Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 42
Текст из файла (страница 42)
(1998; СЬартег 66 от Се))яА Еа!логатогу Мгтиии)). Рго1осо! 1 Марр~пи Рго1е~п-Ь~псйпц %1еь оп 0МА Ьу 0йа~е! Гоо1рпп6пц р ЫА5е ! |Оотринт|мс 15 А метноо то ч150АЕ|ке 0!хестгч йе Ь!п6!пВ оГ а рго|еш |о а хрес|Т|с Р!ч)А хес)пепсе (р1еахе хее р!Ваге 17-1) ГОа1ах апд ЯсЬш)гг !978). ТЬе аххау 15 пя|аПу пхес1 ш сошЬ|па6оп чч)й Ве! гесаг|1а|юп аыаух (р!еаье хее Рго|осо1 2) |о !6еп6Гу ппс)еаг Гас!оса йа| Ъ|пд |о хег)пепсеа !п |Ье гецп1агогу геВюпа оГ цепея А Р!х)аае 1 'Тоо|рпп|" ь Вепегасеб |чЬеп а Ъопп|1 сгапаспрг)оп Гас|ог ргогесгх а хехшепг оГ РЬ)А Ггош йе ппс)ео!у|к асбчпу оГ РЬ!ахе 1. 1п а сурка! ехрепшеп|, йе рапегп оГ РХаае 1 с1еачаВе оЬса!пе6 Гог а гагае! Р)х)А ГгаВшепг |и йе ргехепсе ап6 аЬ|епсе оГ ппс1еаг ех|гас| |х сошрагей роо|рппь арреаг ах !гас!5 |чЬеге по с!еачаВе оссига |и йе ргеаепсе оГ ппс1еаг ех|гас|.
Ву сошраппВ |Ье е1ес|горЬоге6с пюЪ|16у оГ йе РХаае 1 с1еачаае ргодпсыо 1Ьохе оГ а аег)пепсе 1а|Ыег депче6 Ггош |Ье хаше РХА ГгаВ- шеп|, |Ье роя6оп оГ |Ье Гоо1рпп|, апд Ьепсе |Ье РХА хес)пепсе гесоВп!ген Ъу а РХА-Ьшб!пд рго|еш, сап Ье |1есеппшей Очега!1, |Ье ше|Ьо|1 !5 Гак! ап6 хепх!Нче апг) ргочЫех ге50106оп а| |Ье ппс1ео|Ые 1ече). 1п йь ргососо1, |че с)еаспЪе шегЬосЬ Гог шарр)пВ ргоге!и-Ь!п6!пВ 5!гех оп а га|1ю!аЬе1е|1 Ггацшепг оГ РХА.
ТЬе рго|осо1 пхеа Рубахе 1 Со Ггацгпепг |Ье РХА, |чЬегеаа ап а1|егпа6че ргососо! пхех Ьу|1гоху1 га6!са15 |о ГгаВшепг |Ье РХА. рог хпВВеьгюпх оп Ьо|ч |о орг)п|!ге йе Гоо|- рг!06пВ геас|юпЯ р1еахе 5Ее йе рапЕ1 оп тВОе|ВЬЕ5нООт1МС Амо ОРТ1М!УАТ1ОХ ОЕ Омххе 1 ЕООТРВ!МТ!ХС а| йе еп|1 оГ й!5 рго|осо1. МАТЕ!5 1 АЕ5 СА!)Т1ОМ: Р!еаае атее Аррепг!!х 12 Гог арргорпа|е Ьапд1!пд оГ ша!ег!а!5 шаг!|ед чч!й <! >. ВиГГег5 апе! Ьо!ибоп5 Р!еаье аее Аррепг!!х 1 Гог соп|ропепН оГ 5!ос!г ао1и6опя ЬпГГегя апг! геааеп!я 01101е 51осЬ хо!06опа |о 1Ье арргорпа|е сопсеп|га6опя Се)! Ьо|пореп!ха|юп Ьиууег 10 |пМ НЕРЕ5-КОН !РН 7.9) < 1> 1,5 п|М МВС1 10 п|М КС1 0.5 гпМ ЙГЬ!о|Ь|е1|о1 ()5 гпМ рЬепу1п|е|Ьу!я|1Еопу1 Яоог|ае <! > Се!! Ьогподеп!гагюп ЬиГГег сопгат!лВ 0.05% Гчгч) )чоп)с!еГ Р-40 17.6 СЬаргег 17: Апа!уыь о! Селе Ехргеьь(ол т Си игей МаттаПап СеПь — 20'С.
