Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 34
Текст из файла (страница 34)
йоге йе 61сгасе ш 1-ш! аПдиоса ас — 20'С. Мис!е!с АснЬ апе! О!коппс!ео$!с!е6 (7Ь(А со Ье !гала(оггпег7, е.8., р!аат(с( ВЬ7А (7 Ссд(сс!1 и Н,О Ме(1!а Мспстит есьепба! тесиит (МЕМри (солса!п(п8 707 Ее(а! са!Еаегит, аегит-(гее, апс( !ориопа!! зе!есгие аеепса1 прес!а! Ес!и!рп7епЕ Тиьие сиаиге с(!зЬеа (90-псп71 ТЬь ргососо( Ь г(еы8иес( Еог сеаа 8гоъчи си 90-пип си1сше йаЬея 11 ши1ссггеП р!асея Паз1ся ог йаЬеа о( а 61((егеис йашесег аге шей аса1е сЬе сеП Пеиясу аиг( геа8еис хо!шиеа ассогйи81у.
Р1есье сее ТаЫе 16-3. А(М!Е!опа! КеаеепЬ 5(ер 6 о! (Ь!а ргососо! тау гег(и(ге еае геадепса !(асег( гп СЬарсег 77, Ргогосо! у, ог т сЬе аг(с(!с!опа! ргогосо1 т Ргососо! 7. Се!!6 апс! Т!66ие6 ЕхропепиаНу дгоивпд сииигег о( таттаlсап седа МЕТНО0 1. Нагуеп ехропепиа!1у Пгосу(08 се1!а (е.8., СНО се!1а) Ьу сгура101аас1оп, апг( гер1асе сЬет ас а с1епясу оЕ 5 х 10~ сеПа рег 90-ппп Нсьпе сп1спге йаЬ 1п 10 гп1 о(МЕМ-а сопса1п(п8 1098 Ееса1 са! Е аегппи!пспЪасе йе сп!спгеа Еог 18-20 Ьопга ас 37'С сп а Ьпгп(ййес1 1пспЬасог 1п ап а(тоарЬеге оЕ 5-7о'о СО . Рготосо( 7т РИА Тгалгуесттои ~Лти8 Ро!уЬгепе 16.45 2. Кер1асе сЬе псейшп нччй 3 ш1 оЕ нчаппет1 (37'С! гпейшп сопсашш8 аегшп, РХА (5 п8 Со 40 р8; по сагпег Р!н(АЬ апт1 30 Ст8 оЕ Ро1уЬгепе.
Мтх йе РС4А нч!1Ь йе шейшп ЬеЕоге адд!и8 йе 10 ш8(т! Ро!уЪгепе. Кесигп йе сеИа со сЬе шсиЬасог Еог 6-16 Ьоша. Оепс1у гос1т йе д!аЬех ечегу 90 пиписеа дипп8 сЬе еаг!у аса8ех оЕ сЬ!а тпсиЪасюи со епаиге ечеи ехротшге оЕ сЬе сеИх со йе Р!н(А-Ро1уЬгепе пихсше. 3. Кегпоче йе тпейшп сопСа!п!п8 СЬе Р!х(А апд Ро!уЬгепе Ъу аар!гадоп, АтЫ 5 ш1 оЕ 309а РМ5О ш аегшп-сои!а!и!п8 шейшп. Оеис1у яччг! сЬе РМ5О шейшп агоипд сЬе д!9Ь со епаиге ечеп ехроаиге оЕ йе сеИа со йе ю!чепс апд р!асс сЬе йаЬеа ш сЬе шсиЬасог. 4. Айег 4 штпитеа оЕ !псиЪаСюп, гетпоче йе дтаЬеа Егош СЬе (псиЪаСог апд ипшейате!у аартч гасе сЬе РМ50 ао1идоп.
ЧтааЬ сЬе сеИа опсе ог снч!се тчссЬ тчаппед (37'С! аегиш-Егее тпейши, апт1 атЫ 10 ш! оЕ соптр!есе тпейшп сои!а!и!пц 109а Ееса1 са1Е хегшп. 1Е а юйшп Ъисугасе Ъооас га со Ъе тпс!идед, сЬеп ргосеед со 5сер 5. !Е пос, шсиЪасе йе си!сигея Еог 48 Ьоига ас 37'С 1и а Ьипий6ед 1псиЪасог нчтй ап аспюарЬеге оЕ 5 — 79~а СО,. ТЬеп ргосеед йгесс!у со еИЬег 5сер 6 (со аааау Еог сгапяеис ехргеаа!оп) ог 5сер 7 (со еасаЫ!аЬ асаЫе сгапа- ЕогшапсаЬ сеПа тгеатетт ю!тЬ 0М50 аге ргоае то ттетаеЬ Егапг тЬе йаЬ рог тЬЬ нее*оп, тЬе нчысип8 атерг то гегпоче тЬе ао!чепс-соптати!п8 шейши апд сЬе аттд!1!опт о( ПеаЬ тпейши аЬои18 Ъе депе аа Пепт!у аа роаяЫе, е.8., Ьу а1оъч1у ртресдп8 сЬе итейшп а8атпат сЬе агде о( йе йаЬ тч!тЬ еасЬ сЬап8е, 5. (Ордопа!1 То ЕасИИасе сЬе сгапаЕесс!оп оЕ сеИа сгеасет1 нч!1Ь РМ5О апд Ро1уЬгепе: а.
