Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 37
Текст из файла (страница 37)
Ву (пЫЬг6пд асЫ!6са6оп оЕ 1увовогпев, сЫогос(п(пе псау ргечепс ог с(е!ау сЬе с(едгас!ас(оп оЕ сгаыЕес6пд Р(в)А Ьу!увовоспа! Ьус(го!авев (ЕпсЬтпап апс( Мадпыюп 1983). ()п(огсппасе!у, йе Ьепе6ста! ейессв оЕ сЫогос(шпе аге спос1евс апс( с(о пос ехсепс( со аП сеП 1шев. 1п (асс, а1сЬопдЬ сгеастепс тч(сЬ сЫогот(шпе ппргочев сЬе сгапв(ессюп е!Пксепсу оЕ воспе сурев оЕ седа, 6 с(есгеавев сЬе е(6с(епсу оЕ осЬегв (СЬапд 1994). Весапве сЬе Ьа!апсе Ьесвчееп сЬе Ьепебя апс( сПвас(чапсадев оЕ сЫого9шпе чапев ю кЫе!у Егосп сеП!!пе со сеП 1ше, сЬеге ь яспр1у по кау со ргесПсс вчЬесЬег сЬе 6тпд ъчсП 1еас1 со а авера! спсгеаве сп сгапвЕесьоп Егес!пепсу ш а раг6сп!аг ссгсшпвсапсе. Е!отчечег, (Е 1овч Егес(пепе(ев оЕ сгапвЕес6оп аге а ргоЫепс, сс ь сегсаш1у вчогсЬ ехр!оппд вчЬесЬег сЫотоцп(пе сап Ье1р.
ТЬе ор6тпа! 6псе, (епдсЬ, апс( шсепясу оЕ сгеаспсепс пшвс Ъе с(есегт(пес( епсрЫкаду Еог еасЬ сеП 1ше. ТурссаПу, Лочтечет, сеПв М!1 Ье ехровес( со сЫогос!шпе сПрЬоврЬасе ас а 6па! сопсепсга6оп оЕ 100 рМ Еог 3-5 Ьопгв есйег ЬеЕоге, с(пппд, ог айег йе сеПв аге ехровес( со а са1ссшп рЬоврЬасе-РХА соргес(р(тасе, ог с(пппд ехроюге оЕ сеПв со а ппхспге оЕ Р(в(А апд РЕАЕ-дехсгап.
1п сЬе ргевепсе оЕ сЫогос!шпе, йе сеПв с(ече1ор а чеясп1аг!тес( арреагапсе. Айег сЬе стев!таас, сЬе седв аге счавЬес! сч(сЬ рЬоврЬасе-Ьп((егес( ва1спе апс( псегПшп апс( сЬеп шспЬасес( Сот 24 — 60 Ьошв Ьесоге аяауспд Еог ехргеяюп оЕ сЬе !тапа(естес( РС4А. СЫогос(шпе сдрЬоврЬасе ь ргерагес! ав а 100 гпМ всос1с ю!шюп (52 тдтт! сп НсО), вчЫсЬ вЬоп16 Ье всегП(тес( Ьу 61сгасюп апс( всогес) сп Еос1-сочегес1 спЬев ас — 20 С. 16.54 СЬарсет16|!пттотйисйщ С!апет( Сепез йпто Си!тите|1 ЬГаттпа1йап Серь ЕЕЕСТКОРОКАТ!ОМ Ьйис1е!с асЫз 6о пос епсег сеПз побег йе|г о|чп росчег; |Ьеу гет)ц!ге ая|з|апсе |и сгозяп8 рЬуяса! Ьагпегз ас йе сеП Ьоцпбагу ап6 |и геасЬ!08 ап шсгасеПи1ат ясе лчЬете |Ьеу сап Ье ехргеяе6 апбйог гер1|сасе|1. Ехрозцге оЕ агапу |урез оГ сеПз со ап е!есь!са1 сПзсЬаг8е гечепВЫу ПезсаЬ|1|хез сЬеи шетпЬгапез ап6 сгапяепс1у !псцсез сЬе Гоппа6оп оГ ас)цеоиз рай|чауз ог п|е|пЬгапе рогез (!4ецшапп ап6 КозепЬес)с 1972; Мецшапп ес а1.