а(|Оно|а аг — 20'С. аь 0.5 юм РЬепу!- пеебе6,)ньс Ьесоге СеП геьиьрет|оп ЬиЕЕег 40 спм НЕРЕ5-КОН (РН 7.9) 0.4 М КС) 1 гпм гПСЬю|Ьге|го1 109о (ч)ч) 8!усего1 0.1 юм РЬепу!гпе|Ьу1ьнИопу) Лоопа 0.196 (чуч) арго6шп 5соге сЬе ЬнПег ас 0'С нп61 пее6ей.
СеП г!лье ЬиЕЕег 40 юм Тпь-С! (РН 7 4) 1 юм ЕРТА 0.15 М С(аС! 5соге |Ье ЬнЬЕг ас 0'С нп61 пее6ес1. Е(Пало! ЯсоП 400 (20;4 иг)ч) О(ььо!че сЬе РкоП |и ьсеп!е Н О апсс ьсоге сЬе ьо1нсюп Егосеп |и !00-П! а1!Ооось ас Рог|па|о!де дуе гп|х <1> 10 |и! оГ ГоппаюЫе 10 ю8 оЕ ху!епе суапо! РР 10 ю8 оГ ЬгогпорЬепо! Ыне 5|оге ас гоопс сегпрегаюге, МПСЕ,ГСаС!д ьо!идол 10 гпм МЕС1| 5 юм СаС1 5сеп!Ье сЬе ю1асюп Ьу П!сгасюп ап6 ыоге сЬе 61сгасе ас гоо|п се|прегаснге. ХаС! (5 м) РЕолсдеС Р-40 Г0.05;ге чПП РЬело):сЬ!огоуог|п <! ) РЬоьрЬасе-Ьийегед ьаПле и4(Ьоис са!с!и|л алд |лаПлеыи|п ьа!сь Ро!уч(лу! а!сойо! (707а и(ч) ОЬю!че сЬе ро1уч|пу! а!соЬо! |и ьсеп!е Н,О апй ьсоге сЬе ьо1н6оп Ггоаеп |и !ОО-Р! 5сор лнх 20 юМ ЕНОТА (РН 8.0) !9|е ( ч)ч) 5Е|5 0.2 м )4аС! 125 П8)сп! уеа|П СЕМА Т(ььие ЬолсоПел|аадол ЬиЕЕег 10 юм НЕРЕ5-КОН (РН 7.6) 25 юМ КС! О.! 5 юм ьрегпнпе 0.5 юм ьрегпнгПпе 1 юМ ЕЕ|ТА (РН 8.0) 2 М юсгоье !Оеуо (ч)ч) 81усего! ТЬе ЬнЕГег ьЬон16 Ье ке соЫ ас сЬе 6|не оЕ нье.
АгЫ ргосеаье спЬгЬссогь ьнсЬ |песЬу!ы1Еопу! йногЫе (РМ5Р), 1 р8(ю! 1еорер6п, 1 )с8/ю1 реръсас)п, ог осЬегь аь 5|ер 1. Т(ььие геьиьрет|оп ЬиЯег 5 псм НЕРЕ5-КОН (РН 7.9) 1.5 юм МЕС) 0.5 юм сП|Ью|Ьгепо) 0.5 п|м РЬепу1юесЬу1ьн1(опу) йног!6е 26еуе (ч(ч) 8!усего1 5соге |Ье Ьн((ег ас 0'С нп61 пее6ей. 178 Сйарсег 17: Апа(уз|с оЕ Бепе Ехргея(оп т Си1(игег( Матти!|ап Се(Ь СОМТКОЕ КЕАСТ1ОМ5 ЕОК ОМА5Е | ЕООТРК1МТ(МО Ас (еач( Съчо сои(го| геасйопь (деасг!Ьес( (п 5(ер 2) ьйои|д Ье (пс(испей (п ечесу ехрепгпепс. А сопсго| (асЫп8 апу 0МАЬ|псйпй ргосе(п ь гес|огес( со !6епс((у гей!опт о( йе па(сес( ОМА Егай пепс йа( аге гейя сапс со 6!йеас!оп ъч!(Ь 0Маъе | ог йас аге оп|у рагйайу сййеасес(.
