Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 44
Текст из файла (страница 44)
(Ье апюипт о1 рготев ехтгас( гег(и(гед то ч(тиа((хе а тета)пед Ьапд дерепдх оп йе аЬипс|апсе о1 (Ье 1ас(ог о1 (птегеет агк| (Ье а(Пп(ту о1 (Ье рго(е)п (ог йе ОНА. |т гпау Ье песегьагу (о рип(у йе рготе|п (ЬгоиПЬ еечега| сЬгогпатоцгарЫс егере то гепюче (пЬ~Ь|тогл ог то )псгеаее 1ас|ог аЬипс|апсе то с|етес|аЫе |ене3я ТЬе сье о( Ол(А а(Ип3(у сЬ гогпатоПгарЬу (о рип(у а Ол)А-Ь~ птП пП р готе)п х|юи|с| Ье г3е|ауег3 ип63 а И(чеп (гасдоп ь еиЫапт(а()у 1гее о1 епдоИепоие пис|еаъея ТЬе Ьеет геео)ит(оп о1 ге(а| пед ргосе(п-ОЛ(А согпр(ехее |е иеиа()у оЬИПпед оп ро|уасгу|агпк|е ИеВ |Ьат сопта| п Ье(ннееп 4А апд 74 ро)уасгу(ага Ие, А гатю о1 асгу|агпИе со Ьгяасгу|агпк|е о( 29;1 р гон(дее Вопд геьо|идоп.
Ап ордгпигп Пе( е(ге (х 20 х 20 сгп ън(й 3.5-гпгп ерасегя ТЬе сЬо|се о1 Ьи6ег илед |п йе Пе! В о(геп а гпаиег о( сопчеп3епсе. ЕаЬога(опее йас Пеер сопсеп(тагес| яос|ь о( ТВЕ (ог сье (п аПагоее апг| ро|уасгу|агп|де Пе( е)ес(горЬогееВ сье 0.5х ТВЕ (п Пе(л то еерагате Ьоипд апг| ';тее ргоЬея нчЬегеат |аЬога(ог(ех йат ерепд пюге Пепе до|пд рготе|п Пе( е)ес(горЬогедь ъч(33 тур|са13у иле Тпе-П(ус(пе Ьийегя ТЬеее Ьи((егт сап аВо Ье иеед ат 0.25х сопсептгатюп |п (Ье ро|уасгу|агпк|е Пе!. Ргогосо( 2| Сге) Легагдаг(ап Аггауз (ог гггчА-)г(идти Ртоге(лз 1 71 7 3 А001ТЗО)ъ(АЕ РКОТОСО(а 5Т)РЕК5НЗЕТ А55АТ5 ТЬе (деп($(у о( а 0(ъ)АЬ(пд(пВ рго(е|п |л а рад(си!аг Ьапд де(ес(ед (п а Ве! гегап3абоп аээау сап оНеп Ье к1еп66ед Ьу иэ(05 эрес(Нс ап6Ьоду ргоЬеэ со ее ирегяЬ( Н" (Ье согпр1ех (Кп э((е апд Коо тап $986).
1п йь (уре о( ехрелгпеп(, ап апйюду ада(пя йе э|ьрес(ед рго(е(п ь аддед (о йе геасдоп л||юиге Ье(оге, диг(пВ, ог аНег Нггпза((оп о( йе сигор(ех, апд йе геасбоп гп|х(иге ь херага(ед оп (Ье Ве!. 6 йе ап6Ьос3у гесоВп(аеэ йе Ьэпд (п с(иеэ((оп, йеп йе гпоЬ(3$(у о( йе соглр)ех одП эЬ(Н (о а )агВег э(ае дие (о йе (оггпадоп о( а сегпагу согпр)ех Ьелчееп (Ье ап6Ьоду, 0(ЧАЬ(пд)пц рго(е(п, апс1 йе 0НА ргоЬе. 1л яъгпе сээея асЫЫоп о( ап()Ьоду йя гир(э (Ье Нгггпадоп о( (Ье сигор(ех га(Ьег (Ьап (псгеаы)05 1(э то(еси(аг ъче(ВЬ(. А э(гп(1аг ехрепгпеп(а! деэ(Вп сап Ье |ьед со яис(у (п(егас6опэ Ьелчееп йНегеп( рго(е(п согпропеп(э о( (гал|кпр(юп (ас(ог согпр1ехеэ йа( аээегпЬ)е оп еи(сагуо( с ргогпо(егэ (ВеЬеггпап апд Вег(с | 991).
