Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 28
Текст из файла (страница 28)
15о пот го ехсеей сЬе орйпшш гпсцЬайоп регюй. 5есопсЬ сап соцпс! с. Аярпасе ЕЬе П1усего! ш сЬе НЕРЕ5-ЬцЕГегес1 яа1юе апс1 гарЫ!у счаяЬ1Ье йяЬея !чеке сч)сЬ 10 тп1 оГ ъчапиес1 ПтосчСЬ тпейшп. д. АсЫ 10 тп1 тчаппей агосчсЬ шейцсп апс1 шсцЬасе сЬе сц1сцгея Еог 12-15 Ьоцгя ас 37'С )и а Ьшп)йгТсей спсцЬасог сч)сЬ ап аспюярЬеге оЕ 5% СО . Ргосасо! 3: Са!сшт-рЬоярЬасе-тес)1асес) ТтапяЕесссоп оГСе1!я ццсЬ Н)П)г-то!еси!аг-ме)еЬс Сепот)с РХА 1623 16.26 СЬарсег 16: 1псгодис|пц Сlопед Сепел (пго СиКагед Митта!|ап Се!!л АЕТЕКМАТ(сГЕ РКОТОСОЕ: САЕС|й)М-РНО5РНАТЕ-МЕЕ)1АТЕО ТКАМВЕЕСТ1ОМ ОГ СЕЕЕ5 СКОЪЧ1МС |М 5()5РЕМ51ОМ А (ечч сеП |век Пгоччп аь яьрепь(оп си1илгеь (е.ц., Не(а сеПс) сап Ье йгапх(есйес1 их(пВ сЬе иккИед са|сгагп рЬоьрЬайе ргоседиге дехсг)Ьед |и 1Ь(ь рго1осо!.
Ноччечег, тохй Пиеа о( сеИ Вгоччп |и ьиьреиа)оп аге геььйапй 1о са(с(ит-рЬоярЬайе-гпед)айед (гала(есдоп гпе(ЬосЬ, )пйгапх)8епй сеП Пиес аге Ьеяй йгаих(ессеи их)пц е|есйгорога1юп (Ргойосо! 5) ог Про(есдоп (Рго1осо! 1). Адд|1|оиа| Майей|а|а Ехропепба||у дгоиспВ гпатгпабап лис(леал|оп се()л РЬоьрЬасе-Ьийегед ла(|пе (РВ5) 5огча(! Н10008 гойог ог ес)и(ча(епй Ме(Ьос| 1. СоПесй сеПь Поги ап ехропепбаПу Вгочч)п8 аихрепс)оп си)йоге Ьу сепйг!ПлВай(оп ай 800а (2000 грт )п а 5огчаП Н)0008 го1ог) йог 5 т)пайи а1 4'С. ОВсаи3 йе ялрегпайапй, апс| геаиьрепд (Ле сеП реПей |и 20 чо(игпеь о! |се-соЫ РВ5.
ОЫде СЬе хихрепх)оп юйо а!к)иойх сои(а(и(пВ 1 х 10" се((ь еасЬ. Кесочег йе счаьЬес1 сеПь Ьу сепйп(ицай(оп аа Ье(оге, апс1 ада)п д)ксагс1 йЬе хирегпайапй. 2. Ропп 1Ье са1с(ит рЬоярЬайе-ОМА соргес(р!йайе аа деаспЬес3 (п Рго1осо! 2, 51ер 2 П р1ахт!д ОНА 'ь иьед (ог йгапх!есдоп ог ас деьспЬед |и Рго1осо! 3, 51ер 5 8 Вепопдс ОНА В иаед. йсойе 16а1 ргерагаиоп о! йе соргес|рПа1е адсЬ р)алт)д 0гЛА Сл)сел оп |у -5 т)пай ей йо ргераге, счЬегеач 1Ье соргеор)йайе сопла)и(п8 Пепопмс 03(А йаПел -25 т)писел йо ргераге. Ехесисе йе (пи)а) Ичо ссерь о! йЬЬ ргососо| со йа1 се)(с апд соргес|РПасе аге геаду ас йе салопе Пгпе.
3. Сеиду гехиьрепд 1 х 10г се)(ь |и 1 гп! о( са|сгигп рЬоярЬайе-ОНА сиарепа)оп (сои(а(п(пВ -20 щ о! ОНА), апд аПоъч СЬе язепа(оп 1о ьйапд (ог 20 пдпи1еь а1 гааги йетрегаилге. 4. Адд 10 гп! о! согпр|е1е цгосч(Ь мопед!ит (ъч)й ог ъч)йоий сЬ3огос|гдпе) р1еаье атее Ргойосо! 2, 5(ер 5) йо а 1иЬе о( се|Ь, апд р|а1е йе епбге аиьрепх(оп |и а ь)пц(е 90-пип 1(ххие сиПиге с|ЬЬ. 1псиЬайе 1Ье се3Ь сог 6 — 24 Ьоигь ай 37 С |и а ЬиткИед йсиЬайог чч)1Ь ап аииохрЬеге о( 5 — 74 СО . 5.