А сои(го| геасйоп |асЫпй 0Мазе ! Ьис (пс!исйпй 0МА-Ыпсйпй ргосе(п(ь) ехроаеа епс(ойепоиа епг(опис(еаза сйас сап 8!че где со очег6!8еас!оп апФог попгапс(огп с|еанайе раиегпя ЪЧЬеп ияпй раг6а|(у ог МВЫу риг!йес( Егас6опа о( ргосе(пь, (Ье |ассег соп(го| гпау Ье оп песеа вагу, ргонЫес1 а сопсапъ( пай пй пос(еаае боем пос со|тассюпа(е ъч!сЬ йе 0МАЬ|псйпй рго(е|п о( !пгегеьс. СС(Ьеп саггуспй оиг 0МА Еоо(рппйпй Еог йе йга( 6гпе, |С !т иаеЫ| Со Ьане а роьЖне сои(го| (п ъчМсЬ а иЫцсйсоийу ехргеааес( 0МА-Ь~псйпй ргоСе|п о( МВЬ аЬипдапсе апс( ай)п!(у 'ь аааауе6. Ехагпр1еа (пс1иде йе пис|еаг Гас(оса 5рс апс! МЕ-1, ъчЫсЬ Ыпб аисйу со ОМА Егайгпеп(а сои(а(п!пй чапа(юпь оп сЬе вес(пепси СССССС апс( ТССМ,АСС, геарессве|у. Вой о( йене Гас(оса аге ргеаепс |п пис(еаг ехсгассв (гоги сийигес| Не(а сейя а сей йпе сЬас 'ь еаау со ргосиге апд йгоъч.
|с 'ь ъчоиЬъчМ|е оЬ(а!пей Фее ог ойег роясме сои(го! геайепса Ье(оге сапу|пй оис а 0МА Еоосрг|п6пй ьсис(у, А!сеглас(че!у, аечега( сопърааеь чей раг6айу рипйес! Ргерага(!опа оЕ пис|еаг сгапьсг!Рс!оп Еассогк сЬас сап Ье иае6 ат роаЫче сои(го!а МЕТНО[Э 1. Ргераге пис1еаг ехсгасса ияпй опе оГ сЬе Го11оъч|пй (Ьгее гпейобя А1сегпа6че1у, Ггасс(опа 6епчед Ггош рипйсабоп оГ се|!и1аг ргосешз сап Ье иаес! 6|гес(1у ш 5сер 2.
РКЕРАКАТ1ОМ ОЕ МЫССЕАК ЕХТКАСТ5 ЕКОМ Т!5ЯЗЕ а. О!ааесс апс1 пипсе 10-15 8 оГ 6ааие. Ас()иас сЬе чо!шпе оГ пипсес1 6ааие со 30 гп! ъчиЬ ке-со!6 с(ааие Ьопюйешга6оп Ьийег. Нопюйеп|ге !и а 68Ьс-Гссс!пй 0оипсе Ьоиюйеп|гег ип6! >80-9098 оГ сЬе се!!з аге Ьго1сеп аз с1есегпипес1 Ьу ш|сгоьсору. Ь.
