Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 43
Текст из файла (страница 43)
Ви((еппц !п сйе 0Наае 11оосрпис!пц аееау Ь ргоидес3 Ьу (Ье (пцгед(епсь оссйе пис1еаг ехсгасс. 6 1ЬЬ 3 ргочеь иоонас(а(ассогу, сйеп |и 5(ер 2, |пс!ис1е сйе сойочдпц согпропепсь ас (Ье йесед йпа| сопсепсга- ,' 1юп5: 20 тим НЕРЕ5-КОН (рН 7.9)тт50 гпм КС)тт2 гпМ МВС| тт0-4 гпМ ерегитЫ(пеА)-0.02 гпМ адис асесасег0.3 ицггп( ьоч|пе еегигп а1ьигп1птт)07В (н|н) ц1усего(г0.5 гпм д)сыосьге)со(.
ТЬе орйптитп со псе и(гайоп о( птацпейнп Ййои Ы Ье с|есеггп| пес| егп рсг|сайу (ог еасЬ 0ЫА (гацгпепс. РУПЬ еасЬ пенн Ыпд!пц ь)се ог 0ЫА (гацгпепс, а итацпее)игп 1)сга6оп сотне айпи!д Ье вес ир Ьу чагу|пц сйе сопсепсгайоп о( гпациеа(игп (сгу а гапце о( О С вЂ” 1 0 птм) ъчЫ|е )Веер!пц ай осйег напаЫеь соп- исаи(. 5|гп|3аг|у, сЬе орйгпигп 1егпрегасиге цгогп 0'С со 37'О о( Ыпд!пц апд ргосессюп еЬои(д Ье ! де1еппйпес| |п (па| геасйогь. ° ТЬе агпоипС о( ргосе)п ехсгасС гег!Ыгег1 со чЬиайхе а йю1рпп( дерепгЬ оп СЬе аЬипдапсе о( 1Ье (ас- сог о( | п(егеес апд СЬе ай) п((у оНЬе рго(е! и (ог Сйе 0ЫА. Ке|а(ве! у аЬипс|апС Стаи ееп рСюп (астор еисЬ аа 5рс (Оупап апд Т)!ап 1983) апс| 3ПГ-С (Коьеп(ей апс| Ке3!у 1 986) сап Ье де1ес|ед !и 1 — 20 иц о( сеиде пис|еаг ехсгасс ргосе!п оЬСа(пед (гоиг си|1игес| гпагпгпайап се1Ь (е.цм НеЕа сейа).
|п ъъогас саве всепаиоц ьисЬ аа Сйе всего( геци|а(огу е(ептеп(-Ь|пд)пц рго(е(пь (5КЕВРь), пис|еаг ехСгасС гпиь( Ье рипйес| Ы пд| у ей гоп цЬ опе ог гпоге сЬгоптасоцгар6!с ьсерь Ье(оге Уоос рппс(пц ас6М(у сап Ье десес1- ед (Впцце ес а|. 1993; нуапц ес а1. 1993). ТЬе ь(апдагд гпесйосЬ о( ргераппц пис!еаг ехсгасЬ дееспЬед )п РгоСосо! С дегиед (гопт СЬе с(аде(са! ргоседи ген о( 0(цпагп ес а1. (С 983) апд |н|ап)еу ес а3. (1983).
ТЬе сопсепсгайоп о( 0Наье 1 тес(и) ес| 1о ргос|исе а сопч!пс!пц !асЫег о( 0ЫА (гацгпепсь иаиайу час|ее Ье(ънееп 50 апс| 500 пц)гп1. ТЬе ехас| сопсепсгасюп птиьс Ье десеитнпед ептрткайу апд сап нату стоги опе 0ГЧА (гацгпепс со апосйег апс| апюпц д)С(егепс ргерагайопь о( сйе ьапте (гацитепс. С|еачаце дерепсЬ оп (Ье прес)йс асйн(су о( 1Ье 0Хаае 1, сйе рип(у о( (Ье 0ЫА (гацгпепс, апс|, со а )екьег ехсеп1, сйе еес(иепсе о(сйе 033А (гацптепс !и г(иеесюп.