АтЫ 500 шМ юйшп Ьисугасе йгесс!у со сЬе ПготчсЬ тпейшп со а 6па1 сопсепсгадоп оЕ 2.5 — 10 шМ. ТЬе ехаст сопсепсгасюп о( аойшп Ьшугасе аттдед дерепда оп йе сеП суре апд пшя Ье Йетегшшетт ешртггсаПу. Ь. ЕпсиЪасе сЬе се!Ь Еог 20 — 24 Ьоигх ас 37'С 1и а Ьииийбет! тпсиЪасог нч(сЬ ап асшоьрЬеге оЕ 5-79а СО,.
с. Кепюче йе тейшп сои!а!итп8 юйшп Ьисугасе, атн1 гер1асе и тчтсЬ Ъшугасе-Егее шейшп сиота!иш8 1096 Ее!а! Ьотдпе аегшп. Кетттгп СЬе сеИа Со СЬе тпсиЬаСог. 5ойшп Ьшугате иеатгпеит оЕ 0М50-регшеаЪП!хед сеПа сап епЬапсе сЬе тгапяепс (Ьш пос реппапепс1 ехргеяюп Поги сегсатп гесогиЬтпапс р!аагинЬ (АиЬтп ес а1. 19971, еьрестаПу йоте сапутл8 йе 5Ч40 еаг1у ргоптотег!елЬаисег, ш япиап апд Ьишап сеПа (0оппап ет а!.
1953ау 6. 1Е йе оЬ1есбче !а атаЫе СгапаЕоппадоп оЕ йе сеИя ргосеед йгесС!у Со 5сер 7. Рог Сгапяепт ехргеаяоп, ехаиипе йе сеИа 1-2 дауа айег стапаЕесдоп ияп8 опе оЕ йе ЕоИончтп8 ахаауя ° 1Е а р1аяпЫ Рсн(А ехргеаа!п8 Е. со6 !3-Па1ассоядаае ччаа иаед, ЕоИочч сЬе асера оис1шед ш СЬарсег 17, Ргососо1 7, со шеааиге епкуше асдтдсу ш сеИ 1увасея А1сегпа6че1у, саггу оис а Ь!асосЬеписа1 аса!и!п8 ахаау аа десат1ед тп сЬе адйдопа! ргососо1 !и Ргососо! 1. ° 1Е а 8гееп Ииогеасепсе ргосеш ехргеяюп чессог ъчаа иаед, ехапипе сЬе се1Ь нчссЬ а ш!сгоасоре шн1ег 450-490-пгп 61шшпадои. ° Рог ойег Пепе ргодисся аиа1ухе сЬе пеш!у аупсЬеыкед ргосетп Ъу гад!оппшипоаааау, Ьу !шшипоЫосс!и8, Ьу иппшпоргестрИасюп ЕоИонч!п8 ш чтчо шесаЬоИс 1аЬеИп8, ог Ьу аааауа оЕ епкутпадс асс!чтсу 1и сеИ ехсгасся То гптпипие йаЬ-со-г(ЬЬ наиадоп тп !гана(ессюп е(Птс(епсу, Ь Ь Ьея со (т1 сгапасесс аечега! йаЬеа тч!тЬ еасЬ сопасгист, 0 И сгура! шхе йе сеПа а Пег 24 Ьоита о( шсиЬасюп, С П!1 роо! йе сеПа, аптт (и 1 гер! ате тЬеш оп аечега1 йаЬеа.
Еп~окгпак(оп РапеЬ лб.47 СОТ|4АХБГОКМАТ!ОВ) Апа!уяз оЕ Евпс6оп апд ехргеьюп оГ |гааз(еске6 депез шау гес)шге йе з|аЫе ш|едга6оп оГ йе |гапзЕескеб Р)4А ш|о Йе Ьоз| сЬгоп|озоп|е. АЕ|ег еп|епвд йе сеП, зов|с оГ |Ье |гапз(есле|1 пис!ек асЫ ыгапзГеггеб Ггош |Ье су|ор1азш |о |Ье пис!епя РерепгПпд оп йе сеП суре, ир |о 80чб оГ а рори1а6оп оЕ сеПз |ч|П йеп ехргеы |Ье сгапз(еске6 депе |п а |капяеп| Еа|Ьюп.
