Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 61
Текст из файла (страница 61)
А гоЬиьт йеоге6са! ип|!егршшпд Гог зЬ)ь агди|пепз Ьаь Ьееп ргочЫе|1 Ьу Сапп !1989) ъчЬоье са!си!а6опь ьЬоъч |Ьаз |Ье орззша) гапде оЕ сопсепзгат|опь оГ Р)ъзА |и ьтапбаЫ де1 гетагбазюп аяауь )ь ! х 10 "|о 5 х 10 "м очет а гапде оГЬ|псдпд сопьтапп Егоп| 10ь то!Оь м', ъязЬ зЬе орзипа! гатю оЕЪ|п|1- зпд ргозе|п зо Р)ъ)А чагушд Етотп 05 Еог ьзгопд шзегастюпь то 10 ог пюге Гог ъчеа1| шзегасзюпь. Меаьог!пд О!ььос)аГ!оп СопьГапГь оЕ РгоГе)п-0)ъ)А Согпр1ехеь Ьу Се1 КеГагтГа11оп '1о шеаязге |Ье ча1ие оЕ К, йе йьюс|а6оп сопьзапз Гог а ргозеш-РуьА сопзр1ех, а ьепеь оЕ Ь|псдпд геасзюпь аге ьез ир ияпд а ъчЫе гапде 1Еоиг зо ях ог|1егь оГ шадп)тиба) оЕ рготе|п сопсепзгазюпь.
ТЬе аип 6 то Ппб йе сопсептгабоп гез)и)тес! |о Ь)пд Ьа)Е оЕ |Ье Р)ъ)А. ТЬе Паза аге депегаду р1оззе6 аь а Ггастюп оЕ |Ье Ггее Р)ъ)А Гиьиаду еьзипате|1 Гго|п |)епязотпетгу оЕ де! Ьапбь) чегьы 1одщ сопсепзгабоп оЕ ргозеш ш йе Ь~пгдпд геас|юп. ТЬе ецшПЬпшп сопяапз сап йеп Ье еь|1шазе6 Ггопз |Ье геьи16пд ядшоЫ сигче ргоч)6е6 !1) |Ье га6о оЕ рютеш зо ачадаЫе Ь|псдпд ьпеь аз |Ье шЫрошз оЕ |1ъе |еасбоп ! — К ) )ь > !О !Сяеу 1988, 1991), Г2) ч|гшаду аП оГ йе Р)ъ)А |и |Ье геасзюп сап Ье Й пъ еп |п|о соп|р1ех Ьу а чаьз ехсем оЕ рго|е|п, ап6 !3) йе ехреп|пепта! Пата Пз а йеоге6са) Ь|птдпд сшче са)си1азе6 Еготп ап ес)иасап Пеьсг)Ь)пд Ь|псдпд Ьетъчееп |п|1ерепс)епс ап6 еОЫча1епс язеь. рог попсооретат|че ш|егастюпь, ап шсгеаье оГ !.81 1од,а ипдь ш ргозе|п сопсептгазюп )ь тес)и)ге6 зо шсгеаье |Ье Егастюп оЕ Р)ъ)А арреаппд зп сотпр!ех Поп| 109о то 909о.
Реч|аз|оп Гго|п |Ыь ча!ие |псдсасеь |Ьаз Ь|псдпд Гь соорегабче ог )ь оссигппд ат гпи16р!е язеь. 'ъта!иеь <!.8!одш иппь шйсате роя||хе соорегаззч)зу |Гиппд |Ье Ь|пгдпд геасзюп: ъта!иеь >!.8 1одщ ипдь |пгдсате педабче соорегаз)ч)зу ГСагеу !991). МоЬ11!Гу о1 РгоГе1п-0)ъ)А Согпр!ехеь ТЬгее гпа) ог Гас|ать аЕГесз |Ье газе оГ пидгазюп оГ ргосе)п-Р)ъ)А сошр1ехеь |ЬгоидЬ де1ь. ТЬеье а ге йе тпаы оЕ |Ье рготеш-Р)ъ)А сотпр!ехеь, йе|г очегаП сЬагде, ап|1 |Ье сопЕоппаз|оп о! |Ье РХА ъч)тЬ)п |Ьеш. Аь а депега! ги1е, йе тпоЬ|1пу оЕ |Ье сотпр1ех )ь ге1азе|! зо |Ье яте оГ |Ье !гее рго|е|п !Сагеу 1988). ТЬиь, |Ье тпоЬ|1|6еь оЕ йе гезагбе6 ЬапбыуркаПу Песгеаье аь а пюпо|оп|с йшсзюп оЕ рготеш |пап !е.д., р1еаье ьее 17.80 СЬаргег 17: А па!уяз оГ Сепе Ехргезяоп |и Си)зачес! Матта!!ап Се11з Норе ап6 5сгиЫ 1985; Весегипег ес а1, 1989).
