Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 57
Текст из файла (страница 57)
ЪЧЬеп йе Яогеп сеПк аге 1агег ыеЯ, йеу кЬои!г) Ье течтчеЯ апс) 8гокчп !и ке1есЯоп тоеЯтипг соогаюто8 500 )гм 'сПЯкг!г)!по1, 3 и8/то! риготоус!и, аиг! 0.5 08/го! геггасусПие-НС1. 17.68 Сйарсег 17: Апа!усй оЕ Селе Ехргея|оп т Си)сигег( Матта(|ап Се!15 СТАСЕ 3: Апа!уыил ог РгоФе1п ЕхргеВВ1оп 1п ТгапВтес$ед Се!Ь Тсчо ссгаСеа|ек аге ргесепсес! |ог апа!ух)па ехргессюп оЕ йе саг8ес ргосеш(с) ш сгапьЕессес| се11я ! п йе спаш ргососо1, ссаЫу сгапаЕессес( се!15 (ойсашес! ш сЬе Вгсс ссчо ссааес оЕ сйсс ргососо1) аге )пс(исес| Еог ехргесяоп оЕ йе сагаес депе. АЕсег Ьагчесс)08 апд 1уяс оЕ сЬе се116 сЬе !уса!ее аге апа!ухес1 Ъу 5Р5-ро!уасгу!ат|с(е це! е1ессгорЬогеяя апс( сагаес ргосе|пс аге с(есессес( Ьу пппшпоЫос6п8. Ап а1сегпа6че ргососо1 с|ессг)Ьес сЬе сгапяепс !галс(ес6оп апс| |пс|иссюп оЕ сгапяепс1у сгапсЕессес( сесгасус!ше-ге801асес! р!аяп|с!я МАТЕК1А15 САЕ)Т!О)с)с Р!еасе аее Аррепс!1х 12 Сог арргорпасе Ьапд||пе оЕ псасела15 спаг1сед ипй <|>.
В6ЕЕег5 апс1 Ьо166оп5 Р!еаье аее Аррепб!х 1 Еог сотропепо оЕ сСосЬ со|и6опь, Ьи(сегс, апс! геадеп|я Р!!иге МосЬ ьо!иС!опт Со СЬе арргорпа|е сопсеп|га6опя Сагхегит 1107о) Рйоьрйасе-ЬиЕЕегегЕ зайпе сх Ргогет сатр1е Ьиссег Ап6Ьос1се5 Аппйосйес арргорлаге Сог с(еСесс)л8 сйе Саг8ес ргогеслс оЕ тгегесс Ьу ЕттипоЫоспп8 Се!5 уг(ь-8!ус|по 5О5-ро)уасгу)атсс(е Пес < ! > Сасс йе ае! гай а сопсепсгасюп оЕ асгу!аш|с)е сЬас ь арргорласе Сог ойсегчша сЬе сагаес ргосеш(с). Р!еасе сее Аррепйх 8. Мес1!а 5е)ес6оп тесоит сопсаспсп8 500 рм с-йсьйхопо1 апгЕ 3 рфт1 риготуст (сч)сй ог игссйоис 0.5 081тс сесгасусйпе) Ь!ссгаспе-йее РМЕМ 100 ипгийп! решсс11ш 100 Сса)ш! ссгерсошус1п 2 гпм а!исрп)пе СООА Ьоппе са!Е сегшп 500 рм с-Ьсссгаспо! (й!ше Сп а 125 шм ссос|с апс! ссоге Ь ас -20'С) 5 ссайп! ригогпуссп Нйпсопе-Егее РМЕМ Ь ача)1аые Егосп!сапе 5ссеп66с (5апса Апа, Са!!Еогп!а).
