Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 31
Текст из файла (страница 31)
! 6.33 16.34 СЬарсег 16: 1ллодис(л8 С(олед белег (лго Сипигед Маттайал Се16 ° Сог!(огтас(оп апд сопсепггапоп 07 РА(А. А!ЕЬоиВЬ ЬосЬ 1шеаг апд сггси1аг РХАх сап Ье сгапхсессед Ьу е(ессгорогасюп, ЫВЬег )ече!ъ оЕЬой сгапяепс ехргехяоп апд зсаЫе сгапхсогшасюп аге оЬсаспед ъчЬеп 1!пеаг РХА !х ихед (Ъ)ешпапп ес а1. !982; Ропег ес а1.
!984; Топе8иххо ег а). 1986). ЕЕ:есбче Сгапьсесг!оп Ьах Ьееп оЬСаспед чдй сопсепггагюпх оЕ РЪЕА гап8!08 Егогв 1 )с8(ш! Со 40 )с8(ш!. ° 1отс сотрояпол о( йе тед!ит. ТЬе еЕВс!епсу оЕ сгапхсес6оп ыпапу101д Ьс8Ьег счЬеп сЬе се!1х аге хихрепдед сп ЬиЕЕегед аа1с го1исюпх (е.8., НЕРЕЕ-ЬиЕЕегед ха1!пе) гасЬег сЬап ш Ьийегед го!ибопх оЕ попюпк хиЬасапсеа хисЬ ах псапппо1 ог хисгохе (КаЬиххау ес а1. !987). А пшпЬег оЕ д!ЕЕегепс е1ессгорога6оп шягшпепп аге ачабаЫе сопппегссаПу, апс1 йе шаписассигегх вирр!у десас1ед ргососо1а сог йе!г иве. ТЬе 101!осчсп8 шейод ь адарсед Егош а ргососо1 ргоч)дед Ьу 1епп!Еег СисЬЬегс апд КЬопда Ваххе!-РиЬу (()и!чегясу оЕ Техах 5оисЬсчехсегп Мед)са! Сепсег, Ра11аа) апд Егош Вашп ес а1. (!994).
Рог а гечдеи оЕ шесЬода Еог йе спсгодиссюп оЕ РЫА пю1еси1ех спсо еи)сагуос!с се11х Ьу е)есСгорогаСюп, р!еахе аее Апс1геаеюп апс! Ечапа ( 1988); Еог а д)хсип!оп оЕ йе ые оЕ е1есСгорогасюп со !псгос1исе РЬ)А !псо Ьассепа) се11я р)еаее атее СЬарсег 1, Ргососо1 26; апс1 Еог ЕшсЬег спсоппасюп оп сЬе шесЬашяп оЕ е)ессгорогасюп апд орсип(хас!оп, р!еахе хее сЬе шуоппасюп рапе1 оп ЕСЕСТКОРОКАТСОЬС. Млт НИАХ САС)Т!ОЬ): Р!еахе атее Аррепд!х 72 Еог арргорпаСе Ьапд1!п8 оЕ шаСег!а!х тагЬед сч!СЬ <! >.
Выстегь апс! Ьо!м1соп8 Р!еахе хее Аррепд)х 1 Еог сошропепСх оЕ хСос)с хо!иС!опх, Ьи((егх, апд геа8епгя Рпиге хСосЬ ьо!иС)опх Со СЬе арргорг)аСе сопсепСга6опя С(етха игаса (70;4 и(ч) ТЬе О!ела ьса!в еЬовсд Ье ЕгееЬ!у ргерагед св рЬоерЬасе-ЬвВегед еабве ог Н,О авд 6!сегед сЬгов8Ь ИЪаггвав Ссо. С 6!Сег рарег ЬеЕоге вес. МесЬало( <!> РЬоьрЬасе-Ьибегес( ха((ле (РВ5) 5!ел!!хе йе ео!вдов Ьу 6!сгадов Ье(оге вее аве( есоге 6 ас гоогв сегврегасвге. 5осбит Ьисугасе (500 тьИ (орс(олаВ Ев а сЬевнса! (шве Ьоосс, Ъпв8 ав а!х!вос о( ьсос(е Ъвсупс асвС ьо1вдов со а рН о( 7.0 юссЬ 10 и ХаОН.
