Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 32
Текст из файла (страница 32)
ТЬе депе дип |чаз оГ цгеа|ез| ш|егез| со р1апс цепе6с1згз, гчЬозе а||ешрыо !пггобисе РЬ!А !псо р1апс сецз Ьу сопчеп|юпа1 гпе|Ьос!з Ьад Ьееп |тиз|габпц!у шейк!епг. '1Ъе р|п зо1чед |Ье ргоЫеш Ьу |Ье сгибе Ьш еГПс1еп| з|га|ецу оГ 66П|пц Ьо1ез |ЬгоицЬ йе |Ь~с1| сеП |чаПз чбй РХА-соаге6 ше|а1 раг|к!ез. Резр1|е йе ши|а! епоппо|ь з1серГ!с!зпт оГ о|Ьег зс!еп6з|з, цапГог6 ап6 'чтго1Г риЫьЬе|1 рарегз оп йе зиЬ1есг (К!е1п е| а!. 1987; Ятаг1| е| а1.
!991; $|шй е| а1. 1992; дапцог|1 е| а1. !993Ь оЬ|а!пе|1 ра|еп|з оп йе депе дип ап|1 Пз |ьез аз ап 1пз|гип|еп| со |1еПчег РМА |о сеПз, ап|1 Гогше|1 а сошрапу чч1|Ь йе ар| па|пе оГ В!о1ьг1сз, 1пс. ТЬ1з ше|Ьод Ьаз гечо1и6ойге6 р1ап| цепе6сз: Моз| оГ йе гчог16'з |гапзцепк сгорз Ьаче Ьееп рго|Ьгсе|1 ияпд Ъ|о1ык сесЬпо!оду.
ТЬе ггачацз оГ дапГог6 апд Ч'о1Г ап6 йе зс1еп66с апд сопипегс!а1 гетчагбз оГ |Ье!г гчог1с аге Ьеаи6- ГиПу |1езспЪе|1 Ьу дапГог6 !п а риЫкабоп ачацаЪ!е !гош Ь|з рЫ1ап|Ьгорк огцап|ха6оп !реем Му Я|еер Ропота|!оп, Ъ|гагег1оо, Ь!егч 'гогЦ. ТЬе ейк!епсу чч!|Ь ччЫсЬ Гоге!до Р1~А 1з шгго6исед 1псо сецз Ъу Ъю!ьбс ггапзГогша|1оп берепбз оп а 1агце пшпЬег оГчапаЪ!ез, !пс!и61пц: ° СеИ гуре.
Сецз гапд!пц Ггош Ьас|епа |о р1ап|з со Ьера|осу|ез чч!й!и йе 1|чегз оГ Пч1пц годепгз Ьаче Ьееп зиссеззГицу зЬо| гч1|Ь РЬ!А-соаге6 писгорго!есгцез. !п еасЬ сазе, йе сопсцбопз |Ьа| рго6исе6 а зиссеззГи! ехрегппепг |чеге Й!ГГегепи ° СеИ цгогч60 ТЬе |1епя|у ас ччЫсЬ сиПиге|1 сецз аге ЬошЬагбе6 аГГесгз |Ье |гапзГес6оп Ггес1иепсу, |ч!|Ь цгеа|ег ейк1епсу геа1ыед а| 1оъч сеП |1епя|у |и зо|пе сазез (е.ц., ччЬеп 1пггодис|пц РХА |п|о ш|гасеци1аг огцапецез! апд а| Ь!цЬ сеП депз!гу |и о|Ьегз (е.д., гчЬеп сецз оГ Васц!из тедагегГит аге |Ье сагце|Ь допге сецз аге Ьез| ггапзГесгес! |чЬ|!е |п |Ье еаг1у 1оц рЬазе оГ |Ье!г цгогчгЬ сус!е, |чЬегеаз о|Ьегз зиссишЬ аугег Ье!пд цготчп |о за|игабоп, ° СиИиге иге|!!ипг. ТЬе еГПс!епс1ез чч!|Ь гчЫсЬ гпапу Ьас|епа! апс1 р1ап| сеПз сап Ье |гапзГессе6 Ьу ЪюПзгк ше|Ьобз сап Ье 1псгеазед сопядегаЫу Ьу ЬошЬаг61пц |Ье сецз ш а шесцшп оГ ЫВЬ ояпо1ап|у.