АсЫ сесгасус1спе со 0.5 распс! счЬеп арргорпасе (ргераге а 10 гпасш! яос!с ог сесгасус!!пе-НС! сп 70чо есЬапо1 апс! яоге ас — 20'С). 5е|ессюп гпеспипс сЬас сопсашс 0.5 пайп! сесгасус1ше-НС1 шау Ье ссогес) ргосессес! Л.огп йе !)айс Еог -С псопСЬ ас 4'С. йрес|а! Ес161ргпепЕ Вогйп8 счасег Ьагй Ро!уч|пуйссепе еййиолс1е (РС ОР) тегпЬгапе Ас1Й6опа1 КеацепЕь 5сер 13 оЕ ЯЬ ртсосос гегсисгеь геа8епо апсс егсисртепг Еог )ттипоЫогбпд ас Ессгесс сп Аррепсйх 8. Се115 апс1 Т|556е5 5саЫе сеП Плес сйас Еле(ис|Ыу ехргесс аисоге8и!а!игу суА алс( солса)п сйе р(астсг(ь Лагйогсп8 Сйе Саг8ег Пепес оЕ тгегесг Т7.70 Сйаргег )7; Ала!уж о~бепе Ехрггь|оп т Сийигед Магита!|ап Се!!1 АЕТЕКЬ)АТ! ъ)Е РКОТОСОЕ: ТЕТКАСУСЕЗЬ)Е-КЕСъ)ЕАТЕР 383331)СТ1ОЬ) ОЕ СЕВ)Е ЕХРКЕ553ОЬ) 1Ь) ТКАЬ)51ЕЬ)ТП' ТКАЬ)5ЕЕСТЕ33 СЕЕЕ5 й)Ы)ъ)С ТНЕ Аъ)ТОКЕСИ.АТОКУ 1ТА 5У5ТЕМ Тгапяеп1 1гапй(есйоп о1 (е1гасусйпе-геди!а1ес1 р)оп)дх )а ихе|и! |и йечега) я1иа1юлд 1ог ехатр|е, (Ье )п)1)а) 1051)пд 01 1Ье аи1огеди1а(огу йух(егп |и а д)чеп сей Ипе, апд |кгеепюд 1ТА-ехргевяпд сей Илгь (ог )пдг к)Ые ехрге|ьюп о1 апоИЬег Те1 р|йьгпкй 'ъчЬеп 1еййпд (Ье аи1огеди!а(огу 1ТА йуй1ет, |пдисйоп о1 1ТА гпКЬ)А 'ь депегайу а гейаЫе )пд)са1ог о1 )лдосед 1ТА ехргехяюп.
АМеглайче(у, |Ье чес(ог рОНС13-3 ((3!е ТесЬпо(одея), и ЫсЬ епсодей 1исйегазе ипс|ег (е(гасусйпе соп(го1, тау Ье (гапяепг|у Ьапй(ес(ед |п1о сей Ипей (Ьас аге сараЫе (ог аге Ейе!у со Ье сараЫе) о1 1ТА ехргейй)оп ((уатйе е( а!. 1995). Тгапх(ес(ед сейй аге |Ьеп си1(игед (ог 3 12-48 Ьоигй |п 1Ье ргейепсе апс| аЬйепсе 01 (е|гасусйпе, йисйегайе ж((ч3(у |и сей 1уйа(еа сап Ье еая|у п|еа|югес| (ияпд а 41 ачаь ЬЬ !е Кот Рготеда) апд 'ь поги|а! дед ЫТЬег 1о СоСа! рго1Ы и, десепп|пед ияпд а Вгас|(огд рго1е|п аййау, ог 1о а 1гапъ(есйоп соп1го) (Оат)ъе е| а|.
1995). А )МРОВТАЬ)Т Ве аъчаге 1Ьа1 |Ье Ььа) ехргеь!ои о( )е1гасус))пе-сопсго))ей деиеь сзгиед |и |гапдеийу 1гаидес|ей р)аъги)дх Ь йепегайу Ыдйег )Ьап |Ье Ььа) ехргеь!оп о| ягийаг деиех )и ъ|аЬ)у |гапдоииед сейя |и айй)1)ои, |Ье Ь)8Ь ъепхьчйу о( 1Ье |исйегаъе агьау гиау йеиегасе гп)ър)асей ор))ги)яи аЬоЫ (Ье е(йе)еису о1 |ийисед ехргеъъ)оп оНе|гасусйпе-геди|а|ед депея Ах |оид аъ |Ье гехи)1ь аге )п)егрге1ей ч81Ь саи()ои, 1гапяеи1 |гапдссйои ъч11Ь р)аъги)дк якЬ гь рОНС1 3-3 ойеь а гарИ гие|Ьой 1о ъсгееи гпапу с)оиеь )п а ъйоа реиос| о1 1)гпе.
