Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 58
Текст из файла (страница 58)
17.71 17.72 СЬар|ег ]7| Апа!уьть о[ Сепе Ехрге|ыоп т Си]таге|] Маттайап Се!Ь мсь яапа| Г]СЕ)КЕ 17-10 р!3|!О(5Р1)тт|5-Н[ь А ТЬе нес|от ]ь пьем |о с]опе а тагцет депе апг] р1асе (ть ехргеььюп ипг(ег соптго[ о( |Ье ест(уьопе-ьепы(т)не геьропье е1е|пепт. ТЬе та(п Ееатигеь о( йе нес|от аге йе ест]уьопеф)исосогт!со||) геьропье е!ептепть (Е|СКЕ, 5 сор|еь); 5Р1 епЬапсег е]егпепть (5Р), 3 сор]еь); беат ьЬос1| тп|п(гпа] ргогпотег (Н5Р); ро1у(А) аг]г)[т(оп ыцпа( (гоги Ьомпе ВгоиаЬ ]тогптопе (ВСН); апт] тар Еог сопчешеп| рипйсатюп о( |Ье ехргеььег] рго|е3п (н5 ер]торе апг) ро1уЬ]ьт(т]!пе [Н)ыт] та5ь). Ойег Ееа|игеь )пс(иг]е (т) йе опт!и о( гер!|сатюп т]ег)нет] (го|о В[а|пептоиь рЬаце 01 ог0, (2) |Ье со1Е| от|а(п о( гер[|сатюп )п Е. со)т, (3) ап агпр(с(!!!и геыь|апсе |паг]тег (Агпрх) тог ье!есооп !и рго3|агуо6с се(!ь, (4) йе ог)5)п о( гер!)саооп Еог 5Н40 йат аПоиь гер1|сатюп гп |пат|па(]ап се(!ь, апт] (5) а пеоп|ус!п геыьтапсе птаг[|ег (ог ье1есооп (п птагппта!(ап се!!ь (Неох).
(Мог]3()ет], |н!(Ь реги»(ьь]оп, (го|и тпн]тгодеп.) ТЬе иье оЕ йе ест]уьопе-тпг[ис]Ые ехргеьяоп ьуьтеш Еог йе ье1ест|че ргос[истюп оЕ ргосе[пь тчт(Ь[п тгапьЕессет[ тпапипа]]ап се1!ь тнаь бгя герогте|1 Ъу Хо ет а]. (1996) апг] Ьаь ыпсе Ьееп ттьет[ ьиссеььЕи!]у то ьти|1у |Ье Е»пс6опь оЕ пшпегоиь рготешь, ]пс[ис[[п5 |Ье го1еь оЕ 5|па|]4 тп со[оп се1!ь (Са!опте ап|1 Маььа5ие !999), |Ье ейесс оЕ |п[ььепье пштатюпып |Ье ргоарортот|с депе ВАХ (СЛ ет а1. 1999), апг[ тЬе Еипс6опь оЕ йе шшог ьирргеыюг РТЕХ рЬоьрЬатаье (Тапшга ет а1. ] 998).
]и а|Ы]тюп, |Ье ьуьтетп Ьаь Ьееп иье|1 то апа1ухе йе асбчау оЕ "т]египет" х[пс Етпдег тгапьспр6оп Еас|огь (Капа апг[ Кпп 2000) ап|1 со г]ече]ор а |песЬап]ьш йат пю|1и]атеь пеигопа] ехсЬаЪ|1Ьу Ъу сои(го]1[пц йе ехргеьяоп оЕ (сапы]исег[ юп сЬаппе1ь (]оЬпь ет а1. 1999). ТЬе Ео!!отч[пд рготосо1 ]ь ат]арте|[ Егош |Ье опе |Ьас ассоптрашеь ап Ест]уьопе-[пг[ис]Ые Мапипа![ап Ехргеьяоп 5уьтеш (ача[1аЫе Егош ]пч[тгоцеп).
