Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 26
Текст из файла (страница 26)
ъ гаЬагп апд чап с1ег 6Ь 11973) ш|6а!- 1у ъ1еасПЬес1 гЬ|а пгегЬод, апс! йе|г ъчог1с!аЫ гЬе ЕошЫаноп Еог гЬе шггос1исноп оЕ с1опес1 РЬ)Аа иъго гпапипа1гап се!!а апс1 1ед снгесг1у го ге|гаЫе гпегЬода Еог Ьо|Ь яаЫе ггапаЕоггпаг)оп оЕ се!!а апд ггапяепг ехргеааюп оЕ с1опед 1>!ля Рог Еигйег дега!|а оп йе ргоседиге, р!еаае аее йе шЕоппатюп рапе1 оп твЛН5ЕЕСт|СЪЫ ОЕ МЛММЛПЛН С8ГГ5 тЛЛТН СЛГСВМ РНО5РНЛТК-РНЛ СОРРЕС!Р!ТАТ|5 ат ГЬе епд оЕ йь сЬартег.
5!псе гЬе риЫгсагюп оЕ гЬе от!8|па! гпегЬод, |псгеааеа |п гЬе етбсгепсу оЕ гЬе ргоседиге Ьаче Ьееп асЬ|ечед Ъу |псогроганп8 адсбгюпа! агеря аисЬ аь а 81усего! аЬос)с 1раг)ъег апд 8гаг)ъ 1979) апдlог а сЫогоъ)шпе ггеаггпепг 11ийпъап апд Ма8пиааоп 1983) |п гЬе ггапаЕесгюп ргогосо1.
Тгеагпгепг ъчпЬ аод|шп Ьигугасе Ьаа Ьееп зЬоъчп го епЬапсе |Ье ехргеьяоп оЕ р1аяп)да гЬаг сопгагп гЬе 5'ъг40 еаг1у ргогпосег1епЬапсег |п яппап апд Ьшпап се!!а (Соггпап ег а!. 1983а,Ь). ТгапаЕесг)оп )с)гя ъчЬкЬ Егес)иепг1у шс1иде гЬеае апд ойег пюс66санопа со йе от!8!- па! Рготосо1, аге ачаь!аЫе Егош а пшпЬег оЕ сошрашеа |р1еаае атее ТаЪ|е 16-2). ТЬ|а ргогосо|, ъчЫсЬ с1еасПЬез а са1сшпь-РЬоарЬаге-гпесбагед ггапаЕесгюп гпейод Еог ые ъч)гЬ р1аяпЫ РХАа апд адЬегепг се1!я ъчаа гпое66е<1 |гош |огдап ег а!. |1996), ъчЬо г18огоиа1у оргппгхес1 са!с)игп-РЬоарЬаге-Ьааед ггапатесгюп гпегЬода Еог СЫпеае Ьапьгег о~агу се11а апс1 Ьшпап егпЬгуопк Ыдпеу 293 се||я РоПоедп8 ГЬ|а рготосо! аге чаПатюпь оп ГЬ|ь Ьаяс гпейосЬ ° Рог Ы8Ь-еЕ6с|епсу 8епегаг)оп оЕ агаЪ|е ггапаЕесгапгя р1еаае аее гЬе а1|егпанче шегЬод аг гЬе епд оЕ гЬ|а ргогосо1.
° Рог иае ъч)гЬ Ь|8Ь-гпо1еси!аг-ъче18Ьг 8епогп)с Р)ъ)Аа |ргогосо1 3) апд Еог иае ъч|гЬ адЬегепс се1!а гЬас Ьаче Ъееп ге1еааед Егогп гЬе аиЬаггагшп ъч)гЬ ггуряп, р1еаае аее гЬе а1сегпагпе гпейод аг йе епд оЕ Ргососо1 3. ° Рог иае ъчЬЬ попадЬегепг се11я р1еаае атее гЬе а!гегпанче пъейод аг йе епд оЕ Ргососо! 3. 16.14 Ргососо! 2: Са)с)ит-рЛоврЛасе-тег))асес) Тгапв)есс)оп о) ЕиЕсагуос)с Се))в и )ЕЛ Р)азтгг) ЛХАв 16.15 МАТЕ К! АЕ5 САЕ)Т!Ой: Р1еаве вее Аррепс))х 72 Еог арргорпа1е Ьапс)1)пе оЕ тасепа15 спагЬес) ипЕЬ <1>. Вибее5 апд Ьо!и6оп5 Р1еазе зее Аррепс)!х 1 Еог сопсропеп!з оГ в!ос)с зо1ипопв, ЬиЕЕегв, апс) геаеепсз. 01101е 51ос)с зо101гопв 1о 1Ье арргорпа1е сопсеп1гаоопв.
