Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 56
Текст из файла (страница 56)
А !МРОКТАХТ Айег алаЫе Сгапасесл!оп и4СЬ РТеС-СТАЬ, П !х ипрегагве йаг СЬе сеПх Ъе та!пга!пед !и спейшп сои!а!и!08 0.5 08гш! СеггасусПпе Со ргечепг апу Сох!с еЕЕесгх оЕ СТА ехргеах!оп апд хиЬ- лес)иепс хе!есч!оп а8а!пас с!опех ехргехх!п8 ЫПЬ !ече!х оЕ сТА. 18. Ели!сЫу ччай сЛе с!опех ичсЬ -!00 П1 оЕрЬоар!часе-ЬиГГегес1 хаПпе. То ге1еахе йе сеПя асЫ 2 дгорх оГ !х !гура!п-ЕЕ!ТА (-!00 01) апд !псиЬасе Еог 30 — 60 хесопдя Еоохеп сЬе сеПх Ъу рлрегдп8 ир апд с1оччп ичсЬ а рахсеиг р!репе, ТгапхЕег еасЬ со1опу со опе лчеП оЕ а 24-лчеП с!ляле си!шге р!асе сЬас сопла!пх 1 т1 оГ ае!есдоп гпейшп сопсалплп8 250 Елхс Ъ-!Пхс)йпо1 апд сесгасус1лпе. РегЕопи аП шЬсециепс ралла8!и8 оЕ се!Ь Ъу ияи8 а яаидагд ргоседше, сисЬ аь 0) а сСи!с!с РБ5 счай, !П) а ! — 5-ииписе шсиЬадоп и!й сгурс!и-ЕЕ!ТА 12 ги! Рег сопдиепс с0-сги р!асе) ил!и8 ье!есс!ои шеспши соила!иш8 сесгасусПие, ог !ш) с0% са!Елегиш !3 ш!) со даисе/яор сЬе ассЕчссу оЕ йе сгуряи.
17.64 СЬаргег 17: Апа1ух!х о) Схепе Ехргея!оп т Си!гигег! Матти!!ап Се)!з ! 9. 'ч!!Ьеп йе сеПа !п йе ччеПа Ьаче Пгоччп со 80% сопйиепсу, сгапагег сЬепз шсо 6-сгп с!ааие си1- сиге сПаЬек !п ве1есИоп шесПшп сопса!и!п8 500 )гм л-ЬПасЫ!по! апг! сесгасус!ше. Лг!Н-ЗТЗ се!Ь Ьесоше 80% сопйиепс ш -4-7 дауа Ьопечег, сле игпе гег!шге8 со геасЬ 80% соп8иепсу чаг!еа !гош се!! !ше со сеП 1!пе апд ечеп !гога с!опе го с1опе. 20. Ехрапс! йе сеПа (суркаПу иае а 1:5 со 1:10 сП1исюп ог" гЬе сеПа) ш ае!есПоп шесПшп сопСа!и!п8 500 )гМ Л-ЬЫЫ!по! апг! Сеггасус!ше.
Те86щ о! Се!!8 аког 1пс!ос!Ые Рго1е!и Ехрге88!оо 21. ч!!Ьеп йе сеП шопо)ауега аге а8а!и -80% сопйиепс, гесочег а рогПоп ог еасЬ с!опе ог сеПа апг! а!осе сЬеп! !п а1нрхоо !п! щиЫ и!сго8еп. Раааа8е сЬе геша!пг!ег ог' сЬе сеПа ип61 сЬеу Ьаче ехрапг!ес) аий)с!епс1у со аПочч сеаПп8 !ог !пдис!Ые ехргеаа!оп ог" ргосеш. лЧЬеп гЬе !голеи се!!ь аге 1асег ые8, глеу ьлои!8 Ье гемче8 ап8 8гоччп ш Ь!аг!6!пе-ггее РМЕМ сои!а!и!п8 500 им с-лис!8!по! ап8 0.5 щ~ш! сеггаеус!!пе-НС!. 22. 1г" сеПа ччеге соггапагесгег! ъчПЬ ЬосЬ СТА апс1 йе Саг8ег р1аяпнЬ, йеп сПгесг1у апа1ухе СЬе ргог!исса ог" йе саг8ес 8епеа, аа г!еасг!Ъег! ш 5са8е 3. 1г се1Ь ччеге сгапагессег! ччюй оп!у сЬе РТес-сТА1с р1аяпЫ, сЬеп ргераге сЬе се1Ь го Ье сеасег) сог шг1ис!ЬПе ехргеаа!оп аа СоПоюа: а.