(Орйюпа! гог се))ь (сиосчп йо лигчсче а фусего! лЬос(с) Ай 4-6 Ьоигх айег Ьец)пп(пе 5(ер 4, саггу оий 1Ье (о(- (очч)пП (ойегъч)хе, ргосеес! 1о 5(ер 6): а. Со|3есй 1Ье сеПь Ьу сепйг((икай(оп а1 800е (2000 гргп |п а 5огчаП Н1000В го1ог) (ог 5 т(пайи ай гааги йегпрегайиге, апс| ччасЬ СЬегп опсе чч)й Р85. Ь. Кеяьрепд йе ччаеЬед сеПх )п 1 гп! о(15 А ц(усего! |и 1х НЕРЕПЬи((егед яаПпе, апс| |псиЬайе йе се|В йог 30 хесопсЬ со 3 гп|пи1ея ай 37 С. 34еасе лее йе пойе йо 51ер 1ОЬ )и йе пса|и рго1асо|.
с. О|3ийе 1Ье хихрепх)оп чч|1Ь 30 гп| о( РВ5, апс| гесочег СЬе сеПх Ьу сеп1пйлдадоп аь деьсг!Ьед )п 5(ер а. )гуасЬ йе се((х опсе |и РВ5. д. Кесюарепс| сЬе ччаеЬес! се|В )п 10 гп| о( сотр|ейе Пгосч|Ь гпед)игп, апс! р|айе йет (п а 90-ичи йьеие си|сиге д)хЬ. |псиЬайе йе си|йоге (ог 48 Ьоига а1 37'С |и а ЬигпкИед |псиЬайог чч)1Ь ап айгпоярЬеге о( 5 — 7;4 СО .
6. Кесочег йе се((с Ьу сепйп(иКай)оп ай 800а (2000 гргп |и а 5огчаП Н10008 го1ог) (ог 5 т(пайи ай гааги йетрегайиге, апс1 ччаьЬ йет опсе чч(й РВ5. 7. Кехихрепс1 йе сеПь |и 10 гп! о( согир|е1е цгосчйЬ гпед)игп иаггпес1 1о 37'С. Ке1игп йе се|В йо йе )псиЬа1ог (ог 48 Ьоигх Ье(оге аахау(па (ог йгапх(епй ехргесх!оп о( йгапс(есйед Вепес (Ргойосо! 2, 5(ер 6) ог гер|абпВ йе сеПс (п ье|есй!че гпесйипл (ог (хо(ай)оп о! ьсаЫе и апх(оггпапйх (Рго1осо! 2, 5(ер 7). Рго1осо! 4 Тгапйес6юп Месйа1ед Ьу 0ЕАЕ-0ех1гап: Н~цЬ-ей~с~епсу Мейод т НГ Ы85т тклН5ттетЮН МГтНО05, ВЕЧН.ОРНОЙ Ь тНт ГЛтт 1950Ы иаес) Ьурегоыпойс апг$ ро1усайопк рготепь то ргошоте ептгу оГ РЬ)А )пто сейа (Гог теч)етч, р1еаае атее Ее18пег 1990). ТЬе геаи1та ччеге еп а!к, апс1 тЬе ейктепсу оГ тгапаГест)оп тчаы ат Ьеан чету роог.
ТЬе яшатюп гтрточео дгашайсайу иг йе шЫ 1960а тчЬеп РЕАЕ-г)ехтгап Гг))етЬу)апипоетЬу!-г)ехтгап) ъчаа иаес$ то 1птгот)исе ро1юч)тиа К)ч)А $райапо апг) ЧаЬет) 1965) апс1 5Ч40 апй ро1уотпачйгиа РЬ)Аа ГМсСитсЬап апг) Ра8апо $968; Матс)еп апг) ТЬогпе 1968) што сейы ТЬе ргосес$иге, ълтЬ аПВЬт пюс66сатюпы сопт)пиеа то Ъе тчЫе!у иьег$ Гог тгапаГест)оп оГ си!тигес1 се1Ь ейй лга! Вепошеа апс1 гесогпЬ)пап! р!аыпЫы А1$ЬоиВЬ йе шесЬапып оГ асйоп оГ РЕАЕ-с)ехсгап )а пот ипг)егатоог$ тп г)етай, и аееша П)се!у тЬат йе Ь18Ь-гпо1еси!ат-тче)8Ьт рояйче!у сЬаг8ег$ ро1утпег аегчеа аа а Ьйдйе Ьеттчееп йе пе8ат)че!у сЬагйег$ пис1ек асЫ апт$ тЬе пейайче!у сЬатйей аигГасе оГ тЬе сеП $1)еЬег ес а!. 1987; Но!тег ет а1.