!Е, Ьоъчечег, йе Ьоппд ргосеш Ь ЫВЫу асЫк ап6 сагг|ез а зсгоп8 пе8ас|че сЬаг8е, сЬе тоЬПиу оГ |Ье сотр1ех и|ау пос Ье арргес|аЫу 61ЕЕегепс Ггоп| |Ьас оЕ па1|е|1 РХА. ТЫз ргоЫеп| сап Ье ю!че6 Ьу саггуш8 опс е1ессгорЬогеяз ас 1оъч рН (Сагеу 1988). А тоге га6)са) г(ейа6оп |п п|оЬ|!Пу оссигз ъчЬеп Ь|псПп8 оЕ ргосеш |п|1псез ЬепгПп8 оЕ сЬе РХА 6 а8- гпепс. ТЬе тоЬ|!Пу оЕ йе "Ьепс" соп|р!ех Ь |Ьеп 1оъчег (зотесппез Ьу а сопя|(егаЫе апюипс) сЬап пп8Ьс Ье ргесПссед ятр1у Егогп |Ье |пая оЕ сЬе Ьоппб ргосе|п. ТЬе Вгеасег |Ье ап81е оГ шбисед Ьепй сЬе Вгеасег |Ье гебпс6оп ш |поЬ|16у (Коо апг) Сго|Ьегз 1988).
Еиг|Ьеппоге, |Ье с!озег |Ье 1осасюп оГ сЬе Ьепб со йе т(сЫ!е о! йе п|о!еси1е, йе з1оъчег из и68га6оп. ТЬ|з роясюп еЕЕесс Ьаз Ьееп изе6 со псар сЬе!осасюп оЕ ргогеш-)ибисе6 Ьеп|Ь ш РХАз (е.8., р1еазе зее ъъги ап6 Сгойегз 1984; Кип е| а1. 1989). !п Вепега1, сопЕоппасюп-!пдисес1 еЕЕессз аге (1) та8ш6е|1 ъчЬеп РХА соп|р1ехез аге апа(уге6 Ьу е!ессгорЬогеяз ас 1оъч сетрегасигез |п йе ргезепсе оЕ МВ|ъ (Р|е1|гпапп 1987) ап6 ш Ве!з ъч)сЬ япаП роге яхез (Манш ес а1. 1983) апд (2) гебисед ш йе ргезепсе оЕ РХА-Ьшйп8 68апдз зпсЬ аз сПзгатусш ( ъ'ъги апъ! СгоСЬегз 1984).
Ргасс!са! Мас(егз !п а|ЫПюп со йе йеогебса1 тассегз йзсызес1 аЬоче, |Ье ргасска1 абчссе йас ЕоПоъчз и|ау Ье изе6|1 со сЬе Пгзс-сапе изег оГ Ве1 гесагбасюп аяауз. ° бе! тагпсез. 598 ро!уасгу!атЫе Ве1з аге изе6 со апа1уге сои|р!ехез Еоппеб ъч)сЬ РХА Ега8шепсз >200 пис!еосЫез |и 1еп8сЬ; 1Оай ро1уасгу! ап|Ые Ве1з аге ВепегаПу пзе6 Еог зЬогсег РХАз.
А8агозе Ве1з аге пос изе6 пп!ея сЬе исая оГ сЬе Ь~пгПп8 ргосеш(з) ог сЬе РХА Ь чегу 1аг8е (>1 )сЬ Ь Весаые оЕ йе(г 1аг8е роге ягез, а8агозе Ве1з саппос ъ!есесс ргосеш-(ибисы ЬепсПп8 оГ РХАз. ° Е!есггорЬогеяз Ьа2гегз. Мозг ргосе|п-РХА согпр1ехез аге зсаЫе ап6 саггу а зПВЬ| пе8ас|че сЬаг8е ас пепсга1 рН, апс! |Ьпз 05х ТВЕ Ь |Ье зсапс$аг6 ЬпЕЕег о( сЬо|се.
