Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 59
Текст из файла (страница 59)
Оп йе опе Ьапд, Ь|осЬеписа1 апа1уыя оЕ сЬе йцея6оп ргобцсся оГ ЪцП| Е, сей ОЪ)А яЬо|чя оп!у |чеа1| яет)цепсе ярес|6сцу (ЕЬг(кЬ ес а1. 1973; Вегпагй ес а1. $975). Оп |Ье осЬег Ьапй цсЬеуцег ес а1. (1968) Ьаче яЬо|чп |Ьас ОХаяе! Ьая а чету гпаг)сес) рте(егепсе Еог с1еачшц ро!у(|1(А Т)) ро1уЫ(АТ)) со йе 5' яЫе оЕ Т геяЫцея, а геяц1с йас чая соп6ггпе|$ |ч|й Ьопюро!утпегк ро1у(т)(А-Т)] Ьу 1.опюпоыоК ес а!. ($981). Но|чечег, й|я ярес|6сПу |пау Ъе |1це гпоге со ап цпцяца1 сопГоппасюп оГ сЬе О)я)А аяяос|асе6 яч(сЬ сЬе Ьопюро1угпег, гасЬег сЬап со ргеГегепсе оГ йе епау|пе Еог раг6сц1аг яег)цепсея (К!цц ес а1.
1979). Апа!уяя оГ сЬе сгуяса1 ьсгиссцге оГ со|пр1ехея Ьесч ееп РЫаяе! ап|1 йогс 6оцЫе-ясгапбе6 оПцопцс!еосЫея яЬо|чя сЬас ап ехрояе|$!оор оЕ йе епхуп|е Ъ|п|Ь тп сЬе пппог цгооче оЕ В-ОЪ)А сч(сЬ ЬосЬ ясгапй оГ |Ье пцс1е|с асЫ Ъепйпц со ша)те сопсасс сч(сЬ йе епауп|е (5цс)с ес а1. 1984; 5цс)с ап6 ОеГпег $986). Весацяе гец(опя оЕ РЪГА соп|ашшц яечега! сопяесцбче абеп(пе ог йупипе геяЫиея аге согпрагас|че!у пцЫ апе Паче а пасто|я пппог цгооче, 5цс1| ес а1. (1988) Ьаче яцццеясет) сЬас Л-Т сгасся |и Ется!А ппцЬс Ъе ге!а6че!у ген|сап| со с1еачаце яч1|Ь Рсясазе $. Еп ч|еч оЕсЬЬ сопсцпоп, п Ь ргцбепс со сЬес)с сЬас РЪ)аяе 1 йяр1ауя по шасог Ъ|ая ш Пя рапегп оЕ с1еачаце оЕ гайо!аЪе1ет( сагцес РЪ$А йас Ьая пос Ъееп (псцЪасе6 |чПЬ ргосеш. В|аз сап Ье аясегсашед Погп р|1ос ехрепп|епся яес цр со еясаЫЬЬ сопй6опь Еог орбтпшп с)еачаце оГ йе га|$ю1аЪе1е|$ сагцес ОЪ(А Ъу Рабате 1.
ТЬе апп Ьеге |я со с)еаче еасЬ О)я(А тпо!есц!е опсе Ьес|чееп йе 1аЪе!е6 еп6 ап|1 йе йяса! сегпипця оЕ |Ье Ь|пйпц Псе. ТЬе 1опцег йе |$Ьсапсе Ъес|чееп сЬе!аЬе!е|$ еп6 ап|1 йе Ъ|пйпц Псе, йе 1о|чег йе а|поцпс оГ с!еачаце гес)ц(гей Р|1ос ехрегппепся аге цяцацу сагпе|$ оцс ы|пц а гапце оЕ сопсепсга6опя оГ епхуп|е со Пп|1 сопйсюпя цпт)ег |чЫсЬ сЬе па)сес$ ОЪ)А Ь пе|сЬег цп|1еггеассе|$ (пшсЬ оГсЬе от(ц(па! Ггацшепс геп|ашя цпс!еаче|$ ап|$ сЬе Ьап|Ь Гоппшц |Ье!а|Ыег аге Гашс) ог очеггеассе6 (Пс|1е оЕ йе ог(ц(па! Гтацшепс геп|ашя ап6 |Ье ппацег Гтацшепся аге очеггергеяепсе|1 |и |Ье йцеяс). Ая а гоццЬ цш|$е, ап апюшп оЕ!ЭЪ)аяе яЬоц16 Ье цяет( |Ьас с!еачея оп!у -509о оГ |Ье 1аЪе!ет) гпо1есц1ея |и йе геас6оп. Еог чаН- абопя оп йе ргососо1, р!еаяе яее ТцПшя ес а1. (1987), НосЬясЫ16 (1991), ОагаЪейап ес а1.