Ап()Ьод!еэ д(гесгед ада(пэ( а чапе(у о( еи)гэгуо(к (галэсг)рг)оп (ас(огэ аге ачй(аЫе Ногп эечега( согпрап(ея ТЬеэе ал()Ьод(еэ сап Ье иэед Ьой (о (деп($(у а Нпоъчп (аг(ог апд аэ роядче соп(го(э п| (Ье эирегэЫН аээау. Адд(((опа! Ма!епа38 Апг|Ьоду эдэ(пьг (Ье рго(е|п о(гагегех| Тпь |х илиаду ап 18С (гасиоп агь|ле (гоп| а гаЬЬ|1 ро|ус(опа( ап1ьеплп (Наг(оъч апд (апе 1988).
МегЬос1 3. $|киЬасе чэгу(лК агпоип(х о( аллоду ъч((Ь (Ье лис(еаг ех(гас( ргерага6оп (о Ье иэед |и 5(ер 3 о(йе пъйп ргогосо! гог $0 — 90 гп(пи(еэ аг глот (епърега(иге. ТЬе агпоип( о( апдЬоду (о адд с$ерепсЬ оп йе аН(п((у: о( (Ье апдэегигп апд (Ье аЬипдапсе о( (Ье ггалэспр()оп (ас(ог. Тгу а гапВе Ье(ъчееп $ апд | 00 )гВ о( ап6- Ьоду рег э(апдагд це! |е(агда(юп геас(юп, 36 АНег йе (псиЬа(юп, асЫ йе 06(А ргоЬе ап|3 (Ье ойег (пВгед(еп(э 3(эгед |и 5(ер $ о( (Ье пъа(п рго(гко(, алд саггу ои( (Ье гете(п(05 рггкедигеэ )п йе п|йп рго(осо1.
А|ЫЫоп о( ап(йюду эЬои)д д(эгир( ог эЬ(Н (Ье тоЬ((Ну о( (Ье сотр(ех !и с)иеэ6оп. А(глоиел а рал(си(аг апйюду п|ау гесобпяе 16е ээпъсприоп (асгог о( )п(егех( |и ап |гп|пипоЫойп8 ог нпп|ипоргес)рНаиоп ехреп леп(, йе га|пе ап6Ьоду тау по| ъчогх |и а хирегэЫЙ аъъау. ТЬь йъсгерапсу Ь имаэу дие (о гле |паЫ(|гу о( гле ап6Ьоду |о гесо8пЬе йе паэче рго1е|п.
ТЬе Ьеъг |ю(игюп Ь го |ье апойег апгьеги|п йа| гесо80)геь а д(аегеп( ер|1оре оп йе Ыпйп8 рго|е|п. О(лег |ю)и|юпъ (о сопг(дег аге 1псгеаъ|п8 16е я|13 сопсеп|гаиоп |п |ле Ь|пйп8 ЬиНег, адйп8 (оъч сопсеп(га8опь (0.01-0.5%) о( лопюп(с с$егегаепЬ (е.8., Тъъееп-20, Нопюе| Р-40, апд Тг(ъоп Хаоо) |о йе Ь|пйп8 ЬиКег, ог |псге|ь(пд йе апюип| о( ап6Ьо|3у |п |Ье геасэоп. Тле |еглрега(иге аъ ъчЫ)й йе рге|псиЬаэоп х(ер 'ь рег(оппед гэп Ье чапед Ьепчееп 0'С апд 87"С |о (ас(11(а(е апНЬоду г|ко8п(гюп ,' апд сотр1ех ъ|аЫ(11у.
