Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 29
Текст из файла (страница 29)
1п адс66оп го Па иле аь а ргипагу ацепг Еог ггапаЕесг!оп, 1)ЕАВ-г)ехсгап сап а)ао Ье паем аа ап ас))инапг го епЬапсе йе ейк)епсу оЕ е)есггорогаг!оп. АПЬоицЬ гЬе еЕЕесга арреаг го чагу Егот опе сеП 1лпе го апо)Ьег, )Ье сотЬ)пагюп оЕ е)есггорогагюп апс1 РЕАЕ-Пехггап !п лоте саьеа сап ппргоче йе еЕПслепсу оЕ ггапьЕес6оп Ьу а Еасгог оЕ 10 — 100 (Саия апс1 1.елЬег 1992). РЫА ггапьЕесгес) !пго сеца Ъу йе РВАЕ-с)ехггап те)Ьог) )а ргопе го тига)!оп.
ТЬь ь раггки1аг1у сгие оЕ лег)иепсеа с)опт !п чесгога !Ьаг сап гер1каге лп ггапаЕесгег) тапппа1гап сецк Рог ехатр1е, лчЬеп )Ье Е. соП !ас! депе, с1опес1 !п а р)аяпЫ сопла!тпц ап 5'л'40 ог!д!и оЕ гер1кагюп, качая !пггог)исег) !псо СО5-7 сеПя ацолчед го гер1каге )ог аечега) цепегагюпя апг) йеп гегигпес) со Е. со)), тига))опа оссш ге6 аг а Егег)иепсу о! опе го аечега) регсепг 1Са!оь ег а1. 1983). 5)ипп!пд 1п )Ьелг чапе)у, ппааг!опа !пг)исес) Йиппц гер1ка6оп ш гпапипацап сецк !пс1ис1е с1е1егюпя гпаегбопя ап6 Ъаае ялЪа6)ибопа !лхаггагрле ег а1.
1983; ).еЫсолчь)с! ес а1. 1984; АаЬтап апс) РачЫгюп 1985). ТЬеае тига)!опа аге )ЬоидЬ) со абае аа а сопящее)иепсе оЕ с)атаде саиаес) Ьу йе асгюп оЕ л)ецгас)арче епхутеа апг)!олч рН ш йе )уаоаотеь апс) а!ао регЬара Ьу йе !ас)с оЕ а согпр!есе сЬгота6п ягисгиге айег )Ье ггапаЕесг!пд РИА епсега йе пис)еиа !Млцег ег а!. ) 984; Пеечеь ег а1. 1985). Ршгоса/ 4: Тгапл/ее/лап Мед/агед Ьу ОЕАЕ-Рех/галл Нцй-ефг/епгу Мегйад /6.29 Неге, чче деаспЬе глчо чапабопа оп ГЬе с!аба(са! РЕАЕ-дех(гап ггапаГесг)оп ргоседиге.
ТЬе Влгхг (шалп рголосо1) шчо1нех а Ъпе/ ехроаиге оГ се|Ь Го а Ь|ПЬ сопсепгга6оп о/ РЕАЕ-дехггап апд у)е1да ЫПЬег (гала/есбоп Ггел)иепс)еа Ьи( Ыечалед се!101аг гохк|!у. ТЬе хесопд (р1еаае нее (Ье рапе1 оп АЕТЕКЬ(АТ!чЕ РКОТОСОЫ ТКАЫВЕЕСТ1ОЙ МЕ01АТЕ0 ВУ 0ЕАЕ-0ЕХТКА(ч: 38(СКЕА5Е0 СЕ! Е л/!АВ!Е!Ту ас ГЬе епд оГ(Ь|х ргогосо1) шно1чеа а 1опПег ехробиге о/се!!а !о а !олчег сопсеплга6оп оГ ОЕАЕ-г|ехггап, ччЫсЬ ргодисеа 1олчег !галла/есболл Ггег)иепс)еа Ъиг )псгеааед се!1 аигчп а1. | ТКАЫ5ЕЕСТ!ОЫ ОЕ СО5 СЕЕЕ5 Г ТЬе ОЕАЕ-дехиап ргоседиге ыпох( ойеп ихед со сгапх/есг а(гп!ап СО5 сеПК ТЬеае се|К лчеге дече(оред Ьу ! О(иггпап 0 981) апд ехргехх йе 5н40 (агПе Т апйфеп (р1еахе нее йе |п/оппабоп ране| оп СО5 СЕ| 85 |п СЬар(ег 11).