ТЬе и!8Ьс Ъегоге !пг!исс!оп, р1асе сЬе сеПа )п ае1есс!оп гпееПипз сои!а!и!п8 500 !гл! х-Ь!а- сЫ!по! апс1 0.5 сс8/ш! сесгасусПпе ас ап арргорпасе с)епясу ао сЬас йеу М11 Ъе аиЪсопЯиеп! ас йе шпе о! Ьагчеа!. Ь. ТЬе пехс г)ау, и ааЬ сЬе сеПа сЬгее сипеа чч!сЬ РВ5, ачч!гПп8 сЬе р1асеа 8епс1у еасЬ сапе. с. Айег йе сЬ|гг! ъчааЬ, игипесПасе1у асЫ ае1есПоп гпесПип! сопса!пш8 500 !см 1-ЬЬс!Жпо!„ Ъис 1ас!с!п8 сесгасус1ше. Си1гиге сЬе сеПа !п йе ргеаепсе ог аЪаепсе ог" сесгасусПпе гог 6 — 48 Ьоигя !! !а еааепг!а! со !пс!иг)е сои!го!а сЬас аге гпа!пса!пег! !и хе!есиоп гпес)!игп сопсап!п8 500 им с-Ь|я с!г!!по! апс! 0.5 наш! Сеггасус!!пе.
23. Теас сЬе сеПа Гог !пг!ис!Ые ехргеаяоп ог сТА, Ъу погйегп апа!уа!а ог ипгпипоЪ|осПп8. СеП Ппеа ехргеаяп8 сТА гпау сЬеп Ъе сгапагессег) нпсЬ йе саг8ес р1аяпЫ(а) аа с1еасНЬег1 ш 5са8е 2. !и ьсаЫу !гааз!ессег! Л!!Н-ЗТЗ се!1я !пг!исе8 сТА апд саг8ег 8епе ехргея!оп ь оЬьегче8 сур!саиу айег 6 Ьоига о! ш8ис6оп ап8 геаслев а гаахппип1 6 лонга 1асег. 17.66 Сйаргег 17: Апа1уггй оЕбеие Ехргеяюл т Си!!иге|( Матта)(ап Се)(г А41е11Е1опа1 КеаеепЕ5 Мер 3 оЕ (Ь!ь а!аде гес)и(геа (Ье геадепгь !(а!ее) т 5гаде 1 оЕ ЕЬЙ ргогосо).
Чес$огй апг! ВасЕег1а! Яга1пй рРСКРиго (ог чес(ог саггутд апо(Ьег ае)есгаЫе таг)сег) Реп(у ай р1аяппЬ Ьу ейшййпшп сепгг!(айаг!оп ю С|С1-е|ЬЫшп| Ьгоп|гае йгас))епга (СЬар|ег 1, Рго|осо) 10) ог Ъу со1шпп сйгогпасойгарйу (СЬаргег 1, Рго|осо! 9). Рог |п(оппа|юп оп ае!есгаЫе гпаг)сегя р!еаае аее Оашйе е| а1. (3995). Тйе р)аяпнЬ РТе|-5рйсе ап|3 р!)НС ! 3-3 аге ачайаЫе Ьогп !.3(е Тесйпо!ой)ея О|Ьег час!оса саггуюй ье1есгаЫе шаг1|ега аге сопппегс|айу ачайаЫе (е й., РС1-пео Егош Ргошеца ап|3 РТК-НУО ог РРЕ|й Егош С! О14ТЕСН). 1Е апо| Пег ъес|ог ы аойаг!гиге|3 Еог РРСКРиго, |Ьеп ые |Ье арргорпа|е ае!есйоп |песца Еог |Ье ае!есгаЫе шаг)сег саге)е|3 Ьу |Ьа| р!аашЫ. рТе|-5рурсе сапу|пд а герояег депе, (ордопа), е.д., рЕ)НС13-3) р Ге!-5рйсе саггутд (Ье ГагдеГ депе ОКЕЙ) СеИ5 апг! Т1555оей 5(аЫе сед )теь ЕЬаг тг)иЫЫу ехргеьь аигогеди!агогу ЕТА (Яаде Ц МЕТНО0 Со!Гоге апд ТгапйЕесЕ1оп оЕ СеИ5 1.