А ыпи!аг ьуыегп |ь ача[1аЫе сошшегста11у Егогп 5(гатацепе. МАТЕИАЕБ Вт»ЕЕег5 а|те! Ьо!(тйотт5 Р]еаье ьее Аррепгбх 1 Еог сотропепть оЕ ьтос]т ьо1и6опь, Ьи((егь, апт] геадепть. [33!и(е ьтос]т ьо1и6опь (о (Ье арргорпате сопсептга6опь. [т]еот усто Ропаьгегопе А Ап а1|егпаоче ес|1уьопе апа[од 6 птиг(ьтегопе А (5(дота). 7еостп Ргогосо! 91 Есг[уьопе аь а Кеда[а!ос о51пе[ис[Ые бепе Ехргеьыоп т Матти[сап Се[[1 17.73 вхв НЕЕсВ ргсгпссаг ргсшссаг — — и- и а — —— ЕсВЕ Х 4 1апда1 репе гппапа! ргспю1ег Г!СС)КЕ 17-11 5сЬетаос О|а гат о[ Есс[ ьопе-|пс[ис|Ые Севе Ехргеььюп 5уьсет А р|аьгпЫ епсос(|пд 1Ье депеь (ог (Ье есс|уьопе гесер1ог (ЕсК) апг) сае геопоЫ Х гесерсог (КХК) )ь иьес( со ехргеьь сае Ьно гесерсог ргосе|пь.
А ьесопд р)аьт|8 |ь пьем со сЫпе [Ье 1агдес депе апг( р|асе К ипг(ег сопсго| о[ есг(уьопе-ьепь)1)не геьропье е|епсеп1 (ЕсКЕ) ьес|иепсеь СЬас аге роь(1|олег( ирьсгеат о( а гпсп1гпа| ргопсо1ег (р|еаье ьее Е|диге 17-10). ТЬе 1шо нессогь аге сгапь(ессес( |п1о тагпп1а||ап се||ь апс( ехргеьь)оп Ы сае сагде1 депе |ь сопсго[[ес( Ьу асЫШоп о( |пг(ис)пд Ьогп1опе |и (Ье си|юге тес[(ит.
1п (Ье ргеьепсе о( Ьогпсопе (ропаь1егопе А ог гпииь(еюпе А), ЕсК апг( КХК Ьесегог(|тес|ее со (опп 1Ье Сипс0опа! есс(уьопе гесер1ог СЬа1 асбна1еь сгапьспрбоп о(1Ье 1агде1 депе (югп 1Ье ЕсКЕ-сопса|пспд рюспосег. Р|еаье ьее 1ех1 (ог (иг(Ьег с|еса1ЬЕ (Мой(|ес(, хн|СЬ реет|ЕЕ(оп, |нот Мо ес а!.
1996 [Раас)опа! Асас|егпу о( 5с1епсеь, С).5.А.].) Мейа Асес)гит арргорласе 5ог дгогн|лд сЬе се)[ь со Ье «аль5ес(ег[ ТЬе шег)шш пшга Ье наг|оийу ьирр!егпепсег( 1н|1Ь Хаос|о, пеогпусгп, апг[ ропаьсегопе А. А(ЫЙопа! КеадепЕ5 5серь 1, 2, ало) 6 о5 сдгь ргососо! гес[и|ге сде геадепсь Ььсег! т сЬе арргорггасе сгапьуесйоп рго(осо! т СЬарсег 16. 5сер 4 о5 1Ыь ргососо! гес[и|геь ЕЬе геаделсь Ььсес[ т Ргососо! 6 о5 1Ыь сЬар1ег. 51ер 8 о5 СЬ|ь ргососо! гес[и|геь СЬе геадепсь дь(ег! гл СЬар1ег 6, Ргососо! 8; СЬар1ег 7, Рго1осо! 8; ог Аррепг)|х 8, ЧесЕог5 апс[ Ванесса! Ягасп5 Ап есс(уьоле-спс[ис|Ые ехргеььсоп р[аьт(с[ (е.д., СЬе р))но ьелеь; |писгодел) саггутд а (ис|5егаье герогсег деле Яп есс(уьоле-|лс(ис|Ые р[аьтгг( ЬагЬоппд СЬе депе о5 |псегеьс р)гдВИ Илнйгодеп) СеИ5 апс[ Т[55ссе5 Си)сигес[ таттадап се)(ь 1774 СБарсег 17| Апа!уЫк оГбепе Ехргекк|оп |и Си!сиге|)Матти!Еап СеПк )чсЕТНОсг 1.