Ноъчечег, ш сЬе япаП пипопсу о( сазез ъчЬеге йе ргосе|п сотропепс оГ сЬе согпр1ех сагпез а зсгоп8 пе8абче ог роя6че сЬаг8е, и |пау Ье песегаагу со ые асЫ (е.8., ТАЕ ас рН 6.0) ог аП|а1ше Ьийегз (е.8., 50 тм Тпз-8!усше ас рН 9.2). ° Аг(|Е(г!оа о) саглег РХАз. Рп1аЬе!ед сагпег РХА Ь ВепегаПу асЫед со |Ье Ь(и|Пп8 ппхсые со е!ишпасе попзрес|6с Ь(п6(и8 оЕ ргосе|пз ргезепс ш сеП ехсгасЬ со |Ье гасПо1аЬе!ед саг8ес РХА. ТЬе аип Ь со а|Ы)ыс зпГ6с|епс сагпег со аЪзогЬ аП оЕйе ргосе|пз сЬас Ь(пь! попзрес|6саПу со РХА чбсЬоис айесс|п8 |Ье Ыпескз оЕЕоппа6оп ог |Ье зсаЪ|16у оГзрес|6с сотр!ехе|Нпчо!чш8 сЬе саг8ес РХА.
ТЬе аиюппс оГ сагпег гес)шге6 |п а рагбсп!аг с|гсшпз|апсе и|ыс Ье десепшпе6 етр|гкаПу, Ъис |ЬЬ саз)с Ь гаге1у опегоы Ьесапзе |Ье гап8е оЕ ассерсаЫе сагпег сопсепсга6опз Ь пзиаПу ъ)шсе Ьгоай! Е соо ишсЬ сагпег Ь ыей попе оГ йе саг8ес РХА ъч|П Еопп соп|р!ехея (Е соо 1Пс!е сагпег (з изес(, аП оЕ сЬе ргоЬе М11 Ь!п6 попзрес!6саПу со ргосешз |п сЬе ехсгасс ап|1 чНП йегеЬу Ье ргечепсе6 6от епсепп8 |Ье Ве!.
Е. со6 РХА ъчаз сЬе 6|зс сагпег РХА со Ье изед аз а поырес|6с соспре6|ог |п Ве! гесагба6оп аяауз (5сгапзз ап6 'ъгагзЬачз)су 1984), ап6 сЫз ъчаз ЕоПоъче6 Ьу еп(сагуос)с сЬгои|озоп|а! РХАз оЕ ЫВЬ сотр1ехПу (е.8., са!Е сЬугпы апс( Ьшпап РХА). Ноъчечег, |Ье розяЬ|1|су |Ьас йезе РХАз ииВЫ сопса|п зрес|6с Ь)п6)п8 ясез Сог йе ргосешз ппс)ег зссЫу с)икИу 1е|1 со сЬе|г гер1асегпепс Ьу зуп|Ье6с а!сегпас|п8 сора!у|пега зпсЬ аз ро!у(дА-ПТ).ро1у(дА-ПТ) ог ро!у(61-ЙС) ро1у(61-дС) ог Ъу йе ро1уя|1Еасе|1 сагЬоЬу|!гасе Ьерапп (Сагйеъч ес а1. 1985; ЯпВЬ ес а1.
1986). ° Соуассогз. Сегсаш сгапзспр6оп Еассогз, рагскп1аг1у |Ьозе оЕ рго)сагуо6с оп8(п, гес)шге |Ье ргезепсе оЕ а зрес|6с соЕассог Еог ор6тшп ЬшсПп8. ТЬе САР ргосе|п, Еог ехатр!е, |1ереп|Ь оп сАМР Сог Ь|псПп8 (Епеб ап6 Сгойел 1983), ъчЬегеаз йе сгурсорЬап гергеяог Тгрй гес(шгез сгурсорЬап Еог еЕ6с|епс Ь~псПп8 (Сагеу 1988). ° Ехггасгз.
МапипаПап РХА-Ь~пгПп8 ргосе!пз аге изпаПу ъ(есессаЫе !и сопсепсгасеь( 1узасез оЕъчЬо1е сеПз ог |п ехсгассз оЕ пис!еаг ргерага6опз. ТЬе тесЬобз со ргераге йезе ехсгась Ьаче 1ои8 япсе Ьееп ор6- т(хе6 (е.8, р!сазе зее Р(8пагп еС а1. 1983; СЬобозЬ еС а1. 19868| Ка6опа8а ап6 Трап !986; 5(п8Ь е| а!. 198сс) ап|! сЬеге Ь Псс!е ротс ш сгуш8 апуй|п8 пеъч апъ( Еапсу, ас 1еазс |1игш8 йе ш|6а! рЬазез оЕ сЬагассепхасюп оГ а пеъч РХА-Ь|пйп8 ргосеш ° Яле оЕЬоиа|Е ргоге|ая ТЬе яхе оЕ а ргосеш ш а ргосеш-РХА согпр1ех сап Ье теазпге|1 Ьу сгозз-1ш1|- ш8 ъчссЬ ()3| |ггасПа6оп ап|1 йеп геюЬЕп8 йе согпр1ехез Ьу 5Р5-ро!уасгу!агпЫе Ве! е1ессгорЬогеяз.