СаС), Г2.5 м) СЛ)огос)и)пе 1700 тм) ГорбопаИ Гпззо1че 52 пса оГ сЫогос)и)пе ЙРЬозрЬасе ш 1 ш1 оЕ с)еюп)гесс с))вс)11ес) Н,О. 5сег)1!ге сЬе зо)шюп Ьу раззспц и сЬгоиЕЬ а 0.22-игп 61иш яоге йе 61!гасе ш Го!1-счгарресс шЬез ас — 20'С. Р1еазе все 5сер 5. Сгетза згагп 170;4 и)ч) ТЬе Осегпза яаш зЬои1сс Ье ЕгезЫу ргерагес) сп РЬоврЬасе-ЬиГГегес) за1спе ог Н О апсс 61сегес) сЬгоиЕЬ СвсЬагспап Хо. 1 6!Сег рарег ЪеЕоге ые. С)усего) Г7556 ч)ч) сп )х НЕРЕ5-ЬиГГегес) ва)те ГорЬопа)) АсЫ 1596 Гч)ч) аисоаачеа 51усего! со Гс1сег-всеп))аес) НЕРЕ5-ЬиЕЕегес) ва!ше зо!исюп )ивс Ье)оге изе.
Р1еазе зее 5сер 5. 2х НЕРЕЕ-ЬиЕГегес) за!те 140 гпМ Ссас! 1.5 шм 74а НРО 2Н О 50 шм НЕРЕЯ 1Эьзо!че 0.8 ц оГЛ)аС), 0.027 Е оЕС)асНРО 2Н О, апс) 1.2 5 оГ НЕРЕ5 сп а соса! чо!ипсе оЕ90 пс1 оЕйз- 6!1ес1 Н О. Аа)аис йе РН со 7.05 счсй 0.5 гс 74аОН <! >, апс) сЬеп асс)ивс сЬе чо1шпе со 100 ш1 сч)сЬ йз611ед Н О. 5сеп1)ге йе зо!ииоп Ьу равяпЕ 6 сЬгоиаЬ а 0.22-!сап Ес!сег; всоге сЬе 61сгасе Ы 5-шс а!к)иосз ас — 20'С Гог репосЬ оЕ ир со 1 уеас А)еСЛапо) <1> РЛоврЛаСе-Ьийегес) ваlспе ТЬе зо1ииоп зЬои)6 Ье зсег)11гес) Ьу 61сгаиоп ЪеЕоге ые апс) в!огас) ас гоош сегпрегашге.
5оо5ит Ьи1угасе 1500 тм) Горпопар 1п а сЬеппсас Ьппе Ьоой Ьппа ап а11с)иос оГ в!ос)с Ьшупс асЫ зо1исюп со а РН оЕ 7.0 сасЬ 10 74 НаОН. 5сеп11ге с1се зо!шюп Ьу раяспц сс йгоиРЬ а 0.22-иш 61сег; зсоге сп 1-сп1 а!н)иоь ас — 20'С. Р!еазе зее 5сер 5. О. 7х ТЕ ГрН 7. 6) 1 шМ Тпв-С1 ЕРН 7.6) 0.1 псМ ЕЕ)ТА ЕРН 7.6) 5сег11)ае сЬе зо1исюп Ьу разяпЕ и сЬгоиЕЬ а 0.22-иш 6Ьег; зсоге сЬе 61сгасе ш а)сс)посв ас 4'С. )Чис!е!с Ас!415 апе! О1!еопис!ео611е5 Р)авт)с) РА)А Рсяо)че сЬе РС)А )п 0.1х ТЕ ГРН 7.6) ас а сопсепсгаиоп оГ 25 Пфш1; 50 01 оЕ р1аяпЫ во1ииоп и гес)шгесс рег пи!Ипег оГ псес1шгп.
То оЬсасп йе Ь)аЬезс сгапзЕогшас)оп еГ6ссепссез, р!аяпЫ РНАз зЬои10 Ье ригсТсес) Ьу сосшпп сЬгошасоцгарЛу Гр!сазе зее СЬарсег 1, Ргососо! 9) ог Ьу есСш1)Ьг)иш сепспйЕаиоп ш СвС1-есЬс66шп ЬгоспЫе ссепвссу Егас11епсв Грсеазе зее СЬарсег 1, Ргоюсо) 10). 1Е сЬе яагипЕ аспоипс оЕ р!авпс)6 РЫА ь 1ппйпц, сЬеп асЫ сагпег РЛ)А со ас))ивс сЬе 6па! сопсепсгасюп со 25 Сса)ш). ЕиЬагуоск сапсег РС4А ргерагес) Гп сЬе !аЬогасогу изиаПу Есчев Ь)иЬег иапзГесиоп еГ6ссепс)ез йап согпшегсса11у ача11аЫе РЬСА зисЬ аъ са1Е сЬупшв ог за1шоп зрепп РНА.