1982; Сзтоп8 апд Гйецшапп 1982; Гог геч!елчз, р1еазе зее 7лпппеггпапп 1982; Апбгеазоп аллд Ечапз 1988; Тзоп8 1991; лзтеачег 1993) йат росепбасе йе епсгу оГ Р)4А тпо!еси1ез (Гйецшапп ес а!. 1982). ТЬь гпес1юй |чЬ!сЬ ь )сполчп аз е(ессгорога6оп, Ьаз Ьееп йече!оре6 шсо а гарЫ, ятпр1е, ап6 е|Вс|епс сесЬ- пнрле Гог шсгос(исш8 Р)4А !псо а лч!Пе чапесу оЕ сеПз, !пс!исПп8 Ьастепа, уеазсз, р1апс сеПз, ап|1 а 1аг8е пшпЬег оЕ си!сосед |папипаПап сеП 1шез.
ТЬе сЫеГ ргасбса1 а|6 апса8ез оЕ е1ессгорогасюп аге йас П сап Ье арр! |ее! со а |чЫе чат|есу оГ сеПз, ЬосЬ рго1|агуо6с ап|1 еи1|агуоцс, апд йас п ь ехсгеше1у ягпр1е со сатту оис. ТЬе МесЬап!зос оГ Е1ессгорогас!оп Весатье сЬе сЛап8ез ш шеп|Ьгапе зсгиссиге |Ьас ассотпрапу е!ессгорогабоп саппос Ье ч!зиа!ые6 ш геа1 сппе Ьу |шсгозсору, оиг ипбегзсап6!п8 оЕ сЬе тпесЬап|яп |з Ьазе|1 оп ечЫепсе сЬас ь Ьой рассЬу ап|1 с|тсип|з|апба1. Сс|Ы(е ечЫепсе Гот п|апу ой сЬе зсерз !з 1асЫп8, сЬе ЕоПочч!п8 шобе) (С|стеачет ! 993) печетсЬе1ея ргочЫез а р!аияЫе ассоипс оГ йе зет)иепсе оЕ ечепсз сЬас ате !и!с!асе6 Ьу шсгеаяп8 йе стапяпеп|- Ъгапе чо!са8е Егош Пз рЬузйо1о8!са! ча1ие оГ -0.1 со 0.5-1.0 3т. р!длге 16-4 зЬолчз йе ЕоПолч!п8 зес(иепсе оГ ечепсз: ° ТЬе опзес ой' е1есттаротатйоп саизез а таетбтапе тййтрйе ЕоПо|чеб Ъу Еоппа6оп оГ сгапяепс ЬуйгорЬоЬ|с рогез лчЬозе сПашесег Писсиасез Егогп а пипипшп оГ 2 пгп со а тпахипшп ой зечега! папогпетегз.
° боте оЕ йе Гатает ЬутйторЬоЬ(с ротез ате соичеттетй то ЬутйторЬ11(с ротез Ьесагье сЬе епег8у пеебе6 со Еопп ап ас)цеоиз роге ь ге|!псе|1 аз сЬе сгапяпегпЬгапе чо!са8е ь !псгеазет( ап|1 йе епег8у гет)ц!геб со ша!пса!и сЬе с!гсшпЕетепсе оЕ а 1аг8е Ьул(горЬП!с роге |з я8п|Всапс1у 1осчег |Ьап |Ьас гет)ц!гет) со п|а!иса|п а 1аг8е Ьус(горЬоЫс роге. Рог сЫз геазоп, ЬудгорЬП!с рогез Ьаче ап ехсепйе6 Ьа! Е-Ие ап6 тпау Ье ЕигсЬег зсаЬ~Пте|1 Ьу ассасЬлпепс со ип|1ег1уш8 сусоз)се!еса! е!еп|епся ТЬе 8епега6оп оЕ зисЬ!оп8-Пче|1 гпесазсаЫе рогез аПо|чз япаП |опз ап|1 |по!еси1ез со епсег ап|1 !саче сЬе сеП 1оп8 айсег |Ье сгапяпегпЬгапе чо1са8е Ьаз ге|отпел! со!о|ч ча!иез (ВозепЬес)с ес а1.