Адеп|з зисЬ аз зогЪ||о1 ап6Гог шаппбо! 1п сопсеп|га6опз гапц!пц Ггош 0.05 |о !.5 м аге изес1, тч!|Ь йе орбпшш ояпобсшп ап|1 сопсеп|га6оп сИГеппц Ьегччееп зрес1ез ап6 сеП гуре. ° 6еиеции зеггГицз. 1шрогсапс рагаше|егз !пс1иде |Ье ашоипс оГчасишп аррПе6 |о йе зЬоо|- шц сЬашЬег, |Ье Ье1шгп ргеззиге изе|1 |о 6г!че |Ье РЬ!А-соагес1 раг6с1ез, апс1 |Ье сПз|апсе Ьегччееп |Ье цип ап|1 йе |агце| сецз. тб.37 16.58 СЬаргег 16: 1пггогЕис(пе СГопегЕ Сепег гпго Си!гигегЕ АЕатта)Еап Се)!л ° Туре о)" атгпипЕГ(оп. В1ах608 зпЬсеП01аг ог8апеПех лч(гЬ лпарргорпаге1у 1аг8еюПатегег 8016 ог 1008агеп рагбс1еа ргос)псеа оп1у а плеши ТЬе ор6пппп раггк1е мхе Еог еасЬ арр1ка6оп сИЕега Ьеглчееп сеП гуреа апс( гапВех Ггогп 0.6 рт Еог апЪсеПп)аг огдапеПеа со 1.6 )гт Гог сп11пгес) гпапппа!лап се!Пи Раглк!ез гпас1е оЕ1008хгеп ог 8016 аге паес) Го бе)(чег ЕЬе РЬ)А го се1Ь апс1 еасЬ гпега! Ьаа Пх Ыюхупсгаяея Тппргеп ратас!еа аге )гге801аг лп яхе апг) аоте сеПа аге зепх)6че со 1Ье гох)с ейесгх оЕ йь сгапябоп пгега1.
ТппВагеп ь а!хо хгьсер6Ые со охЫа6оп, лчЫсЬ рготогеа 1Ье с$е8гаг)абоп оЕ РЬ)А. Со!6 ь !ехх гохк апг) тоге гпаПеаЫе апс1 сопаег)пепл!у сап Ье зЬарес1 )пго рагбс1еа йаг аге гпоге пплТогт 10 гПатесег. Ночченег, 80)д ЬлпсЬ 1ЭЬ)А 1егь ейк(епг1у апс1 (а гпоге ехрепяче ЕЬап гпп8хгеп. Ах лч)ГЬ гпапу огЬег тейосЬ оГ Сгапх(есбоп, ГЬе Ъеип1с1ебпц аггау оЕ чапаЫех йаг аГГесг 1Ье ейк(епсу оЕ Ыо!Ык ггапаЕоппабоп гес)шгеа йаг ГЬе оргппшп сопс66опх Гог Пепе г)еПчегу Ъе с)есегт)пей егпрлпсаПу лп еасЬ 1аЬогагогу апг( Еог еасЬ сеП луре. Оргпп)хабоп ь Ьехг асЫече6 Ьу арр1у108 а таспх оГ чапаЫех гп йе (п)6а1 хебех оЕ ехрептепь ах дехспЬе6 Ьу 5ап(огг( ег а1.