5сепссге сЬе сагпег РХА Ьеуоге изе Ьу есЬапо) ргессриасюп ог ехсгассюп гасЬ сЫоюЕопп. Мее1!а СеП сиИиге егосчсЛ тесбит Гсотр)есе апс) )орссопа)) зе)есбче) Рготосо! 2: Са1стит-рЬотрйасе-тейатед Тпт~есс(ои оГЕи)сагуоттс Се1)т тч(т)с Р1атт)д 13ХЛт 16.17 5. ТЬе ирса1се оГ РХА сап Ье !псгеааед Ьу сгеаипепс оГ сЬе се!1а ю)сЬ сЫогог)и)пе )и сЬе ргеаепсе оГ сЬе са1с!шп РЬоарЬасе-РМА соргес)рдасе ог ехроыге со 81усего! апд юйшп Ьисугасе Го11очдп8 гешоча1 оГ сЬе соргес!РКасе ао1исюп Ггопт сЬе птейшп.
ТКЕАТМЕЛ~Т ОГ СЕЕЕВ 'ччСТН СНЕОКООСтС!ЧЕ СЫогот)шпе ь а ччеа)с Ьаае сЬас !а роаси1асед со асс Ьу шЬ!Ь!с)п8 йе (псгасеБи1ат де8гадаЬоп оГ сЬе РХА Ъу!уююгиа! Ьудго!ааеа (ЕисЬшап апд Ма8пиааоп 1983). ТЬе сопсепсгас)оп оГ сЫогос)и!пе асЫед со йе Вгоччй птес1пип апд йе типе оГ сгеаспсепс аге 1ппдес1 Ъу йе аепяс)ч)су оГ сЬе се1!а со йе сохк ейесс оГ сЬе дги8. ТЬе орсипа1 сопсепсгасюп оГ сЫогоишие Гог йе се1! суре иаед аЬои)д Ье десегпипед етпр)пса11у (р1еаае аее сЬе !пГоппас!оп рапе1 оп СНЕОКООСЗСЛ(Е О!РНО5РНАТЕ). а.
Р)!исе 100 шМ сЫогог)шпе ЙРЬоарЬасе 1:1000 йгесс!у шсо сЬе шейшп егйег ЬеГоге ог айег сЬе адйсюп оГ сЬе са1сшти РЬоарЬасе — РХА соргестрдасе со йе сеПя Ь. 1псиЬаСе сЬе се!!а Гог 3-5 Ьоига аС 37'С ш а ЬипндтТтед шсиЪагог жй ап атшоарЬеге оГ 5 — 7а7о СО . Моя сеиа сап аогяче го йе ргеаепсе от сЫого9шпе тот 3 — з Ьоата. Се!!а ойео Оечдор а чеяса)апаед арреагапсе гСопл8 ттеастепс чдсЬ сЫогоцшле. с.
АГсег сЬе сгеасгпепс жсЬ РХА апд сЫотос!шпе, гешоче йе шед)иш, ччааЬ сЬе се1!а жй РЬоарЬасе-ЬиГГетед аа1ше, апд асЫ 5 ш! оГ ччатшед сотпр1есе ВгожЬ тиейшп. Кесигп йе се1!а со сЬе тисиЪасог !ог ! — 6 дауя Ргосеед со 5сер 6 со аааау Гог сгапяепс ехргеааюп оГ сЬе сгапаГессед РХА, ог ргосеед йгесс1у со 5сер 7 тГ сЬе оЬ)есс)че ь асаЫе сгапаГогшас!оп оГ йе се11я ТкеАтме!чт ОГ сесе5 ъчстн сеусекОе Т!с)а ргосес)ше гпау Ье гьед Го11ожп8 сгеасптепс чч(сЬ сЫогоишпе. Весаиае се!!а часу ччгде1у !и йетг аепа!с!ч!су со сЬе сохк еГГесса оГ 81усего1, еасЬ се!1 суре шиас Ъе сеасед ти адчапсе со с)есепшпе сЬе орсппшп сппе (30 аесопда со 3 гйпшеа) оГ сгеасшепс.
