегеаг. )гпшоЫйхе ап егпр(у р!аагп(д чес(ог оп й>е пу(оп/п(ггосейи!оае 81(ег со ас! аа а сопсго$1ог ариг(оиа ЬуЬпд(ха((оп. Ргераге Ьчо роай)че ЬуЬг)д)ха()оп сопсгоЬ, (пс1ид(пд а депе (Ьа( В ехргеааед )п (Ье се)Ь Ьи( )а 1споъчп пос со геаропс$1о !Ье геди(а(осу (прис (е.д., ахи, д(усегаЫеЬус)е 3-рЬоарЬаге с1еЬудгодепаае, аид сус(орЫйи), апд а депе 1Ьас ь (споъчп со геыроид со (Ье ас(гпи(иа.
ТЬе СОМА ог депе о( !п1егеаг $п (Ье (шшоЫйхес$0МА аЬои(д пог соппйп гереййче ОМА асс(иепсеа апд гергеаеп1 аа п>исЬ оНЬе депе аа роаа(Ые. ОМА ггадшепга сои(а)п$пд аерага(е гед)опь ог схапав оНЬе депе сап Ье иаед Со аааау Еог д(йегепсеа (п (Ье га1е о1 е)опдайоп (Веп()еу апд Сгоисйпе 1988) апд(ог (о сопйггп а д)чеп ЬуЬпд(ха((оп геаи(с. 1$ аЬоиЫ а(ао Ье $сер( )и ийпд (Ьа(, )п гаге (па(аисеа, Ьо(Ь а(саида о( (Ье ОМА сап Ье сгапаспЬес$. Гог (ЬЬ геааоп, иае а а(пд)е-асгапс$ед ОМА ргоЬе Пои> опе ог гпоге гед)опа ог ехопа аа а сои(го( )и а1 1еаа1 опе ехрепгпеп1. ТЬе очегай ьепа)йч((у о( й>е ЬуЬг(д(ха1(оп аъаау сап Ье епЬапсед Ьу сг(пмп)пд гЬе ехсеаа тегиЬгапе (гоп !Ье 1пхиоЬйссед ОМА П.е., (еачпд )иаг (Ье ОМА-соп(а)п(пд а!ос ог до() апд сапу$пд ои( (Ье ЬуЬпсйхайоп $п а сеас (иЬе $п а ашай чо(ите ипдег гп(пега! ой )п а ъча(ег Ьас Ь асс ас (Ье арргорпасе сегпрегагиге.
1и аогпе сааеа, рагйа! Ьус)го)уды о( паасеис КМА сгапасг(рса ъч(11 епЬапсе ЬуЬпс$ссайоп. Кеаиарепд йе йпа! КМА рейес 8 оп> 5(ер 8 (п 100 и! о(10 гим Тг)ь-С! (рН 7.4), 10 гпм ЕОТА, апд 200 гпм МаС(, апс! асЫ 25 и! о1 1 >$ МаОН. 1псиЬасе (Ье ьо)ийоп оп ке (ог 15 гп)пигеа апс$ йеп пеисгайхе йе геасйоп Ьу аййпд 25 и! о(1 >с НС). АсЫ 500 $>1 оЕ 1.2х ОепЬагдс'а ао!ийоп апс$ ье( ир йе ЬуЬпд)хайоп геассюп аа деасг)Ьед. П аиЬа(апс(а1 Ьас)сдгоипд 'ь епсоипсегес) (п (Ьеае рго(осо(а, (геаг йе ъчааЬед 81(ег ъч()Ь КМаае Т1 (10 ип(сагш() апс! КМаае А (20 )сд(гп() (п 2х 55С 1ог 1 Ьоиг а(37аС го гес$исе попарес(йс Ь>псйпд оЕ (Ье ргоЬе го 1Ье тегиЬгапе. !П1ГОС3иСБОП ТО РГО1ОСОЬ 5, 6, аПп' 7 Керог1ег Аы~ауь: САТ, Шси'егаье, апс1 ~3-ца! ас1оыдаье н октгк семе8 ок млкккю ккочог л сопляк!чт мелю го 1с!епг!гу апс! апа1уге йе ге8и1агогу е1ешепга ог Пепея 8гапг!агг! гесошЬшапг шегЬой аге ыег! го )ош йе ге8п!агогу аег)пепсе ог" !и!егер! го а героггег Вепе ог шаг)гег сагг!ег! ш аи ехргеаяоп чесгог.
ТЬе геап16и8 гесошЬ1- папг !а гЬеп шггог!псег! !иго ап арргорпаге сеП 1ше, гчЬеге 1гз ехргеааюп )а с1егесгег! Ъу гиеааигешепг ог" йе герогсег шКЬ!А ог гЬе героггег ргогеш, ог, ш йе саве ог' епхуше героггегя Ъу аааау!п8 гог йе ге1ечапг сага!у6с асг)ч)гу. ЮЬасечег гЬе шегЬой ог г!егесгюп, гЬече герогсегь сур1саПу Ьаче ап еая1у шеаьпгег! омрцг гЬас сап Ье г!!аг!п8п!ьЬес1 6опг гЬе Ьас1с8гоппс1 ог" ргогепы ш йе Ьоьг сеП. Мозг ог гЬе г!егесг)оп шегЬогЬ !и соиипоп пае аге лепя!!че, прес!6с, цпапг1гаг)че, гергос1ис)Ые, апг! гар)г! го реггогш.
Кероггег яуьгеша аге паед го шеааиге ггапьспргюпа! асг!ч!гу, ш раг6си!аг го а!иду ргогиогега апг! епЬапсега ап6 йегг шгегасгюпь чч)гЬ с6-ас6п8 е!егпепга апо ггапяасгш8 ргоге)пя аа тчеП аа гЬе!г геьропаеа го епч!гопшепга! сЬап8ея ТЬе 6пе ьггпсгиге ог' а ге8и1агогу ге81оп сап Ъе апа1)~ег! Ьу а аепеа оГргошогег-Ьайип8 ехрег)шеи!а" !и ыЫсЬ зе1есгег1 шпгагюпь аге )пггог!псес! !псо гЬе ьег!пепсе ппс1ег агпг!у, апд !га сопьег)пепс асг)ч1гу (ог аЪ|16у со ехргея йе герогсег) ь шеаапгег! апс! сошрагег1 го гЬаг ог йе ич1<$-гуре ог погша) ьесрлепсе. КЕРОКТЕК СЕ!ЧЕ6 06ЕО ПЧ А!ЧА$Л'Я5 ОГ КЕСЫАТОКУ ЕРЕМЕ)ЧТЯ Айег Согшап ег а1. (1982) Пгниг г!еасг1Ье6 гЬе иае ог сЫогашрЬепгсо1 асегу!ггапауегаье (САТ) аз а героггег, йе САТ Вепе Ьесагие гч!г!е1у аг)орсег1 аа а герогсег гог шапу ог гЬе агапдагг! 1шеа ог сп1гпгес$ гиапииаПап сеПя САТ геша!пь ш согпгиоп псе апг) ги!66ыпапу ог" гЬе спгепа гес~п1ге6 ог а герогсег !р1еаье аее ТаЫе 17-1).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