АддК1опа! Майепа! й Сайзегит 110%) Сейй аррюрпа(е Тог 1гапяесйоп Мегйот сол(а|и|од 0 5 ид(т! 1еггасусйие НС! аррюриаге Тог дгоъчпд 1Ье се!!1 (о Ье (гапх(ес(ед Ргераге а 10 гид)ги) яосй о! Се)гасус))ие-НС) |и 70% е(Ьапо) апй а|иге й а| — 20"С. Ай гией)а иъей |и 1Ьь ргоако| (ъч1Ь ог чд|Ьои1 |Ье ъе)есйоп геадепЬ) сои1а)и)пд 0.5 ифп) СеСгасус()ие-НС) гпау Ье ъ|огей рго)ес)ей 1гогп (Ье йдЬ| 1ог -1 гиии)Ь а1 4'С. руе(-1ТАй рТе1-5р3|се саггу)пд 1Ье (агде( депе ог РТе05р!ке саггу|ид а герог(ег гпагйег ТЬе р)ахги)дь руеНТВь аид руе1-5р|ке аге ачайаЫе |гоги 13(е Тесйпо)од)еъь РЬоарПа(е-Ьойегед йайпе (Р85) 51ер 2 о! 1Ь!й рго(осо! гег)о|гей 1Ье геадеп(ь йй(ед гп 1Ье арргорпа1е (гапх(есйоп ргогосо! ги СЬаргег 16. 51ер 8 гедотез 1Ье геадепя йй(ед гп СЬар1ег 6, Ргой ко! 8; СЬар|ег 7, Рго1осо! 8; ог Аррепгйх 8.
МейЬод 1. ТЬе п)дЫ Ье|оге |де (гапй(есйоп, (гапй(ег ИЬе сейй )п(о |Ье арргорпасе тесйипь соп1а)п)пд 0.5 ифп) (е(гасус!)пе-НС1. 2. Тгапй(ес( йеткопйоеп( си)(игей о1 сейь ияпд рТеИТАЬ а1опе ог |и СОГПЬ~пайоп ъчТЬ а чес(ог саггу|пд (Ье Сзгде( йес~иепсе (рТе|-5р|юе сапу)пд (Ье (агде| депе ог руе(-5рйсе сап)йпд а героиег тайег) иялд (Ье рге(епед тейюс) о1 оагь(ех)|оп 1ог 1Ье се)35 ипс|ег й(иду (1ог а йейекйоп 01 (гапй(ес(юп рго1гкоЬ, р)еайе йее СЬар(ег 16). 3.
)4)айЬ (Ье сейй |Ьа1 ъчй Ье )пдисед 1Ьгее 1)гпей ъч|(Ь тесйот (асй|пд (е1гасусйпе. Ч~ В -6И . а.гНЬ~у. Г . Н -ЪЪ-а Ъ~У а Ю Ъ~ Г 66 4. Геед 1Ье се(Ь ъчИЬ 10 гп! 03 гиедвги и ТЬ ог ъч(1Ьои1 се1гасус1|пе, аъ арргорпа1е. Синге Иъе се(35 1ог 12-48 Ьвь. 5. Адег 1Ье сейй Ьаче дгоъчп 1ог 1Ье арргорпа1е 1епд(Ь о1 Ипъе, Ьагчеа( 1Ьегп с)и(сй)у апд 1гапх(ег 1Ьегп 10 а (иЬе )п ап )се Ьис)се1. й )Ье се|В аге Ьячгьгей нмпд Еуряи, чаъЬ )Ьегп ъч)Ь ссАЙ РВ5 апд ъ|ор Иь |гуряи )геа)гпеп) ъчйь со)Й тей)нп сопСлп)пд 3 0% сай ъеплп (ч|)Ь ог ъчйюи| Се)гас)с))пе, аъ арргорпаСе). )гатей)аСе)у 1гаиь!ег )Ье ЮЬеь |о аи ке Ьис|се1.