(1993). Ргот ЕЬеае геял1ь, а гергос)пслЫе гпегЬос( оГ Ью1ьлк сгапа(огта6оп сап Ъе ехгаЫ)хЬес) Еог ехрепгпепга! ршрохея ТЬе 10Полч(08 ргогосо! )х ап ата!Ваги депчес1 )толп НогсЬ ес а!. (1999), 5апЕогг) ес а1. (1993), рпЫкабопх Егопг ГЬе рппс)ра! депе Впп гпапцГасплгег (У5)ЕС ВиПебпа 1688 аллд 2087; Вю-Каг)), апг) а гттеГЬог) солтлг)Ь01ес) Ьу 51ече Рш)сЪешег (()лт)чегх)лу оГ Са!лТогп)а, 5ап Ргапсьсо). МАТЕК!А!.0 ВглЕГег8 алле! ьо!171!оп8 Р1еаае аее АррепсПх 1 Еог сотропепга оЕ а!ос)с хо101юпя ЬоЕЕегя апг) геадеигя 01!01е хЕос)с аоМюпа Ео 1Ье арргорпаЕе сопсепЕга6опя СаС1, (2.5 м) Ейапо! ()ле а ЬелЬ Ьосс1е оЕ аЬво!иге егЬаио! йаг Ьал иог Ьееи арсаева ргечюил1у.
ЕгЬаио! и Ьу8голсорь аид чбгЬ ехроюге со агг ргс)ь ир яиаП аигоииь оЕ лчагег.!и гЬе илегЬог) г)елспЬег) Ъе1олч, ЕЬе ргелеисе оЕ лчасег 1и йе ейаио) ъчалЬег оЕ 8герл 1, 2, аиг) 3 саи лигег(еге чбгЬ ейес6че ЬогиЬаЫгиеиг оГ сеПл аид лысея С!усего! (50,4 т Н О) 5геп1)ае йе ло1и6ои Ьу аигос!ачги8. 5регт)ебпе (О.
7 м) РПяо!че аи арргорпаге аиюиис оЕ лрегшЫше (Егее-Ьале Еопи) ш г)еюиыед Н О аиг) ггегП)те гЬе ао1и6ои Ьу раеаги8 Ь гЬгоиПЬ а 0.22-0ш 61гег. Вгоге гЬе ло1ипои 1и яиаП а1г9иоь аг — 20'С. Ма)се а ЕгелЬ лгос)с ло1и6ои оЕ гЬ)л геа8еис снегу гиоигЬ. Ь)ггс!е!с АснЬ апе! О!фоглглс!еоГ!е!е8 Р!ахт!ЕЕ РА)А )ЧЬеи саггу)и8 оиг а 8еие Пии ехрепигеиг Еог ЕЬе 6ьг г!гие ог 1Е а иелч сеП!ше ог Влюе ь го Ъе ггаия Еесгей оЬсаш аи ехргеь)ои р1аяиЫ еисосПи8 аи арргорпаге шаг)гег Пепе Еог гье 1и ор6ииьи8 деПчегу. Ехашр1ел 1ис!иг)е нес!игл ЕЬаг ехргея В со6 6-8а!асгогЫале, Пгееи Пиогелсеиг ргогеги, аид 8-81исшоиЫале (Еог р)аиь) ог ле!есгаЫе шаг)сего зисЬ ал иеогиусги гельгаисе.
Р!алилнЬ ехргеляи8 а Пепе ог сРЬ)А оЕ Ыгегелг саи Ье олег) айег йе ргосея Ьал Ьееи орг)ш)тес). 1ичел68агогл г)еЬаге лчЬегЬег р!аяиЫ РЬЕАл риг)Егер ои чагюил сЬгогиаго8гарЫс геяил (р1еале лес СЬаргег 1, ргогосо! 9), гчЫсЬ соила)и чагуш8 агиоииь оЕ Проро1улассЬапйе, саи Ье илес) ги ЬюПяк 8еие ПеПчегу.
