Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 25
Текст из файла (страница 25)
ТЬ а шопоса«!оп!с 1!рЫ ппхес1 тч!«Ь а Ьс!рег 1!рЫ ь папа11у ршсЬааес1 а«а сопсспсга6оп оГ 1 шВ«ш(. ООТМЛ сап а1ао Ьс ауп«Ьеа!гс6 ччпЬ с!«с Ьс1р оГ ап о«пап!с с1«еп«ап (рс1Впсг ес а1. 1987). 1ЕаупсЬеягсс( ш-Ьоцае, йяоЬе 1О шВ еасЬ оЕ 6с!сд ООТМЛ ап6 с1«с Ьа1рес 1!рЫ йо!еоу) рЬоарЬасЫу!сйапо1ап«ше (ООРБ, рпгсЬаае6 (гоп«а(Вша) !п 2 ш! оЕ асеп!е 6есопие6 Н,О !п а ро1уяугепс спЬс (с«о пос ыс ро1ургору1спе спЬеа).
попка«с сЬс сшЬЫ ао(шюп со Гогш Броаошса Ье«оге 6!Ь6пВ со а впа) сопсап«гасюп оГ 1 п«В!ш1, а«оса «Ьс ао1псюп а«4'С. 16.7 16.10 СЬаргег 16: 1пггогсие|п5 С)опег) Сепеь тсо Си!(игег(Матти)!ап СеПз ауад 1п1гоп апа П ~п1егдепа гпоа гоар Сагу рго!по!в! Г(СЕ)КЕ 16-2 СМЧ-5РОКТ-П- а| рСМЧ-5РОКТ-П-Па( )а а герог1ег чессог (Ьас гпау Ье иае6 со п!оп|1ог сгапа(есс!оп ейс|епсу.
И сагпев (Ье Е, со|! Пепе епсо6!пП П-Па(ассов!бай ргесебе6 Ьу (Ье СМЧ (суоогпеПа|оигиа) ргоп!осег 16а1 6г(чев Ь!ПЬ )ече(в ог'сгапаспрс!Сп 1п п!ап!п!аПап сеПа. ТЬе 5Ч40 ро|уабепу|асюп а(Ппа( Поччпасгеагп сгот 1Ье П-ца)ассов)даве аег(иепсе 6!гесса ргорег ргосееа!пП о( (Ье гпКНА 1п еи|!агуо6с сеПа. (Кергодисе6, чч|(Ь реут|ад)оп, (гоги (1(е ТесЬпо(СП!ев, |пс.) С!ау впгпва~а1е еаау ргогпогег нзч т!г ро1у(Я) адпа! Вав 1агпвау1а1юп Вдов! ЧВО ро1у(Я) ~дпа! ечво еапу ргогпо!ег Г!СОКЕ 16-3 ЕСГР-Г рЕСГР-Г |а а герогсег чес1ог (Ьас гпау Ье иае6 ЬосЬ 1о гиопПог сгапЫесс!оп е%с|епсу ап6 аь а сосгапв(ес6оп гпаг1!ег, ТЬе чес1ог епсобеа а то61Т!ед (огп! о1 1Ье Пгееп Пиогевсепс ргосе|п, а (атеьу1а1ес1 епЬапсе6 СГР (ЕСГР-Г) (Ьа1 гета)пв Ьоипб со (Ье р)авгпа гпегпЬгапе !п Ьо6! |гч|пц ап6 |и (|хе6 сеПгп ТЬе ЕСГР-Г- со6)п5 вес)иепсе !а ргесебег1 Ьу 1Ье СМЧ (сусоп!еца1оигив) ргоп!о1ег (Ьас 6г1чеъ Ь|ПЬ )ече)ь о( сгапвспрПоп ап6 !а (оПоччед Ьу (Ье 5Ч40 ро|уас|епу1асюп а!Ппа) Со 6|гес( ргорег ргосева|пП о( СЬе гпКНА |п еи(вагуобс се16и ТЬе р(аат)6 сагпеа вег)иепсеа 1Ьа( аПоъч гер1гсасюп 1п рго1сагуо6с (рОС оп) аа ччеП аа еи|!агуобс (5Ч40 оп) сеПв ап6 гпаг(гега СЬас (асПКасе ае|ес6оп (ог 16е р)аагп(6 |и рго|!агуос|с (1!апаисус1п) сеПа ав ччеП ав еиПагуо(!с (пеогпус|и) сеПв.