5огпе Ыневйца1огь йпд !1 еаа)ег 1о чагу 1Ье ЫсиЬайоп йгпе ог сегпрегасиге |и 5(ер 3, гасйег сйап 1о нату (Ье апюип1 о(0Наъе1асЫед 1о сйе геас6оп. Рго1осо! 2 Се! Ке1агоа6юп Аььауь аког 0МА-Ь~пс~~пц Рго1е~пь с КС ВКТЛВОЛТ|ОСС ЛЬЬж ГОВ РЬСА-В|аао|Сас РВОТНСих, дече1оред Ьу рпед апд СгоСЬега (1981), ргочЫед йе Вгя Ыпе6с апа1уаеа 01 сЬе !псегассюпа ос сЬе ЕасЬегссЬса соБ 1ассоае гергеааог мчсЬ |га РХА-Ь|пд!08 яге. ТЬе аппр1ссду апд аепягпдгу оу йе геас6оп апс| йе с|пап!!Саг!че па!иге оу йе аааау 1ес1 со сса гарЫ ас1орсюп Ъу йе 8гоъч|08 сопипипду ос геаеагсЬега асидусп8 сгапаспр6оп апд Вепе ге801асюп.
ТЬе аааау |а посч гоисше!у иаед со Г011осч йе рипйса6оп ос РХА (ог КХА)-Ъ!пд|п8 ргосе|па, со десеппше сЬе аес!иепсе гес)шгетепса оуа )спосчп ог сшарессед РХАЬспйп8 ргосегп, со еасаЪ!гаЬ геас6оп сопасапса (е.8., агйп|су Ь|пйп8 сопасапса апс| оп!ой. гасеа), апд со а!иду ргосесп-ргосеш аааетЪ|у ог сЬе |псегасс|опа оупш|др!е ргосе|па оп депе аес|иепсеа (р1еаае аее йе шуогтаг|оп рапе| оп ОЕС ВЕТАССОАТ!ОЬС А88АУ8).
ТЬе аааау, ъчЬкЬ са асга|ВЫогъчагд, ехр!ода е1ессгорЬоге6с пюЬс1Ьу д|гсегепсеа Ьесисееп а гарЫ1у т!Вгас|08 РЬ)А сопсаш!пц а Ъ|пйп8 ясе апд а тоге а1осч!у т|8гас!08 сотр1ех 01 ргосеш Ъоипд со РЬ!А. Турка1!у, сЬе РХА |га8тепс )а гайо!аЪе1ес| сч|сЬ яр, счЬегеаа йе ргосе|па аге ип1аЪе1ес1. В!пйп8 ос сЬе РЬ|А Ьу а ргосе|п!еада со а согпр1ех ъчсЬ ап е1ессгорЬоге6с пюЬс1- Ьу сЬагассег|ас|с оуйе ргосегп.
ТЬе тейод |а ехс)ша|се1у аепяс!че, Ъесаиае Ь~ВЬ-арес|1|с-асс|ч|- Су РХА ргоЬеа сап Ье иаед апд Ъесаиае а рЬепогпепоп |спосчп аа "са8108" оссига ичг|дп йе ро1уасгу!атЫе Ве1 |Сапп 1989). Са8|п8 |а сЬоиВЬс со оссиг Ъесаиае сЬе ргосе|п — пис1ек асЫ сопгр1ехеа пегасе сЬгои8Ь сЬе рогеа ос сЬе Ве! дипп8 е1ессгорЬогеяа, счЫсЬ сгапяепс1у |псгеааеь йесг сопсепсгабопа очег апд аЬоче йас |п ап ас|иеоиа ао1ис|оп. ТЬ!а сопсепсгасюп сп шгп аЬ|сса сЬе Ь|пд|п8 ес|и!1!Ьпит |п сачог 01 сотр1ех |оппабоп апд а1!осча йе десес6оп оу ечеп чету ъчеа|с Ь~пйп8 шсегассюпа. ТЬе со11оичпц спейод сог це! гесагс|а6оп аааауа га с|епчед |п рагс |тот а ргососо1 ргочсдед Ьу МкЬае1 Вп88а (РЬаппас|а Согр., 86 Ьои!а). МАТЕК!АЕЬ СА|1ТЮЬ|: Р1еаае аее Аррепйх 12 1ог арргорпа|е Ьапд!!пд о1 тасепа!а шаг!сед сч!1Ь <! >.
