Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 33
Текст из файла (страница 33)
Кепюче йе аирегпалап! апг! сагеЕицу 1ауег 140 р1 оЕ 70огЬ е!Ьапо1 очес !Ье реПегег1 раггк!ея Кеточе йе 70ого егЬапо1, апг1 агЫ 140 !л1 оЕ 10056 егЬапо!, ацат ъч!!Ьоиг сПа!игЪ- шц !Ье рагбс1ея Кепгоче 1Ье ялрегпасапг апг1 гер1асе ъч!1Ь 50 !л! оЕ елЬапо1. е. КеялхрепгЕ йе раг6с1е реце! Ъу сарршц йе я6е оЕ йе !иЬе, Еоцоъчес1 Ъу цеп!1е чоггехшц Еог 2-3 аесопг!я 3. Р1асе а тасгосагпег лп гЬе теса! ЬоЫег оЕ йе цепс цип аррагагих ияпц гЬе хеабпц Печ«е хиррПег1 Ъу !Ье тапиЕас!игег. ъАгахЬ йе хЬеег !ъч1се ъч!!Ь 6-!л1 а!нрлога оЕ е!Ьапо1.
Вегъчееп ъчааЬея Ыо! !Ье хЬеег г!гу ъчПЬ |епх рарег. 4. ъгоггех гЬе реПе! хат р1е Егогп цгер 2е Еог 1 пипиге. ъйи1е ъ ог!ех!пц, нп!Ьдгаъч 6 р1 оЕ йе ре1- 1еГ х!иггу (-500 !лц оЕрагбс1ех) апгЕ, ах г!шсИу ах рохяЫе, аргеад !Ье ажио! агоипг! йе сепгга! 1 ст оЕ !Ье тасгосагпег. 5. Кереа! $1ерх 3 апс! 4 ип6! !Ье с!еягег! пшпЬег оЕ 1оаг!ег! тасгосагпегх Ьах Ъееп ргерагей АПоъч 1Ье е!Ьапо! ао!и6оп соплаш!пц !Ье Р1ъ1А-соагег! рагбс1еа !о г!гу оп !Ье тасгосагпег. 6. 1оагЕ а тасгосагпег шсо йе цепе цип, апс! Еоцоъч1пц !Ье тапиЕасгигег'х сцгес6опя хЬоог а р1аге оЕ сецх ог !папе х!ке.
7. АЕгег !Ье часишп Ьах ге!игпег! со агтохрЬепс ргеххиге, гегпоче йе ъчоипг!ег! сеПх ог Палое апг! р1асе ш арргорпа!е сиПиге сопсцгюпя Кегпоче !Ье гирлигес! гпасгосагпег апг! гереаг цгерх 6 апг1 7 ипЕП аП р!а!ел аге 5Ьо!. Ь. ТгапхЕег йе а1н!иол ло а 1Ье гиЬе: р! аяпЫ !ЛЕСА (-25 Р Ц1 2.5 м СаС1, 03 м арегпнсцпе ЕгехЬ писго6лце !иЬе, апг! ъчЬл1е чог!ехлпц, агЫ !Ье ЕоПоъч!пц го 2 5 Н! 50 !л! 20 р! Ргососо! ЕЬ Р)с!А Тгассгуесгсоп Ьу Всо!)ссссь 1бА1 8.
1К сЬе оЬ)ес6че )а асаЫе сгапауогшас!оп оТсЬе се1Ь, ргосеед йгесс1у со 5сер 9. Рог сгапяепс ехргеааюп, ехапппе сЬе сеПа 24 — 96 Ьопга айег аЬоо6пц, пяпц опе оу йе ГоПосн)пц аааауя ° 1Та р)аяпЫ РЫА ехргеыпд Е. соВ !3-ца!ассояс1азе счаа оаед, ГоПосч йе асера оис1шес! си СЬарсег 17, Ргососо1 7, со шеаапге епхуше ас6чПу ш сеП !уаасея АПегпа6че!у, саггу опс а Ь)асосЬесп)са! асаш!ид аааау аа ПесаПес1 !и йе асЫПюпа1 ргососо1 ш Ргососо! 1 оусЬ!а сЬарсег.