а. АГсег се!!а Ьаче Ьееп ехроаед Гог 2-6 Ьоита со йе са1сппп РЬоарЬасе — РХА соргес!Р)саге !и рожЬ гпейшп (+ с!т1огосрлпе), гепюче йе тпейши Ьу аарттаИоп апд ччааЬ йе июпо!ауег опсе чч!сЬ РЬоарЬасе-ЬиГГегед аа1ше. Ь. Адд 1.5 ш1 оГ 1596 81усего1 ш 1х НЕРЕ5-Ъи(Гетед аа1ше Со еасЬ тпопо1ауег, апд )псиЬате сЬе се1!а сот сЬе ргедесепшпед орс)шиш!еи8й оГ сште ас 37 С. с. Кепюче йе 81усего1 Ьу аар!гас!оп, апд ччааЬ йе шопо!ауегв опсе ъч!сЬ РЬоарЬасеЬиГГегед аа1)пе. д. Адд 5 ш! оГ ччаппед сошр1есе ВгожЬ тпейшп, апд тпсиЪасе сЬе се!!а Сот 1-6 дауя Ргосеед со 5сер 6 со аааау Гог сгапяепс ехргеааюп оГ сЬе сгапаГессед Р!ч!А, ог ргосеед йгесс!у со 5сер 7 !Г сЬе оЪ)есс!че ь яаЫе !тапа(оппас!оп оГ сЬе се1ря ТКЕАТМЕГСТ ОГ СЕСЕ5 'чЧСТН 5ООССЗМ ВС1ТтКАТЕ ТЬе шесЬашяп йгоиВЬ ччЬ)сЬ юйшп Ьшугасе ась ь пос )споччп жсЬ сегса!псу; Ьоъчечег, йе сошроипд ь ап шЬ)ЬсСог оГ Ььгопе деасеСу1аСюп (1.еа апд Капдо!РЬ 1998), ччЫсЬ аи8- 8еаса йас сгеастпепс шау 1еад со Ь)асопе Ьурегасесу1асюп апс1 а сЬгошас!п асгиссиге оп сЬе шсоиип8 р1аяпЫ Р!ч)А сЬас ь ргед!ароаед со сгапаст!Рсюп (ЪЧог)ипап апд К!п8асоп 1998).
16.18 СЬаргек 1бг Епт ог)ис)ич С!оиегЕ Сепея тго СиПикег! Матти!тип Се1Ь а. ЕоПочч)п8 ЕЬе 8!усего! яЬос1с, й1ше 500 шм яойшп Ьитугате йгесс1у што ЕЬе ПгоччтЬ шейшп (5тер й тгеатшепс оГ сеПя тч)ЕЬ 81усего1). ГЗтТГегепт сопсептгатюпя оГ яойипт Ьшугате аге ияег! с)ерепсПп8 оп тЬе сеП туре. рог ехашр1е: С'кг-! 10 шм Ы1Н-ЗТЗ 7 тпМ Не1.а 5 шм СНО 2 шм ТЬе собес! апюппт Еог отЬег сеП 1тпея тЬаг птау Ье ггапяуестеП яЬоп18 Ье г)етекшшег) егпрыкаПу.
Ь. 1псиЬате тЬе сеПя Гог 1 — 6 г)ауя. Ргосеег1 то 5тер 6 то аяяау Гог тгапяепт ехргеяяоп оГ ГЬе тгапярестег1 Е)ХА, ог ргосеес1 йгест1у то 5тер 7 ЕГ ЕЬе оЬ)еств е Ея ятаЫе тгапяГогшатюп оГ тЬе сеПя. 6. То аяяау ! Ье тгапяГессеП сеПя Гог !капа)еп! ехргеяяоп оГ ЕЬе ЕптгогГисес) !ЗА, Ьагчеят Гпе сеПя 1 — 6 г)ауя аГтег тгапяГесПоп.
Апа1ухе КХА ог РХА ияп8 ЬуЪНйхаПоп. Апа!ухе петч1у яупЕЬея)хег) ргосе!и Ьу гайопппшпоаяау, Ьу пппшпоЫоттш8, Ьу иппитпоргес)рПаПоп Го1- 1отч)п8 тп ч!чо птетаЬо!к 1аЬе1ш8, ог Ьу аяяауя оЕ епгушатк асПчПу тп сеП ехтгастя. То штпппгае гпяЬ-то-ПкяЬ чапакгоп гп тгапятееиоп еЕПе)епсу, и ы Ьеяг го 00 сгапятеск яечега! йяЬ- ея гпй еасЬ сопя!гост, !П) тгуряпгае йе сеПя айаг 24 Ьошя оЕ гпспЬаиоп, !ш) роо) тЬе сеПя, апг) Е)ч) гер1ате йегп оп яечека! еПяЬея. 7. То )яо1ате ятаЫе тгапяГестаптя: а. 1псиЬате ЕЬе се!Ь Гог 24-48 Ьоигя ш попяе!есПче шес1шш то аПотч типе Гог ехргеяяоп оГ ГЬе тгапяГетгес1 Пепе(я). Ь.