Всеп!гхе йе ьо!вдов Ьу раве|ох в 71иов8Ь а 0.22-ргв 61сег; ьсоге йе 6!пасе ас -20'С. )Ь)ссс!е1с АснЬ аМ О!коппс!ео1сс!еь Саглег РНА (70 тВ(т(; е.8., зол(сагед ьа(тол арест ОНА) (орпола() Нлеалгег( ог ссссо(аг р(аьтсс( РНА (7 СгВ(р( сл хгеп(е г(есол(хег( Н,О) Мейа СеП сиИиге Вгои й тесВит (сотр(есе алд (ор6олаИ хе(есс(че) Сеп1гс1ще8 апс1 Ко1огь 5огча(( Н7000В гогог ог ес(и(ча(елг Ргогосо! 5: РНА Ттл~есгЕоп Ьу Е!есггорогагЕол 76.35 прес!а! Ецп1ргпеп$ Е!есггорогапол ЕЕечусе алсЕ сичеяе» Селе Ра!»ег !! (В!о-Кай Саг.
по. 165-2105 Еог !10-Ч 05. 5у»1ст» апс! Са1. по, !65-2!06 Еог 220-Ч Ешореап 5у»1егп»). УЕ»»ие сиИиге сЕ!»Ье» (35-тт) ТЬВ ргогосо! Ь Ве»!апас( Еог сс!!» Вго»чп !и 35-ппп са!Еше 0!»Ье». !Е пш!1»чге!! р!агс», Ла»(с», ог сВ»!ге» оЕ а с!!ГГегепг с(Гагпегсг аге а»сс(, »са!с 1!ге сеП с(сп»!Еу апс( геаВспг чо!шпс» ассогйпВ!у.
Р!еа»е»ее ТаЫс 16-3. АГ1Й(гппа! КеадепЬ 51ер 70 оЕ ЕЬ!» ргогосо! тау гесЕи»ге йе геаделг» !Г»1егЕ Ел СЬаргег 7 7, Ргогосо! 7, ог Ел ЕЬе асЕ»И!ила! ргогосо! т ргогосо! 7. Се!15 апе! Т155пеь Ехролелг!аПу дгоучЕлд сипиге» оЕ таттаЕ!ал сер» !ЧЕТНО0 1. Нагче»1 1Ье сеП» го Ье ггап»!.есгес1 Ггот си!шге» (и 1Ье тЫ- го 1аге-1оцапгЬт!с рЬа»е оГ хго»ч(Ь. ()»е е!йег а гиЬЪег ро1кетап ог ггуряп го ге!еа»е ас)Ьегепг сеП».
Сепгп(иае аг 5005 (1500 гргп Ги а ВогчаП Н!ОООВ гогог) Гог 5 пппи1е» а1 4'С. 2. Ве»и»реп») 1Ье сеП реПе1 !и 0.5х чо!шпе о( йе ог!0!па! цгоччй пгеспшп апс1 теа»иге 1Ье сеП пшпЬег ияли а Ьегпосу1отегег (р1еа»е»ее Аррепспх 8). 3. СоПесг йе сеП» Ьу сеп11!Гида!!оп а» 11е»спЬес1 т 51ер 1, апс1 ге»и»репе( 1Ьет !и его»чгЬ теспшп ог рЬо»рЬаге-Ьи(уегес!»аПпе аг гоот гегпрегагше аг а сопсепггагюп оГ 2.5 х 10» го 2.5 х 10' сеП»Ап1. 4.