ТЬе ргевепсе о( ЕСГР-Г сап Ье с|есессес| Ьу т)иогеасепсе т!сгоасору. (Адарсеб, ъч)1Ь регги(ввюп, (гоги С$.О(ч(ТЕСН.) Ргогосо! 1: ЕЗХА Тгапфесг!оп Мег)сагег1 Ьу Есроуесссогс 16.11 Се!с е!гсе5 СОАсмоксу 135ео РОВ Ткаас5еест!Оас АВВкеч!Атсом 11.1РАС )ч)ААсе ТУРЕ РВООост ЫАме М- ! 1-(2,3-йо!еоу1оху) ргору1)-М Х Х- сгппейу!апппопшгп сЫопде НроуесВп пюпосаНопк РОТМА М-)142,3-д)о)еоу!оху)ргору))-ХХХ- спспесЬу!апппоппип гпейу) гш1сасе топосаИопк РОТАР НеЕа РОТАР 1,2-йгпудасу!охургору!-3-йгпесЬу1- Ьудгохуейу!апппопшт ЬготЫе топосаНоп)с РМК!Е-С РМК!Е 17 РАК йгпесЬу) дюссаг1есу!агптошшп Ьгоппде топосасюшс !,сросессАСЕ СОВ-7 СНО-К1 ВНК-21 топке Е сеПа Аппйпе С1.ОХуесЕп М-с-Ьпсу1-Мхсесгадесу1-3-сесгадесу1- апппоргорюпатЫе топосасюшс ВС-СЬо1егсего1 пюпосаПопк 1,3-йо!еоу1оху-246-сагЬохуарегту1) ргору1атЫе йсасюшс РОЗРЕК Тсх СНО НеЕа Х1Н-ЗТЗ арест)пе-5-сагЪоху-81усше йоссадесу1-атЫе ро!усаПопк Тгапай.ссапс РОСЬ 2,3-йо!еоу1оху-Х-)2)арегтспесагЬох- атЫо)еСЬу!)-ММ-йтейу1-1-ргорап- аспшгшп спйпогоасесасе ро!усаПопк 11роуессАЫ1ХЕ РОЗРА ММЬМ,М -сесгатесЬу)-М, Х',М,М '- ро1усайопк СеПРЕСТ1Х сесгара1гпЬуЬрепп)пе ТМ-ТР5 ТАВЕЕ 16-4 5опсе Пр)да баед 1п Е1ро1есНоп ВС-СЬо1егсего! ЗВ)МНМ',М'-йтесЬу)апппоесЬапе) сагЬатоу!)-сЬо1езсего! А552 Н187 пюме 1.
сеПа Х)Н-ЗТЗ Не1.а )пг1сас СНО-К1 СО5-7 ВНК-21 А-431 НЕК293 ВНК-21 Не1.а Еб СЧ-1 293 НеЕа Нерб2 НС11 М!Н-ЗТЗ НТ-29 ВНК-21 1сегаПпосусеа МВСК Х!Н-ЗТЗ СНО-К! СОЯ-7 ВНК-21 !цйас 16.12 СЬаргег 16г Гпггойие(пе С!опей Сепеь т'го Си!сигей Мотта(гап Се!6 МЕТНОО 1. Тюепсу-Гош Ьошя ЬеГоге 11роГес6оп, Ьагчея ехропепйа11у Пгою)ие лпапипа11ап се11я Ьу сгуря!шгасюп апй гер1асе сЬепл оп 60-пип с)яяие си1сше йьЬеь ас а с!епясу оГ 10я сеПя(й)яЬ Гог ас 5 х 104 се11ь!35-ппп йяЬ).