А| зоше ро(п| чбй|п |Ье Пгз| Ге|к Ьопгз айег |капзЕесбоп, йе шсопипд Р)4А ипдегдоез а зепез оЕ попЬо|по1одо|ь !пкекшо1еси1аг гесошЬшаиоп ап6 1|да6оп ечепыо Еогп| а 1агде сопса|еп|епс алгос|иге |Ьас ечеп|паду пиедга|ез |иго |Ье сеПв1аг сЬго|иозоию, ЕасЬ сгапз(окше6 сеП пзиаду соила|из оп1у опе оГ йезе рас)садех, |чЬгсЬ сап ехсеег) 2 МЬ (и яке (РегисЬо е| а1. 1980). 5|аЫе сеП 1шез сап |Ьеп Ье )зо1аке6 |Па| саггу !пгедгаке6 сорьз оГ |Ье |гааз(ескед РЫА. Тгапз(о|шаг!оп га|ез чагу |чЫе1у Екош сеП суре |о сеП суре. !п йе Ьез| сазез, -! сеП |п 10| |п йе ок!8(па) !гааз(еске6 рори1а6оп з|аЫу ехргеяез а депе(з) сагбе6 Ьу йе |гапзГес|е|1 Р)4А. Весаизе |Ье ирка!се, |п|едга|юп, ап6 ехргезяоп оГ РЪ)А аге ке!а6че!у гаке ечеп|з, яаЫе !гааз(о|шапка аге илиаду (зо!акег) Ьу зе1ес|юп оЕ седа йа| Ьаче асг)п(гес1 а пе|ч рЬепосуре.
Тур!саду, й|з рЬепо|уре ь соп(егге6 Ьу йе ргезепсе !и |Ье |гапзЕес6оп иих|иге о(а деве епсосПпд ап6Ью6с гез(зкапсе. Седа |гапзГокшеб Еог а деве6с шаг)сег ргезеп| оп опе р|есе оГ РЕ(А Егег)пепл!у ехргезз апо|Ьег депебс гиагдег |Ьа| |чаз ок(д(паду сагпе|1 оп а зерага|с РЕ(А п|о1есп!е. ТЬеге(оге, седа |Ьа| з|аЫу ехргея зе!ессаЫе (е.д., апПЬю6с-геяз|ап|) п|аг1|егз аге а1зо 1Еде1у |о Ьаче !псогрогакед о|Ьег РЫА зег)пепсез ргезеп| ашопд йе сагпег Р)4А.
ТЫ| рЬепоп|епоп, |и |чЫсЬ рЬуясаПу впПп1|е|1 депе|' аге аыегпЫе|1 ш|о а зшд1е шледгасес) аггау ап6 ехргеье6 |п йе хаше !гааз(окше6 сеП, |з )|полки аз со!гааз(окшак!оп. ТЬе Пгз| депе |о Ье изе6 ехге вяче)у Еог зе!ес6оп ш п|апииа1 кап седа ччаз а ч)ка! (Ье грез яшр1ех) депе епсосПпд йуш|гдпе Ыпазе (ТК; Х!81ег е| а!.
1977). А1|ЬоидЬ |папу гпапипаПап сеП Пиеа ехргея йуш|- сПпе !Пиале, зечега1 ТК Пиеа ччеге сгеаке6 Ьу зе!ес6оп Еог дко|чй |и |Ье ргезепсе оЕ 5-Ькоп|обеохуипсПпе (Вгб()). )||Ьеп сглаз(ессе6 ап6 з|аЫу (п|едга|е|1 |иго йе Ьоз| депо|ие оЕ сеП!шез 1асЫпд |Ьуписдпе Ыпазе, йе Ыга1 депе соп(егз йе ТК~ рЬепо|уре, |ЬегеЬу адо|ч|пд дго|чй |и |Ье ргезепсе оГ аиипор|епп (Гог а 6!зспзяоп оЕ йе Ьаяз Гог зе1ес6оп, р!еазе зее йе !в(окша6оп раис) оп 5ЕГЕСТ1||Е АСЕЪ)Т5 ЕОК 5ТАВ$Е ТКА)з)5ГОКМАТ1ОЪ)). ТЬегеаукег, |Ыз акга|еду |чаз взе6 |о )пкгобисе Гоге!дп Р)чА |п п|аиипаПап седа Ьу со|гапзГес6оп |чп|Ь а р1аяпЫ епсосПпд йе к)г депе (рекисЬо е| а!. 1980; КоЬкпз е| а1. 1981).
