Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 62
Текст из файла (страница 62)
Тп 1975, сЬе Вгы Ьаси!отдпь ъчая тедсзсетед ть а ре|6сЫе Сот изе оп соссоп Ьу |Ье Впч|топп|еп|а) Рго|есбоп Адепсу Тп йе Т)т|ед 5СаСея (Тдпо((о 1973, 1981). Рог зачета) уеатя СЬе соиоп ЬоП|чопп |дгия ъчаз сопипегс|аПу гпаг(сесед аз а зиЬяйше Гог |Ье шсгеаяпд1у (пеЕЕессиа! огдапорЬозрЬасе рея6сЫея. Вис, |и |Ье 1асе 1970я, сЬе руге|ЬтоЫ-Ьазед сЬеппса!з |чете гед(зсегед апд гпаг1|есед, е1ип|пабпд сЬе тат(сес Гог СЬе итоге ехрепйче Ыгиз резскЫея. Риппд сЬе 1980з, |Ье Т)5. роте|с 5еглсе дече!оред осЬег Ьаси!оч|шя реяскЫез, |пс1ийпд Тъ(РЧя оЕсЬе дурзу тпосЬ апд сЬе сизяос)с п|о|Ь, ъчЬзсЬ аге я6П ыед содау Гог рея сопсго! |и риЫк Еотезся (Ма|Одопп( 1984).
1пдыспа! шсегезс, Ьоъчечег, Еас)ед ип|П йе адчепс оЕ сесЬпо!оду со депескаПу |тпргоче Ьаси!олгизез ая резскЫез (МсСиссЬеп ес а1. 1991; О'ВеП1у апд М|Пег 1991; 5сеъчагс ес а!. 1991; То|па1|Ы ап|1 МП1ет 1991, 1992), соир1е|1 ъч|ТЬ шсгеаяед геязсапсе о! Резсз со ругесЬгоЫя ТЬе гед(зсгасюп оГ Ьаси1оч|гыез аз реябсЫея Ьад ро66че еЕЕесс оп ЬосЬ Ьаси1оч|гы гезеагсЬ апд ЬюсесЬпо!оду. ТЬе арр1касюп оЕ |Ьеяе чиизез оп пиПюпя оЕ астез оГ адпси!сига! апд Согезс!апс( ЬсдЬПВЬ|ед |Ье пеед со Тспоъч итоге аЪоис Ьоъч сЬезе ч|гыез саыед йзеаяе апд сЬе пасме оЕ |Ьеи Ьозс-гапде !ип|сасюп (дипипегя ес а1. 1975).
1псгеазед тезеатсЬ!ед со а и|осе зорддзбсасед ипделсапйпд оГ|Ье ч(гияея апд ечепсиаду со сЬе |1ече1ортепс оЕ Ъаси1оч|гияея аз ехргетьюп чессотз. Васи1оигыез сопзбсисе ап ипспепзе Гапи1у о( ч|гизез, |Ье Васи!оч(гЫае, ъчЬ(сЬ ~пс1идея >500 Тспоъчп гпеп|Ъегз иЬ|с)и(сопя!у дьспЬшед ш сегтеясг(а! апд спаппе есояузсепь (Магддпот апд 1|ча| 1986). ЕасЬ Ьаси1оигы шГессз а!ипие|1 пшпЬег оЕ аяЬгоро|1 зрес(ея апд зоте саые 1ейа! ер(хиос(сз.
ТЬозе Ыгизез саияпд йяеазея оЕ резс ярес(ез (е.д., Агтуъчогтя) ог Ьепедс(а( шзесся (е.д., я|1)съчоття ог яЬптр) Ьаче тесе)чед тоге аиеп6оп Ьесаизе оЕ |Ье|г росепс|а! изе аз резс|сЫез ог йе|г росепба! со саые дечазсабпд дВеаяез оЕ сопипегс|аПу ча1иаЬ!е агйтородя ТЬе Ьаси1оч(гиз пюяс сопипоп! у ыед аз а депе ехртеяюп честит Амодшрйа са)11оттса пис! еаг ро!уЬедгояз (АсЬТРЧ ог АсМ(ъ)РЧ), Еог ехатпр1е, а!зо Ьая сопядегаЫе росепба! аз ап |пяесс реяс сопсго! адепт ада|пас сег|а|п адпси!сига! Реяс п|о|Ь зрес|ея (е.д., |Ье саЬЬаде 1оорег ТПсЬор)ияа ит' ап|1 сЬе ГаП аппуъчопп 5родоргета 1тидтретди).