(лиодисбоп о/ йе 5ч40 оп8)п о/ герПса!юп, Гур(саПу Ьу ихе о/ йе 5)/40 еаг|у геП(оп ргопюгегепйапеег/ог(П!и (о ехргеах !Ье целе ог сОЬ/А оГ )п!егеа(, гейл(га !и !Ье алзрбйсабоп о/ (Ье опП(п-гоп(а(п)пц р!ахт(д (о негу ЫПЬ сору пиплЬег (Ойлпап 198! ). ТЬ~х атрППсайоп |п !шп ргодисеь а Ь|ПЫече| о/ехргея ь(оп о/ !Ье папа/ес(ед с034А ог Пепе, Ьи! хенеге1у аггеххех апд ечеп(иайу Ы|Ы сеПх !Ьа( !а|ге ир йе р|аяпЫ. СО5 сеПа аге йих игиаПу ихед ах (гапяепг (гапдес|юп Ьох!х апд апа(ухед 48-72 Ьоигь роайгапдес!юп, Т1ле ебчк|епсу о/ ОЕАЕ-дехггагнпед)а(ед (гала/есг)оп о/ СО5 сеПа 'ь челу Ь~ПЬ, ойеп арргоасЫп8 50",4 о/йе се|К оп а гПей Рог ГЬЬ геаеап, СО5 се|6 аге Пег!иепду ихед 1п ехргехх)оп с(оп)пц (р3еаае аее СЬар(ег Л л, Ргогосо( 2). ТЬе ЫПЬ ейс|елсу о/ ггалдесбоп аЬо аПоъчх пняй(р(е р(ахшкЬ со Ье (псгодисед ягпи|лапеоиа|у |п(о йе ее||я Рог ехаплр|е, епдге |п!еппелйагу пле!аЬо|ьгп райччаух сап Ье гесопхП!и(ед |п СО5 се|К ~ Ьу (и!гадис(п8 ехргехяоп р|аяпкЬ епсод(п8 |пгйнЫиа| епгутех |п (Ье ра(Ьшау ИлЬег ег а(.
1988). МАТЕК!АсБ ВоГГег5 ап(! Б01063оп5 Р1еаае нее Аррепйх 1 Гог согпропеп19 о/ 91ос/г ао|и6опа, Ьи//ега, апд геадеп(а. ОПи!е х!ос)л ао1и!/опа !о (Ье арргоргла(е сопсепГгапопя СЫогог/и/пе длрйохрйаге Г/00 тх/) О/ъхо!че б0 ш8 оГ еЫого9шпе д(РЬолрйале (п | ш1 о/ деюпиед йхдйед Н,О. 5|ео1/ае /Ье го|идол Ьу раха!п8 и /ЬгоиПЬ а 0.22-)лш 61/ег.
5|оге йе 61|гаге лп ГоП-лчгарред гиЬех аг — 20'С. Р1еаае нее йе ш/огпладол рапе! ол СНЕОКОО() ГЬ/Е О!5РНО5РНАТЕ. ОЕАЕ-дехггап (50 те/т/) Оило1че 100 лл8 о/1ЛЕАЕ-л|ехлгап (Л4, = 500000; РЬагшас(а) лп 2 ш| о/дьдйед Н,О. Гйеп1ие ГЬе хо|игюл Ьу алгос!апл8 Гог 20 ш(пи!ел аг 15 ря (1 05 |г8/сшл) оп |нрлЫ сус(е. Алгос(ачл|п8 аЬо аяаьлх йяо1идол о/ йе ро1ушел ТЬе шо1еси1аг ъче!ПЬ/ о/ /Ье 0ЕАЕ-дехиап ог|8(паПу иаед Гог ггапдеедоп клал >2 х |О" (Мссигсйал алл| РаПало 19ба).
А1/ЬоиПЬ лЫл шагсг(а) ь ло (ол8ег ачал|аЫе сопипегелаПу, и и лбй| осеаяолайу Гоилд лл гйеш(са! агогегоопи. ТЬе о1дег ЬасгЬеа оГ ЫВЬег-шо(ееи1аг-нле(ПЬг ОЕАЕ-дехиал аге ллоге еййюлелс Гог !галл/есдол йал |Ье 1онлег-лло!еси!аг-лчч(ПЬ/ ро!ушегл сиггелг!у ачал1аЫе. РЬоьрйа/е-ЬиЯегед ъа//пе (РВ5) 5/еп|/ае йе хо!идол 1лу 61/гагюл Ье/оге ые апд яоге лг аг гоогп !ел лрегагиге.