Впаэу, ехрег|гпепь сап Ье сагпед оиг со де|елл|пе 6 адй|юп о( йе ап66о|$у Ье(оге ог алег 16е ОГ(Л рголе айесгх гле ъирегхЫН. | г А003Т(О)ъ)АЕ РКОТОСОЫ СОМРЕТЗТЗО(ъ( А55АУ5 ТЬе эрес(Нс((у о( ап оЬэегчед 0)ъ)А-Ылд(05 геас((оп сап Ье сеэ(ед |л согпре|Нюп аэхауэ в ъчЬЫЬ ап ехсе|ь ' ! о( ип(аЬе1ед ргоЬе 'ь а|Ыес1 (оце(Ьег ъч((Ь йе гад)о(аЬе(ед ргоЬе диг(пд 5(ер 1 о( йе гпйп рго(гко!. 5рес(60 0)ъА Ь(пд(пВ ь иэиа((у дейпед ээ (Ьа( ъчЬкЬ (э сотрегед Ьу а геа|юпаЫе ехсе|ь оТ ип1аЬе1ес( ргоЬе.
гог пюэ( ( (гапэсг)р1)оп (ас(огэ (Ьа( ехЬ)ЬН Ь(КЬагэй(у Ь(пд)05 со а (агце( 0$9А эег(иепсе, а 10 — 1 00Нъ(д то(аг ехсеээ о( 1 ип1аЬе(ед ргоЬе эЬои(д е6гп(лаге йе гайо(аЬе(ед согпр(ех. Сол|ре|Нюп аээауэ сап аЬо Ье иэед (о Ыепб(у а рго(е(п |Ьас 'ь ргеэе|Н (п а Ввел ге(йпед Ьапд. гог ехагп- р1е, 6 а ргоЬе епсогпраээ(пВ йе 9 ъ-ВапЫпд ге5(оп о( а депе 'ь иэед (Ьаг соп(а(пэ эечега! ййегеп( гесоцпйоп | е(елъеп(э едал $(э эес(иепсе апд (Ьиэ 5(чеэ пэе (о гпи(6р(е 039А-рго(е(п сигор(ехеэ идй йНегеп( гпоЬ((Н)ея ! (Ьеп адд(3(оп о(а $004оЫ п|о(аг ехсеээ о(ап 01$5опис1ео((де соп(а(п(пц а (аюъчл гесоцпНюп эес(иепсе якЬ ' аъ (Ьа( Ьоипд Ьу (Ье 5р( (ас|ог эЬои(д е((гп(лаге йе Ьапд соггехропд(пВ го 5р(-06)А сол|р1ехея 5(гп((аг согпре66оп аххауэ ъч((Ь 0135опис1ео((деэ слога(л(пд ойег гесоВп)((оп эес(иепсеэ сап (деп(((у йе рго(е)пэ ргеэеп )п ойег согпр(ехея алд апВЬод(еэ аВэ(пэ( йе яьрес(ед (гапэсг)р((оп (эс(огэ сап Ье иэед (п еирегеЬ|Н аъэауэ (р(еаэе эее 6|е рапе) оп А00(Т10)ъ)АЕ РКОТОСО0 5(3 РЕК5Н (ГТ А55Ау5) го сопйгп| а (ел(абче 3депбйсадоп Г)ла((у, согпреддоп аээауэ сап Ье ивед (о )деп($(у |гпроггап( пис1еоддех (п (Ье Ь(пд(пц яТе о( а 5)чеп (гап эсг(р((оп (ае(ог.
Ву саггу(пд ои( а эепеэ о( согпрейюп аээауэ иэ(пц 03(Копис1ео((деэ йас д(Нег )л а э(05 пис(ео((де (гоп| йа( иэед (о (деп(3(у йе Ь(пд(пц рго(е(п, сгис(а! пис(еоддеэ идй(п йе гесодпйоп е(егпеп сал Ье г(икИу (деп66ед. Рго1осо! 3 Марр~пц Ржаве-1-Ьурегьепыбче Я1еь нв сосствос все!ос45 !сс л сиклвчот!с снчс слсс огтвсс вс сослплст Ъу шаррш8 1Жаае-1- Ьурегаепя6не ясея Рог геааопь йас аге пос сне!1 цпс)егасоосс, Вепеь сопсаш с!1асгесе аес)цепсеа ог РМА сЬас аге сепя6че со РХаае 1 с1еача8е, апс) сЬе рассегп оГ сЬезе ао-са11ед Ьурегьепя6че ясеа сЬап8еь дерепс)!п8 оп сЬе ас6часюп яасе ог" сЬе 8епе (Че!псгацЪ апд бгоцебпе 1976).