То шопйог!уяя пих 10 )с1 оГ йе се1! аиарепяоп ъчЬЬ ап ециа1 чо1шпе оГ 0.49о Тгурап В1ие с1уе апс1 ехапипе йе сю1исюп ипс1ег а ш(сгоасоре ес!шррес1 ъч(сЬ а 20х оЬ)ес6че. Еуьеб се!1а са(се ир (Ье с(уе апс( аса!п Ыие, ъчЬегеав спсасс се!1а ехс1ибе буе апс( гешаш сгапь1исепс. Соп6пие со Ьошойеи(ге йе (Ьаие ип61 >80 — 9098 оГ йе се1!а аге Ьго1сеп. с. 0с1исе йе Ьопюцепасе со 85 ш| ъч!(Ь ке-соЫ с!ааие Ьоиюйешга6оп ЬиГГег. Еауег 27-ш1 а!н(иоса очег 10-ш! сиаЬюпа оГ ке-соЫ сьаие Ьоиюйепсгасюп ЬиГГег !и и1(гас!еаг ог ро|уа!!ошег аъч(пй!пй-Ъис(сес сепспййе ШЪея Сепсбйийе йе сиЪеь ас 103,9008 (24,000 грш !и а Вес(ииап ЯА(28 го(ог) Гог 40 ш!пигеа аг 4 С. д. 0есапс йе аирегпасапс апс( а1!оъч сЬе сиЬеа со с(га!п !и ап |пчегсес1 роясюп Гог 1 — 2 пипшея Р|асе йе сиЬеа оп ке.
(Орйопа|) Уье а гзгог Майе со сш о(Е сЬе сор ичо с|бтра оЕ сЬе сиЬе ап6 р1асе йе Ьоссогп опт сЬ~гд сопса|п|пй сЬе пис1ес оп ке. е. Кеаиарепс( йе ре11ес оГ пис1ес сп 2 ш! оГ ке-со!6 йааие гезиарепяоп Ъи!Тег. Ассигасе1у шеазиге сЬе чо1шпе оГ(Ье геаиарепс(ес( пис1ес апс1 асЫ ке-со1с1 5 м МаС1 со а Впа1 сопсепгга6оп оГ 300 гпМ. Мсх СЬе аиарепяоп йеп(1у. !псиЬаСе йе яьрепяоп Сог 30 шшигеа оп ке.
17.10 СЕларгег 179 Апа!ул!л оГ Сепе Ьхртеягоп т Си!гигес1 Мотта!!ап Се1!л То ап арргорт!асе пшпЬег оГ 15-ш1 ппсгоГи8е сиЪеа ас!й 12 и! ог 1099 ро!уч!пу! а!соЬо! сои! СепстлТи8е сЬе сиЪез Гот 5 ьесопс!а ас 4 С сп а ппсгой8е со с!ерояс сЬе геасПоп ппхсигеа ас сЬе Ьоссопл оЕ сЬе сиЬея 1псиЬасе сЬе геасПоп пихсигеь Еот 10 — 30 пиписеа оп ке. рог еасЬ Р!чЛ Ега8шепг ог !гас Поп Со Ье ачаауесС, аег ир Ьчо сои!го! геао8опя Опе сои!го! сс9СЬоиг СЬе пис!еаг ехтгасС, СЬе оСЬег ъч!СЬоиг асСсС!С!оп ос ОЬ!аче ! сп 5Сер 3.
АсЫ 50 !л! оГ М8С! !СаС1, 501исюп ас тоош сешрегасше апсГ пих ПепПу. 1псиЪасе сЬе геас- с!опа Еог 1 пипше ас тоотп сетпреташге. АсЫ 1-8 р! оЕ й1исес! РЬсазе 1 501исюп со йе писгой8е СиЬея пих 8епс1у, апс1 !псиЬаге йе геасг!опт Еог 1 пиписе ас гоош сегпрегаСиге. 5сор сЬе геассюпа Ьу аеЫ!08 75 р! оЕ асор пих. Ъогсех Ьт!ейу апс! ехсгасс йе геаеПопа сч!сЬ ап ес!иа! чо1шпе оГ рЬепорсЫогоГопп.
ТгапаГег сЬе ассиеоиа рЬааеа со ГгелЬ лпктойце шЬея апс! ргеслрПасе сЬе пис1ек ас!иа сч!сЬ 2.5 чо!шпет оГ ейапо1. СЫП йе ейапо!к ао1иПоп Гог 15 ш!писеа ас — 70"С, апс1 соПеес ргее!рПаСеа Ьу сепгг!Еи8агюп аС шахипшп ареес! Еог 1О пипи!ел аг 4'С лп а пиегой8е. К!иле СЬе реПеса сч!сЬ 1 ш! оГ 70% ейапо1, сепспй8е ада!и, апс! ссгу лп йе алг со гешоче сЬе 1аас сгасеа оЕ есЬапо1. 5о!иЬл1схе йе Р!с!А реПеса !п 5 — 10 !л1 оГ ГогшашЫе с1уе ппх Ьу ч!8огоиз чогсех!08.