(1993), агн$ 1.аЫп (1993). ТЬе цоа! Ь со еясаЫЬЬ сопйсюпя |чЬеге раг6а1 с(еачаце оЕ йе ге!ечапс яецшепс оЕ па1|е|$ РЪГА Ъу РНаяе 1 у|еЫя а 1асЫег оЕ раг6а1 йцеяс|оп ргодцсся йас йбег ш яие Его|п опе апойег Ьу опе Ьаяе. 1Йеацу, сЬеге яЬоц16 Ъе по царя |и сЬе!асЫег ап6 по 6гашаск ййегепсея |и |псепясу 6огп опе Ьапс! 17.76 СБаргег 17: Апа!узь о7" бепе Ехргезяоп ||о Си!сигей Матта1!ап Се1!я со йе пехс. 1п ргас6се, Ьо|чечег, Ь ыьиаПу ппрояяЫе со асЬсече |ЬЬ )ече) оГ ипраг6а!Пу, ечеп чйй па1|ей РЫА. А Ггес)иепс Гспй(п8 аяос|асей чйй йе гье оГ РЕ4аяе! ш Еоосрппсш8 ь йе арреагапсе оГ !псепяе Ьапйя оп |Ье аисогай(о8гап| ш яашр1ея шсиЬасей ойсЬ а РЫА-Ь|псПп8 ргосеш ап|1 |Ье Ыеача8е епхугпе.
ТЬезе яо-саПей Ьуреьепя6че ясея, |чЫсЬ гейесс епЬапсе|1 с!еача8е оГ |Ье Р)з)А Ьу Р)4аяе, гпау апяе ая а сопяес(иепсе оЕ сопГоппасюпа! сЬап8ея ш йоиЫе-ясгапйей Р)з)А |пйисей Ьу Ь|псПп8 оГ ргосеш ог сЬеу гпау Ье с(ие со ргосеш-ргосеш шсегассюпя Ьес|чееп |Ье пис!еазе апс! а ргосеш Ьоип|1 со йе РЫА. ТЬе пасиге оГ йе сопЕоппайопа! сЬап8ея (я пос |чеП-ипс)еьсоой, Ьис Ь п|ау Ье ге!асей со !оса!|хе|1 Ьепйя, )сш)ся, Ьаяе йррш8 (КП|паяаия1|ая ес а!. 1994), ог яп8!е-ясгапс!ей Ьи18ея (КппЬаП ес а1.
1995) ш |Ье Р)з)А ЬгоиЕЬс аЬоис Ьу Ь(пй!п8 оЕ ргосе|п. ТЬе Ьурегяепяс|че ясея сур|саПу Пап1| а Ьопа 6|)е !оосрппс. Ъ|Ьеп чегу яЬогс РЕ4Ая аге изей ая яиЬясгасея Гог РЫаяе 1, "епй-ейессз" Ьесоше аррагепс (Оа!ая ап|1 5сЬпшх 1978; Ьогпопояяой ес а1. 1981).
ТЬе ргоЬаЬ)рйу йас а раг6сп!аг рЬоярЬосПеясег Ьоп|1 чйП Ье с1еаче|1 шсгеаяея ая а |ипс6оп оЕ гь с)ьсапсе Его|п йе 5' еп|1 оЕ а Р)4А я|сап|1, ас 1еаяс ая Еаг ая йе е|8Ьй рЬозрЬогПеясег Ьопс!. !с Ь йегеЕоге ипрогсапс со епяиге йас |Ье Гоосрппсей ге8(оп йоез пос Пе чегу с1ояе со йе!аЬе1е|1 5' епс! оГ сЬе РЫА Ега8шепс.
()яиаПу, Соосрппсш8 геасс|опя аге апа1ухей яЫе Ьу яЫе чйй Махаю-ОПЬегс геасбопя оп РЕ4А яес)иепсш8 Ее1я (р!еаяе зее СЬарсег 12, Ргососо! 7). 1Е сЬе Гоосрппсей РНА Гга8шепс Ь 1аЬе!е|1 ас Пя 5' еп|1, сЬе ашогагПо8гарЫс Ьап|Ь оЬсашей Егоп| йе с|чо яеся оГ геассюпя с(о пос 1ше ир Ьеса|ье сЬе гагПо)аЬе1е|1 рго|1ис|я саггу с66егепс 8гоиря а| |Ье|г 3' еп|Ь. ТЬе Ьаяе-ярес|6с сЬешка1 геасбопя са|ье |Ье геп|оча! оЕ а Ьазе апй гь зи8аг апй Вепегасе а 3'-рЬоярЬогу!асей сеппш|ь оп сЬе 1аЬе!ей РЫА ясгапй.