Си!!иге агаЫе сеП Ппеа !Ьа! )пс)ис!Ыу ехргеаа ашогеци1агогу !ТА (!ао1агес3 !п Маце 1) |и согпр!е!е ае!еспоп |пейшп сопгашшц 500 ПМ Е-Ь)агЫ!по1 апс) 0.5 рцйп) геггасусйпе-ЕЕС1. ТЬе |)ау Ье!оге сгапаЕесгюп, рааааце !Ье сейа шсо 10-сш г!аагге си!!иге с)!айеа сопга!и!пц сошр!е1е ае!есг!оп шейшп. ТгапаГег епоицЬ сейа рег с)!аЬ гю !Ьаг оп !Ье с)ау оГ !Ье ггапаЕеспоп, ! Ье сеП пюпо)ауега ъчП! Ъе 33% сопйиеп!.
А 3МРОПТА)ъ)Т Егоп| |Ьь ро)п| оп, та|п|а|п |Ье седа )п |Ье ргеаепсе о( 0.5 рц|гп) |е|гасусйпе-НС! а! 37'С, )п ап а!тоарйеге о|' 5% СО ип!ееа о!Ьегъч)ае ага!ее(. 2. Е!пеаг!хе !Ье р!аяпЫа со Ье иге|3 Еог !гапаГесПоп апс) аг))ик! ЕЬе ЕЭ)ъ(А сопсепсгагюп оЕ еасЬ го >0.5 шц)пав!. М|х 10 — 20 рц оЕ еасЬ гагце! депе р1аапг Ы(а) ап|1 1 — 2 рц оЕ РРСКРиго (а 10:1 шо!аг га!ю оЕеасЬ ге(гасус1ше р1аяпЫ со ае1ессаЫе п|аг1сег р1аяпЫ) ъч!!Ь 500 р! оГНЕРЕ5- ЪиЕЕегес( аайпе ш а с1еаг 4-п|1 ро!ув!угепе !иЬе. Ргераге а соп|го) Еог гпос)с !сапа(есйоп соп|а|п|пц НЕРЕ5-Ьи((егес) аайпе апс) по ОНА.
А)1 о( Ейе п|ос1|- !гала(ес(ес) се!!а ейоиЫ сйе ъчЬеп )псийаге|3 в а тесйигп сои!а)п!пц ригогпус)п. Р1еаае аее гйе по|е го 5|ер 4. 3. Саггу ои! 5гера 3 — 13 Ггогп Маце 1. А 3МРОПТА)ъ(Т Ве |юге го аийайгиге !Ье ае(есйоп тейит сопга!п)пц 500 рм г-Ь!аййпо( апг) 0.5 рц(|п) се|гасусйпе-НС) !и (Ь!а !сапа(есг!оп, ъч4|епечег 5|аде ! са)Ь Еог ОМЕМ соп|р(есе сопса!и!пц !е!гасусйпе. Ье!есЕ1оп апе1 С1оп1щ оЕ ТгапйЕесЕед СеИ5 4.
Рог!у-е!цЬЕ Ьоига аЕгег ггапаЕесг!оп, рааааце |йе сейк |пго ае1есг!оп п|ейшп сопга|пшц 500 рм !.-Ь!а!!Йпо!, 3 рцйп! ригошус|п, апс) 0.5 рцйп! ге!гасус!ше ас аечега1 й!иг!опа гапц!пц !гоп| -1 х !Оа го 3 х 10' сейа рег 10-с|п р1аге. !пс1и|1е аечега1 р1а!еа соп!аиппц -1 х 10~ сейя ТЬе 1оъчея сопсеп|га|юп о( ршоп|ус(п |Ьа| )ййа ай оп!сапа(есгес) сей| ъч)|Ь~п а Ееъч с)ауа айпи!|3 Ье г!е|егпппе|1 еп|рп)сайу Ье|оге |гаыуес|юп ап|3 чаг)еа ъчЬЫЬе сей суре.