Тгап»(ег 400-р1 а1нраоь оЕ йе сеП»и»реп»!оп (!О» го !07 сеП») !пго а» гпапу!аЪе1ес) е1есггорогагюп сичепе» а» пеес!ес(. Р1асе 1Ье !оас(ес( сичепе» оп ке. 5. Вег йе рагапге1ег» оп 1Ье е1есггорогапоп с(еч!се. А гурка! сараспапсе ча1ие и» 1050 ВВ Уо!гаВе» галие Ггот 200 го 350 Ъ; с1ереисппд оп йе сеП Ппе, ЬШ цепегаПу ачегаце 260»г. ()»е ап 1пйш1е тгегпа! гея»гапсе ча1пе. Р!»сЬагце а Ыап)с спчегге сои!а!п!иа РЬо»рЬаге-Ьи((егес) »аПпе аг 1еа»1 1»чке ЪеЕоге ЪеВ)пи!пц е1есггорогапоп оГ сеП». 6.
А»Ы !Π— 30 Ггц оГ р1аяиЫ РЬГА !и а чо1шие оГ ир 1о 40 р1 1о еасЬ сш епе сои!а(п!пц сеП». (Поупе !пче»1!да!ос» асЫ сагггег РХА (е.д., »а1пюп»репи РЬ)А) го Ьппц 1Ье 1о1а! апюппг оГ Р)чА го 120 )гц.) Сеп11у т»х йе сеП» аис1 Р!чА Ьу р)ре11!па йе»о1ипоп ир апс1 с(оччп. Ргосеес( го 51ер 7»ч(1Ьои1 с1е1ау. а» 1МРОКТА!ЧТ Ро по1 !01гос)исе а!г ЬиЬЫе» !01о 1Ье»и»реп»юп с)иг!ла йе т!х!ла»1ер. 7.
1пппегпаге1у ггап»Гег йе сне!ге 1о 1Ье е1есггорогагог апс1 й»сЬагае йе белее. АЕгег 1-2 пиппге», геточе йе сичегге, р1асе П оп ке, апс1 ргосеес1 ппгиегПаге1у го 1Ье пехг яер. 16.36 СЬаргет 16: Епгтог)ист8 С1опег( Сепеь тсо Сп!ситес( МатспаПап Се!Ь 1О. Тгапьуег СЬе е1есггорогаСес! се1Ь Со а 35-пип си1гше йьЬ ияп8 а писгор)реиог ег)шррес! сч)сЬ а ьсегПе Пр. П)пье оис йе сичессе сч)сЬ а ЕгеьЬ аПс)иос оЕ 8госчсЬ шес1ппп, апс1 асЫ сЬе счаьЬ)п8ь Со СЬе си!Сиге с))ьЬ. Тгапьуег СЬе йьЬ Со а Ьипис)16!ее) )псиЬагог аС 37'С ипСЬ ап асшоьрЬеге оЕ 5 — 7% СО . То 1псогрогасе а ьойшп Ьисугасе ьЬос1с (р!еаье ьее ргососо) 2, 5сер 5), ппье сЬе сичессе сч)сЬ 8гоысЬ псейиш сопсаспш8 ап арргорпасе агпоипс оЕ ьойшп Ьшугасе, апг) сопсЬспе сЬе ппье чбсЬ сЬе е!ессгорогасес) се!Ь ш ЕЬе йьЬ ЬеЕоге си сгапьЕег со ап )псиЬасог.
Айег 24 Ьоигь, геспаче Ьшугасе-сопсасшп8 гпейигп апг( гер!асе сч)сЬ поппа! 8гоюсЬ шес)шш. Кереас Мерь 6 — 8 ип01 аП оЕ йе Р)х)А сеП ьашр!еь сп сичессеь аге ьЬос)сес). Кесогс) йе ассиа! риЬе сппе Еог еасЬ сичепе со ЕасППасе сотраг!ьопь Ьессчееп ехреппсепсь. !Е сЬе оЬ)есбче Еь ьсаЫе сгапьЕоппабоп оЕ сЬе сеПь, ргосеес1 сПгесс1у со $сер 11. Рог сгапяепс ехргеьяоп, ехапипе СЬе се1Ь 24 — 96 Ьоигь аЕСег е1есггорогабоп ияп8 опе оЕ СЬе ЕоПосч)п8 аььауьс ° [!' а р1аьш)с) Р)х)А ехргеьь(сс8 Е.