ЕПЬег !гура)п)ге апг1 гер1ате ЕЬе сеПя Еп ЕЬе арргорНасе яе1есПче шейшп ог ай1 тЬе яе1ест)че тпейшп йгесс1у со гЬе сеПя ъчПЬош ГигтЬег шатпри1аПоп. с. СЬап8е ЕЬе яе1есПче тпейшп ъчПЬ саге ечегу 2 — 4 г)ауя Гог 2 — 3 тчее!гя Го гетпоче ЕЬе г)еЪг)я оГ г1еаг1 се! Ь апг) то аПотч со1ошеь оГ геяятапт се!Ь со Пготч. д. С1опе Епг)!ч)с)иа! со1ошея апс1 ргора8асе Гог аяяау (Гог тпеЕЬойь р1еаяе яее !а1соЪу апг1 Раятап 1979 ог 5рестог ет а1. 1998Ъ !СЬартег 86 оЕ Се)Ьк А ГаЬогагогу Мапиа)) ).
е. ОЬсаш а регшапепт гесогг! оГ тЬе пшпЬегя оГ со1ошея Ъу Пх)п8 ЕЬе гешаш)п8 се!Ь ччПЬ ке-соЫ шеЕЬапо! Гог 15 пипитея ГоПотчег) Ьу яташш8 яч)тЬ !Опало С)ешяа Гог 15 пшпиея ат гоош тетпрегатиге ЪеГоге г!пя)п8 ш тар ччатег. ТЬе е81пиоп ак тчЬ~сЬ ЕЬе ггапяЕесгеП сеПя яЬоп18 Ье гер1акег) го у)еЫ ъчеП-яерагатег) со1оп)ея ь г)екектп)пег) Ъу гЬе еЕПс)епсу оЕ ягаме иапяЕоппаиоп, тчмсЬ сап чагу очек яечега) ошей оЕ ша8п)гпие !е.8., р1еаяе яее Зрапигиоя апП ЧгП)г)е 1984). ТЬе ейктепсу ь г)ерепг)епг оп йе гестртепт сеП гуре !ы8шйсапг ййегепсея Ьаче Ъееп оЬяегчек! ечеп Ьегкчееп ййекепг с1опея ог ййекепт раыа8е пшпЬекя оЕ тЬе яагпе сеП 1ше !Солако апг) Реагяоп 1981; кгап ре! ег а!. 1985!), тЬе па!иге оЕ йе )пггоПпсег) депе апг) йе е65сасу оЕ гЬе ткапяспрпопа1 соптго! я8- па1я аяостатеП чбтЬ и, апг1 тЬе ашоппс оЕ Р)4А шее ш ЕЬе кгапятесиоп. Ргососо1 2: Са!с|ит-РЬозрЬасе-|иеаИагед Тгап17есс)оп о7'йиlсагуогйс Се1Ь ии(Ь Р!азтйд ОХИ 16.19 | АЕТЕКЬ|АТЗЧЕ РКОТОСОЕ: НЗСН-ЕГЕЗСЗЕЬ(СЧ САЕС|0М-РНО5РНАТЕ-МЕ0|АТ ! ТКАЬ(5ЕЕСТЗОЬ3 ОГ ЕЕ)3ЕАКУОТЗС СЕЕЕ5 ЪЧЗТН РЕА5М|0 0Ь(А5 А пюсИИса6оп о1 йе сйахайса! са|сйигп рЬохрЬа(е сгапх(есдоп гпе1Ьод йас дгеаду епЬапсех (Ье е йе ргосес|иге |чаа дече|оред Ьу Нйго(о Ойсауата апд соИеадиеа (СЬеп апд О|сауагпа 1967, 19 п|ейос| ччодсх раг6си|аг|у счеИ ччЬеп 91аЬ(е (гапх(ес(ап(9 аге со Ье ьо|а(ед изид |врегсоИед рйа9 апд д(дега 1гогп (Ье сйа99(сай ргоседиге |п йас |Ье са|свгп рЬоарЬа(е-0ЫА соргес|р|сасе 39 аИо|ч |п 1Ье 1(99ие си|сиге гпесйип| диппд рго3опдес| йпсиЬабоп (15 — 24 Ьоигх) ипдег сопсго3|ес| сопддюпа о1 р (6.96) апд гес|исес3 СО (епайоп (2-4%).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