Аррагеиг1у, ечеи иииог соигапииапои оЕ йе р!алш)8 РЬЕА чигЬ еиг)огохш) Прора)улассЬагЫе гег)осел ЕЬе Ье0иеису оЕ сгаилгес6ои. \Че гЬил гесошшеиг) рип6са6ои оЕ р1аяиЫ Р7САл Ьу СгС1-егЬЫшги ЪгогиЫе сеисг)Еи8аг)ои (СЬаргег 1, ргогосо! 10). Р)яо1че гЬе ршгбед р!аяпЫ РЕЛА 1и Н,О аг а соисегига6ои оЕ 1 0870!. Ргосого! бл Г)АЕА Тгипфегг(оп Ьу В)о1!зскгз 16.39 Ме(1!а СеП сипиге цгочгСИ теебит (готр!есе апк( Еорпопа!! зе!ес(ве) оресса! Ес2псршеп$ Сепе еип А роро!аг шоде! ь Йе Вю166е РСЛВ-1000(Не Рагск!е РеПчегу Вузсеш, зо16 Ьу Вю-рак(, лчЫеЬ (пс!ик(ез а ЬошЬагйпепс еЬашЬег лч)сЬ зерагасе соппеебопз Еок наеишп апк( Ье!шгп 1спез.
А рипср сараЫе о( рипспВ а часишп о( 5 (пеЬез о( шегеигу ь гек)шгек(.!п цепега1, Ьоые чаеишп!шез аге ипзшсаЫе Еог сЬВ саз)г. А ЫВЬ-ргеяиге (2400 — 2600 ря) сап1с о( Ье1пип Паз (>99.999а риге) сЬас и заке1у апеЬоге6 со сЬе ЪепеЬ аг лчаП зЬои16 Ъе соппессес( со йе к(еч)се. Со!г( ог СипВз(еп рагпс!ез (гпссгосагг!его ТЬе Сл(4А со Ье сгапз(еесег( В с(еПчегек( со сеПз оп сипВзсеп ог ВоЫ рагбе1ез сЬас чагу лп гпапсесег !тош 0.6 со 5 ргп. ТЬе орбгпши реПес гпапсесег Еог а В(чеп сеП ог Пяие суре гас Ье к)есегш(пег( егпр(пеа1- 1у ТЬе Ьеак(з аге ригеЬазег( Егогп сопипегеса! юигсез (еВ., Вю-Кал) апл( ВуЬ ап(а) апк1 ргерагек1 Еог Слх)А еоабпВ аз с(езег(Ьек( (п Всер 1. Сепз рарег М!егоуиее СиЬез (7.5 гп0 ()зе ЫВЬ-к(иаПсу писгоЫВе сиЬез.
Воше Ьгапк(з ог ЬасеЬез о( гпкгоблВе сиЬез Ыпг( ехсезяче аплоипь о( йе соПоЫа! рагбе!ез изек( аз агппшпЫоп Еог репе рш ехрепшепи. А(Ы16опа! КеацепЕВ 5сер 8 оЕ Ягз ргосоео! тау гег(и!ге йе геабепсз !(зсег( !п СЬарсег 7 у, Ргосоео! у. СеПВ апд Тсьбпеб Се!!з ог ссззие со Ье сгапМессег( Ак(Ьегепс си!сисек( се!Ь Егогп чапоиз зреелез зЬои!д Ье ЬошЬагк)ек( ас 50 — 80а соп6иепсу. СоПеес р!апс ееПз Вгочлп (п яирепяоп Ьу зсеп1е 61сгабоп опсо ЪсгЬаскпап сао.
1 61сек рарекз (7-егп гпаплесег) ияпВ а ВиеЬпег Еиппе!, апк( р!аее сЬепл оп зсеп1е 61сег рарегз зоаЬе6 лч(сЬ еи!сиге плеепшп о( ЫаЬ озшо!агЬу Ъе(оге ЬопсЬагксплепс (Еок к(есааз, р1еазе зее Вап(огк( ес а!. 1993). РгезЬ(у к((ззесс сЬе кпапипа1сап Пыие, зеебоп ас -400 Рш, апд плапиа(п сЬе з!аез (п еи!сше гпзЬез аз к(езег(Ьек( Ьу МсАПВсег ес а1. (1995). Си1сш е Ьаесепа апс( уеазс со спЫ- со 1асе-1оВаг)сЬш(е ВгочпЬ к(ерепк((пВ оп сЬе крее(ез апг( зсгаш, со1- 1еес Ьу сепсг)блВасюп, гезизрепг( ш а згпаП чо1шпе о( еи1сиге гпексшкп о( ЫВЬ ояпо!апсу, апл( р!асе (1 х 10" со 2 х 10з ееПз) оп а сЬлп 1ауег о( аВаг асор а р(есе о( 61сег рарег лп а Респ' гпзЬ Ье(оге Ье)пВ зЬос. МЕТНО0 1. Ргераге сипазсеп ог ао!д рагпс!ез.
