Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 68
Текст из файла (страница 68)
Ап ехагпр1е оЕ а сопипегс|аПу ачацаЫе чеесог еопса|шпц а ЫВЫу п|от66ед 1ис!Еегаае еЕ)ЫА !ъ сЬе рб!. аег)еа ачацаЫе Поп| Ргоп|еца Ер)еаае аее Р)Вите 17-4). Осцег 1ис!Еегаае цепеа Ьаче Ьееп 1ао!асет) тготп тцчегае п|аппе аптс Ьассепа1 отцапьпь апт) сюп|е оЕ сЬеае аге Ьец!ппшц со Ье сьеП |и тпо1ееи1аг Ыо!оц)са1 аьауя Ап ехашр!е ь йе 1ис)Еетаает)ис!Еег!и ептуп|е ауасеш !гош сЬе аеа раичу Е)тептца теи!ЕЬтиттТ), |чЫсЬ и61|хеа а |шЬасгасе ййегепс Егогп тЬас оЕ 6гебу !ие)Еегаае апт) счЬкЬ Ьаа еП!Еегепс ЬюсЬеппеа1 ргорегПея ТоцесЬег, йе 6гейу апт) аеа рапау 1ис!Еегаае ептуспеа еоп|6сше а с)иа1 герогсег аыау ауасепс |Ьас !а ачацайе Егош Ртоп|еца ап|1 сЬас ацосча шеааигеп|епс оЕ Ьой епгутпеа ш сЬе тапсе сеас сиЬе (Риа1-Ьие!Еегаае Перогсег А|ьау 5уасеш). ТЬе ат)чапсаце оЕ йВ ап|1 ойег т)иа! герояег аяау ауасепса 1е.ц., 17иа1-!58Ы Ьу Тгор|х, !пс., Вееуогд, МасьасЬ|ьесь) ь йас Ьой сЬе сея депе сопасгисс 11ш)сет) со йе 6гебу 1ис!Еегаае) ап|1 а сгапаЕесс!оп)агап|)агт))хас!оп сопсго! (а сопа6- сис!че еи)татуос)с ргошосег Пп)тес) со йе аеа рапау 1ие)Еегаае ог В-ца!аесояцаае цепеа) сап Ье аааауес) !и а япц1е а!щиос оЕ сеП 1уаасе Ьу йе хаше ЬюсЬеписа1 гпе|Ьо|1 ЕПцЬс еппсьюп).
1| ь П)те!у йас ойег 1ис!Еетаае)аиЬ|сгасе еотпЬ|паПопа |ч61 Ье т)ече)орет) |п йе Еисиге сЬас сч61 ехре|6|е йе иае оЕ |Ыа ауасегп сот иапасНРПоп асигцея Кеер |и ш!пт) |Ьас |Ье орсппитп асьау сотпропепь п|ау т66ег Еог йе 1ис!Еегаае епхугпеа оЕ т))ЕЕегепс арес|ея 1прогтаг!оп РапеЬ 17.97 р-САЕАСТОЯОАЯЕ Е. соП В-Ва!ассотЫаае (М, = 465,412; ЕС 3.2.1.23) Ь а сесгатпег оГ Гоиг Ыепска! ро1урерсЫе ялЬипЬя еасЬ сопяь6п8 оГ 1023 апипо аснЬ. ТЬЬ ро!урерс(Ие Ь епсос(ет1 Ьу сЬе Вгас 8епе (!асЛ) оГ йе 1ас орегоп. Еочт!ег апс( ХаЪ(п (1978) Иесептппес1 сЬе апипо асЫ тес(иепсе оГ В-8а1ассоаЫаае ап6 Ка1п(пь ес а1.
