Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 30
Текст из файла (страница 30)
ТЬе еЬВтстевсу оЕ тгавхсестюв Ь тпсгеааеб агнета!Ео!б Ьу тгеатшевт евй сЫогог(шве, тнЬкЬ шау аст Ъу (пЬтЬтивц тЬе децгабатюп оЕ йе РЬГА Ьу 1уюгоша! Ьут(го(ааех (1.вйптап авб Маавттааов 19!!3). Ноте, 1юъченег, тЬат тЬе гуго!охте еЕЕесь оЕ а сошЬтвабоп оЕ РЕЛЕ-т(ах!гав авт( сЫогоцшве сав Ье тенете.
11 ь йегесоге тптрогтавт то саггу овт рге1твввагу ехрепвтевь то Ветегввве ЕЬе шахввшп регштаатЫе 1еватЬ оЕ ехроавге то сЫогат(шве айег тгеатгвевт о( сеПа тн(тЬ РЕАЕ- т!ах!гав (1ог ЕштЬег г(етат1я р(еаае аее йе шсопваиоп раве! ов СНОКООР1ЬтЕ Р1РНО5- РНАТЕ). 7. Кетпоне ТЬе гпейшп Ьу аар(гатюп, апт( хнааЬ тЬе птопо1ауега 1Ьгее т(гпеа тнттЬ аегипт-Егее гпейшп. АсЫ то тЬе се!1а 5 гп! (рег 60-тпгп йаЬ) ог 3 гп1 (рег 35-гпгп йаЬ) оЕ тейипт ятрр!егпетиет( ънЬЬ аегшп, апт1 !псиЬате тЬе си!тигеа Еог 36 — 60 Ьоига ат 37'С тп а Ьигв(ЖВтес( шсиЬатог тн(тЬ ап аттпоарЬеге оЕ 5 — 7% СО ЬеЕоге асьаутпц Еог !тапа(епт ехргеаяоп оЕ тЬе тгапаЕестет( РХА.
ТЬе шве оЕ тпсвЬатюв йовЫ Ье орбшиед Еог т1те рагбсв1аг се11 1ше авт( совягвст ввт!ег атвбу, 8. То аааау ЕЬе тгапаЕестет! се1!а 1ог тгапыепт ехргеааюп оЕ ЕЬе !птгот(исег) Р)х)А, Ьагнеат тЬе се1!а 36-60 Ьоига аЕ(ег тгапаЕесйоп. Апа!ухе КХА ог РХА ияпц ЬуЬПйгаВоп.
Апа1ухе пенн!у ауптЬеягес( рго1е!и Ъу гайоппсвипоаааау, Ьу (штпипоЫотт(пВ, Ьу иппшпоргестрЬатюп Ео!- 1оън(пВ (п н(но гпетаЬо1к !аЬе!!пц, ог Ьу агьауа оЕ епкусват(с асинЬу !п се11 ехтгаста. То ввптввге йй-тою5аЬ напатюв тв тгавасестюв ейктевсу, тт ь Ьезт то (8 става(ест тенета! ЖаЬ- еа тн(тЬ еасЬ соттатгвст, (Е) тгурявие тЬе се1Ь Еог 24 Ьовга оЕ тпсвЬабоп, (ш) роо! т!те се1Ь, авб (гн) гер1ате йевт ов тенета! йаЬеа.
16.32 Сйаргег 16: 1пггодистг С1опед Сепег гпго Си!сигед Матта1|ап Се1В 313опа! Майег|а!5 Ри|йессой гпод(йес1 Еад!ей тесйигп ТЛэа ь яапдагд ОМЕМ Ьийегед и41Л Л(аНСО апд херр)егпепгед и41Л ъегит. 0и|Ьессой тодгй ед Еак1е'ыпесбигп, Ьибегед гнйЬ НЕРЕ5 (НЕРЕ5-Ьийегед 0МЕМ) ТЬэь ь ОМЕМ |асдпй НаНСОэ Ьга сгэп1аэпэпй $0 гпМ НЕРЕ5 (РН 7.15). Но ъегигп айои(д Ье аддед нэ Иэ(ь геайепС Ме(Ьод 5. Кепэоче 1 Ье 0ЫАэ0ЕАЕ-дех(гап(0МЕМ 5О(и($оп (гот сйе се|В Ьу анр(са()оп, апс1 кепйу ъчаяй (Ье сей пэопо1ауега Лчсе ъч1Ь ънаггпед (37 С) НЕРЕ5-Ьийегед 0МЕМ.