1975; Улпппетшапп ес а1. 1976; Ешс)пег ес а1. !977). ТЬе ПесаПе6 шесЬапып Ьу лчЫсЬ тпо1еси!ез раса йгои8Ь ЬудгорЬь!к рогез ь пос )сполчп, Ьш и|ау !пс1ибе е!ессгорЬогеяз (СЬегп|о|1пк(| ес а1. 1990) е1ессгоеп|1о-ояпояз, 6(ГГиз!оп, ап|1 епбосусоз!з (Сзтеачег ап|1 Вагпеи 1992). Пес!оз!п8 о! йе рогез арреагз со Ъе а зсосЬазбс ргосезз сЬас сап Ье с(е1ауе|! Ьу 1|еер|п8 йе сеПз ас 0'С. |С|Ы1е сЬе рогез гешаш ореп, ир со 05 р8 ой РЫА сап епсег йе сеП (Вегс1|п8 ес а1. 1987).
ЕПте зее|пз со Ье по !шре6!шепс я псе 13)4А пю1еси!ез ир со ! 50 1|Ь |п яте сап еая1у рая сЬгоиВЬ йе рогез (Кпиьоп ап|1 Усе 1987). Весагье |Ье РМА епсегз 6!гесс!у шсо йе сусор!аяп, !с ь пос ехрозе6 со асЫ сопй6опз !п епбозотпез апд 1узозотпез. ТЫз гоисе |пау ехр1а!и |чЬу йе гасе оЕ шша6оп |и РсхА !псгобисе6 со п|а|п|паПап сеПз Ьу е1ессгорогасюп ь аррагепс1у чету 1о|ч (Рг!п)ссчасег ап|1 К1е!пгПепзс 1986; Вег|1|п8 ес а1. 1987) сошраге6 чб|Ь РМА сгапзуессе6 аз са!сшш рЬозрЬасе соргес|рПасез ог РЕАЕ-Пехтгап сотпр1ехез (е.8., р1еазе зее Са!оз ес а!. 1983). Еог Е.
со1|, е!ессгорогабоп ь сиггепс!у сЬе п|озс еЕЕс|епс гпесЬоб ачаПаЫе Гог сгапзГоппабоп лч!сЬ р1аяп!Пз. 1п ехсея оГ 8096 оййе сеПз |и а си1|иге сап Ье сгапзйогтпе6 со атпрк|П|п теязсапсе Ьу |Ыз тпесЬо6 апд еЕВс|епс|ез оЕ сгапзЕогтпас|оп арргоасЬлп8 |Ье сЬеоге6са! п|ахцпшп оЕ опе сгапзЕоппапс рег шо!еси1е оЕ р!аяпЫ РМА Ьаче Ьееп герогсе6 (5|п|й ес а1.
1990). 11о чечет, йе пшпЬег оГ сгапзйоппапь оЬ|а!пе6 |з шаг)сег-Персис(епс. Сс|Ьеп рВВ322, лчЫсЬ сагпез 8епез сопЕегпп8 геязсапсе со слчо ап6Ью6сз (атпр|сППп апб сесгасусПпе), Ь !псгобисе6 шсо Е. соП Ьу е1ессгорогасюп, сЬе пшпЬег оГ сесгасусПпе-геязсапс сгапзЕоппапь ь -100-Го!6 1еы йап йе пшпЬег оГ агпр|сП1ш-геязсапс сгапзГоппапь (5|ее!е ес а!. 1994). ТЬ|з с!Гесс ь пос зееп лч1|еп йе р!аяпЫ Ь !псгодисе6 со |Ье Ьассепа Ьу |Ье са1спип сИогЫе тпейой Опе розяЫе ехр1апа6оп ь сЬас е1ессгорогасюп Паша8ез ог сЬап8ез |Ье Ьассепа! |пешЬгапе зо йас |с сап по 1оп8ег шсегасс еГЕ|с!епс1у чбсЬ |Ье сесгасус1ше геязсапсе ргосе!и.