Вмйегв апс! Ьо!сг6опь Р1еаае аее Аррепйх 1 1ог сотропеп|а о1 асосЬ хо|и!!опа, Ь011ега, апд геааеп1а. Р!!исе а!ос!с ао!исюпа со йе арргорпаге сопсепсгабопа. РссоИ 400 120% ис)ч) Оаао!че сЬе ю|исе |п ссеп|е Н,О апд асоге йе ю|иссоп ш 100-Сс! а!н|иоса ас — 20'С. Ро!учспу1 а!соЬо! (707а счуч) Осаао1че СЬа ю|иге ш агап!е Н„О аид яосе СЬе ао|тгоп |п !00-Сс! а!щиога аг — 20'С. 17.13 Ргогосо| 26 бе1 йегагг)аг(оп Аггаугуог ЛХА-Ь|иг3(щ Ргогетг 17 15 МЕТНО0 1. То а аге61е 1.5-гп1 гпкгоуице гиЬе агЫ; пр-!аЬе!ег( гагеег 034А 1 шфгп! ро!у(г(3-г)С) ппс1еаг ех|гасГ (5 — 10 Па) ег ргоееш (гаспоп <10 П! 20% !Всо11 400 1 па (1-10 (гпо!е) 1 и! <30 01 50! ог 109о ро1уяпу1 а1соЬо! но 4 )г! го 20 )г! 1пс3иг|е сап!го| геасиопа ъчгЬ анену ехрепп4епг.
Роя!|не сап)го| геасг(опа сои!а)п а пис1еаг ех|гас| (ог ргоге!п (гас6оп) апг| а гаг|10)аЬе)ег) Рй(А (гацгпепг сапу!пВ а аег)иепсе гесоап(гег) Ьу а 0ЫА-Ыпг|)па ргоге|п гЬаг 'ь аЬипг(апг !и гЬе ехггасг апг3 Ьаа Ь)еЬ а(3)п)гу (ог гЬе 0ЫА аег)иепсе. Ехагпр1еа аге а 05(А (гацгпепг сопга)п(па ап 5р1, С/ЕВР ог Ь)Е-1 5(ге апг| гпапзша1)ап сеП пис|еаг ех|гасг, ог а |ас! гесса(г)ол 51(е алг3 ! < ехггасг г)ег)нег( (гога а )ас)4 агга)п о( Е.
со(Е ТЬе пеца6не сои!го| геасг(опт сои!а(п гЬе гаг310!аЬе!ег( гагеег РЬ)А (гаВгпепГ, Ьи) по пис|еаг ех|гас|. 2. Сепсг!Еице йе геас6оп гиЬеа гог ьснсга) аесопгЬ ш а шкгоуиае го 41ерояг йе геас6оп ппхгигеь аг йе Ъоггош 01 гЬе шЪея 1псиЬаге йе геасг!опа гог 10 — 30 ш!пи(ее оп ке. 3. АгЫ 3 р1 оу аисгоае г)уе 5010(юп Го еасЬ ГиЪе. Еоаб йе аашр!еь |п(о ГЬе 51015 оЕ а пеи(га! 4 — 7% ро1уасгу1ашЫе ее1. 4. Взп йе Ве! |п е!(Ьег 05х Тг(яа1ус!пе ЬиКег ог 0.5х ТВЕ Ьиугег ас 200 — 250 Ъ' ап6 20 шА уог >2 Ьоигя 0ерепйпц оп гЬе |аЫ|пу о( гЬе Ъгпйпц ргоге(п(е) апг) йе а|ВЫ|у о( гЬе ЬгпйпВ геасг!оп(е), Ь гпау Ье песеяагу го гпп йе ае! а| 4'С.
