Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 24
Текст из файла (страница 24)
ОЕАЕ-Пехггап- тег!!аге6 Ргососо1 4 ВВС-1, С!7-1, апс1 СО5 уез по !'Е 5 Е1сс|горога|юп Рго|осо! 5 Арр!кабоп оЕ Ьпеу Ь|ВЬ-чо1саВе е!ес|пс ри1зез |о а чапе|у оЕ п|апипаПап ап6 р1ап| сс!Ь!еа|Ь го йе Еоггпа|юп оЕ папо|пс|ег-яхей рогев |и йе р!аяпа п|егпЬгапе ЕЫеитапп е| а1. !982; ЕПпипеппапп ! 9821. ОЬ!А ыа1|еп 6!гссг!у |иго |Ье сеП су|ор!амп еЬЬег |ЬгоиВЬ йеъе рогез ог аз а сопзес1иепсе оЕ |Ье гесП5|пЬшюп оЕ |пеп|Ьгапе со|пропепп |Ьа| ассо|прап|ез йе с1оъше оЕ |Ье рогев. Е1ес|горога- |юп сап Ье ех|гете1у еЕПс!еп| ап6 и|ау Ъе изе6 Еог Ьо|Ь ггапяеп| ап|1 5|аЫе папзуесгюп. УЕ5 УЕ5 по тапу В|о1|якз Ргососо! 6 рптагу сеП Ппез; 6яиез, о|8апз, р!ап| сеП5 5|паП раг|к1ез оЕ |ППВяеп ог Во!6 аге ивед |о Ь1ПП ОНА, |п ргерага6оп гог бе!Вегу !п|о сеП5, |Ьзнез, ог ог8апеПез Ьу а раг|к1е ассе1ега|ог зуз|ет 15ап- Еогд е| а1.
!993!. ТЬЬ ргосея Ьав Ьееп | агюн51у саПе|1 |Ье т!сгорго>ес61е ЬотЬап!гпеп| тейой йе Вене Вип гпе|Ьой ап6 йе раг|к!е ассе1ега6оп п|е|Ьой Вю1Ьгкв Ь изей сЬ|еПу |о ггапзуопп сеП |урез |Ьа| аге !троъяЫе ог чесу сП!ВкиЬ го папи Еопп Ьу о|Ьег пкйо|Ь. ТЬе ро!усабоп Ро!уЬгепе аПо|чз с1|е е16к!еп| ап6 яаЫе !ппойк6оп оЕ !оъч-то!оси!аг-ъче18Ьг О1'~А5 !е.8., р1азгпЫ !714А5) |и|о сеП Ппез йа| аге ге1абче1у геяз|ап| |о ГгапвЕес6оп Ьу о|Ьег |пе|Ьо|Ь !Ка|ча! апс1 ЕП5ЬЬа|ча 1984; СЬапеу е| а!. 1986; АПЬ|п е| а!.
! 997!. ТЬе ир|а1|е оЕ ОНА Ь епЬапсед Ьу ояпобс 5Ьос1| апд гПгпейу15ППох|Пс ЕОМВО1, зчЬ|сЬ |пау реппеаЫ!Ье |Ье сеП теп|Ьгапе. уез уез по Ро1уЬгепе Рго|осо! 7 чапез СНО ап6 !сегайпосуге уез Усз 11п61 гесепг1у, с1опе6 ЕЗУСА Ьаз Ьееп 1пггодисед |иго си1гшад еп1сагуоПс сеП5 сЬ|ейу Ъу Ь~осЬетка1 гпеГЬос 5. Г)иг!ПП йе раз! !О уеагв, йе гапае оГсеП !урез йас сап Ье ГгапвГесгес1 еЕПс|епПу Ьаз Ъееп ехсепс1е|1 ичй йе с1ече1оргпепг оГ Провоз пе тейосЬ, зчЬ!сЬ зчог1| ччеП чч!ТЬ зиврепяоп сн!- гигев, апд ьчгЬ йе иве оГ р1туяса1 шегЬо65 внсЬ ав е!ессгорогагюп апс1 Ью1Ьгк раг6с!е с1еПчегу, игЬ~сЬ гпау Ье изе6 впссея65Пу ичгЬ гпапу сеП Ппев ТЬас аге геявгап! То !ТапзГесг!оп Ьу ойег гпеапв.