5саЫу сгапкГесс се1Ь сйй рсгцКХК ик!пд сЬе ргеГеггес) гпесЬосс оГ сгапкГесс)оп Гог йе се11к ипс)ег кгис)у ЕГог а ке!есс!оп оГ сгапкГесСюп рго|осо1к, р1еаке кее СЬаргег 16). СЕ РЧХРХК Ь и|ей йеп ике 7еос|п со ке!есс Еог се!Ь саггу)па йе рсаяпЫ. Рог р1актЫ(к) осЛег йап рицйХСС, ике сЛе арргорпасе апиЬюис со оЬ|а)п со!осиек оЕ яаЫе )псеегапск.
Регсопп а сопсго! пис1| сгапксес6оп сч)ЕЛ по 0ЕСА асЫес) со йе се!)к. А!! оЕ йе |пас)с-сгапксессес) се!Ь кЛоиЫ с))е |и СЛе ргекепсе оЕ 7еос)п. 2. То сЬооке с!опек сараЫе оЕ ке!есс!че!у Епс!ис!па депе ехргеяюп ш йе ргекепсе оГ есссукопе ог опе оГ Ьк апа1оу, сгапк|епс!у сгапкГесс Хеос!и-гек!ксапс со1оп!ек оЪса!пед !п 5сер 1 сйй ап есс!укопе-!пссис!Ые ехргекяоп р1аяпЫ саггу!пд а!ис!Гегаке герогсег репе (ацасп, Гог а ке!есс!оп оГ сгапкГесс!оп ргососо1к, р1еаке кее СЬарсег 16). 3. Тсчепсу-Гоиг со шпесу-ях Ьоигк аГсег сгапкГесс)оп, шс)исе йе ехргекяоп оГ 1исйегаке Ьу гер1асша ЕЬе шес))иш |Ый ГгекЬ шес))иш сопсаспша Хеос)п, пео|пус!и, ап|1 5 )см ропаксегопе А. 1псиЬасе йе се!1к Гог 20 Ьоигк ас 37"С ш а Ьиш!с)|Т|ес) |псиЪасог |Ый ап асп|окРЬеге оГ 5 — 7% СО„. ТЛе ага оипс оЕ ропаксегоие А ап|С йе )епасЛ оЕ йе |п|сисиол рег)о|С сЛас |ч|!! у|еЫ орсипа! |п|)ис6оп оЕ сЛе геропег |ио)еси)е |ч))! чагу чбй ййегепс се)! Лпек.
То оригпйе, секс а гапке оЕ Лог|попе сопсепсгасюпк, Егоп| 0 с-|0 ря ропаяегопе А, апс) часу йе репо|) оЕ )пс)исс)оп !гоги ! 6 со 72 Лоигк. )с )к еккепс)а) со )пс!и|се сопио! сиь сгек йас аге пос ехрокес) со ропаксегопе А спсиьасе йеке сопсго! си!Сигек !и гпессвгп сои!а)п)па оп!у сеос)п апс) пеотуссп. 4. Аяау Гог!ис|Гегаке асг!ч!Су ассогсс)п5 Со Рго|осо! 6. 5. С)ке с!опек йас ехЫЬЬ йе с)еягес! 1ече1 оГ есс!укопе-!пс)исес) 1ис)Гегаке асс!ч)су. Ихрап|1 йе сеП сиЬиге |и гпе|1пип сои!а!и!пи Хеос!и апс) пео|пус|п.
6. 5саЫу сгапкГесс се11к Его|и 5сер 5 |чЬЬ ап есдукопе-!пс)ис)Ые р!аяп)с! ЬагЪог)пц йе депе оГ |псегекс апс) а Ьуцгошус!и геяксапсе шаг)сег ик)пц |Ье ргеГеггес) шесЬос! оГ сгапкГесс)оп сог сЬе се!1к ипссег ксис!у ЕГог а ке!есс)оп оГ сгапкГесс)оп ргососо!к, р1еаке кее СЬарсег 16). Регсоггп а сопсго! тос)с сгапксесс оп ъч)ЕЛ по 0С|А асЫес) со |Ле се!Гя А!! оЕ |Ле |пас)с-сгапксессес) се!)к кЛоиЫ кигчсче )и СЛе ргекепсе оЕ сеоссо, Ъиг с)се |и йе ргекепсе оЕ йе кесопс! апС)Ъюис Сгур)са!!у пеотус|п ог Лудготус)п). 7.