Ву сошрапп8 йе рассегп ос Ьурегаепя6че ась оЬса!пес) Ьу с1еача8е ос а с)ц!еасепс Вепе ччиЬ йас оЬса)пес1 счЬеп сЬе 8епе )а ас6че1у сгапьспЪес1, ге8!опт сЬас раг6сграсе ш 8епе ге8ц!асюп (ессЬег цц1цс6оп ог ацрргеаяоп) сап Ье Ыеп66ес1. А гпа)ог асгеп8сЬ оГ йе шесЬос) са сЬас Ь ша)сеа по а рпоп' аяшшр6опз аЪоцс йе 1осас!оиа ог" сопсго! вес)цепсеа апс! сЬца а!!огас ап шчеа68асог со ехагшпе шапу Ьцпс)гей оу)с!1оЬаьеь ог РХА гог росеп6а1 ге8ц!асогу аес)цепсея А саяе йас !11цасгасеа сЬе росчег оУ Ратасе 1 Ьурегаепя6чЬу гпаррш8 )а сЬе Ыеп66са6оп оГ йе!оспа соисго! ге8!оп, а шаьсег гевц1асогу ье9цепсе йас гбгесса сЬе сопср1касес1 сешрога! апс! се!1-суре-прес!6с сгапаспр6оп рассегпа ог" пш16р!е!!п)сес) Ьегпо8!оЪ!п 8епеа апс) йас кепарь -10 1сЪ аснау Стош сЬе 6гьс 8епе )и сЬе с1цасег !Тцап ес а!.
1985; Еоггеасег ес а1. 1986). ТЬеае ье9цепсея счЬкЬ сопса!п ьечега! Ратасе-1-Ьурегаепа!с!че ясея аге ЪосЬ пеееааагу апс! ял6)с)епс гог сЬе ехргеаяоп оу 8!оЬгп 8епех 1и егусЬгоЫ се!!а !бгоаче16 ес а!. 1987; Точчпеа апс) ВеЬпп8ег 1990). %пи!аг ацссеаа зсопеа Ьаче Ъееп геа1!сед ччссЬ гпапу ойег 8епеь (Еог геч!есч, р1еаье аее бгоас апд баггагс) 1988). 5ечега1 йеопеа Ьаче Ъееп ргороаес! со ехр!аш сЬе оссцггепсе ог" РХаье-1-Ьурегаепяссче ясен (бгоаа апсс баггагс) 1988).
ТЬе Ъеьс оу сЬехе Ыеаь !а сЬас йе ясеа гергеаепс ге81опа ог" сЬе РХА Сгош счЬ!сЬ пцс! еоеошез Ьаче Ъееп 6!ар1асес) Ъу йе Ь|пйи8 оГ Сгапаспр6оп Гасгогь апс)гог РХА цпю!ийп8 ргосешя !п сиги, сЬе Ъоцпс) ргосепы аге сЬоц8Ьс со!еас! со епЬапсес1 сгапьспр6оп оГ сЬе 8епе, е!йег гбгесс1у Ьу !псегас6п8 чч!сЬ сошропепса оГ сЬе Ьааа! сгапаспр6оп аррагасць ог гпебгесс! у Ьу еасаЫ)аЬ1п8 а сопсопиасюп сопдцс!не со сгапаспр6оп (Чга11гасЬ ес а1. 1994).
А чапесу оу Сцпсс!опа) аес)цепсеа аге аахое!асес) х!сЬ Ржаве-1-Ьурегаепяс!не ясея шс1цй !п8 епЬапсегя я1епсегя с!ече1оршепса! сопсго1 ге8!опя апсс с)яше-арес!6с ге8ц!асогу ге8!опя Рог сЬ!а геааоп, гпарр!и8 Ьурегаепя6че ясеа !п сЬе пцс1е! оЕ 6!Суегепс с!яцека ог ас с)1)уегепс с!шея оЕ с!ече!оршепс сап ргонЫе а ччеа1сЬ оу !иуогшасюп аЬоцс сЬе ехргеьяоп ог' а саг8ес 8епе. ТЬе пюьс роро!аг гпейос1 оу гпаррш8 Ьурегьепясгне ясеь !пни!нес йе !ао1ас!оп оу пцс1е! Егош а се11 ог с)яше оЕ !псегеас Ео!1осчес1 Ьу !псцЬасюп ог' йе 1псасс пцс1е! ъчЬЬ нату)п8 ашоцпса оу Ржаве!.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