А ЬпеГ вшптагу оГ ггапвГес6оп шейосЬ ь ПЕчеп !и ТаЫе 16-1. 16.4 Сссаргег 16: Еиггогсистц С!оиегс Сепее 1пго Си!гигее1 Матти!сап Се1Ь ТссА!хбГЕСТ1О!х! СОМТКОЕЬ А11 сгапхЕесс!оп ехрепшепь а!сои!6 !пс1ибе сопсго!х со сеас !п61н!6иа! геацепь апс1 р1аяиЫ РХА ргерагасюпя ап6 со сехс Еог сохкпу оЕ сЬе цепе ог сопасгисс Ъе!пц !псгодисед. СопсгоЬ Еог Тгапыепс Ехргеююп АседаЕЕсге Соп1гоЬ 1п сгаияеис сгапаЕесс!оп ехрепгпепь, оие ог ссчо 61аЬеа оЕ се!Ь аЬои!6 Ъе сгапхЕессед члсЬ йе сагпег РХА аиг11ог ЪиЕЕег гье6 со сИисе сЬе сеас р1аяпЫ ог цепе. Турсса1!у, аа1гпоп арегш РХА ог апосЬег !пегс сагпег аисЬ аа сЬе чессог гьед со сопягисс йе гесошЫиапс Ь сгаихЕессе6 шсо а6Ьегепс се!!а ш йе аЪаепсе оЕ йе сея цепе.
АЕсег сгаихЕесссоп, йе си1сиге6 се!!а хЬои!д пос десасЬ Егош йе дьЬ пог Ъесоше гоипбед ап6 ц!ахау гп арреагаисе. РояЕЕсге СопггоЬ Опе ог ссчо 6ьЬеа оЕ се!!а аге сгапаЕессе6 сч!сЬ а р1аяпЫ еисо61пц а геай1у аяауе6 цепе ргодисс ешсЬ аа сЫогашрЬешсо! асесу1 сгапхЕегаае, 1исгЕегахе, Ееессег1сЫа со!1 (1-ца1ассохЫахе, ог цгееп Е!иогеасеис ргосеш, счЬохе ехргеах!ои Ь бпнеп Ьу а рап-хрессЕсс ргогпосег аис!с ах йе Ьшиап сусогпеца!олггь ппше61асе еаг!у цеие гецсоп ргогпосег ап6 епЬапсег. Тгасег р1аяп!6а оЕ йь 1ипс1 аге ача!1аЫе Егош шапу 61йегепс соиипегсса! аирр11ега счЬо ае11 Ыь сопсапипц йе еихушеа ап6 геацепь пеебе6 Еог 6есесс!оп оЕйе еисо6ед ргосеш.
Весагье сЬе епбоцеиось 1ече1а оЕсЬеае геропег асс!чсс!еа аге сурсса11у 1осч, сЬе шсгеазе 1и еихуше асбчиу ргочЫеа а 6!гесс ш6!сас!оп оЕ сЬе еЕЕгссепсу оЕ сЬе сгапаЕес6ои ап6 йе г!иа!1су оЕ йе геацепса гье6 Еог а рагски1аг ехрепгпепс. ТЬЬ сопсго! ь еарес!а1!у ппропапс счЬеп сошраппц гееи1са оЕ сгапаЕес6оп ехрегсшепса сагпес1 оис ас 61йегепс сипея СосгапаЕес6пц йе герогсег р!аяиЫ счссЬ йе сехс р1аяиЫ ог цепошк РХА а1сю ргочЫеа а сопсго1 Еог попхрес!Есс сох!спу 1и йе очега1! сгаихЕес6оп ргосеея Сопсго!ь Еог ЯаЫе Ехргеыюп А1ееаЕЕсге СопсгоЬ Опе ог Ссчо дьЬех аЬои16 Ъе СгапаЕесгед счсСЬ ап !пег! иис1есс асЫ хисЬ аа аа1шои арепп РХА, гп йе аЬаепсе оЕ йе ае1ессаЫе шаг!сег. АЕсег си!сиппц Еог 2 — 3 счее!са !и сЬе ргеаепсе оЕсЬе хе!ессеи ацепс (О418, Ьуцгошуссп, шусорЬепо1к аси1Ь по со1оисеа аЬои!6 Ье ч!х!Ые. РохЕЕЕсее Соп1гоЬ Оие ог ссчо 61хЬех оЕ се1!а аЬои16 Ье сгапаЕессед счссЬ сЬе р1аяиЫ епсо61пц йе ае!ессаЫе шаг1сег ш йе аЬаепсе оЕ аиу ойег РХА.
