Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 35
Текст из файла (страница 35)
ТЬе Ьассепа! епгуше апипо81усояйе РЬозрЬосгапз(егазе, сагпей оп сЬе сгапзрозоп зес)иепсе Тп5, сопчегсз 0418 со а попгохк (огш. ° 5е!есбче соий!с!оиз. Весапзе еасЬ еиЬагуоск сеП 1ше йешопзсгасез а й)СТегепс зепя6чиу со сЬ!з ап6Ъгоск (апй зопсе аге сопср1есе!у геязсапс со )с), сЬе ор6гпшп аспоипс гес)шгей со )сП! попсгапз(ее!ей сеПз пшя Ье езсаЫЬЬей егпрсгкаПу (ог еасЬ песч сеП Ппе ог зсгаш изес) (ог реппапепс сгапзуесс)оп, ТЫз орсипши ь еяаЫЬЬес! Ьу с)есеппшсп8 а ЫПш8 сигче (ог сЬе сеП 1гпе о( шсегея. !п йЬ суре ог" ехреп'- гиепс, а р!аяпЫ соп(егг)п8 геязсапсе со 6418 (е.8., р5Ч2иео ог р5тг3иео„5оисЬегп апс! Вег8 1982) ь !гааз(ее!ей шсо йе сеПз, апй р1асез ог сгапзгессей сеПз аге зпЬ)ессей со й!(гегепс сопсепсга6опз о( 6418.
Айег а 2 — 3-счее)с зе1ессюп репой, йе сопсепсга6оп о( 64! 8 8)ч)п8 пзе со сЬе 1аг8езс пшпЬег ог чгаЫе со1ошез ы г1есегпипей Ьу чапа) гпзрес6оп, ог Ьессег Ьу ассиа! соип6п8 о( йе со1ошез айег зсашгп8 чйсЬ б)еаза ог Вепбап чю!ес. Сопипегсса! ргерагабопз ог" С418 чагу ш СЬесг сопсепСгаСюп о( асбче ап6Ъю6с, чйСЬ СЬе ачега8е рппсу Ьесп8 -509я рог йЬ сеазоп, еасЬ ЬассЬ о( С418 зЬои1й Ье 6сгасес) Ъе(оге изе сп 6ыие си1сиге.
(3езр)се сЬ)з чапа6оп, йе агпоипс ог С418 изей со оЬсаш ор6спа1 пшпЬегз о( сгапз(ее!ей со!оп(ез гз сопзсапс гог счеП-сЬагассег)сей сеП !спез. ТаЫе 16-5 8)чез сЬе орсггпшп С418 сопсепсгасюп гап8ез (ог ые сч)сЬ зечега! сопипоп1у изей сеП 1шез. ТАВЕЕ 16-5 5е!есс)че С418 Сопсепсга(1оп ССапВез С418 Соясеяткхтсоя (Ссфш1) Сеет есие Ох Окохясзмз СЬгпезе Ьашзсег оз агу сеПз Май)п-)тагЪу сапше )сЫпеу сеПз Ншпап ерЫеппоЫ А43) се1Ь 5(ш)ап СН-1 сеПз ЪПсгуозге1шт Р1апс Уеая 700-800 500 400 500 !0-35 !О !25-500 ° Майе ог" ас6ои. ТЬушЫше !Ппазе саса1ухез а геассюп сп ап а!сегпасп е расЬсчау (ог йе зупйеяз о( йТТР ггогп сЬупий)пе.