ТглУРЬийегед ыа!/пе чг//Ь дехггоье ГТВ5-О) 1пнпейале|у Ье/оге ихе, агЫ 2090 (лч/ч) дехггоье (ргерагег! |п Н,О алс1 хлеп1лгед Ьу аигос1аюл8 ог Пр сгайол) со ГЬе ТВ5 го1игюп. ТЬе 6ла| с|ах!голе солсеплгаг(ол аЬои|г| Ье О. !% (ч/ч). )х/ос!е!с АС1415 апг! О1фопос!ео6(1е5 Рlахт/д Олх/А То оЬ/аш йе ЫПЬеаг сгаллГоплагюп е/Глс(епс(ел, ригКу ГЬе р!аялЫ РНАа Ьу го!ишл сйгошагоПгарЬу (р1еахе ьее СЬаргег 1, Ргосоео| 9) ог Ьу е9ш!лЬгшш сепсп/и8адоп лп Сьс! — е/Ыйшл ЬгошЫе г|елягу Пгад(елгл (р!гале атее СЬаргег 1, Рголосо1 1О). Ме(1!а Сед гийиге Вгочг/Ь теебигп Геотр/еге апо' легат-Ггее) 16.30 СЬарсег 16: Гпсгог(ггс5п5 С!олег( белея !и со Си!сигея( Мотта!!ап Сс!(я Ьрес1а1 Ес1п1рспепТ Т)хьие си!(ше с((яЬея (60-тт ог 35-тт) Т!Пя ргососо! ь г)ся(спсг) Гог ссПя агогчп )и 60-пип ог 35-пип си!гиге дьЬся.
)Е ши!г)гчсП р!асса, Лая)ся, ог гаяЬся оГ а йрсгспг йашсгсг агс шсй яса!с г!гс ссП г)спяггу апг) гсасспг чо1шпся ассоггппд1у. Р!саяе ясс ТаЫс !6-3. А(1с11Е1опа1 КеарепЬ 5(ер 8 оЕ йгя ргососо! гес(и(гея йе геацелп !гясесЕ гп СЬарсег 6, Ргососо! 7, апс( СЬарсег 7, Рго(осо! 8.
Се115 апс1 Т155пе5 Ехропепба!Гу Всоси(05 сипигея оЕ татта!(ап се!!я РЕАЕ-РЕХТКАМ ТКАМ5РЕСТ!ОМ К!Т5 5ечега! спагнФаспзгегя яеП Ыся йа( ргочЫе а(! о( йе спа(ег(а)я !ьсес1 )и (Ь)я ргогосо! (е.а., Ргорессоп МатгпаПал Тгапя(ессоп 5уясесп Егогп Рготеаа). ТЬеяе (гая аге яоспеи4за! ехрепяве (геааеп( соя( 'ь аЬоса $1 рег 60-гпгп сПяЬ), Ьис (Ьеу яегче ая а ияе(и! яоигсе о( сил!го! гегели мгЬеп рег(оптИпа РРАЕ-г)ех(гап (галя(есиоп ехрепгпепся Еог йе Пгяс йпе. МЕТНО0 1. Ттчепсу-Еоиг Ьоигя ЬеЕоге сгапяЕесбоп, Ьагчея! ехропеппа11у агогч)па се11я Ьу сгурыпсхасюп апс) сгапяЕег йегп со 60-лип с(яяие си1(ше с()яЬея а! а с)епя)су оЕ 103 се11яЫьЬ (ог 35-пип с))яЬея ас а г(епя!(у оЕ 5 х 104 се1!я(с))яЬ). АсЫ 5 гп! (ог 3 гп1 Еог 35-пгт с))яЬ) оЕ согпр1есе агояч(Ь тес))шп, апс) )псиЬасе (Ье си!шгея !ог 20 — 24 Ьоип ас 37'С )п а ЬигпЫ)Егес( гпсиЬасог сч1(Ь ап аспюярЬеге оЕ 5-7% СО .