6. Ехроье йе дпе6 Ве1 го Х-гау 6!гп 1ог >1 Ьоиг аг -20'С го н(аиа1!хе га6!01аЬе1е6 Р)н)А Егацшеп~.еаа аЬипг)апг РЬ)А-ргосеш сошр!ехеа сап Ье де(ее(ест аугег 1 — 3-Ьоига оп а рЬоарЬогппацег. 5. А(гег е1есггорЬогеяа 15 согпр1еге, ргу йе ае! р1агеа арагг, ггапауег йе де! го а р!есе оу агигйу Ъ|огг!па рарег, апг3 Игу йе ее! Еог -1 Ьоиг оп а це1 6гуег. 1726 СЬаргег 17г Аиа)уг|т о! Сеие рхргесь|ои !и Си!(игег! Матта!!аи Се)!з ТВОЕ)ВЕЕ5НООТ36(С А(л(О ОРТ|М|ХАТЗО(т( ОЕ СЕЕ КЕТАКОАТЮ(т( АВВАУ5 ТЬе сопсептга6оп о1 гпопоча|епт сатюпе |п йе геас6оп гпЬииге (5(ер 1) еЬои(д Ье к200 гпм апс3 Ы туркаПу (п йе 50 гпм гапВе. Н)ПЬег сопсептгадопл аге а|споет а|Ьчауе |пЫЫ(огу Н(ПЬ ят(т (гасбопе (гоги сЬгогпатоцгарЬу е(ере еЬои(д Ье д)(отед арргорпате|у, д(а)ухед аИа(пе( )отч-еа)( Ьийегя ог раееед (ЬгоиПЬ а Септпсоп ог дееа(т)пц со|игпи Ье1оге аееау(пВ Ви((еп пИ (п йе Пе! гетагда6оп аееау В р гон(дед Ьу |Ье )пПгед)еп(е о1 йе пис|еаг ех|гас(.
И ЬийегвВ р гинее то Ье оплат(е(ас(огу, (пс(иде йе 1о((отч(пП согпропепЬ ат йе 3(етед Япа| сопсеп(габопя 20 гпм НЕРЕ5- кОн (рн 7.9)(50 гпм кс|(2 гпм мВс),,'0-4 гпм трепп(д(пе/0-0.02 гпм ипс асетатег0.1 (гоп! ьомпе еегигп а|Ьипкп)304 (н|н) И)усего(!0.5 гпм д((Ь|о(Ьге(то). ТЬе ОНА 1гаПгпепс иеед )п (Ье геас|юп лЬои(д Ье (опПег йап 20 Ьр, тч((Ь йе гесоцпйоп тес(иепсе ат )еатт 4 Ьр атнау 1гогп еасЬ епс| о1 йе (гаИгпеп(.
Ро|упзепдпц йе гесса)т(оп ест)иепсе Ьу ППатюп о1 пюпогпег е(тех ог Ьу сЬегп)са) еупйееВ гпау епЬапсе с|етес|юп о1 гаге ог (отч-а(Ип)(у Ь|пд(пВ рготе)пя РЬоерЬатаеее ог ехопис(еатее ргееепт )п спк(е пис|еаг ех(гас(е сап гепюче гасПоасбче пис(ео(Иее )гоги йе епде о1 ОЛ(А ргоЬея цепега6пц ип|аЬе|ет| Ь~ од(пП е(тех (Ьат сап ас( ат согпре| Поте о1 (Ье ЫгкйпИ геасИоп. РгоЬее еЬои)д Ьаче Ыипт епде то аноИ Ь|ВЬ Ьас(гИгоипде сасьед Ьу (Ье аЬипс|апт апд поперес(Ис яике-кгапс|ед пис(е(с-ас(д-Ь|пд(пц рготе)пе ргеаепт в гпапу сеПя Еог (ЬВ геаеоп, доиЬ|е-етгапдед ргоЬее 1оггпед Ьу аппеаПпВ япВ(е-ктгапдед о))копие)ео6дее лЬои(д Ье сЬес|сед Ьу ро|уасгу|агпИе Ие! е!ес(горЬогеяВ (ог согпр|е6оп о1 аппеаПпд. И а е(Ип(Исаи( ргорог|юп о1 х(пП)е-лтгапдед о()Копие(еот)дел гегпа)п, (Ьеп ад)итт йе сопсептгат)опт о1 йе оПцопис|ео6с|ет |п киЬеес|иепт аппеаПпд геас|юпя Ап аднаптаПе то ия|пП (Ье К(епотн 1гаПгпепт от' Е.