'! Ье ишпЬег оЕ чсаЪ1е со1оисеа ргеаепс ас сЬе епд оЕ сЬе 2 — 3- счее1с хе1ессюп репой Ь а гпеаяпе оЕ сЬе еЕВссепсу оЕ сЬе сгасьЕес6опЬе1ес6оп ргосеяи А асшс!аг пшпЬег оЕ со1ошев хцои!г1 Ье ргеаепс оп с1ьЬеа шсо счЬ!сЬ Ьой йе хе!ессаЫе шагссег апс1 йе сеас р1аяиЫ ог цепе снеге спсгобисей А шаг!сед 61асгерапсу ш йе пшпЬег оЕ со!оп!еа оп сЬеае пчо хеь оЕ с$ьЬеа сап Ье ап !п61сас!оп оЕ а сохк цепе ргоссисс (ог ис гаге 1пхсапсеа оЕ а цепе ргос1- исс йас епЬапсеа хигнсча1 оЕ сЬе сгапаЕессед се!1аЬ 1Е а рагбси!аг сРХА ог цеие ргочех сох!с со 1пггос!исг!оп 16.5 гесгргеп! сеПк, сопыс)ег йе ике оуа ге8и!асес1 ргогпосег кисЬ ак тегаПогЬ)опе!и (а Хп" - ог Сс!"- гекропыче Р!хА), гЬе топке гпапипагу гшпог ч)гик !оп8 сегпипа1 гереас рготогег (а 81исосогПсоЫ-гекропыче РХА), а сесгасусПпе-ге8и!агес) рготогег (Соккеп апс! Ви)агс) !992; Соккеп е! а1. 1995; 5Ьос1сеи ег а1.
! 995), ог ап есс)укопе-ге8и!а!ее! кукгет ()х)о ег а1. 199б). А1гегпаПче1у, сопсППопа1 аПе1ек 01 коте аепек сап Ье сопкггисгес) (Р!саге! ес а1. 1988). 1ггекресПче о1 йе тегЬос! икес) го !пггос)исе РХА гпго сеПк, гЬе е16сгепсу о1 ггапыепс ог кгаЫе ггапк1есггоп !к с!егегт!пес! 1аг8е1у Ьу гЬе сеП гуре гЬа! )к икес! !р!еаке кее ТаЫе 16-1). Р!йегеп! Ппек о1 си1гигес1 сеПк чаху Ьу кечега1 огс)егк оугпа8пПис1е !п гЬе!г аЬПиу го га1се ир апс! ехргекк ехо8епоик1у асЫес) РЬ)А. РиггЬегтоге, а тегЬос) йас счог1ск гчеП 1ог опе гуре о1 си1гигес) сеП Кгт/Раооист Се!!РЬесг Тгапкб:сиоп Кп Млггиглсгоаеа АпгегкЬаппРЬаппас!а ВгогесЬ Вю-Кас1 С!.ОГ4ТЕСН чЧгакгге Аооагкк Мегноо оа келсе~чгк гчкч.аршогесЬ.сот гчччгч.Ь!огас!.сот СаРО, ог ОЕАР-Рехггап Саиопк 1!РЫ Сабопк! !РЫ СлРО СаРО ОЕАР-!5ехггап Сугоресгепе Веа8епг С!ОКРесбп ВеаВепг Са!РЬок Матта1гап КЬ гчсччсс!опгесЬ.сот 5 Рпте — «3 Роте Са1сшгп РЬокрЬаге ТгапкЕесгюп КЬ гччгчч.5рг!те.сот Рег1есг ЫРЫ !л!Ро!есгат!пе, Ыроуесип, !лроуесгАсе, Се11геспп Са!сшгп РЬокрЬаге Тгапкуесиоп 5укгет ЕхСеп 500 !плсго8еп !.гуе ТесЬпо!о8!ек гчгчхлпч!