Репаилге сЬе Рсс1А ао1исюпь Ьу ЪоП!08 Гог 3 — 5 пиписея 5еС ир а с!епагит!08 6% ог 8% ро1уасту1агпЫе ьес!иепс!08 Пе1 апс1 тип СЬе Пе! Еог ат 1еазг 30 пипи!ел ЬеЕоге!оасПп8 йе РЬЕА загпр1ея Г.оас! йе РссЕА аашр1еь ш сЬе ГоПоичп8 отс1ег: аессиепсе 1асЫег сопсго1 РЬсА с!!8еьсес! ичсЬ Рсчаье 1 ш сЬе аЪаепсе оЕ пис!еаг ехсгасс саг8ес РЬ1А Егогп геасс!опт сС!8езсесс сч!й РЬсаье 1 !п сЬе ргеаепсе оГ пис1еаг ехсгасс саг8ес РЬЕА !псиЬасес! сч!сЬ пис!еаг ехсгасс апсс по Ртсаае 1 Кип йе 8е! ат ялйк!епс сопяапс ролчег со тпа!псаш а сегпрегасиге оЕ 45 — 50"С.
ТЬе сапе тесла!гесС со асГПече орилпа! геао1ислоп оЕ йе ьеслиепсе оЕ !псегеьс тиьс Ье стесегт!пес! епсрлпса11у. МопЬог сЬе рго8геы оЕ сЬе е1ессгорЬогеис тип Ьу Ео!!осч!п8 сЬе пи8гаПоп от сЬе таг1сег с!уел га сЬе ЕопиатЫе 8е1-!оатПп8 Ьисуег. АЕСег е1есСгорЬогеяь !а сошр!еСе, рту йе 81ааа р1атеа арагС апс! СгапаЕег СЬе 8е! Со а рсесе оЕ сЬ|с1с ЫосПп8 рарег.
Рту сЬе 8е! ипссег часишп Гог -1 Ьош, апсГ ехроае Ь со Х-гау П1ш сч!сЬ- оис ап !псепа!Еуспц сегееп сот 12 — 16 Ьоигь ас -20 С. А1сегпаПче1у, сшЪ!есс сЬе с!г!ес! 8е! со рЬоьрЬогипа8е апа!уях Гог 1 — 3 Ьоигя 1О. пис1еаг ехиасс ог ргосесп Егасиоп ллР-епс1-!аЪе!есС СЛЬ!Л ! тфп! ро!у!с11-сСС) НО Орс!ооа! ассс1!г!оол: 2099 УПсоП 400 1-25 и! ! — 10 Ето!ез ! н! Со 25 и! Ргососо| 1: Марртц Ргосет-3т(ид(пц 5|сея оп РТАТА Ьу 0Хаяе! Роогрг|гтс(пц 17.11 ТЙООВ1ВВНООТ!МОАМО ОТТ1МОАООМ ОТ ОМ 1 ТООТТЙ!МОМО ТЬе сопсепсгасюп о( гпопона|епс сас!опь Ы 1Ье геас6оп гп|хсиге (5сер 2) айпи(д Ье с200 гпм апд сур|сайу )п (Ье 50 гпм гапце. Н)цЬег сопсепсгайопь аге а1пюьс а!ънауе )пЫЫсогу, дцгирйпц !п1ега 1(опв Ье(ънееп рго(е(пъ апг| пеца(Ые!у сйагцег1 0ЫА. Н!ВЬ-еа11 (гас(юпхт стоги сйгогпаСоцгарЬу ете ЙйоиЫ Ье дйи(ед арргорпасе!у, д)а1уеед аца!пес 1оън-ьа)1 Ьийегц ог раъеед (ЬгоицЬ а Септпсоп с|еяаЫпц со|игпи Ье(оге аъеау!пц.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