РЫаяе 1 с1еачея |Ье рЬоярЬогПея|ег Ьопй ап|1 1еачея а 3'-Ьус)гоху1 сегпипгь оп сЬе 1аЬе!ей Р)4А ясгап|1. ТЬе е1ессгорЬоге6с п|оЬ~1иу оГ йе сЬеписа! Неача8е геас6ом Ь |Ьеге(оге яПЕЬс!у Егеасег йап |Ьас оЕ йе Гга8шепс ргойисей Ьу |68еясюп чйй РЬсаяе 1. ТЬь ргоЫегп ыпоге яечеге |чЬеп йогс 13НА Гга8п|епся аге ехапппес!. РЫА Гга8|пепсз гергезепсш8 еи)сагуос!с ргоспосег зес)иепсея ойеп сопса|п п|и)6Р1е Ь~пгПп8 ясез Еог опе ог |поге сгапзспрсюп Гассогя. То с!е6пе ассигасе!у йе Ъоипйапея оЕ шйп Ыиа! Еоосрппь, П Ь Ьеяс со саггу оис Еоосрпп6п8 аяяауз ш |чЫсЬ йе 5' епй оЕ |Ье РЫА Ега8шепс Ь гагПо1аЬе1ей ш опе ехрепгпепс апй сЬе 3' епй оЕ |Ье Р)4А ь гай(о!аЬе!ей ш а яесопс! ехрепгпепс. Ву соп|рапп8 |Ье ргосессе|1 ге8(опя оЕ РЫА оЬ|ашей ш |Ье с|чо ехрегнпепся, яиЬс!е6ея |и йе Ьоипйапея сап Ье йесессей, апй а п|оге ассигасе рксиге оЕ йе Ьшй)п8 ясея апй йе|г ге1асюпяЬсря со еасЬ о|Ьег сап Ье йесегпппей. 1)зе оЕ 3'-1аЬе!ес! Гга8- шепся а1ю е1ипшасез йе ргоЫеп| оЕ е!ессгорЬогебс пп8габоп й(ЕГегепсея Ьес|чееп РЫА ясапйакЬ Вепегасе|1 Ьу Махагп-ОПЬегс Йеача8е ап|1 |Ье Гоосрппсес! РЫА, япсе ш |Ьь саяе, аП РЕ4Ая чйП Ьаче 3'-рЬозрЬогу!асей сегпиш, Нуг)гоху! Наг()са(з Нуйгоху! гагПса1я с!еаче РХА Ьу аЬясгас6п8 а Ьуйго8еп а|оп| Ггоп| а йеохупЬояе пю|есу (НегсхЬег8 апй Регчап 1982; Рпсе апй ТиПшя 1992).
ТЬезе гасПса1з аге ияиаПу 8епегасей Ьу геассш8 йе ЕРТА соп|р!ех оЕ Ре(11) |чПЬ Н,О, (Репсоп 1894): Ре(1!) + Н О вЂ” з Ре(ЕРТА)' 3- ОН е -ОН Ре(1Ц ь ге8епегасес! Ьош |Ье Ре(111) ргос)исс Ьу |пс!игПп8 аясогЬасе |и йе геассюп пихсиге. ТЬе Ьус!гоху) гай(са1я, |чЬ|сЬ аге й!ЕЕия(Ые апй ехсгеше!у йог|-1|чей, геасс чйй йеохупЬояе гезЫиея оп йе яигЕасе оЕ йе РНА, С!еача8е йегеЕоге оссигя ш а гпаппег сЬас Ь 1аг8е!у шйерепйепс оГ пис!ео|Ые яес)иепсе (Неппег е| а). 1982).
1п а|ЫПюп, Ьесаияе о| сЬе|г япаПег яхе, сЬе Ьу|Ьоху1 гасПса1я сап геасс пюге еЕЕ- с|еп|1у йап Р)4аяе! |чпЬ пис1еосЫея оп йе репрЬегу оГ йе Ь|пгПп8 ясе. ТЬь ассея п|еа|ь йас сЬе ге8(оп оЕ 68Ьс сопсасс Ьес|чееп |Ье ргосе|п 68апй апй Ья Ь|пгПп8 ясе сап Ье йебпей чйсЬ ЫЕЬег ргесьюп. ТЬе еЕ6с|епсу оЕ с1еача8е оГ па)се|1 РХА сап Ье ипргочей |Е |Ье Ре(1!)-ЕРТА соп|р!ех Ь 1ш)сес! со а РЫА-Ь!пй(п8 68апй, Еог ехашр!е, ргору1|пейЫш|п (НегскЬег8 ап|1 Регчап 1982; ТиП|ия ес а1.