ТЬе епхугпе ь пос гег)шгей ипс1ег поста! сопг86опз ог" ВгосчсЬ, аз сеПз сурка!- )у зупйезгае йТТР Пош йСРР. Носчечег, сеПз 8госчп ш сЬе ргезепсе оу апипорсепп (ап апа!о8 ог й)Ьуйго(о1асе) аге ипаЫе со псПП(хе йе изпа1 расЬсчау (ог зупйеямп8 с1ТТР, апй йы гесрше йупигПпе Ыпазе со гпа1се ые о( сЬе а!сепса6че расЬсчау. ° 5е1ес6че соий16оиз. СеП 1спез !ас)йп8 епйо8епоиз сЬушЫше Ыпазе асбчПу аге Вгоччп )п а согпр1есе псес1шгп зпрр1егпепсей ейсЬ 100 рм ЬурохапсЬгпе, 0.4 Ссм апипорсепп, 16 )см сЬуш!й)пе, апй 3 рм 81усспе (НАТ шей)шп). Енуогтаг(он Ране!я 16.49 ТАВЕЕ 16-6 5е)ес6че Сопсеп(га6опя оЕ Нуеготус!п В 1мн|В|тОВТ Сомсемтахтсом Ое Нчскомчс|м В Кеееаемсе5 ОВСАМС5М Сг(гг ап|1 )3ач)ея (1983) 6г!Сг аид (Зач!ея (1983) 5и86еп ес а). (1985); Ра1гпег е| а1. ( 1987) Вясйепс)иа го!| 200 И8/гп1 200 88йп) 12 — 400 И8|ш1, с)ереийи8 ои йе сеП Ппе 5асс)|аготусе| сегеппае МагптаПап се(Ь НуВгогпус!п В <! > ° Мог(е арас6он. Ну8готусш В Ь ап аиипосус1йо) ап6Ьюс!с ргог(исес) Ьу 5иергон|усея )гу5гоясор)сггя (Р!ссеи8ег ес а1.
1953). Ну8гоп|ус(п В |пЫЬия рюсеш яупсЬея!я |п ЪосЬ рго1|агуосея ап6 еи)сагуосея Ьу !псегуег!п8 чбсЬ сгапя!осас|оп (СаЬайая ес а). 1978; Сопха!ех ес а1, 1978) апс( саиып8 гпЬсгапя1асюп ш чгчо апд ш чиго (5!пВЬ ес а1. 1979), А Ьассепа! Р1аыпЫ-Ъогпе Вепе Ьая Ъееп Ыеп66ей ап6 яес)иепсес( (Сг!сх апс) Е)ач!ея 1983), |чЫсЬ епсодея а 341-анино-асЫ Ьу8готус!сс-В РЬоярЬосгапя(егаяе (Као ес а1. 1983) сЬас шас6часея йе ап6Ъю6с. ТЫя Вене Ьая Ьееп те|1 ая а яе1ессаЫе гпаг)сег ш Е, со)1, апс( сЬииегк Вепея сопя!спесей |ч|й |Ье арргорпасе рго|иосегя асс ая г(от!пап| яе1ессаЫе таг)сегя |п 5асс)ыготусея се|аллое (Сг!сг апс) (3ач!ея 1983; Каясег ес а1.
1984), гпаиипайап се1Ь (Вапсепе ес а1. 1984; 5и86еп ес а1. 1985), апс( р1апся (чап йеп В!геп 1985; )Ага)йгоп ег а1. 1985). ° 5е(есг(че сопя((г(онх ТЬе сопсепсгасюпя оЕ ап6Ь|оск гег)и!гес( со |пЬ|Ь|с Вго|чсЬ оучагюия ог8апЬпь аге ргеяепсег) ш ТаЫе 16-6. МеТЬОТгеха!е (МТХ) <! > ° Моде оу асг(он. Ап апа!о8 оЕ с)йудгоЕо)асе, гпесЬосгехасе Ь а ро|чегри1 шЬ!Ьйог оЕ 6!Ьус(го(о!асе гедиссаяе (Е|НРК), ап епауи|е гег)и!гес! Еог рш!пе Ь(ояупсЬеяя. 1псгеагбп8 1ече15 оЕ тейосгехасе сап геяи1с ш атрППса6оп о! сЬе Вепе епсойп8 Е|НРК ч6|Ь сопсот Паис )псгеаяе и| (ся 1ече15 оЕ ехргегаюп.