АсМГТРЧ |чая Тяо(атед Егоп| а1Еа(Еа 1оореь (А, сиП(оттса) ш |Ье еаг1у 1970я (Чад ес а!. 1971). Весаизе П Ьад росеп6а! ая а резбсЫе апд соиЫ Ье геай!у ргорадасед |и зечега1 езсаЬЫ|е|1 сеП Ппея, и |чая адорсед Еог пю1еси1аг депес|с апа1уя(я (Гее апд МП!ег 1978, 1979; дппй ап|1 5ипипегя 1978, 1979; Вгоъчп ес а1. 1979; Сагяепз ес а1.
1979; МП!ег апд Раъчея 1979; М|Пег 198Ц. ТЬе ВошЬух тоН пис1еат ро1уЬедтояз Ыгы (Вт(ъ)РЧ) Тя а1зо изед аз а депе ехргеяяоп честит (Маеда 1989), рп|па61у Гог ехргесыоп |и шзесс 1агчае Ьесаые оЕ |Ье 1агде я|хе оГ |Ье зП)с|чита 1агчае. Васи1отдгизез Ьаче!агде (-80 — 200 Т|ЬР) с|гси1аг РЕТА депотпез (диттегя апд Апдегюп 1972, 1973), зечета1 оГъчЬ|сЬ (шс!ийпд АсМНРЧ 133,894 Ьр; Ауте| ес а1. 1994) Ьаче Ьееп сотр!есе!у яес(иепсед. ТЬе АсМТъТРЧ депоп|е сопсашз ас 1еаяс 154 ореп геайпд Ггатея, п|ояс оГ ъч!ПсЬ Ьаче Ьееп аяз(дпед ас 1еаяс а гис(ипепсагу Гипссюп.
Арргохипасе1у 20 депез арреаг со епсоде ч|га1 зсгиссыа! Ргосе|пз (ПоЬ|тапп 1992; Коо! апд Ч!а)с 1993), ъчЬегеаз а япн!аг питпЬег Ьаче Ьееп атыдпед го!ез |и депе геди1абоп (Тодд е| а1. 1994). А пшпЬег 17.82 Г Ьаргег 17: Аиа1уж и)' ллеие Ехргелл(ои ти Си1сигед Матта)ит Се!Ь оЕ депеш арреаг 1о Лаче Ьееп аст)шгед Егош 1Ье Ьоас ас югпе рошс ш ечо1п6оп; Гог ехатпр)е, Ьасп!оЫгпа депеа епсогПпд ргосеша чдсЬ ядплйсапс лес(пепсе Ыепбсу со Ьоас ргосеша тпс1пс1е апрегохЫе дыппсаае, пЬ(л)шс(п, ргоселп Ыпааеа, ргосеш РЬоарЬасаае, рго!лЕега6пд сеП ппс!еаг ап6деп, я-сопосох!п-П)се ргосеш, апд сЫ6паае (Коо! апд Ч!а)с 1993; Аугеа ес а1.
1994). ТЬе ч)тпа лпсегасп ехсепяче1у чдсЬ сеПц1аг ргосеяеа апд асс(чту Ыос)са арорсож (С!епл е1 а1. 1991; С1еш апс1 Млдег 1993; Сгоо1с ес а1. 1993; ВкпЬашп е1 а1. 1994), ап апбчлга! деГепае плесЬашяп (С!епл апс) Млдег 1993). ТЬе ч)тпа соптго1а лп Ьоа1 а1 1Ье огдапЬ- гпа!!ече1 аа лчеП аа ас Йе пю1есп!аг апд сеПп!ах 1ечеЬ. Рог ехагпр!е, 1Ье члгпа сопсаша а депе епсогПпд а с)РР-81псоае стопа(егаае сЬас асса ареслдсаПу оп есдуаопе, йе спа)от тпо16пд Ьогшопе оГ (паесся 1Ьм адолч(пд йе члгпа со Ыос1с шо!6пд апд рпра6оп оГ ля Ьоас (О'ПеП1у апс) Млдег 1989). Педп!асюп оЕ Ьасп1оч)гы депе ехргеяюп арреагв сЬы Еаг со Ъе сопстоПед рпплап1у ас йе 1ече1 оЕ сгапаспрслоп. АсМ)4РЧ депеа аге сгаплспЬед лп йгее Ьаяс РЬааея еаг!у, 1асе, апд чету 1а1е РЬааеа.
Еаг1у РЬаае депеа арреаг со Ье сгапаспЬед Ьу Ьоас П)4А ро!угпегаае 11 (Сгп!а ес а). 1981; НпЛ апд Хеачег 1990а,Ь; Ноореа апд ПоЬтшапп 1991; Сдос1сег ес а1. 1993), Ъпс еаг1у депе сгапаспр6оп Ь асЫл6опаду плоди!асед Ьу 1Ье ргодпсп оЕ ас )еая 1Ьгее еаг1у ч(та! депеа, ге-), ле-2, апд ре-38 (Спаппо апд 5шпгпега 1986; Сагаоп ес а1. 1988; Кочаса е1 а!. 1991; 1лл апд Сагасепз 1993).