ТЬе 610|си1- 6ез ог абс66опа1 еЕЕогкз |пчо1че|1 |п сгеа6пд к)с и|агап|а ргошокед йе зеагсЬ Гог о|Ьег зе!ес6оп зсЬеп|ез. ТЬегеЕоге, о|Ьег розяЬ~1|6ез Еог зе1ес6оп ш со!гааз(окша6оп яи|Пез |чего ехр1оге|1, 1еасдпд |о йе |)ече1- ори|еп| оЕ чес|огз йа| ехргеы Ьас|епа1 рго|е|пз |чЫсЬ сопЕег акад гез!агапке |п гпап|гпаПап сеП Пиеа. ТЬезе зе1есгаЫе |паг1|егз шс!п|)е, Еог ехап|р1е, апипод1усоя|1е рЬозрЬо|гапзГегазе (геяз|апсе |о С418 ог пеогиус|п), Ьудгогиус|п-В рЬозрЬо|гапзЕег|ье (геяз|апсе со Ьудгогпус(п-В), хапгЬ)пе-диапше рЬозрЬобЬозу!|гапз(егазе (геыз|апсе |о гпусорЬепо!к асЫ ап|1 апнпор|епп), ап|1 ригогпусш-)л(-асесу! сгапз(егазе (геяз|апсе |о рпгогпус)п). АП Ьаче Ьееп взад чб|Ь сопя|(егаЫе зпссея |о ез|аЫьЬ з|аЫу сгапз(о|шее) Ввез оЕ шапнпаПап седа.
1п адс66оп |о рго| Ппд а шеапз |о |п|госЪлсе еходепо|ь депез |иго гиагп|паПап седа |п а з|аЫе гиаппег, П |з ойеп деягаЫе |о (псгеазе йе з|ппдепсу оЕ |Ье зе!ес6че сопгП|юпз |и огбег |о оЬ|а|п ЫВЬег 1ече1з оГ ехргеяюп оГ йе сгапз(еске6 депез. ТЬь епЬапсегпеп| ш ехргезяоп сап Ье асЬ!ечед аз а гезп1| оЕ |псгеазе |п сору вшпЪег, ог соашр1|дса6оп, о( |Ье |агде| деве ап|1 йе депе соп(егппд |Ье геяяапсе. А |агде| депе |Ьас Ьаз Ьееп со|гапзЕес|е|1 |чПЬ (авс) Ьесогпе шседка|е|1 пеаг) а раг6си!аг шак)лег депе |з Ь(дЫу П)ке!у |о пп|)екдо агпрППсабоп чбй |Ье |иа|1|ег ив|(ек зе!ес6оп. ТЬиз, |Ье ашрППса6оп оЕ йе 6(Ьубго(о1а|е гес)показе (г()|Гг) депе гехи!6пд Гкош ехрозше со шсгеаяпд 1ече1з оГ гпе|Ьо|геха|е Ьаз Ьееп |ье6 зпссеярвду |о очегехргея со!гааз(есгед Гоге(дп депе| (5сЬ!ш)се 1984).
5(пп!аг1у, |Ье депе епсойпд абепояпе деапипазе (АРА) сап Ье агпрППе6 |ЬгопдЬ йе зкергч)зе |псгеазе |п сопсеп|га6опз оГ 2с-ПеохусоЕопиус|п (6Ср; Каи(киап е| а1. 1986) (Еог Гиг|Ьег 6есадз оп депе агпрППса6оп, р!еазе зее 5|аг)с ап|1 ЖаИ 1984). Рог Гиг|Ьег |)е|а|1з оп йе Ьаяз Еог зе!ес6оп аз |чеП аз зе)есбче сопсП6опз ге|!юге|1 Еог |Ьезе зуз|еиь, р1еазе зее йе !п(окша6оп рапе1 оп 5ЕЕЕСТ!ЧЕ АСЕ)з)Т5 ЕОК 5ТАВГЕ ТКА(х5ЕОКМАТ1О)ч.
16.48 СЬарсег 16:!иггог(ис!иц С!оией Сеиез тсо СиПигей Матта!)аи Се!Ь ВЕЕЕСТ!сгЕ АСЕ!Е!ТБ РОК ВТАВЕЕ ТКАЬ!БГОКМАТ!ОЬ! Реязсапсе со ап6Ьгобсз Ьаз ргочеп со Ье ейес6че сп зе1есбп8 сосгапзгоггпапсз апс), ш зоспе сазез, аз а с(п'- чег (ог депе агпр!сПсасюп. Апс1портег!и С418 ° Майе ог асйои. ТЫз апипо8)усояйе ап6Ью6с, япи!аг )п ягиссше со пеогпусш, Вепсагпусш, апй 1сапагпусш, гз сЬе пюзс сопииоп!у ыес1 зе1ес6че а8епс ш реппапепс сгапзгессюп ехрепгпепсз. С418 апг1 ссз гмабчез Ыос1с ргосегп зупсЬеяз йгоиВЬ !псеггегепсе чйй пЬозопса1 Гипссюпз.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