ТЬе яуясет Ь |Ьеге(оге ехсгеспе1у еЕЕесс!че Еог а|прППсасюп о( сосгассяуессес) Вене| (5!псоияеп ап|1 Ееч(пасси 1983). ° 5е1ес6| е сопг((г(оня. ТЬе и|ейшп Ь сур|саПу яирр!есиепсе6 чбсЬ 0.01-300 Ссм и|есЬосгехасе. МусорЬепо11с Ас(с( Риготуоп ° Мог(е оу" асс1оа. Ригоп|усш, ас6п8 ая ап апа1о8 оЕ аиипоасу1 сК)4А, (пЫЬ!ся ргосе|п яупсЬеяЬ Ьу саы!и8 ргетасше сЬаш сепиша6оп. ТЬе ап6Ьюбс Ьесоп|ея асесу!асей апй йегеЪу |пас6часей Ьу йе ас6оп оЕ риготус!и-АГ-ассу! сгапясегаяе (|1е (а ! Впа ес а1. 1988). ° 5е!ессие сонгВВоня. ТЬе сопсепсга6опя оЕ ап6Ьюбс гес)и!гес) со |пЬзЬ|с Вгоъч|Ь оЕ тапипа1|ап сеП 1|пея Ь сур|саПу |п йе гап8е оЕ Ой — 10 ИВ(гп1; |папу сгапяЕогтес( сеП Пиеа аге еЕЕес6че1у яе!ессег) ас 2 и8| 1.
° Мог(е о)'ас6он. МусорЬеио1к асЫ, а |чеа1| йЬайс асЫ |ч|сЬ ап6Ью6с ргорег6ея, ярес!ЕгсаПу шЫЬ|п !пойпасе (!МР) с(ейуг!го8епаяе, ап епгуте оЕ таиипаПап сеПя сЬас сопчегп 1МР со хапсЫпе гпопорЬоярЬасе (ХМР). ТЬЬ Ыос)с со яупсЬеяЬ оЕ Виапояпе гиопорЬоярЬасе (СМР) сап Ье геЪечей Ьу яирр)у|п8 сеПя чбй хаий|па ап|1 а Еипс6опа! Е.
соП ерг Вене, |чЫсЬ епсо|1ея ап епгуп|е, хапсЬ!пе-Виапше РЬоярЬопЬояу1сгапяЕегаяе, сЬас сопчегся хаий|не со ХМР. Е. сей 8рг сап |Ьеге(оге Ье мед ш йе ргеяепсе о( гпусорЬепо!к асЫ ая а йопипапс яе1ессаЫе таг)сег Еог сосгапя(оппа6оп оЕ |папина!!ап се1Ь оЕ апу суре (МиП!Вап аий Вегу 1981а,Ь).
ТЬе яе1ес6оп саи Ье гпайе тоге ейк!епс Ьу сЬе ас(с)!с!оп оЕ апппорсепп, |чЫсЬ Ыос1|я |Ье епйо8епоы расйсчау оЕ раппе ЬюяупйеяЬ (Еог й|гйег с(есайя, р1еаяе яее Согтап ес а1. 1983Ь). ° 5е1есйче сопййоня. ТЬе сопсепсгасюп оЕ ап6Ь~о6с гес)и!гей со шЬ|Ь|с Вго|чсй ги гпаиипаПап се!Ь Ь -25 ИВ(гп1. !650 СЬаргег16: Гисгог)истП С1опей Сеиез тса СиЬигейМатта1(ап Се((к Е! РОРЕСТ1ОМ Е(роЕессюп сз сЬе 8епепс нагие оГ а зес оГ сесЬпнйиез изей со шсгойисе ехо8епогь Р(ъ(Ак сиса си1сигей псапипа!сап сеПз. Мапу чаиапь оГ сЬе Ьаяс гпесЬой Паче Ьееп йече)орей, Ьис йеу аП айЬеге со сЬе каше Вепега! рппсгр1е: ТЬе Р)ъ)А со Ье сгапзГессег1 ь соасей Ьу а 1грЫ, счЫсЬ еПЬег шсегасск й(гесс!у чйсЬ сЬе р1аяпа сиепсЬгапе оГ сЬе сеП (ВапВЬаш 1992) ог Ь са1сеп гпсо сЬе сеП Ьу попгесерсог-гпесПасес( епйосусомк (ХЬои апс( Ниап8 1994; ХаЬпег еС а1.