Тгапаспрсюп оЕ Йе 1а1е апс) чету 1асе депеа личо!чеа а чЬпа-шсЬкет) а-аплапЛлп-геяЬсапс П)4А ро1ушегаае (Сгп1а ес а1. 1981; НпЬ апс) ЪЧеачет 1990а,Ь; Ъапд ес а1. 1991). ТЬе 1ассег арреага со Ье епсос)ед ас!еаас лп рагс Ьу йе титы (Раыагерд ес а1. 1994). 1.асс апс) чету 1асе депе сгапаспр6оп (ь с)ерепс)епс оп РХА гер1лсабоп (Соте)оп апд Сагасепа 1984; рдсе апд Млдег 1986; 1 и апд Сагяепа 1991; 1.п апд Млдег 1994). А11ЬопдЬ сЬе чита! РНА гер!ка6оп оп'- д)па Ьаче пос Ьееп дейпед, елдЬс гед(опа )сполчп ав "Ьопю1одоы гед)опт" (Ьп) аге гПарегаед лп йе чиа) депотпе апс1 арреаг со асс ал опд(па оГ РХА гер1сса6оп Еог р!аяпкЬ лп стапяеп1 ехргеаяоп аааауа (Реагаоп ес а!.
1992; Коо! ес а1. 1993а,Ъ); сЬе Ьошо!одою гед(опа а1ао Ьаче епЬапсег-П)се Еппсслоп Еог еаг!у депе ехргеаяоп (Спаппо апд дшплпега 1986). Опдш-ареслйс р1аяпЫ РНА гер!кабоп сап Ье иаил-асстчасед Ьу сЬе адгП6оп оГ сеп члга! депеа, )пс1пд)пд йе йгее депеа Ычо!чед ш еаг!у депе гедлл1а6оп (Коо! ес а!.
1994; 1.п апд МП!ег 1994). Орсппа! ехргеаяоп Ггош а 1асе герог1ег депе )п сгапяепс ехргеяюп амауа гецпЬеа 1Ьеае сеп депеа апд е(дЬ1 адгП6опа! депеа, аП оГ лчЬлсЬ шйпепсе йе а1еаду-асасе 1ечеЬ оЕ герогсег депе ехргеаяоп (Еп апд МП!ег 1994; ТосЫ ес а1. 1994). Ттчо оЕ йеае депеа епсот(е ргосе(па чдсЬ пюйа сопхегчес) ш йе 1агдеас апс) аесопд 1агдеас апЬпп(са оГ еп)сагуо6с апд рго1сагуоск П)4А ро1ушегааеа, апддеас)пд а гПгесс го!е ш сгапаспр6оп (1ш апд МлПег 1994; РаяагеПл ес а!. 1994). Оп1у опе Гас!от ареслдсаду аГЕессшд чету 1агде!асе депе ехргеяюп Ьав Ьееп Ыепбйес1 1Ьпь Еаг, апс1 й|ь Еассог !а ге!асед Ьу тел)пепсе шослуа со сЬе Х шседтаае Еапп1у (МсЬасЫ(п апс1 МлПег 1994). А11ЬопдЬ йе еаг!у Ыга! ргопюсега аге 1агде!у гепппЬсепс оГ ВНА ро1ушегале!! Ршплосегя 1асе апд чету 1асе ртошосега оГ Ьасп)оч(тпаеа аге ппыпа! апд арреаг со 1ас)с "прасгеапл-аспчабпд аес)пепсез (Гог геч!елч, р1еаае аее О'Под!у ес а1. 1992).
ВосЬ!асе апд чету 1асе ргошосега сопсалп ап еяепба1 аес)пепсе, ТААС, ас сЬе сгапаспрбопа! яагс ысе. ТЫа аес)попсе Ь ргоЬаЫу шГВскпс со легче ав а "1асе ргопюсег" Гог сЬе печ ПЕ4А ро!утпегаае, а1йопдЬ йе сопсехс оЕ йе ТААС лет)пепсе, еаресладу йе 5 ог 6 Ьр ппшед(асе1у прягеатп апс) с1олчпасгеаш Гголп йе ТААС, шдпепсеа сЬе ехргеиюп 1ече! (МоггЬ апд МлПег 1994). Рог йе чету 1асе ро1уЬедпп ргошосег, йе 50 Ьр Ьестчееп 1Ье ТААС апд 1Ье сгапа!асюпа! яагс содоп оГ йе ро)уЬедпп ореп геас щд (тате аге гет)шгед Еог йе тпаятче сгапаспрс)опа) ас6чабоп оЬаегчед дпппд сЛе чету! а1е РЬаае оЕ шЕес6оп (Оол ес а1.