1п |папу сазез, йе ргезепсе оЕ а ргеЫоы1у сЬагассегие6 РХА-Ь(псПп8 ргосеш сап Ье сопусгшеь! Ьу пптипо!о8(са! апа!уяз. Ап апс(Ьобу сЬас Ь~п|Ь зрес!6саПу со а рагскп1аг РХА-Ь!пдш8 ргосеш сап еПЬег ргечепс Еоппасюп оЕ а зрес|6с ргосеш-РХА сагир!ех ог Епгйег гесаг|1 ("трегй|6") йе е1есСгорЬоге6с тоЬ|16у оЕ йе сотр1ех (Кпзбе ап|1 По(лпап 1986). 1п)Ьттаттоп Ратге1з 17.81 ВАО)ЕОЧ!ЙТ)йЕВ АМО ВАО)ЕОЧ!ВТ)$ ЕХРВЕВВТО(ЪТ $|тЬТЕМВ Васи1оч|гыез саые а "|пе(сшд" йзеазе оГ!ер|дорсегап 1агчае (е.д., яП(съчоття) йас Ьаз Ьееп зсийед Ьу т(сгоЬ|о1од(ясз япсе |Ье пшесеепй сепшгу. Тп |Ье 1940з, Рг. С.
Вегдо1д дьсочегед сЬас тапу год-йаред Ыгы раг6с1ея ("Ьаси!о" теапз год) |чете егпЬеддед чдй|п йе ро(уЬедга1 сгуяса!я (-2 рсп |и йаспесег) 1|поъчп со Ье |Ье йяеаяе адепс оЕ п|е16пд дьеазе (Вегдо1д 1947). Ригйеппоге, йезе год-йаре|1 Ып|з раг6с1ез сои1д Ье ге1еазе|1 (тот йе ро1уЬес(га Ьу сгеасгпепс чд|Ь аП|а1ше яо1ибопз зисЬ аз йозе Гоипд ш |Ье тпЫдш оГ |Ье Тпяесс Ьояс.
ВеяеагсЬ дигшд йе 1950| апд 1960я ъчаз аипед ат ипдегясапйпдчиа! Райодепеяз, рптап1у Ьу е!ессгоп ппсгозсорк апа1уяз (Нагтар апд ПоЬегсяоп 1968; Тапада апд Ьеитепеддег 1968, 1970; Наггар 1970; дипнпегя 1971; 5со!сг апд дшпп|еь 1972). Оиг сиггепс ч|еьч оГ Ьоъч Ьаси1оч|гыез саые йзеазе еп|етдед Ггогп сЬезе я|ийея. ТЬе стузса1з зсийед Ьу Ветдо1д аге |Ье осс1идед Еопп оЕ а зиЬзес оГ Ьаси!оч|гияез 1|поъчп аз пис!еаг ро!уЬейояя сдгыез (НРЧя), ТЬе стуяса1я (а1зо 1|поъчп аз ро1уЬес(га1 шс!ияоп Ьойез ог Р!Вя) аге |пдезсе|1 Ъу йе |пзесс апс! зо!иЬПье|1 ш йе ньесс тЫдис, йе ргипагу ясе оГ (пГес6оп.
ТЬе тЫдис се!Ь апд осЬег сеПз чдс)дп сЬе Тпяесс ргодисе РТВя ая ъчеП аз а зесопд Сопп оЕ сЬе ч|гы, йе Ьидс(ес( ч(тия (ВЧ) йас ь гезропяТде Еот зуясеспк |п(асс|оп оГ йе Ьояс ап|1 ь сЬе |пЕессюиз Гопп ш сеП си!- сиге. Ву йе 1асе 1960з апд еаг1у 1970з, шзесс сеП 1шез |чете еясаЫьЬед сЬас сои1д зиррогс Ьи|Ыес! чйы гер1|са6оп аз |чеП ая йе ргодис6оп оЕосс1идед ч(гия (Стасе 1962; Соодтдп ес а1. 1970; Нш1|! 970, 1972).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