(1983) герогсет) йе пис!еосЫе ает)иепсе оГ сЬе!асХ Вепе 8 уеага!асег (бепВап)с ассеяюп пишЬег = 3т00296). Х- гау Игу(тассюп апа)уяа оГ сгуаса!ь оГ В-Ва!ассоаЫаае аЬоъч сЬас сЬе сесгаптег Жар!аут 222-ротпс тупыпесгу ()асоЪьоп ес а1. 1994). ТЬе шйчЫиа! ро1урерсЫе сЬаша Го!6 шсо Вче тес(иеп6а! с(отпатпя тч(сЬ ап ехсепс1- ед ае8шепс оГ -50 апипо асЫ геаЫиет ас сЬе апипо сепшпия ТЬЬ ае8птепс соггеаропсЬ со сЬе а-рерсЫе, йасияес) ш тпоге с1есат! 1асег. (3-8а1ассоаЫаье, итЬоае аупсЬеяа Ь (п<1исед Ьу 1ассозе апт1 сепатп осЬег Ва(ассояйея сага!угеа ичо епгутпаск геас6опя ° Нус(го!уеЬ оГ ()я и8а1ассоругапояс1ея ТЬе епгутпе Ь еяепИа! Сот сЬе Ьуйо!уяа ш Е, сой оГ йе 6!аассЬапс(е 1ассоае (1,4-0-)3-0-8а!ассоругапоау!-тт-8!итоге) тисо 8!итоге апс( 8а!ассоае. ° А сгапа8а1ассоа!Иасюп геасИоп ш итЬкЬ 1ассоае Ь сопчегсес! со аПо!ассоае (1,6-О-В-ст-8а1ассоругапоау!-тт-8!итоге), йе стае шт(исег оГ сЬе )ас орегоп (МИПег-НтП ес а1.
1964; !оЬе апд Воиг8еоЬ 1972). В-Ва!ассоаЫаае а1ао !псегасса тч(сЬ а ьег(еь оГ аупсЬе6с апа(о8а оГ 1ассоте ш итЬ(сЬ 8!итоге Ьаа Ьееп гер1асес! Ьу осЬег тпоте6ея Аа Иеаст!Ъес$ тп тпоге ИесаП Ъе1оъч, сЬехе шс1ис1е: ° ТЬе сЬготпо8епк аиЬпгасеа о-п(стор!тепу1-(3-33-Ва1ассот!Ие (ОЫРб) апд 5-Ьгогпо-4-сЫого-3- !пс$о1у1-В-тт-Ва1ассоа)6е (Х-Ва1), апд сЬе Пиото8еп!с аиЪьсгасе 4-тпесЬу!ишЪеПтуегу1-(3-37-Ва!ассоа!Ие (М!)С). ° 1пЫЬтсол тшсЬ аь р-аш)порЬепу16Ь37-сЬ!о-Ва(ассояде (ТРЕб), итЬкЬ (ь иье6 Гот аГВшсу рипйсастоп оГ !ась Втяоп рготешь (беппшо ет 41. 1983; П(тпапп 1984). В-Ва(ассояйаае Ь со1егапс оГ т)е!есюпа апд яаЬт6си6опь оГ апипо астсЬ ас 16 атпшо апс1 сагЬоху! сеппшт.
(3р со 26 апипо ас!тЬ сап Ье гешочес( Ггош йе апипо сетш!пиа апд гер!асеИ тч(сЬ аечега! Ьипдгед ог итоге гет(диет оГ а чапету оГ осЬег ргосеша чИйоис аГГесс!п8 епгутпастс асИчиу (Впсйпап ес а1. 1979; Ротч!ег апд 7аЪ!п 1983). ТЬе пчо сагЬоху-сеппша1 апипо ас(сЬ аге 6!арепааЫе апт1 сап Ье гер(асе6 Ьу осЬег сойп8 геЕПопт со Вепегасе ассгче сЬттпепс В-8а(ассоыбааеа (ВйсЬег ап6 МППег-НтП 1983). (3-Ва!ассов!Иаае Ьаа опе осЬег ехсгетпе1у тейт! реса)тапсу: сЬе апипо апс1 сагЬоху1 догпаша оГ йе епгуше пее6 пос Ье сагпе6 оп йе ааше пто!еси1е со Вепегасе (3-Ва!ассов!Иаае асс(ч(су.! птсеай пчо ЫасИче 6а8шепсь оГ сЬе ро1урерпс1е сЬа!п, опе 1асЫп8 йе апипо-сеппша1 ге8!оп (сЬе а-ассерсог) ап6 сЬе осЬег йе сагЬоху-сеппша1 ге8(оп (йе ст-т1опот), аш аЫе со аяюсысе ЬосЬ ш чтчо ап6 ш чтсто со Гогтп а Сетгаптепс ас6че епгутпе (П1птапп ет а1. 1967; П1птапп апд Регпп 1970). ТЫа ипиаиа! Гопп оГ сатир!ешепсаИоп, саПес( и-сошр!ешепса6оп, Ь тчЫе1у ыес1 ш шо1еси1аг с1ошп8 со тпопПог !паегсюп оГ Гоге!Вп РЫА тес(иепсеа !псо чессогт епсойп8 йе апипо-сепп!па! (а-допит) Гга8тпепс оГ(3-Ва!ассоябаае (Гог пюге с!есат1я р!еаае аее сЬе ш(огтпа6оп рапе1 оп и-СОМРЕЕМЕ(т(ТАТ!ОЫ тп СЬарсег 1).