1989). Айег йе РЕАЕ-г)ехтгап/РХА сотар!ехеа Ьаче Ьееп тпсегпа11хес1 Ьу епс)осутоыа (Куаег 1967; Уап8 апс1 Уап8 1997), йе РЬ)А аошеЬоъч еасареь Ггош тЬе тпстеаып81у асЫк епг)оаогпеа апг$1а тгапьрогтег$ Ьу ип)спотчп шесЬап)аша асгоаа йе сутор1аып апт$1пто йе пис1еиы ТгапаГесйоп шесйатес1 Ьу РЕАЕ-с1ехттап ййега Ггош са1сиип рЬозрЬате соргестриайоп 1п йтее ипроыапт геаресты Е)тат, и )а иаег$ Гог ггапяепт ехргеааюп оГ с!опег)8епеа апс$ пот Гог атаЫе ттапаГогшат!оп оГ сейь (С1иттпап 198$). 5есопг$, й ъчог)сь чету еГ6с)епс!у чч)тЬ 1шеа оГ сейа аисЬ аа В5С-1, СЧ-1, апг$ С05 Ьит )а ипаат)аГастогу тч)тЬ тпапу отЬег туреа оГ сейы ТЬ)гг$, аптайег ашоипта оГ РЬ)А аге иаег$ Гог тгапаГест)оп ълтй РЕАЕ-с1ехттап тЬап ълтЬ са!сгитп рЬоарЬасе сортес)рйатюп.
Махипа1 тгапаГест)оп еГ6степсу оГ $0а япиап сейа )а асЫечег$ ъч!$Ь 0.1 — 1.0 88 оГ аирегсойет$ р1аяпЫ Р)4А; 1аг8ег ашоипга оГ РЬ)А $>2 — 3 и8) сап Ъе шЬ1Ь)тогу. Ву соптгаы то тгапаГес$1оп гпесйатей Ьу са1сйгп рЬоарЬате, тчЬете ЬтВЬ сопсепттатюпа оГ Р$4А аге гег)и!тег$ со ргопюте тЬе Гоппайоп оГ а соргестрйате, сагйег РЬ)А )а 1аге1у иаег) чйтЬ йе РЕАЕ-г)ехтгап ттапаГестюп шетЬой 51псе йе шетЬот) тчаа 1птгос)исет$ гпоге тЬап 20 уеага а8о, шапу чайапта оГ РЕАЕ-йехтгап сгапаГестюп Ьаче Ьееп с1езспЬег1. 1п июы сааеы тЬе сейа аге ехроаег$ со а ргеГотшес) пихтиге оГ Р$4А апг$ Ь18Ь-тпо1еси1ат-тче18Ьт РЕАЕ-г1ехсгап (шпл >500,000).
Нотчечег, а гпот$1Ттег$ ргосег)иге Ьаа Ьееп деаспЬед ш тчЫсЬ тЬе сейа аге ехроаег$6гы то РЕАЕ-йехттап апт$ йеп то РЬ)А (а!-Моь!й апт$ РиЪеь 1973; Но! сег ет а). 1989). А$1 оГ тЬеае шетЬог)а аее)с то шах)ш)хе тЬе ирта1се оГ Р)х)А апг$ то пип)пг)ге тЬе сутосох!с ейеста оГ РЕАЕ-г)ехтгап. ТЬе Гойоълпй аге апюп8 тЬе чат)аЫеа тЬат шйиепсе тЬе еуйсгепсу оГ тгапьГестюп.
° Сопсепттайоп оГРЕАЕ-г$ехгтап пиеа апг$!епйт$т оГ11пте се!1т ате ехрохет$ то 11. $$ га роыПЪ|е то иае егйег а ге1айче1у ЫПЬ сопсептгайоп оГ РЕАЕ-г)ехтгап $1 ш8/ш1) Гог аЬотт рет)ог)а $30 ш)питеа то 1.5 Ьоигь) ог а !отчет сопсепсгатюп $250 $г81ш1) Гот 1оп8ег рет)ог)а оГ типе (ир то 16.27 )6.28 СЬаргег )6: )и!гол)ис)ац С)опег) Сепел )иго Си)гигег! Матта))ап СеПл 8 Ьоига). ТЬе Пгниг оЕ )Ьеье ггапаЕесг!оп ргосес1игеа )а йе тоге еЕЕлс!епг, Ьи) П 1пчо)чеа тотсоппц )Ье сеПа Еог еаг1у яцпа оЕ сцаггея лчЬеп )Ьеу аге ехроаед го )Ье Р)х)А)РЕАВ-с)ехггап т!хгиге.
