Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 36
Текст из файла (страница 36)
1998). ЕасЬ со1шип ог сиЬе гп сЬе ЬопеусошЬ сопмзь оЕ а сепсга! соке оЕ Ьуйасей ВЫА гио1еси1ез апй а зиггоипйп8 Ьеха8опа! зЬеП оЕ 1срЫ пгопо1ауегз. Ехрегипепск чйсЬ гпойе1 зуксеспз ки88екс сЬас ЬопеусопсЬ аггап8ешепск оГ сЬгз суре йе1счег В)ъ(А асгоъз 1грЫ Ьл1ауегз псоге еГПсгепс1у сЬап спи161алиеПаг зсгиссигез. !п~огтагг'оп Раве!з !6.51 А Р1есйога оЕ ЫроЕесЕапсь 18 Ача!!аЫе ТЬе ьагпе ргорег6еь оЕ 1грнЬ сЬас Еасййасе сЬе Еоппа6оп оЕ сгапзсес6оп-согпресепс ьсгиссшеь ьчйЬ Р)ь)А а1зо Ьпп8 ипсчапсег) яс1е ейесся СЬгеЕ атоп8 сЬеье аге а 8епегайгед сохгсйу, чгЬ)сЬ )ь гпашЕезсег) Ьу сейь гоипейп8 ир апг) десасЫв8 Егот йе 6)ьЬ.
!п асЫг6оп, !гроЕес6оп гь чи1пегаЫе со шсегсегепсе Ьу Еась апс) Проргосешк ш ьепип апй Ьу сЬаг8ей сопсропепсь оЕ йе ехсгасейи!аг пгаспх кисЬ аз сЬопйо!6п ьи!Еасе Ере18пег апг1 Но1гп 1989). 5уксепса6с гпосйбсасюпь оЕ йе са6ошс апг1 пеигга1 1грнЬ Ьаче Ьееп шаде ш ап ейогс со очегсогпе йеке дгаьчЬас)ск 1е8., р!еаье ьее ВеЬг ес а1. 1989; Ре!8пег ес а1.
1994), геьи16п8 ш а ьчеа! с!с оЕ ейес6че 1гроЕес6оп геа8епск. С)вЕогсипасе1у, сЬезе геа8евыпапу оЕ счЬ)сЬ аге сопипегсгайу ачаг)аЫе, счог)с нвсЬ чагуш8 ейгс!епсгез сч)сЬ гПЕЕегепс суреь оЕ сейь, А!СЬои8Ь Еесч Ьеайсо-Ьеай сотрапьопь ог е)Тгс!епсу аге ачаг1аЫе, сЬе сотрапгеь с1сас псаг1сес сЬезе геа8епсз Еог Про!ее!гоп ргочЫе ыейй Ь)Ыю8гарЫеь апс1 1Ьск оЕ сеП 1шеь сЬас сап Ье ейкгепс1у сгапзЕессес1 кйЬ сЬе Ье1р оЕ сЬегг рагски1аг ргог1ися.
ТЬе сохссйу оЕ йеье согпроипйь чагкь йопс сей!ше со сей 1ше, аз г)оеь гпсег а!са, сЬе ор6гва! гасго оЕ са6ошс Пр)йяР)ч)А апд сЬе аспоипс оЕ са6опгс 1срЫ сЬас сап Ье асЫег) со а 8)чеп пшпЬег оЕ сейь Ее.8., р1еаье ьее Ре18пег еС а1. 1987; Но еС а). 1991; Ропе)ег ег а1, 1991; РагЬоог) ег а1.