ТЬс ссая яЬоп!д Ьс -75% сопйиспс аг ЕЬс Пгпс оГ сгапяГссиоп. И ЕЬс ссПя агс агохчп Еог < )2 Ьоигя Ьс(огс !галя(ссгюп, гЬсу чаП пог Ьс гчсП апсЬогсд со ЕЬс яиЪягашш апг( агс гпогс П)сс!у го Пегас!г г(иггпа схрояигс Го (3ЪАВ-г)схсгап. 2. Ргераге !Ье РМАГРЕАЕ-с)ех(гап!ТВ5-Р яо1ипоп Ьу ппх)па 0.1-4 ПВ оЕ яирегсог1ег1 ог с)гси1аг р)аяпЫ РМА гпсо 1 ша)т1 РЕАЕ-с(ехсгап гп ТВ5-Р. 025 ш! оГ йс яо!ииоп Ь гсг)шгсг) Еог сасЬ 60-пип П)яЬ; 0 )5 гп! ь гсии)гсс( Еог сасЬ 35-пип саяЬ. ТЬс агпоипг о( (3 !А гсг)шгсг) го асЬгсчс шахипа1 1счс1я а( ггапыспг схргсяяоп г(срспг)я оп йс схасг па!иге оГ йс сопя!хиос апг) яЬоиИ Ъс г)сссгш(псд )и ргс1ппгпагу схрсгипспь.!Е ЕЬс сопягисс саглся а гср1гсоп ЕЬас ъл1! Гипссн>п гп сЬс сгапя(ссгсг) ссая (с.с., сЬс 5Ч40 саг!у гсСПоп ргошогсг)ог)агп оЕ гср!каиоп), (00 — 200 па оЕ С314А рсг (Оя ссая яЬоиИ Ьс яиЕПсгспг; )Е по гср!гсоп ь ргсяст, !агасг ашоипь оЕ РВА шау Ьс гсг)шгсг) (ир со ! Ра рсг )О' ссая), 3.
Кешоче (Ье шес1шсп Егот йе се!1 си1(иге с(!яЬея Ьу аяр)гапоп, апс1 счаяЬ (Ье гпопо1ауегя схчке сч)(Ь гчаппес) (37'С) РВ5 апс) опсе сч)СЬ счаппес) ТВВ-Р. 4. АгЫ йе РМА/РЕАЕ-с)ех(гап(ТВ5-Р 601ипоп (250 р1 рег 60-ппп с1ТЯ, 150 р1 рег 35-пип г))яЬ). Кос1с йе с))яЬея аеп(1у со яргеас1 йе яо1ипоп ечеп1у асгояь сЬе пгопо1ауег оЕ се11я. Кесигп (Ье си!(игея со йе шсиЬасог !ог 30-90 пиписея (йе силе ъчг11 с)ерепг( оп (Ье яепяс)ч)(у оЕ еасЬ Ьа(сЬ оЕ се1Ь Со йе РМАЕРЕАЕ-с)ех(гап(ТВ5-Р яо!игюп). АС 15-20-пипи(е !пгегча1я, гепгоче (Ье с((яЬея Егош йе )псиЬагог, яъч)г! йегп аепс)у, апс1 сЬес1с йе арреагапсе оЕ йе се1)я ипс)ег йе писгоясоре. 1Г (Ье се11я аге яг!! Впп1у ассасЬег( со (Ье яиЬягасшп, сопс(пие (Ье !псиЬагюп.
5сор йе !псиЬасюп ячЬеп йе се1!я ЬеВ)п со яЬпп1с апс1 гоипс) ир. Ргогого( 4: Тгапфесг(оп Мег((атее( Ьу РЕАЕ-Рехтгап: НуЬ-ефс(ету МегЬог( 16.3! 5. Кегпоне тЬе РХА!РЕАЕ-г(ехтгап(ТВ5-Р ао1итюп Ьу аар(гатюп. Септ1у ннааЬ тЬе пюпо1ауега опсе ьчтЬ тнаппет( ТВ5-Р апс1 ТЬеп опсе тн(тЬ тнаггпег( РВ5, таЫпВ саге пот то т!!а!ос(ае тЬе тгапаЕестес) се11я 6. АтЫ 5 тп1 (рег 60-пип йаЬ) ог 3 гп1 (рег 35-пип йаЬ) оЕ тнаггпег! тес1пип аирр!етпептет1 ьч(Ь аегигп апт( сЫогот!и(пе (100 рМ Впа1 сопсептгатюп), апт( !псиЬа1е тЬе стт1тигеа Еог 3-5 Ьоига ат 37'С ш а ЬшшйВтет( шсиЬатог хн!1Ь ап атгпоарЬеге оЕ 5 — 756 СО,.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