гго8еп.сот гчгчгч.!гуегесЬ.сот Саиопк ВРЫ Саиопк 1грЫ !Ршрпегагу) СаРО, Саиопк ро!утег кккТеппепгак,сот гчгччспочацеп.сот гчгчгч.рготе8а.сот МВ! Геггпепгак Г4оча8еп Ртте8а Тгапкраъг Тгаж!есгюп Тух Веацепь Тгапкуесгат Ргоресбоп гчгчгчл!!а8еп.сот О!АОЕЬ! 5орегресг ЕГГесгепе Тгапкуесбоп КеаВепг 5е!есгог Кп Опапгот В!огесЬпо!о8!ек 5!Вта АЫпсЬ гчггхчл4цапгшп!г!огесЬ,сот ччгччск!Вта-а!Вг!сЬ.сот Сепе5Н с!ТТЕЕ 20 апс! 40 !ЭЕАЕ Оехггап КЬ Са!сшго РЬокрЬаге Тгапкуесиоп Ексогг, ООТАР, ПОРЕ глроТах! МВ5 Мапппа1!ап Тгапкуесиоп Кп Мапипа!гап Тгапкуесбоп КЬ Ргпплгу ЕЫНАГ4СЕВ ВеаВепс СепеТгапкуег НМС-1, -2 М!хгцге 5ггага8епе гчгчгч,кггага8епе.соуп СаРОл апг!!ог ОЕАР-Оехггап 5ирр!степ!ее! чай !грЫ, СаРО, !.!Рокогпе-тееПагеи хса!со СЬетка1к НВА чггчччгча!сопка.сот ОРТ!М1УАТЮ)Ь) А!Ь)0 БРЕС1АЕ СО!Ь)$10ЕгсАТЮЮ ТАВЕЕ ! 6-2 Сопппегс!а! К!!к апс1 йеа8епгк Еог Тгапк!ес!!оп Саиопк ВРЫ Сабопк !грЫ Сабопк !грЫ СаРО, ог ОЕАЕ-Оехггап Асг!чагег! Вепс1Нтег Ыоп!!Рокота! !грЫ апс! ОНА сопс!епкбп8 а8епг ЕпЬапсег ВогЬ геа8епгк Сагюпгс 1грЫ ОЕАЕ-Рехггап СаРО, Слиоп!с !!РЫ Ыв глрокоте-тес!гагег! Мос!гТгег! СаРОг 16.6 СЬаргет 16т 1пгтот!ис!пе С!отсег! Сепел !пто Си!ситес! Матти!!ап Се!!л шау Ье пае1еаа Сот апосЬег.
Мапу оЕ йе ргососо!а с!еясгсЬелс ш сЫа сЬарсег Ьаче Ъееп орс!пикете Еог йе асапс!агд 1!пеа оЕ сп!спгесс се1!я. 'чч"лсеп па!па пюге елсос!с 1!пек оЕ се1!а, Ь !а ппрогсапс со согпраге сЬе еЕВс!епс!еа оЕ аечега! с!!йегепс шесЬосЬ. ТЬе ргососо!а ш сЬ!а сЬарсег ргеаепс сошшоп1у пьес! сгапаЕесс!оп сесЬп!сспеа аа сче11 аь шесЬосЬ сЬас Ьаче ргочеп апссеааЕп! лч!сЬ се11 1!пса сЬас аге геа!асапс со сгапаЕесс!оп Ъу асапс!аг<$ сесЬп!с1пея. Сопппегсса! !с!ся аге ача!1аЫе сЬас ргоч!с!е соПессюпа оЕ геааепса Сог шапу сурея оЕ сгапаЕесс!опа !р1еаае аее ТаЫе 16-21. Мапу сесЬпн!пея наес! !п еп1сагуос!с се!1 со!сиге аге пос йзспааес! ш с1есас1 ш сЬыпаппа! (Еог арес!Вс !пЕоппасюп оп се11 си!сиге, р1еаае аее сто1шпе ! оЕ Се1Ье тС ЛаЬотасогу Мапиа! !Ярессог ес а1.