Тахе саге по1 1о д)5!идее(йе (сапа(ес(ед сейя 6. Ъуаяй (йе сейа ОПСе ъийй ъчаппед 0МЕМ (Ьи((егед ъчйй Л(аНСОэ, по( НЕРЕ5) аиРР(етеп(ед ъийй 5ЕГит. АсЫ 1о 1Ье се|В 5 т! (рег 60-пэпэ д|й) ог 3 пэ! (Рег 35-пнп сйяй) о(сопэр|е1е кгоинЬ гпесйигп, апс| ЫсиЬа(е (йе си!(игеа 1ог 36-60 Лонга а! 37'С |п а Ьит(сййэед |псиЬа(ог и4(Ь ап а1пэойрЬеге о1 5 — 7% СО Ье1оге аъаау(пк 1ог (гапяеп( ехргегьюп о1 (йе 1гапх(ес(ед 0)4А. 7. То агьау(йе (гапй(ессед сейа (ог (гапяеп( ехргегьюп о( (Ье |п1годисед 0ЫА, Ьагчеа( 1Ье се|В 36-60 Ьоига айег !сапа(есс(оп. Апа|уге КЛ(А ог 0Л(А иа!пк ЬуЬг|д|га($оп.
Апа|уге пеи4у ауп(Ьеа)год рго(е|п Ьу гасйонпгпипоахаау, Ьу |гпгпипоЫо!Ипр, Ьу |гптипоргес)р|йа1(оп (о!!о~чик |и чЫо пэе(аЬо|эс (аЬейпк, ог Ьу аъаауй о1 еггут айс ас((нйу |п сей ех(гас(5. То папиные д(аЛ-1о-д)нЛ чапайоп (п ггапъ(ес((оп е(йс)енсу, й 'ь Ьеэ! 1о И) 1гапдес( ъечега| д)ъйеь чй(Ь еасЬ сопъггисг, йй !гура|о(ге гйе се)$4 айег 24 Лонга о( (псгэйа()оп, (йй роо| 1Легп, апс$ (Ы) гер|аге гйегп оп ъеъега( д(эйеэ. 1.
2. 3. Л(5ЕЕСТ1ОЛ$ МЕ01АТЕ0 ВУ 0ЕАЕ-0ЕХТКАЛ|г од дехспЬед |п (Ье таэп рго(осо|, 1Ьь а|(егпайне рго(осо! иаеа а |оиэег пэ!) (йас гета|па |п соп(ас( и41Ь сйе се|В Еог $опкег репода о1 йпе (ир епс|гь аге по( ах Ь|кЬ аа 1ЬоаЕ оЬ(а|пед эп гЬе ргеаЕПСЕ О1 е|ена(ед 1 гейкед 1ече(5 о1 0ЕАЕ-дех(гап ь аейос|а(ед и41Ь |еах сей (охкйу. Тънеп(удоиг Ьоига Ье1оге сгапн(есс(оп, Ьагчеа( ехропепйайу кгоън)пк сейй Ьу (гуряпЫа(юп апс3 (гапх(ег !Ьепэ 1о 60-пэгп ййяие си йоге д)5Ьеыч(Ь ! 0' сейагд$5Ь (ог 35-пнп д)5Ьеъ ън(йэ 5 х ! 0' сей яэд)5Ь).
АсЫ 5 т! (ог 3 гп! (ог 35-пнп дь|э) о1 согпр|е(е кгои4Ь гпед(ит, апд эпсиЬа(е (Ье си|сигей 1ог 20-24 Ьоигх а( 37'С (п а Ылпхййед |псиЬа(ог ин(Ь ап аопонрЬеге о1 5 — 7% СО,, ТЛе се( )э эпои Ы Ле -75% сопйиепг ас гйе 6пэе о(ггапдес6оп. 6 гйе се|В аге Игпи и (ог < $ г Лонга Ье(оге напъ(есйоп, гйеу чай пог Ье иэей апсПогед го сйе хийанаги го апг| те гпоге й йе(у ггэ дега! Ь с|и ппй ехрояэге го ОЕАЕ-дех(гап.