Еп)огтаг(оп Рапе|з 16.55 В А Г!СС)КЕ 16-4 СЬапцез |п СЬе МешЬгапе депп Е|ес(го ога6оп 3)гасч)пцз о( ЬуросЬес|са| зсгиссигез 1ог сгапяепс апй псесазсаЫе гпегпЬгапе соп1оггпасюпз Ьецечей со Ье ге|ечапс со е|ессгорогасюп. (А) Ггейй моЧите Яиссиа6оп; (В) аг|иеоиз ргосгизюп ог "йгпр|е"; (С,О) ЬуйгорЬоЬ|с рогез изиацу гецагйей аз сЬе "рпгпагу рогез" (ЬгоицЬ мчЫсЬ 'юпз апг3 гпо|еси|ез раза; (Е) сопсроз|се роге мч)сЬ "Еоос |и 16е йоог" сЬагцей гпасгопю|еси|е |пзегсей |пса а ЬуйгорЬйс роге. ТЬе сгапяепс аг(иеоиз роге пюг|е| аззитез ЕЬас !гааз)с!опз 1гогп А- В- С ог 35 оссиг чч(сЬ |псгеаяпц 1гес(иепсу аз () 'ь )псгеазей.
Туре Г гпау 1опп Ьу епсгу о1 а сесЬегей гпасгопю|еси3е, мчЫ1е сЬе СгапяпегпЬгапе чо|Саце 'ь з)цп)1)сап((у е|ечасей, апй сЬеп регязс а(сег () Ьаз йесауей со а згпаИ ча|ие сЬгоицЬ роге сопйиссюп. П 'ь егпрЬаз)хей сЬас )Ьезе Ьуро(Ьебса! зггиссигез Ьаче пос Ьееп йгесс|у оЬзегчей апй |Ьас зиррогс Еог (Ьегп йегвез 1гогп сЬе |псегрге(а(юп о1 а чапесу о1 ехрегппепыпчо|чпц е1есспса|, орбса3, спесЬап|са3, апй спо|еси|аг сгапзрогс ЬеЬанюг. (Кейгамчп, мч)сЬ ренпьз|оп, Егогп ууеачег 1995 (соруг)цЬс В'Пеу-$.)зз, 1пс.|,) Тур|сацу, Ьессчееп 50% апс1 70% оЕ сеПз ехрозей со ЫцЬ е!ессгк Пе|й зсгепцсЬз аге Ы!ей. Т!се |есЬа! ейессз, счЫсЬ с агу сп спсепясу Егогп опе сеП суре со апойег, аге пос с1ие со Ьеа6пц ог е!ее(го!уяз апй аге шйерепг|епс оЕ сЬе сиггепс йепясу апг| епегцу спрос. !пзсеаг1, сеП |йцшц сз с|ерепйепс оп Пе|г1 зсгепцй апс1 сЬе соса! сапе оЕ сгеасгпепс (ца1е апй Нагпцсоп 1967).
ТЬе гпозс 1гце1у саизе оЕ сеП 36Пгпц гз йе гирсиге оЕ сеП псепсЬгапез, счЫсЬ 1еай со гарей 1оы оЕ юшс Ьа1апсе апй гпая|че еЕПих оЕ сеци1аг согпропепсз. Е!ес1гсса1 Сопг3!1!опа Кег)и|гег) Еог Е!ес1горога11оп Е|ессгорога6оп оЕ а1псозс аП гпапипа1сап сеПз сз гпйисей счЬеп сЬе сгапяпепсЬгапе чо1(аце, л()(с), 'ь спсгеазей со 0.5 — 1.0 Сг Еог йигасюпз оЕ писгозесопйз со пиП|зесопйз. ТЬВ сгапз|асез со ап е1есспс Пе1й зсгепц|Ь оЕ -7.5 — 15.0 )сТг/сгп. Весаше сЬгз ча1ие сз сопзсапс апй сз шйерепйепс оЕ сЬе ЬюсЬеписа| па!иге оЕ йе сеП псепсЬгапе, Ь зеепсз П)се!у сЬас чапа6опсйп йе еЕПссепсу оЕ е1ессгорогасюп Егосп сеП 1спе со сеП Ппе аге йие со йй:егепсез ш сЬе гасе апй еЕЕгс|епсу оЕ гпепсЬгапе гесочегу ас сЬе епй оЕ сЬе ри1зе.