АсЫ 5 гп! Гог 3 пл1 Гог 35-пии йяЬ) оГроюсЬ гпейцпл, апс1 ГпсиЪасе сЬе си1сигеь Гог 20 — 24 Ьоигя ас 37'С гп а Ьипий6ей лпсиЬасог юиЬ ап асшоярЬеге оГ 5 — 796 СО,. Т!ле ее1Ь яЬоп!д Ье -759С сопй цепс аг сЬе сппе оГ ПроГеейоп. 1Г сЬе «еПь а ге сгосчп Гог Гесчег гЬап 1г Ьопгя Ьесоге сгапьГеедоп, с1леу чйП пог Ье счеП апеЬогед со йе ьпЬьлгаплгп апд аге 1гЕе1у со с1есаеЬ с1пг1пс ехрояпге ло 1грЫ. 2. Рог еасЬ 60-шш йьЬ оГ си1сигей се!1я со Ъе сгапяГессей, й1исе 1-10 )ли оГ р1аяпЫ РЫА Гпсо 100 )с! оГяСеп1е йеюп!гей НгО ГлГ их)и8 1лроГесйп) ог 20 плМ яойшп сцгаСе сои!а!ши8 150 шМ )х)аС! !рН 5.5) ГлТ ия)п8 ТгапьГессагп) ш а ро)уясугепе ог ро!ургору)епе сеьс сиЪе.
1п а ьерагасе сиЪе, й!исе 2-50 Сс! оГ сЬе 1лрЫ ьо!исюп со а 6па! чо)шпе оГ 100 )л1 юиЬ ясеп1е с1еюпсгей Н,О ог 300 шМ Ь)аС!. 4, 1МРОКТА!с1Т ССгЬеп Сгапясесг!пп чдй Рро(есг!п, цье ро!уьгугепе Сея! СиЬея; до пог иье ро!ургору1епе сиЬеь, Ьесацье йе сацоп1с Пр1д РОТМА сап Ь1пд попьрес!Г!саПу со ро!ургору!епе. Гог осЬег саПопк Пр1дь, иье йе СцЬеь гесоттепс1ес! Ьу ГЬе таписассигег.
3. !псиЪасе йе сиЪея 1ог 10 гшписеь ас гоогп сегпрегасиге. 4. АсЫ сЬе 11рЫ ьо1ийоп со сЬе Р)ч)А, апс1 пих ГЬе ьо1ийоп Ьу р)ресдп8 ир апд йоюп ьечега! шпея. !псиЬасе сЬе пихсиге Гог 10 иипшея ас гоопл сеплрегасиге. 5. ЪЛп1е сЬе РЬГА-1ГрЫ ьо!исюп Гя ГпсиЬаипр юаяЬ сЬе се!!я со Ье сгапяГессес1 йгее сипея ю11Ь яегшп-Ьее гпейшп. Айег йе 1Ь)гй ппяе, айй 0.5 ш1 оГ яегшп-Ггее гпейшп со еасЬ 60-пип йяЬ апс1 гесигп йе юаьЬед се1!я со а 37'С Ьиш)йлТлей ГпсиЬасог ччКЬ ап асилоярЬеге оГ 5 — 756 СО . 1с Ь чегу ппропапл со ппье лЬе ееПь Кее о!ьегпгп ЬеГоге йе адййоп оГ йе ПрЫ-0НА Проьогпея.
1п соте саьеь, ьегшп 1ь а чегу еПесцче шГПЪ|лог оГ йе иапьсесйоп ргосея Гре!спег апд Но!гп 1989). 51пп!аг!у, ехсгаееПп1аг гпаспх сотропепи ьисЬ аь си1сасед ргогео51уеаы сап а!яо 1пЬгЬц 1гросесиоп, ргеьпгпаЪ|у Ъу ЬшеПпс сЬе 0НА-ПрЫ согпр1ехеь апд ргечепйпс йеи 1псегасл1оп чйй ГЬе р1аьгпа гпетЬгапеь ос йе гесгргепс се1Ь. 6. Айег сЬе Р)х)А-11р!й яо1исюп Ьая ГпсиЬасей Гог 10 ииписеь, асЫ 900 Гл! оГ яеплш-6ее гпейиш со еасЬ шЬе.