1992; Нагпьоп ег а). ! 995). Орс)пс) х1 щ 1.1 роЕе с!)оп 1п айсйсюп со сЬе ргорегбеь ап6 сЬеппса) согпрокг6оп оЕ сЬе сас)оп)с апг1 пеисга! Пр)гСь, кечега! осЬегч а гЬ аЫеь айесс сЬе еЕйс)епсу оЕ ПроЕес6оп, )пс1ий)п8: ° Етйа! г)еиз!гу оЕ г)ге сеП си!гиге. Сей топо1ауегь зйои16 Ье ш гпЫ-1оц РЬаье апд зЬои16 Ъе Ьепчееп 40ь апй 75 сопйиепс. ° Атоииг оу РсчА агЕгсегЕ рег гЕ!зЬ. Реревгйв8 оп йе соосепсгапоп оЕ сЬе ье9иепсеь оЕ спсегея, аз 1гсс1е аь 50 п8 апй аз пшсЬ аь 40 Р8 оЕ РЫА ш)8Ьс Ъе гес)и)гег) со оЬсаш гпахппшп я8па1 Егот а герогсег Пепе.
° МегЕЕит аигЕ зегит изей го Пеона г)ге сейз. ° Т!те оЕ ехрозиге оЕ се!Ь го гйе сайотс !Ер!гЕ-РХА сотр!ех, чгЬ)сЬ чагкь йогп 0.1 со 24 Ьоигь. ° РигйУ оЕ гйе РХА РгеРагайоо. 'МЬегечег РоьЯЫе, сЬе Р)4А ьЬои)6 Ье с))кко!чей ш НгО гасЬег сЬап Ьийегь сопсашгп8 ЕРТА. Р1аяпЫ ргерага6опь ыег1 Еог ПроЕес6оп зЬои16 Ье йее оЕ Ьассепа! Проро1уьассЬапдеь апд ьЬои16 ргеЕегаЫу Ъе рипйег1 Ьу сЬготасо8гарЬу оп авюп ехсЬап8е геяпк ог Ьу СзС! — есЬЫшт ЬгогпЫе ег)шПЬпшп с1епясу сепспуи8а6оп. АП оЕ сЬеье чапаЫеь птьс Ье орйпигег) )п огг)ег со еяаЫЬЬ орсппшп сгапкЕессюп Егег)иепс)еь Еог а саг8ес сей!ше. )6.52 С!шртет !6: Епттот(иппе С!опег( Степея !ото Сийитей Матти!Еап Сейл ТКАМЬЕЕСТ!О)Ч ОЕ МАММАИА(ч) СЕЕМСЯ ЪЧ!ТН САЕСШМ РНО$РНАТЕ-01ЧА СОРКЕС!Р!ТАТЕЙ Р)ь(А сап Ье !истое)осесть !псо плапу (шез оГ си1шгес1 тпапипайап сейя аз а соргеслрйасе лч(сЬ са1ссшп РЛозРЬасе.
Айег епсепп8 сЬе сей Ьу епг)осусояз, ьотпе оГ сЬе сортеслр(сасе езсарез Еготп епс(озотез ог 1узозогпез апс1 епсегз сЬе сусор1аып, Ггогп ьчЬеге лс лз сгапзуеггес( со йе пис!сия Ререпсйп8 оп сЬе сей суре, ир со 5096 оГ а рори1аслоп оГ сейз сЬеп ехргеы сгапз(ее!ел! 8епез лп а сгапяепс Гайюп. Тгапз(остей сей 1лпез сЬас саггу лпсе8гасес) сор(еь оЕ сЬе сгапзЕессег1 РЫА сап аЬо Ье зе!ессед, а1сЬоиПЬ ас а списЬ 1осчег Ггег)иепсу.
Тгапзсоппа6оп гасеь чагу счЫе1у !толп сеП суре со сей суре. 1п сЬе Ьезс сазез, — 1 сей гп 10л реппапепс1у ехргеыез а зе1ессаЫе плат!сег(з) сагпед Ьу сЬе сгапз(ессед Р)4А. Са1сшпл-РЬозрЬасе-гпесйасей Р)ь)А сгапзЕес6оп счаз с(ече! пред Ьу Ргап1с СгаЬагп апс1 А1ех чап Пег ЕЪ ( 1973) аь а тесЬос) со шсгос1исе ас1епочйиь апс1 5Ч40 Р)ь(А |псо ас)Ьегепс си1сшес( сейз. ОгаЬапл апс( чап дег ЕЬ ьчог)сес) оис орсипа1 сопсй6опз Гог йе Гоппа6оп оГ са!сшпс РЬозрЬасе — РЕ4А соргеслрлсасез апс( Еог зиЬзесрлепс ехрозите оГ сейл со сЬе соргеслриасе.