соб О)4А ро(угпегаее | то 633 апд гасПо|аЬе| а ргоЬе В йа( (Ье есугае чн(3! оп|у ас| оп доиЬ|е-л(гапдед ОНАЯ 5)пц(е-е(гапдед ОЛ(А ог ипЬуЬг)д)тед о)(Попис)ео(Иее 1гогп ап )псогпр(е(е аппеаПпП геастюп нн(33 пот Ье гад(о(аЬе(ед Ьу К(епотн есугае, апс| (Ьик апу рготе|п- ОЛ(А согпр|ехее |пчо|чпц йегп гчП пот Ье чьиаПкед (п йе аитогадюП агп ог рЬоерЬоптпаВе о1 (Ье де(.
ТЬе ор6па го сопсептгабоп о1 МПт ~ еЬои)д Ье детепп 6 пег| егп р)пса((у 1ог еасЬ ОНАИ ПпгПпВ рготе|п. )Мй а певуч Ыпд(пц я|е ог ОНА ргоЬе, ап МПтч йга(юп сигче еЬои|д Ье лет ир Ьу нату(пП (Ье сопсептгатюп о1 МПт (|гу а галде о1 0А — ) 0.0 гпм) тнЬ|)е (сеер(пц а|3 о(Ьег чап|аЬ|ее ипсЬапИед. 5(гп()аг)у, йе ордгпигп тегпрега|иге (1гогп 0чС то 57гС) о1 Ь|пд(пП апс| йе е((ось о1 ехоИепось|у асИед яаЬ(3(х(пП ргосе(пе (е.П., а|Ьипкп апг| сутосЬгогпе с) еЬоиИ Ье детепп|пес| (п (па3 геас6опя Адд(т(оп о( Ьуетапдег рготе)пт со (Ье геас|юп пбх|иге сап еогпедгпел е(аЬ)3(хе а ьчеп рготе)п-ОНА (птегастюп. Рго(е(пе (Ьат Паче Ьееп иеед |п йь ннау (пс(иде Ьомпе еегигп а)Ьигп(п, гп36г рготе(пе (В! ОТТО, тчЬ|сЬ 'ь попдат с|пег| гп((П), сутосЬгогпе с, 1ети(п, Ьоч|пе гпП(г сато|и, (ЬугоП|оЬиПп, ая(а)о1ети)п, апг| Ьоч|пе тиЬгпах)3(агу гпис|п (туре )), аП ат 0035 — 3 гпфгп).
ТЬеее рготе(пе гюгпе6гпее аст Ьу яаЬ|3(х)пП а д((и(е тгаплсг(рдоп 1ас(ог ог О|4А-Ь|пд(пц рготе|п. Моте оЕ(еп (Ьап пот, Ьончечег, |Ье гпесЬапьгп Ы ип(гпотчп апг! йе Ьее( адд(т(че гпие( Ье г|е(егпз|пег| Ьу (па| апд егтог. 5(егоИ Ьоггпопе гесертоге апг! сегта|п о(Ьег тгаптспрт(оп 1ас(огх аге ет(гпи!атед Ьу йе адд(т(оп о1 ятд(игп гпо|уЬс3ате ат сопсептгат(опе Ьепчееп 0.1 апд 5.0 гпм. ТЬе асИ||юп о1 яапдагд геаПепте йат епЬапсе рготе|п етаЬ)33(у (е.П., рготеате (пЬ|Ы(огя рЬоерЬатаее )пЫЬ|тогя Ипате |пЫЫ(огя апс| П(усего() гпау 'ппргоче йе Ь|пд(пП Ье(нчееп рготе(п апд ОЛ)А. Ае тн((Ь ОЛ(А 1оотрг)пбпВ.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