Млх сЬе яо1ийоп Ьу р)ресс!ие ир апс1 с1оюп ьечега1 6гпеь, 1псиЬасе йе сиЬеь Гог 1О пипШея аг гоогп Сешрегагше. 7. ТгапьГег еасЬ сиЬе оГ РХА-1)рЫ-шей)шп яо!шюп со а 60-пип йьЬ оГ се1!я. 1псиЬасе сЬе се!1ь Гог 1-24 Ьоигя ас 37'С ш а ЬшпЫл6ей шсиЬасог чйй ап аспюярЬеге оГ 5-79е СО . 8. Айег сЬе се1!ь Ьане Ъееп ехрояес1 со йе РЬГА Гог йе арргорпасе сипе, юаяЬ сЬегп сЬгее сипеь чйсЬ ьеплш-Ьее шейшп. Реей сЬе се11я юЬЬ сошр1есе шейшп аий гесигп йепл со йе шсиЬасог.
9. !Г йе оЬ)'есбне !ь ясаЫе сгапяГоппас!оп оГ сЬе се1!ь, ргосеей со 5сер 10. Ехаииие йе се!!я 24 — 96 Ьошь айег!лроГессюп ия)п8 опе оГ йе Го!1ою!п8 аяьауь. ° 1Г а р1аяпЫ РГ4А ехргеььлп8 Е, соБ !3-Па1ассоя!йаяе юая иьей, Го11ою 1Ье ьсеря оис1шей Ги СЬарсег 17, ргососо! 7 со гпеаьиге епгуше асйлсу ш се1! 1уьасея. А!Сегпас)не!у, саггу ош а ГйьсосЬеписа1 яса!шп8 аяау ая с1еса1!ей )и сЬе рапе1 оп А001Т1019АС РКОТОСОР Н15- ТОСНЕМ1САС 5ТАПс1!Гс1С ОГ СЕСЕ МО!ч1ОСАУЕК5 ГОК П-САСАСТО510А5Е.
° 1Г а рееп Яиогеясепсе ргоселп ехргеяяоп нессог юая иьей, ехапипе сЬе се11ь чйсЬ а писгоьсоре ипс1ег 450-490-пш 111ииипа1юп. Рго|оса(1: ОХА ТгапвЕесс(оп Мейа|ед Ьу 1лро~есс(ап 16.13 ° Рог ойег цепе ргодис(в, пеи 1у вуп|Ьеяге|1 рго|е(п шау Ье апа1угед Ъу гайоиппшпоаввау, Ьу пппшпоЫо|Ппц, Ъу иппшпоргес|рйа|юп Еойоиппц |п ч|чо гпе|аЬо1к 1аЬейпц, ог Ьу авваув оЕ епгугпадс асйчйу (п сеП ех|гас|в. То пнпипгге д(вЬ-го-д(вЬ чападои |п сгаивсесс!оп е(6с(еису, Ь ь Ьев| |и (г( |гаивсес| вечега! йвЬ- ев чдй еасЬ сопвиис|, (61 |гурыпгге |Ье се(1в айег 24 Ьоигв оГ гпснЪадоп, (ш( роо! |Ье се(цс аид ((ч( гер!а|е йегп ои вечега1 гйвЬев. 10. То 3501а(е всаЫе |гапвЕес1апся Айег |Ье сейв Ьаче шсиЪасе|1 Еог 48-72 Ьоигв ш сошр1е|е гпейшп, |гуряп(ге |Ье сейв ап|1 гер!а1е йеш ш |Ье арргорпа|е ве1есйче шейшп.
СЬапце й|в шейиш ечегу 2-4 даув Гог 2-3 игее(св 1о гешоче |Ье |1еЬпв оГ |1еа|1 сейв апд со айовч со(оп(ев оЕ геяяап| сейв |о цсои. ТЬегеайег, (пйчсдиа1 со!ошев шау Ье с1опед апд ргораца|ед Гог аввау (Еог ше(Ьодв, р1еаве вее 1а1|оЬу ап|1 Рав|ап 1979 ог 8рес(ог е| а1. 1998Ъ (СЬар(ег 86 ш СеИ|г А ЕаЬага(агу МапиаЕ(1. А реппапеп| гесогд оГ |Ье пшпЬегв оЕ си!оп!ев шау Ъе оЬгашед Ьу 6х(пц |Ье гешаглшц се11в чл|Ь 'ке-со!д п|е|Ьвпо! Гог 15 пнин|ив ГоПовчед Ьу в|а|пшц гдй 10% С(ешвв Гог 15 пнпи|ев в| гааги |еп|рега|нге Ьейге пидпц |п |ар вчасег.