1989). ТЬеае 50 Ьр лпс!пйпд сЛе ТААС тел)пепсе аге апЕВслепс, ш йе сопсехс оЕ йе чка1 депопле, со дтлче ЬлдЬ 1ече1а оГ ро1уЬедпп ог Ьесего!одою депе ехргеаяоп дпппд йе чету 1асе РЬаае оЕ лпсес6оп. Мпсасюпа чдйлп йЬ 50-Ьр тед)оп шдпепсе хсеаду-яасе 1ече!а оГ шКИА Ьу айесс)пд сгапаспрсюпа! шЛсаслоп гайег йап шПЛ)А сшпочег га1еа (Оол ес а). 1989). ТЬе сЬоке оГ рготпосега плед сот Ьесего1одопа депе ехргеаяоп Ь 1Ьпа а сгпсла1 десепшпапс оЕ лчЬеп апд Ьотч шцсЬ депе ехргеаяоп осспгя Нолчечег, йе сопсехс оГ йе сгапа)абопа1 лшсласюп сос!оп апс! асЫлбопа! 5' 1еас)ег апс) 3' 1гал!ег сап а1ао ехегт аотпе ейесс. 5(псе ро1уЬедпп ргопюсег-с!пчеп ехргеаяоп шЖасеа -20 Ьопп айег шЕессюп апс1 сеП 1уяа доел пос осспг ппсП 72 — 94 Ьопга роа6пГесбоп, 1Ье чету 1асе РЬаае епсотпраиеа -30 — 50 Ьопп оЕ шсепае депе ехргеаяоп. Чеку ЛлдЛ (ече Ь оЕ ро1уЬедпп плП)4А аге ргодпсед дпппд ЙЬ 1ппе, апд ро!уЬедпп сопасПпсеа -2596 оЕ сЬе соса! Ртосеш оЕ сЬе ш(ессед сеП Ьу йе 6тпе оЕ 1уяя 5)пи1аг 1ече1а оГ ехргеаяоп Ьаче Ьееп оЬаегчед Еог аечега! асаЫе ргосеша епсодед Ьу Гоге(дп депеа р1асед подет йе сопсго! оЕ йе ро!уЬедпп ргопю1ег ш Ьасп!оЫгпа чессогя ()опаду, Ьолчечег, Еогелдп ргосеша аге ехргеяед ас а аоспелчЬас 1олчег 1ече1, суркаду Ьеслчееп 19о апд 109о оГ соса) сеПп1аг ргосеш ГиГЬттаг(оп РапеЬ 17.83 Васи!оч1гиь Чес1огз 1)п01 гесепс1у, гесоп|Ь|папс Ьаси!олгпзез |чете ргот(псег) Ьу сосгапз(есПпд зсаЫе Пиеа оГ си1сиге|1 |пзесс седа мчсЬ 1шеаптес) Ьаси1оч|гы РВА апт( а сгапзуег р1аяпЫ саггу|пд сЬе Гоге)дп депе ЬеЬ(пт( а ягопд ч|га! ргопюсег (ыпаду йе ро!уЬедпп рготпосег).
Опсе !пзЫе йе сеП, Ьотпо1одоиз гесои|Ь|паиоп Ъеьчееп сЬе р1аяпЫ апс( сЬе ч!га! депо|не депетасес) а гесошЬюпаш сЬас сагпез сЬе Гоге(дп депе ш р1асе оЕ йе епл)одепоы ро!уЬе|1пп депе (5иий ес а1. 1983; Мает(а ес а1. 1984; Реппос1| ес а1. 1984; Сот |поте сошр!есе л(езспрПопз оЕ йе п|ейой р1еазе зее К|пд ап|1 Рояее 1992; О'Пед(у ес а1. 1992; ! пс(со|ч 1993; МП1ег 1993). ТЬе Ппеаг!хес( Ьаси1оч|ты Р!1А изет! Еог сгапзГесиоп Ь оЬса|пе|1 Ьу йдезипд йе депогпе оЕ ап АсМ)4РЧ чессог сч(й гезсгкПоп епхуи|ез |Ьас гешоче а герогсег депе (Гас_#_ ог ОРР) апт( рагс оГ ап еяепПа! Ьаси!олгы депе. ТЬе гезп1сшд!шеаг РВА Ь пошпЕесПоиз апг( саппос депегасе лаЫе ргодепу лгпзез пп1ея и гесои|Ь|пез сч(сЬ |Ье сгапзЕег р!аяпЫ (К|си ес а1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