ТЬелг счог)с 1аЫ сЬе Еоислг(асюп Гог сЬе Ь(осЬеплка! сгапзГоппабоп оЕ Вепеслсайу тат)сей споизе сейз Ьу с!опей Р)ь(Аз (Ма(с!апс) апй МсРои8ай 1977; )4т(8)ег ес а!. 1977); Еог сЬе сгапяепс ехргемюп оГ с1опес1 Вепез (п а чапесу оГ лпапппа!лап сейз (е.8., р!еазе зее Соппап !985); апс( Еог сЬе (зо1абоп апс1 Ыепбйсас1оп оЕ сейи1аг опсо8епез, сшпог-зирргезяп8 8епез, апс1 осЬет яп81е-сору тапипайап Пепел (е.8., р!сазе зее )4т(8)ег ес а1.
1978; РегисЬо апс1 )зт(81ег 1981; а!те(пЬег8 1985; Рпепс1 ес а1. 1988Ь Ночтечег, бгаЬагп апс1 чап дег ЕЬ печет ргоГгсес) йпапссайу йопл йеп 6(зсочегу. ТЬас лчая 1ей со ССг(81ег, Ахе1, апг( сЬелг сойеа8иея гчЬо ш !983 чтете аячагг(еЯ а 1исга6че расепс Сот сосгапяЕогпла6оп оГ ип1лп1сег) зе8тепсз оЕ Р(я(А Ъу йе са!сгшп РЬозрЬасе тейос1 (р!еазе зее сЬе ш(оппасюп рапе! оп СОТКА(Ч5ГОКМАТ!ОЫ). РиЫсзйей ргосес(игез Плй(ег счЫе1у ш сЬе гпаппег лп лчЫсЬ са1сшт РЬозрЬасе — Р)4А соргесгриасез аге Еоппес) ргюг со сЛелг агЫПюп со се1ря 5огпе спесЬойз а<(ч(зе а8ашы апусЫп8 Ьис сЬе 8епс1езс а8(сасюп апс( зи85езс, Еог ехатпр1е, сЬас асг ЬиЬЫей Вепс)у (толп ап е1есспс р(рес6п8 с(еч!се зЬои16 Ье шей со ппх йе Р)4А апс! сЬе Ьийегес1 зо!и6оп оГ са1сшлп РЬозрЬасе.
ОсЬег тесЬойз ас)чосасе з1оъч пихлп8 сЬлпп8 асЫ)- 6оп оГ сЬе РГ4А зо!ибоп, Гойолчес( Ьу 8епс!е чогсехш8. СстЬасечег сесЬшсрле )з сЬозеп, сЬе аип зЬои16 Ъе со ачоЫ сгеа6оп оГ соаше ргеслрйасез сЬас аге епг)осусозел( апс1 ргосеыей (пе(йслепс!у Ьу сейл. !п алЫПюп со сЬе зреес( оГ пихш8, йсе Еойосч!пц аге ойег Гассогз йас айесс сЬе ейклепсу оЕ ыапзЕессюп: ° 5!хе апгЕ сопсепттайоп о) г)ле РХА.