Мэх ОЛ вЂ” ! РВ о( яирегсо||ед ог с|гси|аг р|аагп|д 0Л(А апд 250 рк о( 0ЕАЕ-с|ех(гап рег 1 пэ| о1 НЕРЕ5- Ьийегед 0МЕМ. ТЬе гехи!!)пк хо|одоп и4И Ье ийес$ а! 500 и1 рег 60-пэпэ с$ьЬ ог 250 р| рег 35-тпэ с$ьЬ. ТЬе агпоипг о1 ОНА гецдгед го асЛ)ече гпахспа||ечеК о( ггапяепс ехргеьяоп дерепдь оп йэе ехасг павге о( 1Ле сонэ!гас! апс$ айпи(д Ье де!егин пед эп рге()т(пагу ехреппэепгя й гйе сопъ1пэсг сагг(еа а герйсоп гйа( ъи$$ Ыпсйоп в 1Ле ггапдесгес$ се((ь (е.й., 1Ье 5Н40 еаг|у гей)оп ргогпо1ег)ог)И(п о( герйсайоп), ! 00-200 пй о1 ОНА рег ! Оэ се))ь нЛоиЫ Ье ъи((эс(еп1; И по герйсоп 'ь ргеаепг, (агйег атоипЬ о1 ОНА тау Ье гег|Ыгед (ир го $ РИ рег 10" сейь).
Кепюче (Ье гпесйит 1гот (Ье сей си|(иге сйхЬей Ьу ахр|га(юп, апс| ъчайй 1Ье топо|ауега !ъисе и4(Ь ъчапиед (37'О НЕРЕ5-Ьийегед 0МЕМ, АсЫ (йе 06(А(0ЕАЕ-дех(гап(0МЕМ хо|одоп !о Иэе се|В (500 и! рег 60-пнп с3ЫЬ, 250 р| рег 35-пэт д15Ь), апс1 гесигп (йе сей 5 (о (йе эпсиЬа1ог (ог ир (о 8 Ьоигя Сеп(|у гос|с (йе д|5Ьех ЕНЕГу 2 Ьоигх (о епяэге еъеп ЕХРОйигЕ 1о (йе 0Л(А(0ЕАЕ-дех(гап(0МЕМ 5О|и((оп. ТЬе е(йс)енсу о( ггапдесгюп 'ь (псгеаъед аечегайо(д Ьу сопсиггепг ггеаггпепг о( гЛе се| К и466 сЛ)огог)и)пе д(РЛоя РЬаге. И чаед, адд нэе дгий ($ ОО Рм йпа| сопсепгга6оп) го гйе ОНАэОЕАЕ-дехггап ъо(и!оп |иъг Ье(оге й ь аррйед го 1Ье сей с Исса гэне сЫогоцшне (ъ гох(с го йэе се( $6 1Ье 6пэе о( )псиЬайоп пахг 1Леп $эе 1(гоэгед го 3 — 5 Лонги А 4(эпр(е напаэюп оп (Л(ь 41ер Ь героаед го доиЫе 1Ле ггапъ(ес()оп (гег(пенсу оЬ(а(пег) и(йэ СО5 се)$4 (Сопга|йь апс| |о(у ! 995): (Таге гйе сейэ )п агпай си|гиге йаяь и(1Л асгеъч сара а1 1Ле Ьей)пп(пц о( 1Ле ехрепгпепг апс|1$561)у эсгьч (Ле сар айег адд(1(оп о( 1Ье ОНАэОЕАЕ-дех(гап(ОМЕМ яэ1и()гэп (п 51ер 4.
Сопйпие 1Ье НсиЬа6оп 1ог 8 Лонг Ъ диппй ийэсЬ 1)те йэе пэесйигп а(йа)(п)ген доъч(у, дие го сйе тегайо((ьт о( гйе япай агпоип1 о( СО, гата(п)пц эп сйе йаък ТЛ(а сйапйе, ъчЬсЛ $5 тагйед Ьу 1Ье Игадиа| деереп)пд (п со|ог (гого сг(тэоп го Ьигй эгх|у о1 йэе РЬепо| гед )пд(сагог )п (Ле гпедвгп, пэау ъ6пв)а1е ггапъ(ссйоп эп а гпаппег ягпэ|аг го 1Ле иъе о( а гедисед СО а1пвнрЬеге ъигЛ)п йэе (псиЬа1ог (р|егье ъсе 1Ле АП ЕКЫАТ(НЕ РКОТОСО1: Н(СН-ЕРТ)С(ЕНСУ СА!С10М-РНО5РНАТЕ-МЕО|АТЕО ТКАН5- ЕЕСТ)ОН ОР ЕОКАКНОТ)С СЕ!$5 ЪН(ТН РС45М(О ОЛ(Аь (п Ргогосо|2). Рго1осо! 5 0МА Тгапйес6оп оу Е!ес1горога6оп р тттвю втгств!схт тьпэв слм вв ттвво то !ттгвовттсв ГтЬ)А тито а чапе!у оГ апппа1 сеПх ]Хешпапп ет а1. ! 982; тттоп8 апт1 Мешпапп 1982; Роиег ет а!.