а. )4ге(ВЬ 60 т6 оЕ ио16 ог сипазсеп рагпс1ез 1псо а 1.5-пс1 пиего6лбе сиЬе. Ь. АгЫ 1 гп1 оЕ 70аго ейапо1 со йе рагпе1ез апгlчогсех сЬе сиЬе сопс)пиоиз!у Еог 5 пиписез ас гоогп сепсрегаси.е. 5соге сЬе шЬе оп сЬе ЬепсЬ сор Еок 15 пипшез. с. СоПесс сЬе рагпс!ез Ьу сепспйдапоп ас тахипшп зреес( Еог 5 зесопс(з (п а писгоблбе. д. Сепс!у геспоче йе зирегпасапс. Кезизрепк) йе кпеса1 рагпе!ез 1п 1-т! оЕ зсеп)е Н О апс1 чогсех сЬе зизрепз(оп Еог 1 т(пи(е. 5соге йе сиЪе оп йе ЬепсЬ сор Еог 1 пиписе.
е. СоПесс сЬе теса1 рагск1ез Ъу сепсг(6лаас(оп ас тахгтшп зреес( Еог 5 зесопс(з (п а т(сгоблие. 1640 СЬаргег 16:!пггогЕпс1пц С1оггегЕ Сепел тго Сп!гпгегЕ Матти!лап Се!Ь Е. Кереал гЬе Н,О ъчахЬ !5!ерх гЕ апг! е) йгее тоге липея ц. Кеточе йе аирегпагапг айег йе Еоиг!Ь Н О ъчааЬ. Кехиарепг1 !Ье рагг!с!еа гп 1 т1 оЕ х!еп1е 50огЬ ц1усего1. ТЬе ъчаьЬег! раггк!еа аге аааишег! го Ьаче а сопсепггагюп оЕ 60 шц!ш! апи пъау Ье агогегл аг гоопг гепгрегагше Еог 1 — 2 ъчее!гя 1опцег агогаце сап гели!г ш охЫаиоп оЕ гце гпега! Ъеаг!ь апг1 а глас!1пе ш сгапауесъ!оп е10гсгепсу. 2.
Рог ечегу ях г!15Ьеа оЕ сецх ог 51кех оЕ Пххие Го Ье аЬол, ргераге ап а!нрю! оЕ Р!ъ!А-соа!ег! раг6с!ех ах ЕоПоъчя а. 'ъйи1е сопл!пиона!у чояехлпц 1Ье а!ос!с хо!иг!оп оЕ писгосагпег раг6с!ея геточе а 50- р1 аПс!ио! 1-3 тцЬ АЕгег аП шцгесПеп!а аге асЫед, сопбпие чоглехшц йе !иЬе Еог ап адсП6опа1 3 пипи!ею ! с В чегу ггароггапг йаг гЬе гп!сгоуице гиЪе Ье сопгшиоы!у чопехеи глиг!пц гЫа ргосейлге го епаиге ип1Еогш соаипц оЕ гЬе раг6с1еа ъчлгЬ р!аяпЫ !ЛИА. с. 5!апс! 1Ье !иЬе оп йе ЬепсЬ Еог 1 пипиге го аПоъч йе рагбс1еа го хе!!1е, апг! 1Ьеп соПесс йет Ьу сепгпЕицалюп а! тахпгнпп хреес! Еог 2 хесопгЬ лп а ткгоЕице. 1опцег сепгг!Еидагюп Ппъеа сап санге ацц!огпегаиоп оЕ гЬе шега! раггк!еа, геглис1пц ггапаЕесиоп еуцгс1епсу. д.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