1987). Но|чечег, |и й|з саяе, с!еача8е оЕ йе Ьас)|Ьопе йерепгЬ оп шсегса1айоп оЕ сЬе гпей|гПшп гпо|есу шсо йоиЫе-ясгапйей Р)4А. ЖЬеп |псегса1а6оп ь ргечепсей Ьу Ь!пй(п8 оЕ а ргосеш, |Ье ге|и!с|п8 Гоосрппс Ь!аг8ег |Ьап йас оЬса(пей сч(сЬ Егее Ре(!1)-ЕРТА апй Ь с егу япп1аг со |Ьас ргойисей Ьу й8еясюп |ч|сЬ РЫаяе 1 ( згап Ру)се апй 1Эегчап 1983; ТиПшя ес а1.
1987). 7,70-репаоГ)гго!те-Соррег ТЬе сЬесп|ягу оЕ й|я геассюп ь япп!аг со йас оГ Ре(11)-ЕРТА, ехсерс йас йе сесгаЬейга! сирго|ь соп|- р!ех Ь|п|Ь ш |Ье пппог Пгооче оЕ Р)4А апй роясюпз сЬе соррег юп с!ояе со а с(еохупЬояе геяЫие. !п~огтаттоп Рапе!в 17.77 ОхЫасюп оЕ йе сиргоы юп Ьу Ьус)гойеп регохЫе сЬеп Вепегасев а соррег-охо врес(ев йас еЕйс(еп|1у аЬвсгась а Ьут)го8еп асош йотп сЬе т(еохупЬове (5рась1|у ап|1 Ярпап 1985; 5|8тпап апд СЬеп 1990). ()пй)се Ее(!!)-ЕРТЛ, 1,10-рЬепап|Ьгойпе-соррег(1) с!еачев тса)сед Р)4А |и а Еавйзоп сЬас Ь Вгеас!у |пйиепсей Ьу йе пис1еосЫе вет)иепсе.
ТЬь ейесс Ь ргевишей со Ье а сопвет)иепсе оЕ вет(иепсе-врет(Етс ча6асюп ш всгиссита1 Ееашгев оЕ йе пипог Вгооче оЕ РМА. ТЬе ЕоосрппЬ оЬ|а(пей |ч(сЬ |Ье Х гергеяог |чПЬ 1,10-рЬепапйго1ше-соррег(1) аге чету яспйаг |и яге со йове ргойисей Ьу с!еачайе гйй РЫаве 1 (Тийшв е| а1. 1987). Аррагепс!у, сЬе Ьоипй ргосеш сап я|рргея Ь|псйпй оЕ йе сиргоив согпр1ех ечеп оп сЬе вЫе о( |Ье Ьейх сЬас ь пос ш сопсасс |ч|сЬ |Ье ргосе|п.
ОЕЕтег Иеаееи(в 5ечега! адсйс|опа! сЬеписа1 геа8епь с1еаче Р)4Л ап|1 сап Ье ые|1 со вси|(у РЫА-ргосеш шсегас6опв. Ехап|р1ев )пс!иде гЬодпип соп|р1ехев и4|Ь 1,10-рЬепап|Ьго!ше (СЬо|ч апд Вагсоп 1992), счЬкЬ с!еаче РЫА |и а ПВЬ|-дерепйепс Еайюп ап|1 аге (пвепя6че со сопипоп 108гей(епсв ш!аЬогасоту Ьийегв висЬ ав йча!епс сас|опв, ЕРТА, 81усего! ап|1 ге|1ис|п8 геайепсв (Яс1ап| ес а1. 1992), рогрЬупп дег(ча6чев (Ъ(тагй ес а1.
1986), ап6 игапу! ва!ь висЬ ав игапу! асесасе апй игапу! п|сгасе (14(е1веп ес а1. 1988; баупог ес а1. 1989). ТЬеве сЬетпка! пис!еавев пиы Ье вупсЬеыгей |и йе 1аЪогасогу, апй йей иве гет)и)гев итоге йап а равяп8 (спосч1еййе оЕ шогйап|с сЬеш(в|ту. Еог шапу оЕ сЬеп|, и ь пос уес с!еаг |чЬейег сЬеу ргочЫе а|Ыйюпа1 |пЕоггпабоп очег ап6 аЬоче йас оЬ|а(пей сч(сЬ 1,10-рЬепап|Ьгойпе-соррег ог Ьус)гоху1 тай)са!в ш Еоосрппс|пй ехрепгпепсв. Ноччечет, сетса|п гЬосйшп Пег|час|хе| оЕ 1,10-рЬепапйгойпе (СЬотч ес а1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