! 984; 5и8с]еп ег а!. ! 985; Топе8илло ег а1. 1986; Тиг-Каара ег а1. 1986), р!апт сеПх Гргоппп ес а1. 1985, !986; Ес1сег апс1 Гтачь 1986), апс1 Ьастепа. Е!естгорогатюп тчог)сх ччеП тчттЬ сеП 1тпеа тЬат аге ге]гасиче Го отЬег тесЬптт)иея аисЬ аа са!сштп РЬохрЬате — ГтХА соргестрПатюп, Вит, аа тчттЬ ойег тгапаГестюп тпетЬос)я тЬе орПгпа! сопсППопх 1ог е!естторогаттп8 ЕтХА тпто иптеатес! сеП Ппех пшЯ Ье т]етегпипес1 ешр]г]- саПу. ТЬе еГГтс!епсу оГ тгапхГестюп Ьу е1естгорогапоп ]х ]пйиепсес1 Ъу а пшпЬет оГ Гастогх аа с]еаст]Ъет] Ье1отч. ° 3ггепдгЬ оГ гЬе арр!1еИ е!есгпс гте)И.
Ат 1отч чо1са8е, тЬе р1аяпа тетпЪгапеа оГ си)тигес! сеПх аге пот вийк!епт1у а1тетес1 то аПотч ратьа8е оГ РХА пто!еси1ея ат ЫВЬет чо!та8е, гЬе сеПа аге итечелтЫу с)ата8ес]. Рог тпохт Пиеа оГ тапипа!тап сеПя йе тпахнпа! 1ече! оГ ггапяепт ехргеяяоп ь геасЬет! тчЬеп чо1та8ех ЬеГтчееп 250 ттт'стп апс1 750 Исти аге арр!тет1. ТуркаПу, Ъеттчееп 2096 апт1 5098 оГ йе сеПх хигчтче тЬтх тгеатптепт (ах тпеааигес! Ьу ехс1ияоп оГ тгурап Ыие ]РатГегаоп !979; Ваитп ет а1. 1994]). ° Кепи)т оГ гйе е1естг]с риЬе. )7аиаПу, а яп81е е1естпс ри1зе ь раааеП тЬгои8Ь тЬе сеПя ТЬе 1еп8й, Гте1д аЬаре, апс] атгеп8тЬ оГ йе ри1ае ате с]ететтптпес) Ьу йе сарасПапсе оГ йе ротчег аирр1у апс] тЬе гПтпепяопа оГ йе сичегте. 5опте е1естгорогагюп с]ечкех Пгапт тЬе ]пчеаП8атог соптго1 очег йе сЬагастегьПса оГ йе ри!ае; о!Пега с)о пот. ТЬе ортппа1 1еп8гЬ оГ гЬе е!естпс ри1ае гет)шгет) Гог е!естгорогаПоп ь 20 — 100 пьес. ° Тетрегагттге.
5оше !пчеат]8асога геротт йат шахипа1 1ече1а оГ ггапяепг ехргеаяоп аге оЬта]пет! чтЬеп йе се!Ь аге ша!пта]пет! ат гоотп тетрегатиге с!ит]п8 е1естгорогатюп !СЬи ет а1. 1987); отЬега Ьаче оЬта!пес) Ъеттег гехи!та тчЬеп тЬе сеПа аге тпа]пта!пег! ат 0'С (Ке]ть ет а1. 1986). ТЬеае с)]хсгерапс]ех птау геаи1т Гхош с]тТГегепсех тп ГЬе гехропхеа оГ чаттоиа турех оГ тпапппа1тап се1Ь то тЬе ратьа8е оГ е1есспс сшгепт ог ш тЬе аптоипт оГ Ьеат Пепегатес] с]иттп8 е1есггорогаПоп тчЬеп !аг8е е1есспса1 чо)та8еа (>!000 'тттст) апс)/ог ехтепт!ет] е1естпс ри1аеа Г>!00 тпяес) аге гьет1, ТЬе ейк]епсу оГ тгапяепт ехртетьюп ]х ]псгеааес1 !Г йе се1Ь аге ]псиЬасет] Гог 1-2 пипитеа тп тЬе е1естгорогатюп сЬаптЪег айег ехрохиге то йе е1есспс ри1ае (ПаЬитьау ет а1. 1987).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