° 1Г а дгееп Ниогеасепсе ргосе!п ехргеаяоп чессог ччаа очей ехапппе йе се1Ь члсЬ а ппсгоксоре ппдег 450-490-пш сПипппа)юп. ° 1Г а р!аяпЫ РХА ехргекяп5 !)-5!пспгопЫаае счаа паес), аааау )ог !)-51пспгопЫаае ас6ч!Су аа с!егаПе6 ш йе рапе! оп АОР!Т)О)9АЕ РКОТОСОЕ: Н)5ТОСНЕМ)САЕ 5ТА!)9)Ь)С ОГ СЕсс МО)с)ОСАУЕРс5 ОК Т!55С) Е ЕОРс )3-СШСС) КОЬ)!ОА5Е. ° Рог осЬег Пепе ргобпсся апа)ухе сЬе песн!у аупсЬеяхед ргосеш Ьу га6)о)шпшпоаааау, Ъу пппшпоЫопспд, Ьу пппшпоргес!РПа6оп ГоПосч)иа ш чпо шесаЬоПс 1аЬе!шц, ог Ъу аааауа оГ арргорпасе епкушас)с ас6чйсу ш сеП ехсгасса. То гйпппие йсЬ-со-йсЬ чапасюп гп сгапссесс)оп еШс)епсу, сс ь Ьесс со ) с) сгапгресс сенега! дкЬес сн)сЬ еасЬ сопссспсс, (0) ссуряпые сЬе сеПс зиес 24 Ьоасс о1 )псаЬапоп, 10) роо! сЬе сеПА апс) Пч) сер!асе сЬесп оп сенега! йгЬеа 9.
То )ао1асе асаЫе сгапкуессапся Аусег сЬе сеПа Ьаче спспЬасес1 Еог 48-72 Ьопга сп сошр!есе гпейшп, сгапауег сЬе ЪоспЪаЫед се1Ь со ае1ес6че шейшп. ТЬе сопсепсга6оп оу ае!есс)че ацепс ап6 йе си!сиге сопгПгюпа ннП1 нагу с)ерепс!)пц оп йе сеП суре. 16А2 СЬаргег )6: 1пггойистд С1опед Сепег т'го Си)(игед Матта1!ап СеПь !О(ъ)АЕ РКОТОСОЕ: Н15ТОСНЕМ1СА1. 5ТА1)ъ(!(ъ(С ОЕ СЕЕЕ МО)Ъ(ОЕАг'ЕК5 ОК Е РОК 33-СШСЕ) КОЬ)1ОА5Е опЫаае !5 ойеп иаес1 ан а герог(ег депе )п (гапн(ес(ед р1ап( се!Ы Ьесаиае 1Ье епдоеепоиа!ече!5 го1аае аге чесу 1омг. ТЬе епхугпе с1еачеа пъапу 33-д!исигоп)де 1)п)ъадеа их)дь Ь(аЬ е(Г3с)епсу, )пс)ид) а!исигоп)даъен соп)ица1ед еи(Ь ()иогеасеп( апд ЫеаосЬепнса! (а55 (Ьа( аге геад(!у ч)аиа!(аед ъч(дь се1!5 ог )уаа(еа.
ТЬ)5 рго(осо1 ъчаъ ас)ар1ег! Ггопь )ейегноп е1 а1. () 987). ' САЕ)ТЮ)ъ(: Р(сане нее Аррепд(х 12 Гог арргорпа(е Ьапд!)п5 о( гпагег!а!н гпаг(гед ъч4(Ь <! >. Адд!1!Опа! Ма1епаЫ Еогта(деЬуде (0.3% чгЫ <1> Х-СlсА 5О(одоп 3 О тМ ЕВТА (рН 8.0) 100 гпм ьодвгп рЬоьрна(е 0.5 тм росъъх(ипь (епосуапЫе < ! ) 0.1% (чМ Тп1оп Х-1 00 0.5 пъфп( Х-С(сА (5-Ьгогпо-(-сЬ)ого-Заоди)у)мро-5)исигоп(де) 39)мо(че ап арргорпа(е агпоип1 о( Х-С)сА (535гпа) 3п а угнан чо)игпе о( Е)М5О Ье(оге адд)п5 31 1о (Ье Ьи((ег.