ТЬе спс1ияоп оГ ЫВЬ-то)еси!ат-лче(8Ьс Пепот)с РЫА (п йе соргес(рйасе шсгеазез йе ейлслепсу оЕ сгапзЕоппасюп Ьу япай РЫАз (е.8., р1аяпнЬ) (е.8., р!сазе зее С!леп апс( О)сауата 1987). 5ооп айег стапз(ессюп, сЬе япаП Р(4Аз спсе8гасе сп сЬе сагпег РХА, ойеп Еогпип8 ап аггау оЕ Ьеад-со-сас1 сапе(епль. ТЬсь аыеплЫа8е ялЬзес(иепс!у )псейгасез шсо сЬе сЬгопюзопк оГ сЬе сгапз(естес( сеП (РеплсЬо апс( Х(8!ег 1981). ° ЕхасгрН оГ Яе Гтл!Яет аплЕ йе сопсептгайоп оГ та!с!ит апгЕр)гоар(лаге !опя Догйап ес а1.
1996). 5огпе лпчезсл8асотз та)се ир зечега1 ЬассЬез оГ НЕРЕ5-Ьи((егес( за1лпе очег сЬе РН гап8е 6.90-7.15 апс) сезс еасЬ ЬассЬ Гог сЬе с) пай!у о! сЬе са!столп РЬозрЬасе — Р)ь(А ргеарлсасеь апд Еог сЬе еЕйслепсу оЕ сгапзЕогпла6оп. ° Г(яе оЕГас!!!гагата. 1псгеазез лп йе еГГгс(епсу оЕ сгапяепс ехргеьяоп апд сгапзЕоппасюп сап Ье асЫечес) Ьу ехрояп8 сейз со 81усего( (Раг1сег апс) 5сагП 1979), сЫогос)и(пе (ЬлсЬтап апг! Майпшъоп 1983), сопипегссайу ачаг1аЫе "сгапьЕес6оп плахипйегь" (е.8., р!саяе зее ХЬасс8 апс( Ка!и 1996), ог сегсалп шЫЬссогз оЕ сузсете ргосеазез (Соопгос1 ес а1. ! 997). !п Пепега1, сЬезе а8епсз аге сохк со сейл, апс( сЬегг ейесы оп члаЬПиу апс! сгапз1ес6оп ейлслепс1у чату Еготп опе суре оЕ сей со апосЬег. Рог ехаплр1е, сЫогос)ише, ап агпше йас ргечепсз асЫ1йсасюп оГ епс)озогпея апг) 1узозолпез апй (пЫЬ!сь 1узоьопла1 ргосеазе сасЬерып В (%)Ьо апд Роо!е 1974), (тргочез йе сгапзЕес6оп еуйс(епсу оЕ зопле сурез оЕ сеПз апй г(есгеазез сЬе ейкгепсу оЕ осЬегз (СЬап8 1994).
ТЬе орсипа1 6спе, 1еп8й, апс) (псепысу оГ сгеасплепс лч!сЬ Еасл!йасогз тиас сЬетеГоге Ье с)есегт(пей елпрлпсайу сот еасЬ сеП !ше. ТЬе (ече! оЕ сгапяепс ехргеылоп В Песегтшед сЬлейу Ъу сЬе гпсепясу оЕ стапзспр6оп Еголп сЬе ргопюсег апй (ы аззос!асей сй-ас6п8 сопсго1 е1еплепся !п зрес(йс саьез, и гпау Ье роза(Ые со шсгеазе сЬе !ече) оГ ехргеыюп Ьу ехрояп8 сЬе сгапзуессей сейл со Ьоппопез, Ьеачу теса1з, от ойег зиЬзсапсез сЬас ас6часе йе арргорпасе сейи!аг сгапзспр6оп Еассотя 1п айг(16оп, ехргезяоп оЕ Пепел саят)ей оп р)аыпЫз сЬас сопсаш сЬе 5'лт40 епЬапсег сап Ье епЬапсес( Ьу сгеас)п8 сгапзГессес( япиап апс( Ьигпасс сейл сч(сЬ зос(нип Ьисугасе (Согплап ес а1. 1983а,Ь). Тгапз(ес6оп )с(сз, лчЫсЬ (тес)иепс(у шс!иде йезе апд ойег плотййсасюпз со йе ог(8(па! ргососо1, аге ачайаЫе Егогп а пшпЬег оЕ согпратез (р1еаье ьее ТаЫе 16-2).