1995), ргезшпаЫу ак а рге!иг(е Со гпешЬгапе Еияоп (и епг(оъопгез (Ргппас1исча8е ес а!. 1989; Еечепбз апй 5Пч(ик 1990; Коке ес а!. 1991). Носчечег, ак чйсЬ ойег сгапзЕес6оп сесЬпнрлек, оп1у а япаП регсепса8е оГ Прозопгез йе1гчег сЬегг саг8о оГ РИА сиса сЬе пис1еиъ' (Тзеп8 ес а1.
1997). Ак )ий8ей Ггоги писгоксору, псозс оГ сЬе Р(ъ(А гепсашз аккос(асей чисЬ сЬе гиепсЬгапе сопсрагсгпепь оГ сЬе сеП, лчЬеге и ь ипачайаЫе Гог сгапзрогс гпсо йе сусор1азгп апс( зиЪкециепс псочегиепс со сЬе пис!сиз (ХаЬпег ес а1. ! 995). (ъ(ечегсЬе1екз, счЬеп счог(йп8 ас (ск Ьекс, 1гроЕессюп сап йеПчег В(ъ(А шсо сеПз тоге еЕЕгс(епс1у йап ргессргсасюп сч(сЬ ро1уса6опз зисЬ аз са1сшгп РЬозрЬасе апй ас 1оччег созс сЬап е1ессгорога6оп. (л(се осЬег сгапзГесбоп сесЬшс(иез, ПроГес6оп и пос ишчегкаПу киссеяВлЬ ТЬе еГПссепсу оГЬосЬ сгапяепс ехргезяоп апс1 зсаЫе сгапзГопиа6оп Ьу ехо8епось!у аййей Вепез чапек чгЫе1у Ггош сеП Ппе со сеП Ппе. РгЕГегепс сурез оГ сеПз пгау зЬосч а гап8е оГ с)иап6са6че геъропзез со йе занге ПроГес6оп ргососо1. В(ЕГегепс ргососо1з изей оп сЬе залпе сеП !гпе гиау Вессегасе гези1съ сЬас крап ап ехсепяче гап8е. Ноъчечег, ПроГессюп счог)ск чеку счеП Ы шапу згсиа6опз счЬеге зсапйагй гпесЬойз аге посопось1у (пеЕЕгс(епс, Гог ехаплр1е, сгапзГес6оп оГ рпгпагу си1сигез ог си!илгек оГ йлТЕегепс(асей сеПз (е.8., р!еазе зее ТЬогпрюп ес а1.
1999) ог спсгосЬлссгоп оГ чегу ЫВЬ-псо1еси1аг-ъче(ВЫ Р)ъ)А гпсо зсапг1агг( сеП !спек (е.8., р1еазе зее 5сгаикк 1996). 1лроЕес6оп и йеге(оге СЬе плесЬос1 оЕ сЬогсе Сог гпсгос1исш8 Пенек гпсо йгТГегепс(асей сеПк гп чьго апй и йе сесЬпнрле оГ Пгзс гезогс лчЬеп о1йег шейосЬ оЕ сгапзЕессюп аге шайес)пасе. ТЬе СЬепсс ксгу оЕ Е1роГес(1оп ТЬеге аге сна Вепега1 с!аяек оЕ Проъоша1 сгапзЕес6оп геа8епся сЬозе сЬас аге апгопн апй сЬозе сЛас аге са6ошс.
Тгапз(еспоп чйсЬ ашопк Прозошез, счЫсЬ лчак Пгзс гьей ш йе 1асе 1970з со йе!Нег Р(ъ(А апй К(ъ)А со се!Ь (и а Ью)о8(саПу ас6че Голи, гег)и(гез сЬас с!се Р)ъ(А Ье сгаррес( (и сЬе шсегпа1 ас!иеось красе оГ 1аг8е аг66с(а! 1ашеПаг Прозошез (Еог геч(есчк оГ сЫз еаг1у счог)с, р!еаъе зее Рга!еу апй РараЬай)орои1оз ! 981, ! 982; Рга!еу ес а!. 1981; 5сгаиЫп8ег апс( РараЬаг1)орои1оз 1983).