Ехрапс) |Ье сЬокеп со)оп|ек оГ се!!к йас аге геяксапс со Ъой апс!Ьюс)ск, Ьудгошус!и апсс пео|пус|п. 8. Апа!ухе ехргеяюп оГ |Ье !агнес иепе Ьу !пспсипоЫосс!пц, погсЬегп ЬуЪг)йхас!оп, ог о|Ьег арргорпа|е аяау. Еттуогтат(оп Рапе1ь 17.75 ЕООТРР1 )я)Т1 КС 0 МА роосрпп6пц Ь цяе6 со Ыеп6Еу сЬе гец(оп |п а яецшепс оЕ с1опед ОЪ(А сЬас Ь гесоцпыед Ьу а яет)цепсеярес|6с Р)я(А-Ъ(пйпц ргосеш яцсЬ ая а сгапяспрсюп Гас|от. ТЬе сесЬп(т)це шчоЫеь ргоЪ|пц |Ье ассеяПЬ|1- |су оЕ еасЬ пцс!еосЫе |и а ПеГ|пе6 яет(цепсе оЕ РЫА со геацепп йас Ыеаче сЬе рЬоярЬойеясег Ъас)|Ъопе. ТЬеяе геацепся шс!ц|$е епхутпея ысЬ ая ОЪ(аяе 1 (Оа1ая ап|$5сЬппсх 1978; 5сЬпцсх апс$ ба!аз 1979) апт$ сЬепцса! пцс!еаяея яцсЬ ая Ьудгоху) гайса!я ап6 соррег-рЬепапйго!ше юпя (Гог теч(ею, р1еаяе яее 5(цшап ап|$ СЬеп 1990; 5(цшап ес а!.
$993). ТЬе 1|еу со яцссеы тч(сЬ РЫА Еоосрппсшц Пея ш еясаЫЬЫпц сопйсюпя Еог с1еачаце |Ьас цепегасе гертот)цс(Ые йЕГегепсея |чЬеп сЬе яап|е яецшепс о( РХА |я геассе6 |и |Ье ргеяепсе апд аЪяепсе оГ ргосе|п. ТЬе роч ег о( |Ье шесЬод Пея ш йе я|$е-Ьучц|$е чЬца! соп|рагЬоп оп яе|рлепсшц це1я оГсЬе с!еачаце рго|1- исся оЬ|аше|$ тч(сЬ ап|1 тч(йоцс ргосеш Сопппоп1у бьет! С!еачаее $яеацепсь ТЬе пчо сурет оГ Ыеачаце геацепся ые6 ш ОЪ)А Гоосрппбпц ассас)с О)я(А ш с(ц(се ййегепс |гауз. Епхушея яцсЬ ая ОЪ$аяе 1 цяе ап |и-Ппе 55$-2 птесЬап)яш со сага!ухе пцс1еорЬ|1|с ассас1| оп йе ясЬ61е рЬоьрЬойеясег Ъопй Ву сопсгаяс, сЬеппса1 ацепся яцсЬ ая Ьут)тоху( гайса!я апт( соррег-рЬепап|Ьго!ше юпя аге гебох-ас6че соогйпабоп сошр1ехея тЬас оийте |Ье |1еохупЬояе пю(есу оЕ $3Ъ)А (5(цптап ес а!. 1979; НегсхЪегц апй Регчап 1982).
ОА|аье Г ОЪ)аяе 1 |чая |Ье геацепс ог(ц(цацу цяет$ со |1ече!ор РНА соосрппбпц (Оа1ая ап6 5сЬгппх 1978; 5сЬпс(са ап|1 Оа!ая 1979) ап6 |1еярпе |Ье яцЪяет)цепс йзсочегу оЕ е!ецапс сЬетпка1 шесЬот(я со с1еаче РЫА ш а яет)цепсе-шдерепбепс Еайюп, П гегпа|пя Ъу Еаг |Ье гпояс роро!аг ч ау со 1оса1|ае ярес|6с шсегас6опя Ъес|чееп ргосе|пя ап6 ОЪ)А. 1| Ьая Ъееп 1|по|чп Гог п|апу уеагя йас рапсгеас|с $3Наяе 1, ш йе ргеяепсе оЕ Мцт', (псгобисея шс1|я |псо еасЬ астап|1 оЕ с)оцЫе-зсгап|$е|$ РЪГА |п|1ереп|1епс1у. Но|течет, |чЬейег сЬЬ пк1|шц оссшя ас таит)ош ог йяр!ауя яет!цепсе ярес|6сПу геша|па а яцгрпппц1у пшг1|у сорк, |чПЬ соп6|с6пц дата Ггош ьечега( цгоцря.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