44иапс!Гас!че Агаауь Нутуго(уатЬ оГ ОАГРС ГС-Ва!ассоядаае асбчЬу ш Ьассепа! си!сигеа Ь ыиаПу аяауе6 арессгорЬосошест!саПу. Весаые йе епгупте с1еачеа В-Ва1ассомйс Пп)са8еа (р1еаае аее Рт8иге 17-15), П тчП! Ьут1го1уге сЬе аупсЬес(с сЬгопю8ешс шЬ- а!гасе ОНРб, ВепегаИп8 о-шсторЬепо1, итЬ!сЬ Ь уеПом ш ат!иеоиа ао1ис!оп. ТЬе соигае оГ сЬе геасбоп сап сЬеге(оге Ье ГоПочте6 Ьу тпоппопп8 аЪаогЪапсе ас 420 пгп (ЪебегЪег8 1950).
ТЬе аяау Ь сатпес1 оис ияп8 Ьассепа! сеПз сЬас Ьаче Ьееп регтпеаЬйгеИ тчтсЬ со1иепе ог сЫогоГопп апс1 аиарепбес1 ш а Ъи((ег сопсашш8 ЬтВЬ сопсепсгасютть оГ !3-шегсарсоесЬапо! (МтПег ! 972). АГсег ЫсиЬастоп тч(сЬ ОНРб Гог тес репосЬ оГ сапе, йе геас6оп Ь сепп(патей тч(сЬ тх(агСОт апс! сЬе О134га ыпеааигей Весаиае сЬе аЬаогЬапсе ас 420 ппт Ь а соптЬтпабоп оГ аЪьотЪапсе Ьу а-ппгорЬепо! ап6 ПВЫ ьсассепп8 Ьу Ьассепа1 ИеЬпя Ь )а екпс(а1 со сепсп(и8е сЬе геасбоп ш(хситеа Ьпейу (60 аесопсЬ тп а 17.98 СЬарсег 17: Апа!укгк оу' бепе Ехргемшп т Сийигед Матиса!сап Се)!к 5-Ьгогпо-4-смоге-!ос!ау! 8-о да!асгов!бе СН,ОН С! о ОН Вг Н Н ОН Н 8-да!асговшаве С' О н Вг !! ! Н и С Г ! !! Вг Н О С! Е!СС)ЙЕ 17-15 Кеасйоп СаСа! гед Ьу !3- а1асСокЫаве 5-Ьгопю-4-пьогоапгадо писгосийе) Ьесоге гпеакигш8 сЬе ОР4 в ос'сЬе кирегпасапс.
В-Ва!ассов!даве ассппсу ос йе Ьассепа! си!сиге ь ехргемед ш Мсйег ишся !)шь ос )3-да!ассов)даве = р(1000 х ОР, с х ч х ОР ) счЬеге ОРса Ь йе аЬвогЬапсе аг 420 пис ог йе геассюп пихгиге; ОР вв )к сЬе аЬкогЬапсе ас 600 ппс ог" сЬе Ьассепа1 си1сиге )икс Ъегоге сЬе епгуспе ас6чйу Ь амауей с ь сЬе сипе ос' сЬе геас6оп 1и пиписек; апд ч ь чо1шпе ог" сЬе си!сиге (ш1) сьед сп сЬе аккау. Мсйег ишск аге ргорогйопа! со сЬе шсгеаке ш о-пйгорЬепо! рег иипше рег Ъассепшп; ! пс! оу а ййу шдисед счйд-суре сийше ог" Е. сой сопсашк -1000 ишь ог )3- 8а!ассоядаке ас6чиу, счЬегеак ап ишпдисес1 си!сиге сои!вгик <! ипи.