ТЬе сгапяпепсЬгапе чоЬаце, л()(с), шс1исег| Ьу е1есспс Есе)йз чаг|ез |п йгесс ргорог6оп со сЬе йагпесег оЕ йе сеП сЬас В йе сагцес Еог !гааз(есс!оп (Кписзоп апй Усе 1987). Е!ессгорогасюп оЕ спапипаПап сецз, Еог ехагпр1е, гес|шгез япацег е1есспс Еге1йз (<10 )сИсш) йап г1оез е1ессгорогасюп оЕ уеазь ог Ьассепа (12.5 — 16.5 )сЪ'!сш), Мозс оЕ |Ье сошшегс!а! зиррПегз оЕ е|ессгорогасюп гпасЫпез ргочгйе 1Ьегасиге йезспЫпц сЬе арргохипасе чо|сацез гес)и)гей Еог сгапз(ес6оп оЕ зресгцс сурез оЕ сеПз ш сЬесг раг6си1аг аррагасиз.
ТЬгее ипрогсапс сЬагассегь6сз оЕ йе ри1зе ацесс йе еЕЕгс(епсу оЕ е1ессгорогасюп: сЬе |спцй оЕ сЬе ри1зе, гсз Еге(г(-зггепцг)с, апй гь Жаре. Мозг о( йе сопииегс|а! е1ессгорогасюп псасЫпез изе сарасЬабче йзсЬагце со ргойисе сопсгоПей ри1зез ччЬозе |епцсЫз ша(п)у йесегпипей Ьу сЬе ча1ие оЕ сЬе сарасссог апй сЬе сопйис6чЬу оЕ йе гпейшп. ТЬиз, сЬе 6гпе сопзсапс оЕ сЬе ри1зе сап Ье а|сегей Ьу зсч!ссЬ~пц сарасЬогз ассогйпц со сЬе пъапиЕассигег'з шзсгис6оы ог Ьу сЬапц(пц сЬе юпгс зсгепцс|с оЕ сЬе гпейшп.
СзгЬеп сЬе 16.56 СЬартет 16:!и!тот(ис(ие С!апет( бепея тто Си(гите|(Матта!]аи Се1Ь сЬаг8е (тот |Ье сарасиог Ь йгестеб |о а яатр1е р!асеб Ьет|чееп ||чо е!естгобея, |Ье чоЬа8е асгоь йе е1есггобея пяея гарЫ!у |о а реа1| (У,) ап|1 г(ес!шея очег типе (т) ассогйи8 |о йе е|р|а|юп: У, = У,[е "|"] |чЬеге | ЫЬе 6|пе сопя|ап|, |чЬ|сЬ |я ес)иа! |о йе типе очет |чЬЬЬ йе чо1|а8е дес1(пея |о -379о о( реа1| ча1ие. я (теаяиге|$ ш яесопсЬ) ь а!яо ег(иа! |о |Ье рго|1ис| о( |Ье геяя|апсе (В, теаяшед |п оЬи|я ]($) ) ап|1 |Ье сарасЬапсе (С, ш Рата|Ь ]Р]): т=ЯС Ргоп| |Ь)я ет)иагюп, Ь (о11о|чя (1) |Ьат а 1аг8ег сарасЬог гет)и(гея тоге типе |о йясЬаг8е тЬгои8Ь а п|ейшп оу а 8!чеп геяятапсе ап|1 (2) |Ьат а сарасЬог о1 а 8(чеп яхе йясЬаг8ея гпоге я1о|ч1у ая |Ье геяя|апсе оу йе тейшп !псгеаяея.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