ТЬе аесопг) гесЬп!г)ие га )ела л)етапгПпд апс) тоге ге)лаЫе, Ъггг ьПдЬ)!у 1ея еЕЕгс)епг. Но мечег, П сап Ье сотЬлпес1 ъч))Ь аЬос)с ггеагтепга Елее Ье)олч) йаг сап га!ае йе ейк!епсу оЕ ггапаЕесг!оп го чету Ь!дЬ )ече)я ° )ухе оЦасЕ)Егатгл лией аа РМБО, сИогогЕите, ог ц)усего!. ТЬе еццслегку оЕ ггапяепг ехргея яоп оЕ цепеа !пггос1исед Ъу РЕАЕ ггапаЕесг!оп 1а !псгеааес1 -50-ЕоЫ !Е сеца аге ехроаес1 со РМ50, 81усего1, ро1уейу!епепплпе, ог о)Ьег аиЬяапсеа ьисЬ аь 5)агЬигаг депс1пгпегв йас регтгЬ ояпож апс) !псгеаае йе ейк)епсу оЕ епс)осугояа !сораса ег а1.
1984; 5иаяпап апг) МПтап 1984; Ки)солча)са-ЬагеПо ег а1. 1996; Хаипег ег а!. 1996; СодЬеу ег а1. 1999). А 5!плцаг )псгеаае ш еЕПслепсу оЕ ггапаЕесгюп оЕ еогпе Ппеа оЕ си1)игед сеца шау Ъе оЬга!пес1 Ъу ехроя шц гЬе ггапьЕесгег) сеПа го сЫогог)и)пе, ъчЬ1сЬ ргечепга асЫгцса6оп оЕ епг)оаотеа ап6 рголпогеь еаг1у ге)еаае оЕ РХА шсо )Ье сугор1аяп !1и)Ьтап апс1 Мацпияоп 1983). 1п йе Ьеаг самец 8098 оЕ йе сецк т а ггапхЕесгед рори1а6оп сап ехргея Еоге!дп депеша хЬелл РЕАЕ-с)ехггап ап6 Еасл1Пасога аге илес) ш сотЪ1па6оп (е.ц., р)еазе аее К)ихеп апд 10ЬЪегг 1993). Нолчечег, !Ье ейк)епсу оЕ РХА ггапаЕесг)оп ияпц 13ЕАЕ-с)ехггап лч!)Ь а Еас|П)агог чаг|еь цгеаг1у Егопл сеП!лпе го сеП 1ше. СопсП6опа )Ьаг аге оргппа1 Еог опе сеП 1ше гпау пог лчог)с аг аП Еог апойег.
То оЬсаш сопяяепг1у ЬлцЬ е)Пклепслеа оЕ )гапаЕогтаг!оп лч!)Ь а рагиси1аг сеП 1ше, )Ье ЕоПочч!пц Еасгога хЬои)6 Ье агапбаг6)лес): Репягу оЕ сеПа апг) )Ье!г яаге оЕ цголч)Ь. Агпоипг оЕ сгапьЕес6пц Р)х)А. Сопсепггабоп апс) пю1еси!аг чче!8Ь) оЕ РЕАЕ-г)ехггап. 1епд)Ь оЕ 6гпе сецх аге ехроаег) го Р)4А. ЮЬе)Ьег )Ье РЕАЕ-с)ехггап ап6 РЫА аге агЫед го )Ье сеца ыти!сапеоиа!у ог ьег)иепг!аПу !а)-Моа1й апд РиЬех 1973; Но)гег ег а1.
1989). 1епд)Ь апс1 гегпрегатге оЕ йе роагггапаЕес6оп Еасцпа6оп апг) )Ье сопсепггагюп оЕ )Ье ЕасППа6пц ацепи 'ччЬе)Ьег йе сеца аге ггапаЕесге6 ъчЫ1е цгочбпц оп а хо1Ы аиррогг ог аге Елгя гепючес) Егопл йе ао1Ы аиррогг апг) ггапаЕесгес1 лп аиарепяоп !Со1иЬ ег а!. 1989). рог риЫ!саг!опа йаг апа)ухе йе еЕЕесга оЕ аоте ог аП оЕ гЬеае сопсП)!опа оп ггапхЕесгюп ейк!епсу, р)еаае аее Но!гег ег а). !1989), ргедеаи апс) В1еасИеу )1991), К1ихеп апс1 ЬиЪЬегг !1993), апс1 1.ио апд ца)ггплап !1999).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