Е. сой )3-8а1ассоядаке сап а!во Ъе ехргемес1 ш шашшайап сейк (е.8., р1еаке кее Най ес а1. 1983). А кПВЬс!у псосййед чеьюп ог йе МП1ег амау сап Ье сьед со гпеавиш сЬе ас66су ог йе Ьассепа1 епгугпе ехргемес1 ш си!сшес1 чегсеЬгасе сейк !Сдпг!оп апд Сойш 1983) апд уеакск !Коке апд Восксеш 1983; 8!едгсесчк)с) ес а1. 1990). !в ус!го!увгк ог" 84с)С !3-8а!ассоядаке счй! Ьус1го!уге йе купсЬеск йиогойепк киЬвсгасе МС)О (ачайаЫе йоги 8!8гпа), Вепегайпд 4-шесЬу1ишЬейсгегопе, счЫсЬ епиь ап шсепке ЫиЬЬ йиогексепсе сп айса1ше ко1ийоп.
ТЬе соигке ос' сЬе геас6оп сап сЬегеСоге Ье уойои ед йиогошеспсайу Ьу ехссйп8 ас 364 пгп апс1 гесогсйп8 сЬе 1с8Ьс ешйсес1 ас 440 пгп (КосЬ 1969; Уоипдшап 1987). ТЬе йиогогиеспс амау ь -10 сипев псоге кепябче йап с!се крессгорЬосошеспс аккау, Ьш ог соигке, Ь геди)гек ап ехрепяче йиогогпесег. ТЬе йиошпсесгк амау Ь икейс) оп1у ипдег крее)а1 сйсшпксапсек, Сог ехашр1е, со с)пап!!саге сЬе ас6чйу ог" а счеаИу ехргемед депе сЬас Ьак Ьееп йьед со !ась. ТЬе оЫег крессгорЬосоисеспс амау Ь реггесс1у адес)ивсе гог а1гпоя ай гоийпе амаук ос )3-8а1ассоядаке ас6чйу 1и Ьассепа1, шапипайап, апд уеавс си1сшек. Н!51осЬепс!са! 51а!пв )3-8а1ассовЫаке ш гпапу счаук Ь ап Ыеа! ЫяосЬеписа! гпаг1сег.
1с Ь а ксаЫе епгугпе апд йк ехргекяоп сп си1- сигед псапипа1сап сейк, уеакск, РгокорЫ!а, ог сгапкйешс гпагп|паь доев пос арреаг со Ье еиЬег де!есеиось ог адчапсайеоик со сЬе Ьоаь 1п асЫс6оп, а кепясп е сЬгосиойепсс амау Ь ачас!аЫе 1кее Ье!осч) сЬас депегасек а попд)уйсяЫе, ЬНВЬс1у со1огес1 ргодисс. Ешайу, гп ай Ьис а уепс кресса!сгес1 еи)сагуоск сейк, Ьус1го1уяк ос !3- 8а1ассояйс 1ш)седее ь саса1угед Ьу 1укокогпа1 епгугпек сЬас аге асссче оп1у ипдег асЫ сопййопк. Весаике сЬеке епгугпек аге спасссче ас сЬе пешга! рН сьед со амау сог!асЛ, Ьасссйгоипд яаспсп8 ь пе8581Ые. Тп(огтаНоп Рапе)я я'7.99 |и 1967, !и1|ап Оачея, и~ог|йпВ а1 1Ье Раягеиг |пзсВи1е, сная И)4пВ 1о с1ече|ор попс1ея1гис|Ые Ьепос яса|пя йас и~оп|с! аИои Ь|гп го сйзПпВ льстя Ьепчееп )ася апс3 |ас со|оп|ез.
ТЫя Воа! гес|и|гес3 ВпсйпВ а |с сЬгогпоцеп|с яиЬЯгаге йа1 знои!с$ Ье Ьус|го|угес| Ьу В-Ва!ас|оз|с|аяе 1о Ь|ф|у со|огес$ ргос$ис|я й Ьой попс!3((ия|Ь|е апс1 попгохк. Оачея иая р1еазес|1о Вас| 1Ьа1 рЬепу$+Ва|асгоя|с|ея ргос$исес$ а яа гу со|ог геассюп, Ьиг Ье чная |еяз ВгаВВес$ Ьу йе|г сопчегяюп |п1о !ох|с пПгорЬепоВ 1Ьа1 е(8с|епг|у 1с чесу сеПя Ье сная 1гу|пВ 1о $г|еп1$(у.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