1998а] Ь 1п рагс!сп1аг, Ь !а ааашпесС сЬас йе сопсС!с!опт Еог орВгпа1 агосчсЬ апс1 рааааае оЕ йе се!1 1!пеь со Ье наес! сп сЬ!а ргососо! Ьаче а1геас1у Ьееп еасаЫ!аЬей ТЬе лгит!епгг гсит!у то!еси!ел ссора, лр!птс!пе тот!е!л асголл йепи сотрисет лстеепг апт! гр!!с!пч йе еепел о1~опе степ!иге !псо гЬоге о! апог!сет. ТЬе лс!епсе оЕ~епет!сл !л ипет!у сЬап~егс.... 5отеател 1 и опт!ег и'Ьеге и е Ьаче т!лр!асег! оиг !!чеа Апссгеа Ваггеп ТЬе ВеЬасбот о! йе Наы!ссчеей. Рго1осо! 1 0МА Тгапйес6оп Месйа1ед оу Ыро1ес6оп есл««ве л гласе химвев Ог члв1лвсев лггест тне еенс1ьхсч оЕ 1!РоЕессюп, «не апццеас сЬас йе соп6!«!опа оп«!!пей «и йе Ео11оччша ргососо1 Ье пае6 аа а а«аг«!па рошс Еог ауасеша«!с ор«!ш(гасюп оЕ сЬе ауасеш (Еог ГшсЬег бе«аВа, р!еаае аее сЬе !пГоппа6оп рапе! оп ПРОрсСТ1ОХ а««Ье еп6 о1 «Ь!а сЬарсег). Л)«егпа«!че!у, а рго«осо! гесопппепс(ес( Ьу а сопппегс«а! «паппГас«пгег о1' а рагбси!аг 1«роГессап«сап Ье пае6 со Ьерп йе ор«ппггасюп ргосеяа Опсе а рояссне яапа! Ьаа Ъееп оЪ«а(пе6 чч)«Ь а р1аяпЫ саггу!пг а а«апба«6 герогсег пепе, еасЬ оЕ сЬе рагаше«ега 6(аспаае6 !п сЬе п«Еоппасюп рапе1 оп Г«РОрсСТЮХ гпау Ъе сЬапае6 ауасегпабса!1у со оЬсаш йе «пахппа1 га6о оЕ яапа! «о Ьас)«~«пипа ап6 «о ш!ппп!ге чапаЬ«16у Ье«ччееп гер!ка«е аааауа.
Ргоп««Ьеае геап1«а, орсппа1 рго«осо1а сап Ье 6ече!пред со аааау йе ехргеаа!оп оГ йе цепеа оГ шсегея. То ехр1оге йе ашсаЬ!1Ьу оЕа «чЫе чапесу оГ!!р!6а Еог йе саа)с ас Ьапс1, чне гесопппеп«1 ригсЬаяпа ап орспп!гасюп Ыс соп«а!и!па а аепеа оЕ !66(ч!6па! 1!РЫв ог согпЬ!па6опа оЕ 1«РЫя Ехашр!еа оЕ апсЬ )с!«а !пс!аде «Ье ТГх Кеацеп«а ТгапаЕес6оп Тпо (Ргошеаа), Регрес«1«РЫ ТгапаЕессюп К)с (1пч(«гоаеп), апс1 йе Тгапаресбоп Веааеп«ОР«пп!га6оп $уа«егп (1(Ее ТесЬпо1оа!еа). ТЬе Ео!1о«ч!па ргососо1 (а а пю6«Т«са«!оп оЕ а гпе«1«о6 ргонЫед 12у Ма«1« Ечапа (А1ехюп РЬаппасеп6са1я Ые«н Начеп, Соппес6спс). МАТЕК!АЬБ ВиГЕегв а«тд Яо!««Г«опв Р1еаае аее Аррепб(х ! Гог соп«ропеп«а оЕ а1осЬ ао166опа, Ьийегь, апд геадеп«я О!!п«е ь1ос)с ао1пбопа 1о 1Ье арргорпа«е сопсеп«га6опя Е(роЕес«(оп геааепс Ла !Ппассасе«1 сп ТаЫе 16-4 ап6 с1ааспЬед ш сЬе шГогша6оп раве! оп ИРОГЕСТ«ОХ, сече«а! «уреа оГ 1сроЕес6оп сеаВепь асс ача!)аЫе. Тува рсососо) 6сасс!Ьса «Ьс ыс оГ «счо сошпюп 1«рЫа: ° ЕвроЕесбп (Х-(1-(2,3-6!о1соу1оху)ргоруЦ-ХХ,Х-«с!п«е«Ьу!апппоп!пш сЫогЫе !ООТМЛ)) (р(Впгс 16-1).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