Нолчечег, сЬе сесЬпн)ие (и (ь Ьаяс Еопп иечег епсегес( ъчЫеъргеас1 гье, регЬарк Ьесасье оЕ гь с(ше-сопкипии8 па!иге апй ргоЫеисз счгй гергойисгЬг1иу Ьу гпчек68асогз счЬо ъчеге пос ехрегс ш 1грЫ сЬегпьсгу. ТЬе 1гроЕессгоп сесЬпн!иез ш сопипоп гье сойау зсепг Егопл а зепсша1 гПзсочегу Ъу Ресег Ре18пег сЬас са6ошс 1грнЬ геасс зропсапеось1у лч(сЬ ВС4А со сопи а ипйапгеПаг зЬеП счЫс!л сап Гике чйй сеП шеплЬгапез (Ре18пег ес а1. 1987; Ре18пег апс1 Рйп8о1й !989). ТЬе Еоппа6оп оГ РсчА-ПРЫ сошр1ехек и с1ие со юшс гпсегас6опз Ьепчееп сЬе Ьеас) Вгоир оЕ сЬе 1грЫ, лчЬ(сЬ сагпез а зсгоп81у ром6че сЬаг8е сЬас пеисга! Ьез сЬе пе8а6че!у сЬаг8ей РЬозрЬасе Вгоирз оп сЬе В(ъ)А (р1еазе зее Р(8иге 16-1).
ТЬе Пгзс Вепега6оп оГ са6опк ПрггЬ счеге гиопоса6опсс г1оиЫе-сЬгйп агпрЫРЫ1ек сч(сЬ а роя6ч:1у сЬаг8ей срласегпагу аги(по Ьеас1 Вгоир (Вих8ипек ес а1, 1989), 1ш)сей со сЬе ПРЫ Ьас1сЬопе Ъу есЬег ог ексег ! ш)са8ез. 5исЬ спопосасюшс 1грЫз кисуег Попс сгчо гпа)ог ргоЫепь: ТЬеу аге сохгс со плапу сурез оЕ гпаплспаПап апй гпзесс сеПз, апй йегг аЬс!гсу со ргопгосе сгапзГес6оп Ь гезспссей со а зпсаП гап8е оЕ сеП Ппез (Ре18пег ес а1, 1987; Ре18пег апй Рйп8оЫ 1989). ТЬе 1асег Вепегасюпз оГ са6ошс ПРЫз аге ро1уса6опгс, Ьаче а Еаг лчЫег Ьозс гап8е, апй аге сопяйегаЫу 1ея сохк сЬап сЬегг ргег)есеяогз (Гог геч(елч, р1еаке зее Оао апй Ниап8 ! 993).
!п псом сазез, ргерага6опз оЕ сасюп(с 1грнЬ изес1 Гог сгапзЕес6оп сопяъс оЕ а пихсиге оГ зупсЬе6с са6опсс 1грЫ апс1 а Еико8епгс 1грЫ (РЬозрЬасЫу!есЬапо!апипе ог ВОРЕ). 5ечега) са6опсс апй ро!уса6опгс 1срнЬ ас6че сп сгапк(ессгоп аге с(експЬей гп ТаЫе 16-4. РерепгПп8 оп йе согироябоп оГ сЬе 1грЫ пихсше, йе РГ4А со Ье сгапзЕессей Ъесошек шсогрогасей еПЬег шсо пш16!агиеПаг ксгиссигек сошрозей оГ а1сегпа6п8 1ауегз оГ (срЫ Ьг1ауег апй Ьуйгасей Р(ъ(А ог шсо Ьеха8опа1 со1ипспз аггап8ей гп а ЬопеусосиЬ зсгиссиге (ЕаЬас-Мо!еиг ес а1. 1996; Ко!!очес ес а1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