А сопсепсга|юп оЕ Ртотосо18: 5га8е 2т 5гаИе ТтапкЕесг!оп о/~/пйис/Ие ЕТА-ехртекйпд Ы/Н-ЗТЗ Се/Ь 17.67 3 )г8/т! ригоитус!и и кайте!еог Еог ке1есгюп оЕ ггаок/есгег! Х!Н-ЗТЗ сеПк, Мокс курек оЕ сеПк аге )сП!ес) еЕЯс1епЯу тп сопсеиггаЯоик оЕ ршотоусто гаи8!и8 Поит О. ! 08/то1 го 1О 08йо1, 5. АЕГег гпсиЪаби8 си!гигек ш ке1есгюп гпес1Ытп Еог 4 с1аук, Ееес! 1Ьегп чйй а ЕЬгйег 3 — 4 ш! оЕ ке!ес)юп шес1шш сои!а!пш8 500 )гМ 1.-Ь!кГЫ!по1, 3 )г8йп! Ригошус!п, апс1 0.5 )г8йп! Ге)га- сусПпе. 6. язеп со1оп!ек аге кчеП-екгаЫткЬед (аг дау 12 — 14 оЕ ке!ес6ои), с1еПпеасе ЕЬегг Ьогдегк Ьу с1гачч!08 а сггс1е оп гЬе Ъоггоиг оЕ йе си11ше сПкЬ агоип6 еасЬ со!опу.
Акр!гаге !Ье пгесПиш Егош йе р1аге, апс1 р1асе а кгеп1е р1ак6с с!опш8 пп8 оп йе р1аге со кигтоипд ап !псПчЫиа1 с1опе. Кереас йе ргосес1иге кч!!Ь еасЬ со!опу гЬаг тк !о Ъе р!с1сед. СЬооке се1Ь Егош р1асек оп ччЬкЬ !пбтчЫиа1 со!оп!ек ате кчеП красет) апд сап Ъе еая1у сПк6п8шкЬей 7. Е4и!сЫу кчакЬ ГЬе с1опек кч!й -100 )г) оЕ РЬокрЬаге-Ьийегес! каПпе.
То ге!еаке 1Ье сеПк, асЫ 2 Ягора оЕ 1х !гура!п-ЕНОТА Е-!00 )г1) апг) !псиЪаге Еог 30 — б0 кесопбк. 1.оокеп йе сеПк Ьу ргрегбп8т ир апс1 с)окчп чч!1Ь а Ракгеиг ргреие. Тгапкуег еасЬ со1опу го опе кчеП оЕ а 24-кчеП Пккие си1гиге р1аге йа! соп!а!пк 1 ш1 оЕ ке1есгюп шест!ипк сои!а!п!08 500 р.М ~.-Ыкг!6!по1, 3 )г8/гп! Ригошус!п, апс) 0.5 щи! сеггасусПпе. Саггу оиг аП киЬкег)иеиг ракка8!п8 оЕ сеПк Ьу а ктапдаЫ ргосеОиге, кисЬ ак !!) а с)и!с)с р85 ччакЬ, аид 01) а 1-3-иипше 1осиЬагюо кч!гЬ !гура!и-Е13ТА (2 пт! рег сопЯиепг !О-стп р!аге) и!и8 !0% са!Е когито !3 то1) го г01иге/кгор гЬе асг!ч!гу оЕ ЕЬе сгуряо.
8. гатЬеп сеПк гп йе чче!Ь Ьаче 8гоччп Со 80% сопйиепсу, Сгапкрег йегп гпго 6-сш сПкЬек ГЬас сои!а!п ке1ес!юи гпееПцпг сои!а!п!п8 500 )гМ ~;Ыкг!6!по1, 3 )г8/ш) ригопгус!п, апс1 0.5 )г8/ш! геггасус1тпе. )91Н-ЗТЗ сеПк Ьесогие 809о сопЯиепг !и -4 — 7 г)аук; Ьогчечег, йе Ятое гецтПгед го геасЬ 8098 сопЯиеису чапек Еготп сеП 1тое го сеП 1юе апс1 ечеи /тоти с1опе го с1опе. 9. Ехрапс) гЬе сеПк (гуркаПу ике а 1:5 со 1;10 061шюп оЕ 1Ье сеПк) !и ке1ес6оп гиесПши сои!а!шп8 500 )ЕМ Е.-ЫкГ!6!по1, 3 )г8/ш! ригошус!п, апс) 0.5 )г8/ш! геггасусПпе. 10. катЬеп сеП гпопо1ауегк аге а8а!п -8098 сопйиепг, гесочег а роггюп оЕеасЬ с!опе оЕ 1Ье сеПк апс! кгоге 1Ьегп тп а1н!иогк !и Пг)ш6 п!!го8еп. Ракка8е йе гегпаин1ег оЕ йе сеПк ип61 1Ьеу Ьаче ехрапс1ес1 киЕЕтс!епг1у го аПочч гекгш8 1ог шс)ис!Ые ехргекяоп оЕ йе саг8ес Пепе ртос)- исг(к) ак с1експЪес1 тп 5гаце 3.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