6. ччайЬ уие сей рейеь Ьу адд)пд 1 гп| о1 )ее-со)д РВ5. Рейе1 1Ье сейй Ьу сеп1г)(ид)пд 1Ье10Ьеь а1 3000 грги 1ог 5 т)пи1ех а1 4'С |п а т)его(оде, апс| деп(! у айр)га(е | де я|регпа(аи( ъч|(Ьои( д)й(игЫпд (Ье сей рейе1. 7. 34еер 1Ье сей рейеь оп )се апд )ооаеп |Ьеп| Ьу дел11у апс| с)икй)у гиип|пд 1Ье (оЬех очег |Ье ореп Ьо)еа о1 а гп| ого(оде гас)с Ье(оге (геех)пд а1 — 70ъС ог! уяпд 1Ье се)! й (ог апа| уя й Ы |идос)Ые рго1е|и ехргейй)оп.
8. Апа)ухе 1ТА ог сагде( депе ехргегь)оп (ехрепгпепса! ог герог(ег) Ьу )тгпипоЫои(пд, 5ои(Ьегп ог пог(Ьегп ЬуЬпсйхайоп, ог оИ|ег арргорпа(е аййау. |и се))ь |Ьа) яаЫу ехргьь 1ТА, 1гаиъ)еп| )агде) депе ехргеьяоп Ь деиегайу оЬхегчед ъч|1Ыи 32 Ьоиь. |п се))ь 1гапяепйу ехргеъяид 1ТА аид а )е(гасус))пе-ъепъ|1)че |исйегахе герог|ег (рОНС)3-3), )ис)(егаъе асйч)(у Ьаъ Ь.:еп оЬъегчей Со )псгеаъе Ьу Ьчо огйегь о( гиадийис|е ъч||Ып 20 Ьоиь (о))оъмид )пйисйоп.
Рго1осо! 9 Есдуьопе а~ Веце!аког о1!пдис~Ые Сепе Ехргеююп ~п Магпгпа! ~ап Се! Ь вА|чвсивтюм амтв квсылтю вч втвкоюв осе||к соммо|ч|ч |п а |ч)0е чаггегу оЕ еиКагуо|ея )п 0гоюрЬ)1)а те)аиоХа||ег, Еог ехагпр)е, |Ье гио16п8 Ьогшопе есг)уаопе ь ап )пг)исег оЕ |ие|апюгрЬояя ТЬе г)е8епегаг)оп оЕ 1агча! Ьая|еа ап|1 йе арреагапсе оЕ айй аггисгигеа г)иг)и8 пю1||п8 аге ггщегес) Ьу |Ье |п|егас|юп оЕ есс)ущипе, |Ье пис1еаг есг)уаопе гесер|ог, апс) сЬ-асс)п8 гезропае е)ешепга (ЕсКВ).
ТЬе Еппс6опа! есг)уаопе гесер|ог )а а Ьегегойшег сошроае|$ оЕ |Ье ес|1у|юпе гесер|ог 1 ВсК) апг) |Ье Лггаар)гас)е ргосе|п Е))ЯР), апо|Ьег шешЪег оЕ йе пис1еаг гесер|ог Еаш|1у ('гао е| а!. 1992, 1993). 1п |Ье ргеаепсе оЕ есг)уаопе, йе ||чо ргоге)иа ЕсК апг) ))8Р ш|егас| апг) Ь!пг) |о |Ье г|чо )ичеггег) Ьа)Е-ягеа оЕ есс)уаопе гекропае е1ешеи|я гчЬ~сЬ аге р)асег) ирягеап| оЕ шапу оЕ йе Вепеа шчо)чег) |п РгоюрЬ))а пюгрЬо8епеяа ЕЕог 6|г|Ьег шуопиагюп ап|$ геЕегепсея р)еаке аее Киме!1 1996; ТЬпииие1 1997; ч||Ь)Ге е| а).