соП !3-8а1ассоь)с!аье счаь иьед, !оПосч сЬе ьсерь оп!Пиес! ш СЬарсег 17, Ргососо! 7 со псеаьиге епгупсе асПчПу Еп сеП !уьасеь. А1сегпабче1у, саггу оис а Ь!ьсосЬеписа1 яасшп8 аььау аь с)есаПес! сп сЬе ас1сППопа1 ргососо1 ш Ргососо1 1. ° 1Е а 8гееп Пиогеьсепсе ргосеш ехргеьь)оп чессог счаь пьес(, ехапипе йе сеПь ипсЬ а ппсгоьсоре ипс!ег 450 — 490-пгп П!шпюаПоп. ° Рог осЬег Пепе ргос!исса, апа!ухе сЬе песч1у ьупсЬеыкес! ргосеш Ъу гайо!шшипоаььау, Ъу пппшпоЫоссш8, Ъу пппшпоргессрПабоп ЕоПосч!п8 Еп чгчо гпесаЬо1сс 1аЬеПп8, ог Ьу аььауь оЕ арргорпасе епгутаПс асспбсу )п сеП ехсгасся То пипипые йьЬ-со-йьЬ чаг(а!гоп сп сгапьсесстоп еЕЕсс)епсу, и Ь Ъея со (с) сгапь(есс ьечеса1 йьЬеь ъч)сЬ еасЬ сопьсгисс, (6) сгуряпсхе йе сеПь айег 24 Ьоигь оЕ спсиЬаиоп, (ш) роо! сЬе сеПь, апг) (1ч) гер!асс сЬегп оп ьечега! Й)ьЬеь. То гьо1асе ьсаЫе сгапьЕессапся АЕсег ЕпсиЪабоп Еог 48 — 72 Ьоить )п согпр1еге гпесПшп, сгуряп)ге йе сеПь апс) гер1асе сЬеш Еп йе арргорпасе ье1есстче гпейшп.
ТЬе ье!есПче шейшп ьЬои16 Ъе сЬап8ес1 ечегу 2 — 4 с)ауь !ог 2 — 3 счее)сь Со геспоче йе г)еЬг)ь оЕ с(еас) сеПь апс1 со аПосч со1оп)еь оЕ геяяапс сеПь со 8гоъч. ТЬегеаусег, с1опе Епс!)ч)с)иа! со1оп)еь апс! ргора8асе 1ог аььау (Еог тесЬос)ь, р)еаье ьее 1а!соЬу апс( Раьсап 1979 ог 5рессог ес а1. 1998Ь [СЬарсег 86 сп СеПьг А ЕаЬотаготу Мапиа()). А реппапепс гесогс) оЕ сЬе пшпЪегь оЕ со!оп)еь шау Ье оЪса!пег) Ъу Пх1п8 сЬе гешашсп8 сеПь чбсЬ )се-со!с) гпейапо) Еог 15 ппппсееп ГоПосчес) Ьу ьса1псп8 ю1сЬ 10% 0сепиа Еог 15 пшппеь ас гоопс сешрегасиге ЬеЕоге ппт щ8 сп сар счасег.
ТЬе 0сепиа яасп ьЬои1с) Ье ЕгеьЫу ргерагес) сп рЬоьрЬасеЬийегег) ьа)ше ог Н,О апсс Ес!сегес) сЬгоиПЬ СЧЬасгпап )со. 1 6!сег рарег ЬеЕоге пье. Рго1осо! 6 0МА Тгапйес6оп оу ВюЬ6сь р гзр|тг тнг мчх|лг| лнв |нсзяог|з мзтноггз дрече!оре6 |о !пггойгсе с!опе6 РЬ!Аз ш|о сецз, зоше сеП |урез, 6ззиез, апд 1пггасеци1аг огцапеПез геша|п ипреппеаЫе |о Гоге!до РЬ!А. ТЬ|з ргоЫегп, |чЬ|сЬ |з рагбси!аг1у аси|е |чиЬ р1ап| сецз, |чаз зо!че6 |о а !а|де бед|ее ч6|Ь йе |пчеп6оп оГ |Ье "депе цип" Ъу !оЬп дап!от|1, Ес1 ччо1Г, ап|1 |Ье|г соцеадиез а| Согпец Уп!чегз!гу.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