А(апп!101 (О. 3 М) Гч!Е5 (30 ГПМ, рН 5.6) )ъ(аН7РО4 (50 тМ) Ме(Ьод ) . Кегпоче(Ье гпесйигп Зп ъчЫсЬ (Ье р)ап( се1Ь ог 1)аеие аге гпа(пидпес1 апд гер(асе ед((Ь )и51 епоиаЬ Х-С)сА 50!иьоп (о сочег (Ье Ь)0!орса! гпа(епа). ъч(Ь хогне р)ап( 1(миех (Ье )п(епн((у о(5-ц)исигоп(даче х(а)п(п5 сап Ье епЬапсед Ьу Г (юп о( (Ье ХС)сА но)иноп, )псиЬа(е 3 Ье несноп )п 08% (Ыч) (оггпа(денудеЛ о гпм МЕ5 50-80 пипи(ен г(пие (Ье яесйоп яечега( Йпех ъм(Ь 50 гпМ НаН РО„апд (Ьеп сочег Ооп. 2. !псиЬа(е 1Ье р)а1еа (ог )2-24 Ьоигь а1 37'С. 5. Ехапнпе ГЬе ЬопъЬагдес3 се! Ы ипдег а 1)ф| гпкгоасоре апд соип( (Ье пипъЬег о( Ь о( се)!5. Се!!5 (Ьа( Ьаче 1а(гоп ир 3Ье 33-д(исигоп)даче ехрге55(оп р)аъгп(д апд аге 5Ьои)д Ье а даг)с Ыие. ТЬе пигпЬег о( Ыие яро(ь рег д(ъЬ сап Ье сонь)дегед (о Ье а( Ьеъг а ъегпк)иа)3(аг(че е с(енсу.
ТЬЬ пигпЬег Ь гпоьг ихеМ (п де(епп)п(п5 (Ье ор()пъипь сопд(3)опь (ог Еепе Ьогп еЬгюЫ по( Ье (аЕеп аъ а г(иап(3(а((че геадои1 о( депе ехргеьяоп. 8 а г)иапг)Ьаг(че гпеаь 'ь пеедед, (Ьеп Х Ь Ьех( (о еааЬ(ЬЬ ап (п М1го Ьюснепнса! аыау ияп5 а яиогевсеп( 8- се(3 (уьа1ез ргерагед (гогп (гапФес(ед се)(х ог (Какие н)(сею Еог а де(а()ед деясг)р((оп о( 1 )еЕегноп ег а(.
(1987). Рго1осо! 7 0МА Тгапйес6оп Выпь Ро! у'огепе вчввАг РОгчслт)0з)5, з)чсгг)0)гзс Рогчвквгзв (1,5-й|шегЬу1-1,5-й|ахаипйесаше)Ьу1епе ро1у- с ) пзе)ЬоЪгогпзйе) (Казча| апй ЫззЫаазча 1984; СЬапеу ег а1. !986) апй ро1у !.-огп!гЬ!пе (Вопс1 апй 'ззго1й 1987; Роп8 ег а!. 1993; 1'аксай апй МсСапсе 1995% Ьаче Ьееп изей |п зЬе ргезепсе ог" РМ5О со гас|1|гаге РЫА ггапзгесг|оп оз се!1з гЬаг аге |пзепз|г|че со ггапзгесгюп Ъу огЬег шезЬойз. згагзагз)ез зйас зпйиепсе |Ье е(гзс!епсу о( )гааз(есг!оп Ьу Ро|уЬгепе аге гйе сопсепггазюпз о! 0М5О апг| ро|усазюп, йзе атоипз о( 0)4А, зйе сегпрегагиге о! зпсиЬайоп чч)зЬ ОМ5О, апй зйе (еп8|Ь о! багие зйе се1Ь аге | |ей |и сопзас| зч!)Ь зйе ро(уса)!оп-0)4А пзийиге (Вопс| апй Ч/о)й 1987; АиЫп ег а|.
1988; )4еай апй МсСапсе ! 1995). Тйе ог!8)па! Ргозосо|, зчЫсй зчаз с|ече1орей ияп8 ей~с)геп епйззуо гзЬгоЫазгз, Ьаг| орйгпа| |ечеЬ о! )гааз(есг!оп ъч|йз 30% 0М5О апй 30 )з8 о( Ро| уЬгепе. Оргзгпа| )гааз(ес6оп |пго озйег сеП 1|пез гег|шгез сИ- (егепз апзоип|з о! ЗЬезе геа8еп| я ° Реппапепз !гааз(ес6оп о( Ьишап ер!йеггпа! |гегайпосугез из|п8 Ро|уЬгепе зчаз (оипй зо Ье орз!гпа) айег а 27% 0М5О з|зос)г ()|ап8 ез а|. 1991). РМ5О йзг орз|та) Ггапз|епз )гааз(есз!оп. ) ° Нипзап |гегайпосу|ез зчеге !гааз(ее)ей ияп8 12 )г8г !оччей Ьу а 4-гп|пизе зйос(г ъч))Ь 25% 0М5О (Неай ТЬе шесЬапьпз Ьу зчЫсЬ РМ5О епЬапсез гЬе ирга)се ог РЫА ь пог (спозчп, Ъиг гпау |пчо1че а согпЪзпагюп ог" регшеаЫ1)газ|оп ог" (Ье сеП пзешЬгапе апй гйе озпюйс зЬос1с.