1997), Кеаропячепеаа со есс)уаопе гпау Ье гесопа6|ше|1 |и и|а|пи|а!|аи се))а йас Ьаче Ъееп соггапаЕесгес) |ч)|Ь ЕсК ап|$ с)8Р. тА|Ьеп гЬезе се))в аге ехроаег) |о ес|$у|юпе ог |о опе !га апа1о8я я|сЬ аа ропаагегопе А ог шит)агегопе А, |гапаспр6оп оЕ аи есг)уаопе-геаропяче герог|ег 8епе Ь шг)исег) )СЬг)агорЬегаоп е| а1. 1992; гао ес а1.
1992). ТЬе аепа)г)ч)гу оЕ йе гесопаг)гигес) ауя |еш Ьаз Ьееп )шргочег) Ьу сгеа6п8 а пюге рогепс гесер|ог со|ир1ех, |п |чЬ|сЬ (1) 08Р Ьаа Ьееп гер1асе|1 |ч)гЬ )га шашша))ап Ьо|ио)о8, |Ье ге||поЫ Х гесер|ог (КХК), $2) ЕсК Ьаа Ьееп |п|псасе|) а| йе апипо |епшп|ь а|Ы 6ье|$ со йе ||Р16 ас6ча|юп г)оша!п (Ваг)о|ча)с) е| а1. 1988; Тг)екепЬег8 е| а1. 1988а,Ь; Сгеаа апг) Тг)екепЪег8 1991; Ь)о е| а). 1996), апг) (3) |Ье РЬ)А-Ъ)пг))п8 |)о|па|и |чиЬ)п ЕсК Ьаа Ъееп иш|асе|1 ас йгее апипо асЫ гея|$иея а)гег)п8 )ь Ъ|пг))п8 арес)Е|с)- |у со пштис |Ьа| оЕ а 8!исосог|коЫ гесер|ог )СК) (ЕЛпезопо ап|$ Ечапа 1989). 1п ггапаЕессег) се))а аЫе |о ехргеаа Ьо|Ь КХК апг) |Ье пюйргег) ВсК, |Ье а|ЫЫоп оЕ есс)уаопе ог опе оЕ |ь апа1о8в гея|1ь ш йе Еоггиа6оп оЕ 6|пс6опа1 Ьесегой)шега |Ьа| Ь!пг) |о а аег оЕ ЬуЬгЫ геаропке е1ешепь сои!а)пег) |ч!|Ь!п ап !п|1ис)Ые ехргеь)оп чес|ог (Г|8иге 17-10).
ТЬе ЬуЪп|1 гезропае е1егпепь сопякг оЕ г|чо |$)ЕЕегепг Ьа1Е я|ея |АССТСА-', |чЬ)сЬ ь ЬошЫ Ьу КХК, ап|$ ~ АСААСА', |чЫсЬ ь гесо8п)ге|) Ьу йе СК-Ъ!п|$)п8 |$оша|п оЕ ВсК. ТЬ!з ЬуЬгЫ гезропае е!ешеис ь ии)г)ие)у геаропяче |о |Ье ЬуЪп|$ гесер|ог рго|е)п (Хо ес а!. 1996). В)пйп8 оЕ |Ье Ьегегог)!шег со |Ье геаропзе е!егпепь |6пш1а|ек ггапасг)рг)оп Егоп| ап ас))асепс пипииа! ргошосег оЕ апу 8епе йа| Ьаа Ъееп с1опе|1 )псо йе ш|$цс)Ые ехргеаа)оп чессог )Р)8иге 17-11).
Веса|ье шаиипа!)ап се)!з аге по| поппа!1у геаропа)че |о есг)уаопе ог !ь апа!о8а апг) г)о пос соп|аш |Ье есг)уаопе гесерсог, Ьааа! )ече)а оЕггапасг)рг)оп аге чегу )очч от цпг)егесгаЬ)е. ))Роп а|Ыиюп оЕ |Ье Ьопиопе, |п|1ис|юп )ече)а о) >1000-ЕоЫ Ьаче Ъееп героггег) )Еог геч)егчя р)еаае аее С1ас)||юп 1997; Ваег е| а!. 1997; Нагчеу ап|1 Сайеу 1998).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