!п~огтапоп Рапе!в 16.53 РЫА стаяв(естес! ав а са!с(шп рЬоврЬасе соргес!рВасе ог вч(сЬ РЕАЕ-т(ехсгап ав а Еасдпасот (в пшсасес1 ас а ЫдЬ Егецпепсу (-19о рег депе) ш аП тапппаПап сеПв ехапппед (Са1ов ес а1. 1983; ЕеЫсовчв)с( ес а!. 1984). ТЫв еЕЕесс св сопуспес( со йе сгапв(ессес( вес(папств апд с!оев пос аЕЕесс сЬе сЬготоюгпа! Р)в)А оЕ йе Ьовс сеП (Каехат(пе ес а1. 1983). ТЬе пппа6опв, чтЫсЬ аге ргес(от(пап!!у Ьаве юЪвс(сцсюпв апс( с!е!ебопв, арреаг со осспг вЬогс!у айет сЬе сгапвресбпд РС4А атттчев ш сЬе ппс!епв (ЕеЫсотчв)с( ес а1. 1984). Новчечег, гер1касюп оЕ сЬе шсотспд РсвСА !в пос песеяагу.
Весаые а!тоя аП оЕ сЬе Ьаве впЬвбсшюпв оссш ас ОЬС Ьаве ра(гв, (с веетв 16ке1у йас йе пса)ог ргеспцсасюпа! ечепя аге Ьус(го!уев о( йе юдаг Ьаве 81усову1 Ьопс1 оЕ деохудпассояпе геядпев апс( с!еатпша6оп оЕ сусояпе гев!с(пев, Вос!с оЕ сЬеве геас6опв осспг геасду ас асад рН апт( тчоп16 са)се р!асе ав сЬе тсопппд РС4А раяев сЬгопдЬ епс(овотев, вчЬкЬ спашсаш а рН оЕ -5 (с(е Рпче ес а1. 1974). (апеаг РИА (в еврее(аду ргопе со с(е1е6опв (Катхаопе ес а1. 1983; М(Пег ес а1.
1984) ргеюгпаЫу Ьесапве п вегчев ав ап апгасссче юЬвсгасе Еог ехоппс1еавев. А1сЬопдЬ сЬеве пшсасюп гасев аге ехсгаогсПпап1у ЫдЬ, йеу Ьаче 1Ьс!е ге1ечапсе со сгапяепс ехргеыюп оЕ сгапвЕессес( депев пп1ея сЬе депе оЕ шсегевс !в 1агде ап6)ог Ьав а чету ЬсдЬ сопсепс оЕ СяС. Мовс оЕ сЬе вчог(с оп пшса6оп гасев чтав сагпес! опс вч(сЬ !асЕ, вчЫсЬ (в епсо6ес( Ьу а 750-Ьр ведтепс оЕ Р)в(А. А депе сЬас (в 10 !сЬ (п 1епдсЬ ппдЬс йегеЕоге Ье ехрессет( со вцЕЕег а пшса6оп гасе оЕ 12ая ог тоге Перептдпд оп (ь сопсепс оЕ ОяС. СНБО!сОхЕШМЕ О!РНОБРНАТЕ СЫогоошпе (ЕЖ = 519.5), ап апппе сЬас ргечепя ас!г66сасюп оЕ епс(овотев апс1 1увоютев апс! спЫЬЬв !увовогпа! ргосеам сасЬеряп В (ЪЧ(Ьо апс( роо1е 1974), (псгеавев сЬе еЕ6с(епсу оЕ сгапв(ес6оп оЕ вогпе сурев оЕ сеПв апс! десгеавев сЬе еЕ6с(епсу оЕ осЬегв (СЬапд 1994).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