ТЬе О(епиа в|в(п вЬон!д Ье 6 евшу ргерагес3 (и рЬоврйа|еЪнйегед вайпе ог Н О апд 6йегед |ЬгосцЬ ((Ъаггпап 34о. 1 6йег рарег ЪеЕоге иве. А001Т1ОЬ(АЕ РГТОТОСОЕ: Н|5ТОСНЕМ1САЕ 5ТАПЧПЧС ОЕ СЕЕЕ МОЬ(ОСАУЕ315 ЕОГС П-ОАЕАстО510Аце ТЬ!в п|ейод, деяцпед Гог се18 цгои4пц (п 60-тгп си!йге д(вЬев, |чав адар1ед Ггот цапев е1 а!. (19861. К!(в |Ьа1 сои|а(п аП о( |Ье песеввагу геацеп(в Гог !ттипоЬ!5(осЬегп!са! де1есдоп о( 8-ца1ассов(даве аге ачацаЫе Ггогп вечега! тапи(ас(игегв. САС(Т1О(Чг Р1еаве вее Арреисйх | 2 1ог арргорпа|е Ьапдциц о( та|епа1в таг(сед вч!СЬ <! >.
Адд|йопа! Ма1ег1а15 Сец Пха|сче 2% (чгч( ГоггиаЫеЬуде < (> 0.2% (чМ ц(и|ага(деЬуде <1> | х рЬоврЬа|е-Ьнцегед вацие А счпцйпи(С Ргераге |Ье сеП (ивине во!шюи (и а сПегика! Гнгие Ьоод аид в|осе а| гааги гешрегагнге. ГГ(в(осЬетгса1 в|а|и 5 гим росьвюги (ешсуаи(де (к Ее[с|(1 ! <! > 5 шм рисввв(нш ГеггосуаиЫе (К,се(СВ((в( <1> 2 гпм Мцс! |х рПоврЬа|е-Ьнцегед вд(ие | шц(ш! Х-ца! (5-Ьгошо-4-сйого-34идо(у(-П-ца(ассов(де( <1> 5|иге йе в|аю(иц во(н|юи (и йе даг(в а| 4'С. А Пв(РОПТАНТ Адд йе Х-ца! (гпшед(а(е(у Ье(оге арр(у(иц йе в(а(и |о |Ье сеП гиоио(ауег.
РЬоврЬаге-Ьийегед ва((ле Ме1Ьод |. ИгавЫЬе |гапвГес|ес( се!35 Ьчке ив!й 2-3 п|! о( рЬоврЬаш-Ьибегед вацпе ас гоогп (егпрега(иге. 2. Адд 5 п|! о( сец Г!хадче |о |Ье се(ПК 3. САгавЫЬе се315 опсе вч!(Ь рЬоврЬа|е-Ьийегес( вацпе. 4. Адд 3 — 5 пз! о( ЬРЯосЬепдса! 5(а(п |о йе сецк 5.
(псиЬа|е йе се315 |ог | 4-24 Ьоигв а| 37"С. 6. ИавЬ йе сеП гпопо!ауег вечега! Птев ил(Ь рЬоврЬа|е-Ьийегед ва((пе. 7. Сочег йе сеП топо1ауег |чу а вгпа(1 атоип1 оГ рЬоврЬа(е-Ьийегед вацпе апд ехапипе ипдег а П8Ь( гп!ствсоре. | Се|в йа| Ьаче ехргеявед Фе 31-ца(ас|оядше ехргеввюи чес|ог вЬон(д Ье а Ьийаи| цне. ТЬе ггаив(есина (гег(неису саи Ье евигиа|ед Ьу сонициц |Ье ге(а|не иншЬегв о( вин(иед аид нпвсн(иед сес и Рго1осо! 2 Са!сыт-рйо~рйа1е-тейа1ес! Тгапйесйоп о1 Еи1агуойс Се!Ь ЫЙ Р!а~тМ ОМАМ т ни ъ1втлкв ов Рйл вч свгг5 |н сигтъ1вг ь лълвкгогч гннлнсго ъчЬеп гЬе пис1ек асЫ |а ргеаепгед аа а соргесгрнаге оЕ са1сшгп РЬоарЬаге апс1 Р|ъ|А.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