1п зоше ехрегппепгз из|п8 Ро!уЬгепе (е.8., р!еазе зее 08азча ег а1. 1988), РМ50 Ьаз Ьееп гер1асей Ьу зо1игюпз сопгашш8 5 — 7% ХаС!. РХАгохкйу зз Вепега1!у пог а ргоЫегп зп гЬе ро!уЬгепе шегЬой ог" ггапзгесг|оп. Нозчечег, гЬе 1|пеаг ге1агзопзЬ|р Ьегзчееп РЫА сопсепггагюп апй сгапзгогшаг|оп е(Тзсзепсу Ьгеа(сз йозчп зчЬеп из|п8 чегу Ь)ВЬ сопсепггаг|опз ог' РЫА (Казча| апй ХззЬзгазча 1984). ТЬе шегйос1 оиг!шей Ъе!озч из|п8 Ро!уЬгепе апй РМ50 зчаз айаргей ггош АиЫп ес а1. (!997). ТЬзз ргосейиге зчог)сз ейк|епг1у гог згаЫе ггапзгогшагзоп ог" СЫпезе Ьашзгег очагу апй 1сегайпосуге се11з Ьу р1аяпзй РХА, у!е1й)п8 -!5-го1й пюге ггапзгогшапгз |Ьап са1сшш рЬозрЬасе-РХА соргесзраагюп. Ноччечег, гЬеге |з по й|гТегепсе Ъегччееп зЬе гзчо ше| Ьойз зп гйе еГ6- с|епсу ог'ггапзгогшагюп ог" се1Ь Ьу ЬзВЬ-шо1еси1аг-зче|8Ьг РХА.
16.43 16.44 СЬаРгес 1(с Епггог(ис(пе С!опас( Сгепег тго Си(гигег( Митта(!ап Се((г МАТЕИА15 САс7ТЕОЬС: Р1еаае аее Аррепс(!х 12 Еог арргориасе Ьапг!1!оп оЕ та!ела!и таг!сег1 ъисЬ <1>. ВиЕЕег8 апс! Ьо!иЕ!оп5 Р!еаае аее Аррепг1!х ! Еог сотропепса оЕ аСосЬ ао1пС!опа, Ьи((ега, апг1 геаеепСа. сг11псе а(ос1с ао!п11опа Со ЕЬе арргориа!е сопсеп!гаиопа.
0М5О (30;41 !п аегит-соп(асп!08 теодит <1> Раисе Ьг8Ь-регЕогисаисе 1сдш6 сЬгошасо8гарЬу (НРЬСЬ8гаг(е ог ссяие-си!сиге-8гаг(е ОМПО со а 6иа! соисеисгасюи оЕ 3004 (м!х1 ш сЬе сеП цгоепЬ сиейши соисасп!п8 зегшп ссьс ЬеЕоге иге (и 8сер 3. С!егпаа Па(п (70Уа су(у1 ТЬе Сюпаа аса(и аЬоиЫ Ье ЕгезЫу ргерагегС си РЬоарЬасе-Ьииегед ааПие ог Н О аигС Ес1сегесс сЬгои8Ь СгЬасшап С(о. 1 61сег рарег ЬеЕоге иге. Ме!Ьапо! <1> Ро!уЬгепе (70 гщ/т!1 Осего!че Ро!уЬгепе (АЫисЬ1 ас а сопсепсгасюп о( 10 ш8Ьи1 си Н,О аигс а!ага!ге сЬе сю1шюп Ьу рапи спц Ь сЬгои8Ь а 0.22-рш 6Ьег. 5соге сЬе ео1и6оп аа япаП аПдиоса (0.25-пс11 ас — 20'С ии61 пеебей Осасагг( аПдиоса айег иге. 5ос((ит Ьисугасе (500 тасс (ориопа0 1п а сЬеииса! 6пие Ьоой Ьпи8 аи а!щиос оЕ асосЬ Ьисуис асЫ ао!исюи со а РН о( 7.0 иисЬ 10 п ЫаОН, 5сегП(ге сЬе ао1шюп Ъу раь(и8 Ь сЬгоиРЬ а 0.22-пш 61сег.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
